大黄中蒽醌类成分的提取、大黄中蒽醌类成分的提取、大黄中蒽醌类成分的提取、大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定分离和鉴定分离和鉴定分离和鉴定中药化学与分析教研室中药化学与分析教研室中药化学与分析教研室中药化学与分析教研室 实实实实 验验验验 目目目目 的的的的n掌握掌握蒽醌苷元的提取方法蒽醌苷元的提取方法——酸水解法酸水解法n掌握掌握PH梯度萃取法的原理和操作技术梯度萃取法的原理和操作技术n掌握掌握缓冲纸色谱的原理和基本操作技术缓冲纸色谱的原理和基本操作技术n通过大黄酚、大黄素甲醚的分离实验，通过大黄酚、大黄素甲醚的分离实验，熟悉熟悉柱层析的操作技术柱层析的操作技术n熟悉熟悉蒽醌类化合物的鉴定方法蒽醌类化合物的鉴定方法 实实实实 验验验验 内内内内 容容容容n总蒽醌苷元的提取总蒽醌苷元的提取n蒽醌苷元的分离和精制蒽醌苷元的分离和精制n蒽醌类成分的鉴定蒽醌类成分的鉴定 实实实实 验验验验 原原原原 理理理理n提取：提取：蒽醌苷蒽醌苷 苷元苷元(溶于热氯仿溶于热氯仿) 总蒽醌苷元总蒽醌苷元氯仿提取氯仿提取酸酸水水解解 实实实实 验验验验 原原原原 理理理理n分离：分离：A大黄酚（大黄酚（chrysophanol）） R1=H R2= CH3B大黄素（大黄素（emodin）） R1= OH R2= CH3C大黄素甲醚（大黄素甲醚（physcion）） R1=OCH3 R2= CH3D芦荟大黄素（芦荟大黄素（aloe-emodin）） R1=H R2=CH2OHE大黄酸（大黄酸（rhein）） R1=H R2=COOH由于各羟基蒽醌结构上的不同所由于各羟基蒽醌结构上的不同所表现的酸性不同，用表现的酸性不同，用pH梯度萃取梯度萃取法法分离他们；大黄酚和大黄素甲分离他们；大黄酚和大黄素甲醚酸性相近，利用其极性的差异，醚酸性相近，利用其极性的差异，用用柱色谱柱色谱分离之。
分离之 酸性酸性E>B>D>A≈C n总蒽醌苷元的提取总蒽醌苷元的提取 大黄粗粉大黄粗粉100g +20%硫酸硫酸200mL，湿润，湿润 +氯仿氯仿1瓶，加热回流瓶，加热回流2h 稍冷，过滤稍冷，过滤 药渣（弃）药渣（弃） 氯仿提取液氯仿提取液实实实实 验验验验 内内内内 容（一）容（一）容（一）容（一） n蒽醌苷元的分离和精制（蒽醌苷元的分离和精制（1）） 蒽醌类成分的缓冲纸色谱蒽醌类成分的缓冲纸色谱 层析材料：层析材料：3×12㎝㎝滤纸滤纸 样样 品：大黄氯仿提取液品：大黄氯仿提取液 展展 开开 剂：氯仿（水饱和）剂：氯仿（水饱和） 显显 色：自然光下观察色：自然光下观察实实实实 验验验验 内内内内 容（二）容（二）容（二）容（二）pH3pH8PH9.95%Na2CO3:5%NaOH(9:1)3%NaOHpH8 n蒽醌苷元的分离和精制（蒽醌苷元的分离和精制（2）） 大黄氯仿提取液大黄氯仿提取液 +PH8.0缓冲液缓冲液150mL，振摇，振摇 碱水层碱水层 氯仿层氯仿层 +20%HCl调调PH3.0 +PH9.9缓冲液缓冲液300mL，振摇，振摇 静置，抽滤静置，抽滤(*) 沉淀沉淀1 碱水层碱水层 氯仿层氯仿层 冰醋酸精制冰醋酸精制 同同* +5%Na2CO3: 大黄酸大黄酸 沉淀沉淀2 5%NaOH(9:1)540mL 丙酮精制丙酮精制 大黄素大黄素 碱水层碱水层 氯仿层氯仿层 同同* +3%NaOH300mL 沉淀沉淀3 乙酸乙酯精制乙酸乙酯精制 碱水层碱水层 氯仿层氯仿层 芦荟大黄素芦荟大黄素 同同* 沉淀沉淀4实实实实 验验验验 内内内内 容（二）容（二）容（二）容（二） n蒽醌苷元的分离和精制（蒽醌苷元的分离和精制（3）） 柱层析法分离大黄酚、大黄素甲醚柱层析法分离大黄酚、大黄素甲醚 装柱（湿法装柱）装柱（湿法装柱） 上样（干法上样）上样（干法上样） 洗脱剂洗脱剂1 石油醚石油醚-乙酸乙酯（乙酸乙酯（98：：2）） 洗脱洗脱 洗脱剂洗脱剂2 石油醚石油醚-乙酸乙酯（乙酸乙酯（95：：5）） 流份检查（合并相同流份）流份检查（合并相同流份）实实实实 验验验验 内内内内 容（二）容（二）容（二）容（二） n大黄蒽醌类成分的鉴定大黄蒽醌类成分的鉴定 （（1）化学鉴定）化学鉴定 （（2）色谱鉴识）色谱鉴识实实实实 验验验验 内内内内 容（三）容（三）容（三）容（三） n大黄蒽醌类成分的鉴定（大黄蒽醌类成分的鉴定（1）） 化学鉴定化学鉴定 ①①碱液试验：碱液试验： 样品＋样品＋2%NaOH 颜色变化颜色变化 ②②醋酸镁试验：醋酸镁试验： 样品（乙醇溶解）＋样品（乙醇溶解）＋0.5％％醋酸镁醋酸镁 颜色变化 颜色变化实实实实 验验验验 内内内内 容（三）容（三）容（三）容（三） n大黄蒽醌类成分的鉴定（大黄蒽醌类成分的鉴定（2）） 色谱鉴识色谱鉴识 薄层板：硅胶薄层板：硅胶G板板 点点 样：提取的大黄酸、大黄素、芦荟大黄素样：提取的大黄酸、大黄素、芦荟大黄素 、大黄酚、大黄素甲醚及其对照品、大黄酚、大黄素甲醚及其对照品 展开剂：正己烷－乙酸乙酯－甲酸（展开剂：正己烷－乙酸乙酯－甲酸（30：：10 ：：0.5）） 展开方式：上行展开展开方式：上行展开 显显 色：可见光观察，浓氨水熏或色：可见光观察，浓氨水熏或5％醋酸镁％醋酸镁 显色后再观察显色后再观察实实实实 验验验验 内内内内 容（三）容（三）容（三）容（三） 思 考 题思 考 题思 考 题思 考 题1.大黄中大黄中5种羟基蒽醌的酸性和极性大小应如何种羟基蒽醌的酸性和极性大小应如何排列？为什么？排列？为什么？2.pH梯度法的原理是什么？适用于哪些中药成梯度法的原理是什么？适用于哪些中药成分的分离？分的分离？ 。