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1、会计学1基础科学基础科学(jch kxu)金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌检验检验第一页，共24页。概况概况(gikung)n n葡萄球菌属微球菌科，本菌有19个菌种，从人体上可检出12个种。n n葡萄球菌属主要(zhyo)与皮肤腺体和温血动物的粘膜相关系，有些种是人及动物的条件致病菌。n n金黄色葡萄球菌对人类有致病性，通常被称为病原性球菌。金黄色葡萄球菌可引起化脓性炎症，又称为化脓性球菌。第1页/共23页第二页，共24页。金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌(p to qi jn)(p to qi jn)的生物学特的生物学特的生物学特的生物学特性性性性形态与染色：形态与染色
2、：金黄色葡萄金黄色葡萄(p to)(p to)球菌的典型形态呈球形，直径，大小球菌的典型形态呈球形，直径，大小不一，平均直径约为。不一，平均直径约为。革兰氏染色阳性，呈葡萄革兰氏染色阳性，呈葡萄(p to)(p to)串状排列。无鞭毛、无芽串状排列。无鞭毛、无芽胞。在陈旧培养物中，衰老的菌体常转为革兰氏阴性。胞。在陈旧培养物中，衰老的菌体常转为革兰氏阴性。第2页/共23页第三页，共24页。培养特性：培养特性：易培养，对营养要求不高，在普通培养基中生长良好。易培养，对营养要求不高，在普通培养基中生长良好。需氧或兼性厌氧。需氧或兼性厌氧。最适生长温度最适生长温度3737，最适生长。耐盐性强，在含，
3、最适生长。耐盐性强，在含101015%15%的氯化钠培养基中仍能生长，可用于筛选菌种。的氯化钠培养基中仍能生长，可用于筛选菌种。在普通营养琼脂平板上培养在普通营养琼脂平板上培养18182424，可形成，可形成(xngchng)(xngchng)圆形、表面光滑、不透明的菌落。可产圆形、表面光滑、不透明的菌落。可产生金黄色色素，色素为脂溶性，不溶于水，故色素生金黄色色素，色素为脂溶性，不溶于水，故色素只局限于菌落内，不渗至培养中。只局限于菌落内，不渗至培养中。第3页/共23页第四页，共24页。n n在血平板上可形成在血平板上可形成(xngchng)(xngchng)明显透明的溶血环。明显透明的溶血
4、环。为为型溶血。型溶血。n n可产生卵磷脂，在卵黄高盐培养基上形成可产生卵磷脂，在卵黄高盐培养基上形成(xngchng)(xngchng)周围有白色沉淀环的菌落。周围有白色沉淀环的菌落。n n大多数菌株分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖，产酸不产大多数菌株分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖，产酸不产气。甲基红试验、气。甲基红试验、 VP VP试验多为阳性，不产生靛基试验多为阳性，不产生靛基质。触酶阳性。质。触酶阳性。第4页/共23页第五页，共24页。金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌(p to qi jn)(p to qi jn)的酶的酶的酶的酶n n金黄色葡萄球菌可产生血浆凝固酶和耐热金黄
5、色葡萄球菌可产生血浆凝固酶和耐热DNADNA酶。这两种酶。这两种酶均与金黄色葡萄球菌的致病性有关。酶均与金黄色葡萄球菌的致病性有关。n n血浆凝固酶：与金黄色葡萄球菌的致病力密切相关。一血浆凝固酶：与金黄色葡萄球菌的致病力密切相关。一般认为，血浆凝固阳性的金黄色葡萄球菌菌株有致病力。般认为，血浆凝固阳性的金黄色葡萄球菌菌株有致病力。否则为无力的菌株。血浆凝固酶对热稳定否则为无力的菌株。血浆凝固酶对热稳定(wndng)(wndng)，能，能抵抗抵抗6030min6030min甚至甚至10030min10030min后，仍能保存大部分活性。后，仍能保存大部分活性。n n耐热耐热DNADNA酶作为除
6、血浆凝固酶外鉴定金黄色葡萄球菌致病酶作为除血浆凝固酶外鉴定金黄色葡萄球菌致病力的指标之一。该酶的最适力的指标之一。该酶的最适pHpH为。为。第5页/共23页第六页，共24页。n n金黄色葡萄球菌肠毒素：是金黄色葡萄球菌一种重金黄色葡萄球菌肠毒素：是金黄色葡萄球菌一种重要的致病物质要的致病物质(wzh)(wzh)。本菌引起的食物中毒是因为。本菌引起的食物中毒是因为食品污染了金黄葡萄球菌后，由细菌产生大量肠毒食品污染了金黄葡萄球菌后，由细菌产生大量肠毒素而导致的。素而导致的。n n近年报导表明，近年报导表明，50%50%以上的金黄色葡萄球菌菌株在实以上的金黄色葡萄球菌菌株在实验室条件下可产生肠毒素
7、，并且验室条件下可产生肠毒素，并且1 1个菌株能产生两种个菌株能产生两种或两种以上的肠毒素。或两种以上的肠毒素。n n肠毒素是一种可溶性蛋白质，由单个无分枝的肽链肠毒素是一种可溶性蛋白质，由单个无分枝的肽链组成。分子量约为组成。分子量约为30003000左右。易溶于水，难溶于有左右。易溶于水，难溶于有机溶剂。机溶剂。金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌(p to qi jn)(p to qi jn)的肠毒的肠毒素素第6页/共23页第七页，共24页。n n耐热，经耐热，经100100煮沸煮沸30min30min不被破坏，也不受胰蛋白不被破坏，也不受胰蛋白酶酶(y dn bi mi)(y dn bi mi
8、)的影响。食物中的肠毒素耐热的影响。食物中的肠毒素耐热性更强，一般烹调温度不能将其破坏。性更强，一般烹调温度不能将其破坏。218248 218248 的油中需的油中需30min30min才能被破坏。可引起急性胃肠炎。才能被破坏。可引起急性胃肠炎。n n根据肠毒素的血清型，可分根据肠毒素的血清型，可分A A、B B、C C（C1C1、C2C2）、）、D D、E 5 E 5 个型。个型。A A型肠毒素引起的食物中毒较多，约占型肠毒素引起的食物中毒较多，约占50%50%左右。其他依次为左右。其他依次为D D、C C、B B和和E E型。也有型。也有A AD D、A AB B、A AC C、B BC
9、C等。等。第7页/共23页第八页，共24页。n nA A型肠毒素毒力较强，摄入型肠毒素毒力较强，摄入1g1g即可引起中毒；即可引起中毒；B B型毒型毒力较弱摄入力较弱摄入25g25g，才引起中毒。一般，才引起中毒。一般(ybn)(ybn)认为引起认为引起人中毒的最小剂量是。人中毒的最小剂量是。第8页/共23页第九页，共24页。金黄色葡萄球菌的检测金黄色葡萄球菌的检测金黄色葡萄球菌的检测金黄色葡萄球菌的检测(jin c)(jin c)程序程序程序程序检样检样25g(mL) 25g(mL) 225mL225mL生理盐水生理盐水(shnglynshu)(shnglynshu)或磷酸盐缓冲液或磷酸盐缓
10、冲液7.5%7.5%氯化钠肉汤或氯化钠肉汤或10%10%氯化钠胰酪胨大豆氯化钠胰酪胨大豆(ddu)(ddu) 肉汤肉汤361361Baird-ParkerBaird-Parker 平板，血平板平板，血平板涂片染色涂片染色观察溶血观察溶血血浆凝固酶试验血浆凝固酶试验报告报告血平板血平板1824h1824h， Baird-ParkerBaird-Parker 平板平板1824h1824h或或4548h4548h。BHIBHI肉汤和营养琼脂小斜面肉汤和营养琼脂小斜面3613611824h1824h第9页/共23页第十页，共24页。增菌培养基增菌培养基增菌培养基增菌培养基n n7.5%7.5%氯化钠肉
11、汤：为葡萄球菌选择性增菌培养基，因氯化钠肉汤：为葡萄球菌选择性增菌培养基，因金黄色葡萄球有耐受高盐的特性，因而能在此增菌液金黄色葡萄球有耐受高盐的特性，因而能在此增菌液中生长，除某些嗜高盐的海洋中生长，除某些嗜高盐的海洋(hiyng)(hiyng)菌外，大多菌外，大多数细菌都被增菌液中的高盐所抑制。数细菌都被增菌液中的高盐所抑制。n n胰酪胨大豆肉汤：含氯化钠达胰酪胨大豆肉汤：含氯化钠达10%10%，以胰酪胨替代牛，以胰酪胨替代牛肉浸粉，并加入少量磷酸氢二钾和葡萄糖促进葡萄球肉浸粉，并加入少量磷酸氢二钾和葡萄糖促进葡萄球菌的生长。菌的生长。第10页/共23页第十一页，共24页。样品样品样品样品
12、(yngpn)(yngpn)(yngpn)(yngpn)的稀释的稀释的稀释的稀释n n固体和半固体样品：称取固体和半固体样品：称取25g25g样品至盛有样品至盛有225 mL225 mL磷酸盐磷酸盐缓冲稀释液或生理盐水的无菌均质杯内，缓冲稀释液或生理盐水的无菌均质杯内，8000r/min8000r/min10000 r/min10000 r/min均质均质1min1min2min2min，或放入盛有，或放入盛有225 mL225 mL稀释稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min1min2min2min，制成制成1:101:10的样品匀液。的样品匀液。
13、n n液体液体(yt)(yt)样品：以无菌吸管吸取样品：以无菌吸管吸取25mL25mL样品至盛有样品至盛有225mL225mL磷酸盐缓冲稀释液或生理盐水的无菌锥形瓶磷酸盐缓冲稀释液或生理盐水的无菌锥形瓶( (瓶内瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠预置适当数量的无菌玻璃珠) )中，充分混匀，制成中，充分混匀，制成1:101:10的样品匀液。的样品匀液。 第11页/共23页第十二页，共24页。增菌与分离增菌与分离增菌与分离增菌与分离(fnl)(fnl)(fnl)(fnl)培养培养培养培养n n增菌培养：吸取增菌培养：吸取5mL5mL上述样品匀液，接种于上述样品匀液，接种于50mL 7.5%50mL 7.
14、5%氯氯化钠肉汤或化钠肉汤或10%10%胰酪胨大豆肉汤培养基内，胰酪胨大豆肉汤培养基内，361361培培养养18h18h24h24h。金黄色葡萄球菌在。金黄色葡萄球菌在7.5%7.5%氯化钠肉汤中呈混氯化钠肉汤中呈混浊生长，污染严重浊生长，污染严重(ynzhng)(ynzhng)时在时在10%10%胰酪胨大豆肉汤胰酪胨大豆肉汤内呈混浊生长。内呈混浊生长。 n n将上述培养物，分别划线接种到将上述培养物，分别划线接种到Baird-ParkerBaird-Parker平板和血平板和血平板，血平板平板，血平板361361培养培养18h18h24h24h。Baird-ParkerBaird-Parke
15、r平板平板361361培养培养18h18h24h24h或或45h45h48h48h。 第12页/共23页第十三页，共24页。分离分离分离分离(fnl)(fnl)培养基培养基培养基培养基n nBaird-ParkerBaird-Parker琼脂：培养基中含有卵黄亚碲酸钾，能抑制大多数细菌琼脂：培养基中含有卵黄亚碲酸钾，能抑制大多数细菌的繁殖，并能促进金黄色葡萄球菌的生长使其产生黑色和晕圈。培养的繁殖，并能促进金黄色葡萄球菌的生长使其产生黑色和晕圈。培养基中的丙酮酸钠和甘氨酸也能促进金黄色葡萄球菌的生长。基中的丙酮酸钠和甘氨酸也能促进金黄色葡萄球菌的生长。n n金黄色葡萄球菌的菌落形态：圆形、光滑
16、凸起、湿润，直径约金黄色葡萄球菌的菌落形态：圆形、光滑凸起、湿润，直径约23mm23mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊带，在其外层有一，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊带，在其外层有一透明圈。用接种针接触菌落似有奶油树胶的硬度，偶而可见无混浊带透明圈。用接种针接触菌落似有奶油树胶的硬度，偶而可见无混浊带和透明圈的非典型菌落。和透明圈的非典型菌落。n n长期保存的冷冻或干燥食品长期保存的冷冻或干燥食品(shpn)(shpn)中所分离的菌落比典型菌落所产中所分离的菌落比典型菌落所产生的黑色较淡些，外观可能粗糙并干燥。生的黑色较淡些，外观可能粗糙并干燥。第13页/共23页第十
17、四页，共24页。第14页/共23页第十五页，共24页。分离分离分离分离(fnl)(fnl)培养基培养基培养基培养基n n血琼脂：是一种基础(jch)培养基，含有5%的脱纤维血(羊血或兔血)。用于观察金黄色葡萄球菌的溶血现象。金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上呈溶血。n n金黄色葡萄球菌的菌落形态：呈金黄色，有时也呈白色，大而突起，圆形、不透明、表面光滑，周围有透明的溶血环。第15页/共23页第十六页，共24页。第16页/共23页第十七页，共24页。革兰氏染色革兰氏染色(rns)(rns)第17页/共23页第十八页，共24页。血浆凝固血浆凝固(nngg)(nngg)酶试验酶试验 n n试验原理：致病性
18、的金黄色葡萄球菌产生的血浆试验原理：致病性的金黄色葡萄球菌产生的血浆凝固酶，使血浆中纤维蛋白原转变为纤蛋白，附凝固酶，使血浆中纤维蛋白原转变为纤蛋白，附着于细菌着于细菌(xjn)(xjn)表面表面 ，产生凝固。，产生凝固。n n金黄色葡萄球菌可产生两种凝固酶：一种是与细金黄色葡萄球菌可产生两种凝固酶：一种是与细胞壁结合的凝固酶，为结合凝固酶；另一种是菌胞壁结合的凝固酶，为结合凝固酶；另一种是菌细胞释放于培养基中，为游离凝固酶。二者的抗细胞释放于培养基中，为游离凝固酶。二者的抗原性不同。原性不同。第18页/共23页第十九页，共24页。血浆血浆血浆血浆(xujing)(xujing)(xujing
19、)(xujing)凝固酶试验凝固酶试验凝固酶试验凝固酶试验 n n挑取挑取BairdBairdParkerParker平板或血平板上可疑菌落平板或血平板上可疑菌落1 1个或以上，个或以上，分别接种到分别接种到5mL BHI5mL BHI和营养琼脂小斜面，和营养琼脂小斜面，361361培养培养18 18 h h24 h24 h。 n n取新鲜配置兔血浆，放入小试管中，再加入可疑菌落的取新鲜配置兔血浆，放入小试管中，再加入可疑菌落的BHIBHI培养物，振荡摇匀，置培养物，振荡摇匀，置361361温箱或水浴箱内，每半温箱或水浴箱内，每半小时观察一次，观察小时观察一次，观察6h6h，如呈现，如呈现(c
20、hngxin)(chngxin)凝固（即将试凝固（即将试管倾斜或倒置时，呈现管倾斜或倒置时，呈现(chngxin)(chngxin)凝块）或凝固体积大于凝块）或凝固体积大于原体积的一半，判定为阳性结果。原体积的一半，判定为阳性结果。 第19页/共23页第二十页，共24页。n n同时以血浆凝固酶试验阳性和阴性葡萄球菌菌株的同时以血浆凝固酶试验阳性和阴性葡萄球菌菌株的肉汤培养物作为对照。肉汤培养物作为对照。 n n结果结果(ji gu)(ji gu)如可疑，挑取营养琼脂小斜面的菌如可疑，挑取营养琼脂小斜面的菌落到落到5mL BHI5mL BHI，361361培养培养18h18h48h48h，重复实
21、验。，重复实验。 第20页/共23页第二十一页，共24页。结果结果(jigu)(jigu)报告报告n n如血浆凝固酶试验阳性，可判定为金黄色葡萄球菌(p to qi jn) 。n n报告在25g（mL）样品中检出或未检出金黄色葡萄球菌(p to qi jn)。第21页/共23页第二十二页，共24页。谢谢(xi xie)!第22页/共23页第二十三页，共24页。内容(nirng)总结会计学。第1页/共23页。甲基红试验、 VP试验多为阳性，不产生靛基质。金黄色葡萄球菌可产生血浆凝固酶和耐热DNA酶。耐热DNA酶作为除血浆凝固酶外鉴定金黄色葡萄球菌致病力的指标之一。血琼脂：是一种基础培养基，含有5%的脱纤维血(羊血或兔血)。报告在25g（mL）样品(yngpn)中检出或未检出金黄色葡萄球菌。谢谢。第22页/共23页第二十四页，共24页。
