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1、组培接种工培训教程科研中心组培车间目录基本概念规章制度接种技术安全生产基本概念组织培养：根据植物细胞全能性，利用植物的一部分组织，在人工培养的条件下，使之不断的快速分化繁殖，最终形成与母本植株相同性状的大量种苗，简称组培。培养基：为培养物提供营养物质，并起到固定作用的介质。基本概念污染：因受外界因素感染，培养基表面或内部长出细菌或真菌的现象。真菌：白色、黄色或黑色等毛状霉菌，分布在培养基表面或瓶壁，接种后48天形成可见菌落，主要传播途径:空气传播。（一般操作不规范容易引起，如手经过牛皮纸、经过消毒好的瓶口上方、口罩没戴好等等。）细菌：白色、黄色或红色丝状、片状菌落，表面光滑湿润，边界清晰，分布
2、在培养基表面、内部，植株基部切口处。接种后35天形成。主要转播途径：接触传播。（一般是工具没消毒好或工具碰到其它物体还在继续使用，牛皮纸被切破碰到台面等引起）。基本概念有菌：已经污染的材料或培养基（瓶内任何任何部位一旦带菌均视为污染）工作台四壁、工作台面、瓶子、酒精灯、培养瓶外壁、未消毒的接种工具、操作人员的体表、呼吸出的气体、说话时溅出的唾液。无菌：消毒后未污染培养瓶内部，未污染的母体材料瓶内部，消毒后的纸包内部，消毒后的镊子和刀片前端，工作台内部的空气。污染的形成：有菌和无菌的直接或间接接触，无菌部位的风向上方有有菌物体存在或经过。（容易污染的环节？）基本概念无菌操作：在特定的无菌设备下，
3、遵守严格的技术规范进行的操作方式。接种：在组培过程中，在无菌条件下，把芽丛从母瓶中取出，切分整理后，再接入新的培养基当中。规章制度净区工作人员工作守则净区工作人员工作守则1.禁止在培养室、接种室内讲话、串岗。2.禁止将脏物品（包括衣服）带进培养室、接种室。3.患感冒时不准入室操作。4.室内操作时动作要轻、缓，不允许打闹和大声说话。5.进更衣室前先脱鞋、换衣服后用肥皂洗手、过风淋室、穿拖鞋、穿白大褂戴帽子（把所有头发全戴进）、戴口罩、进出门必须随手关门。工作人员要勤洗澡、勤换衣服、勤剪指甲。禁止在接种室内听MP3、接电话、发短信。规章制度工作台使用操作守则工作台使用操作守则1.使用超净工作台前，
4、必须确认有关插座、插头、电源线使用超净工作台前，必须确认有关插座、插头、电源线和开关无明显故障。和开关无明显故障。2.工作台运行过程中，如发现有异常声音、气味出现，应工作台运行过程中，如发现有异常声音、气味出现，应立即切断电源。立即切断电源。3.在下班时，必须超净关闭工作台的所有开关。在下班时，必须超净关闭工作台的所有开关。4.酒精灯、酒精纱布、装有酒精的瓶子必须远离消毒器。酒精灯、酒精纱布、装有酒精的瓶子必须远离消毒器。5.接种工具在消毒完成后要及时拿出，避免过热烫伤。接种工具在消毒完成后要及时拿出，避免过热烫伤。（一般消毒器温度达到（一般消毒器温度达到270度以上开始计时，消毒一分钟度以上
5、开始计时，消毒一分钟以上为完成消毒）。以上为完成消毒）。6.工作台使用电源为工作台使用电源为4格指示灯。格指示灯。规章制度酒精灯使用操作守则酒精灯使用操作守则1.添加酒精时酒精灯必须是熄灭状态。2.酒精灯每次添加酒精时，最多可加至2/3容量处，切勿加满。（酒精灯使用95%浓度的酒精）3.酒精灯口有明显缺口或裂缝时，不可继续使用（易爆）。4.工作台上的瓶子堆放要稳固，双手的移动要小心，避免砸碎或碰翻酒精灯。5.三角瓶类（包括兰苗瓶)禁止堆叠，以防翻倒。6.酒精灯意外失火时，要迅速用的牛皮纸或浸有消毒药水毛巾扑灭火焰。7.熄灭酒精灯时必须是盖灭，绝不可以吹灭。规章制度接种器械使用操作守则接种器械使
6、用操作守则1.在解剖刀柄上装卸刀片时，必须首先经过在解剖刀柄上装卸刀片时，必须首先经过培训。培训。2.安装刀片时，手指应避开刀口方向，夹紧安装刀片时，手指应避开刀口方向，夹紧刀背一侧往刀柄方推动。刀背一侧往刀柄方推动。3.拆卸刀片时，应先确认刀片已经处于拆卸刀片时，应先确认刀片已经处于冷却冷却状态。状态。操作技术小瓶无菌操作技术规范1.准备工作程序准备工作程序-操作人员换上拖鞋，通过工作人员通道，进入准备室。-在准备室内，先换去外套，再用肥皂洗手，通过风淋室风淋后，进入更衣室。-在更衣室内，穿上工作服，戴好帽子、口罩。-用痱子粉擦拭双手后戴上手套，进入接种室，打开工作台风机，打开消毒器。-小玻
7、璃瓶中倒入消毒酒精浸泡纱布。操作技术小瓶无菌操作技术规范2、酒精消毒工作台及工具酒精消毒工作台及工具 .使用消毒酒精浸泡的纱布擦拭，程序为：工作台顶上一面前方送风正处一面右 侧玻璃台面右边装酒精的小瓶子并打开瓶塞/消毒器刀架、刀、镊子酒精灯喷壶装酒精的瓶子左侧玻璃台面左边把工具摆在适当的位置。（所有消毒酒精为75%的酒精)操作技术-小瓶无菌操作技术规范 3.用酒精灯的火焰消毒刀架、刀、镊子（用外焰，第一次要烧彻底，刀片烧黑，刀尖发红，镊子尖发红）。 4.将培养基和材料用消毒酒精浸泡的纱布擦拭后摆放到工作台面左侧。操作技术-小瓶无菌操作技术规范 5.用消毒过的镊子从信封内取出无菌纸（注意手势），
8、拿起材料瓶打开盖子时，左手拿瓶盖，右手拿瓶身，打开后瓶盖不离手，并将瓶身放入左手心中、再从材料瓶中取出材料放在纸上切分，切分完成后，先把苗接入相应的培养基中放好，接完后再用酒精纱布把刀子和镊子擦干净插入消毒器中消毒以备后用。操作技术-小瓶无菌操作技术规范 6.收拾台面：把牛皮纸上的废材料倒入回收盆内，把空的培养瓶、使用过的牛皮纸拿出工作台，并用酒精纱布擦去纸上的残留物，最后把台面擦干净。操作技术-小瓶无菌操作技术规范 7.下一瓶材料转接程序下一瓶材料转接程序 用酒精纱布擦放适当数量的培养基和材料把先前消毒好的刀和镊子放到纸上，火焰消毒或消毒器消毒下一套工具，火焰消毒时要烧至即将发红即可，消毒器
9、消毒时至少1分钟，然后放置于刀架上冷却待用567。操作技术-小瓶无菌操作技术规范 8.材料接完后或下午下班前，要写好标签贴在接好的瓶子上，标签的书写包括四个内容：品种名称、接种日期、培养基编号、接种员编号；品种为原材料的品种，培养基编号为相应编号，每种培养基都有编号；另外将接好的苗和未用完的原材料、培养基等分别放到指定的位置。 例如：在3月12日B2接非洲菊FP品种，同时接的继代和生根，没到下班 时间就下班了，B2要将接好的该品种贴上标签放到指定的位置；标签 的书写分别为： FB 3.12 FB 3.12 C1 B2 C2 B2技术规范-小瓶无菌操作技术规范 9.注意事项注意事项 9.1 台面
10、上瓶数不可过多，打开瓶盖的瓶子严禁前方有物体遮挡。 9.2 火焰消毒一定要用外焰，消毒器消毒时间一定要保证至少1分钟的时间。 9.3 手离开工作台后重新回到台内工作前一定要用酒精重新消毒。 9.4 中午下班后必须将刀和镊子拿出消毒器放在刀架上，有纱布的酒精瓶要盖好盖子，下午下班时刀、镊子和刀架重新用火焰消毒，最上面一张牛皮纸也要弃去不用。 9.5 装无菌纸的大信封如有破损则不可使用，用完的无菌纸要用酒精纱布将废材料擦干净。 9.6在没有特殊要求的情况下，材料每次只能开一瓶，如有特殊要求由组长另行通知。操作技术-兰花瓶无菌操作技术规范 1.准备工作程序准备工作程序 -操作人员换上拖鞋，通过工作人
11、员通道， 进入准备室。 -在准备室内先脱去外套，再用肥皂洗手，通过风淋室风淋后，进入更衣室。 -在更衣室内，穿上工作服，戴上帽子、口罩。 -用痱子粉擦拭双手后戴上手套，进入接种室，打开工作台风机，打开消毒器。 -小玻璃瓶中倒入消毒酒精浸泡纱布。操作技术-兰花瓶无菌操作技术规范 2.酒精消毒工作台及工具酒精消毒工作台及工具 .使用消毒酒精浸泡过的纱布擦拭，顺序为：使用消毒酒精浸泡过的纱布擦拭，顺序为：工作台顶上一面工作台顶上一面正前方送风一面正前方送风一面右面右面玻璃玻璃台面右边台面右边装酒精的小瓶子并打开装酒精的小瓶子并打开瓶塞消毒器刀架刀镊子酒精灯喷壶装酒精瓶塞消毒器刀架刀镊子酒精灯喷壶装酒精大瓶子左侧玻璃台面左边把工具放在适当大瓶子左侧玻璃台面左边把工具放在适当位置。（所用酒精为位置。（所用酒精为75%的酒精）的酒精）
