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1、植物生理学设计性实验植物生理学设计性实验上课时间：周二 第五组乙烯利对油桃生理指标的影响一、实验目的1、通过本实验了解乙烯利对果蔬、通过本实验了解乙烯利对果蔬生理指标的影响。生理指标的影响。2、掌握呼吸强度的测定方法。、掌握呼吸强度的测定方法。3、掌握多酚氧化酶的测定方法及、掌握多酚氧化酶的测定方法及分光光度计的使用方法。分光光度计的使用方法。二 实验原理乙烯利，乙烯利，是一种是一种有机化合物，纯品为白色针有机化合物，纯品为白色针状结晶，工业品为淡棕色液体，易溶于水，状结晶，工业品为淡棕色液体，易溶于水，甲醇、丙酮、乙二醇、丙二醇，微溶于甲苯，甲醇、丙酮、乙二醇、丙二醇，微溶于甲苯，不溶于石油
2、醚。不溶于石油醚。 用作农用植物生长刺激剂用作农用植物生长刺激剂，乙烯利是优质高效植物生长调节剂乙烯利是优质高效植物生长调节剂,一分子乙一分子乙烯利可以释放一分子的乙烯，具有烯利可以释放一分子的乙烯，具有促进果实促进果实成熟，刺激伤流，调节性别转化等效应成熟，刺激伤流，调节性别转化等效应，本，本实验主要研究的是乙烯利对果实成熟的影响，实验主要研究的是乙烯利对果实成熟的影响，通过测定乙烯利处理后的果蔬呼吸强度及多通过测定乙烯利处理后的果蔬呼吸强度及多酚氧化酶的活性，了解其对果蔬生理指标的酚氧化酶的活性，了解其对果蔬生理指标的影响。影响。呼吸强度的测定通常是采用定量碱呼吸强度的测定通常是采用定量碱
3、液吸收果蔬在一定时间内呼吸所释液吸收果蔬在一定时间内呼吸所释放出来的放出来的CO2，再用酸滴定剩余的，再用酸滴定剩余的碱，即可计算出呼吸所释放出的碱，即可计算出呼吸所释放出的CO2量，求出其呼吸强度。其单位量，求出其呼吸强度。其单位为每为每kg每小时释放出每小时释放出CO2毫克数。毫克数。 反应如下：反应如下：2NaOH + CO2Na2CO3 + H2O Na2CO3 + BaCl2BaCO3 + 2NaCl 2NaOH + H2C2O4 Na2CO4 + 2H2O 测定可分为气流法和静置法两种。气流测定可分为气流法和静置法两种。气流法设备较复杂，结果准确。静置法简便，法设备较复杂，结果准确
4、。静置法简便，但准确性较差。由于实验条件限制，本实但准确性较差。由于实验条件限制，本实验采用静置法验采用静置法 多多酚酚氧氧化化酶酶是是一一种种含含铜铜的的氧氧化化酶酶，能能使使一一元元酚酚和和二二元元酚酚氧氧化化生生成成醌醌。多多酚酚氧氧化化酶酶活活性性可可以以用用比比色色法法测测量量产产物物的的形形成成，常常用用的的底底物物如如儿儿茶茶酚酚（邻邻苯苯二二酚酚）和和多多巴巴（3，4-二二羟羟苯苯丙氨酸）。丙氨酸）。三、实验仪器、材料及试剂1、实验仪器、实验仪器：冰箱冰箱1台、移液管（台、移液管（1mL、2mL、5mL、10mL各一支）、洗耳球各一支）、洗耳球1个、培养皿个、培养皿1个、个、干
5、燥器干燥器1台、三角瓶台、三角瓶2个、刀片、烧杯个、刀片、烧杯 50mL 2个、研钵个、研钵1套、离心机套、离心机1台、离心管台、离心管2支、恒温水浴锅支、恒温水浴锅1台、分光光度计台、分光光度计1台、电台、电子天平子天平1台、试管台、试管2支，酸式滴定管支，酸式滴定管1支。支。2、材料、材料：油桃【（：油桃【（1）、冷库贮藏；（）、冷库贮藏；（2）、）、室温贮藏室温贮藏5天（乙烯利天（乙烯利0.1%处理处理3天）】天）】3、试剂、试剂：0.1%乙烯利、乙烯利、0.4mol/LNaoH、Bacl2溶液、酚酞试剂、溶液、酚酞试剂、0.1mol/L草酸溶液、草酸溶液、0.2mol/L磷酸缓冲溶液、
6、蒸馏水、磷酸缓冲溶液、蒸馏水、0.1mol/L邻苯二酚。邻苯二酚。四 实验内容1、呼吸强度的测定、呼吸强度的测定采用静止法。吸取采用静止法。吸取0.4molL-1的氢氧的氢氧化钠溶液化钠溶液25ml于培养皿中，立即放入于培养皿中，立即放入干燥器中，把已称重的果实（约干燥器中，把已称重的果实（约1kg）放到干燥器中的隔架上，密封并记时，放到干燥器中的隔架上，密封并记时，1h后，吸取后，吸取10mLNaOH转移到三角瓶转移到三角瓶中，再加入中，再加入1.0ml的的Bacl2溶液和两滴溶液和两滴酚酞，用以标定好的酚酞，用以标定好的0.1molL-1的草的草酸溶液滴定至终点，以不放样品的空酸溶液滴定至
7、终点，以不放样品的空白组为对照，每个样品重复三组，操白组为对照，每个样品重复三组，操作同上。作同上。呼吸强度的单位表示为呼吸强度的单位表示为CO2，mgkg-1h-1。按下式计算：按下式计算：呼吸强度（呼吸强度（CO2，mgkg-1h-1）=0.1（V样品样品-V空白）空白）4425/（w1）式中：式中：v样品为样品所消耗草酸的体积，单位样品为样品所消耗草酸的体积，单位mL v空白为空白组所消耗草酸的体积，单位空白为空白组所消耗草酸的体积，单位mL 44为为co2的质量分数的质量分数 25为为NaoH的体积，单位的体积，单位mL w为样品鲜重，单位为样品鲜重，单位g 1为所用时间，为所用时间，
8、1h实验结果记录在下表样品样品样品质量样品质量v样品样品V空白空白呼吸强度呼吸强度未经乙烯利处理经乙烯利处理2、多酚氧化酶多酚氧化酶(PPO)活性测定活性测定 称取果肉称取果肉3.0 g加加8.0 ml预冷的预冷的0.2 molL-1pH=6.2 Na2HPO4-NaH2PO4缓冲液冰浴缓冲液冰浴研磨研磨成成匀浆，于匀浆，于4500 rpm离心离心10 min，取，取上清液上清液1.0 mL加加4.5 mL缓冲液和缓冲液和0.5 mL 0.1 molL-1 邻苯二酚震荡摇匀，于邻苯二酚震荡摇匀，于37水水浴恒温反应浴恒温反应15 min，取出立即于沸水浴煮沸，取出立即于沸水浴煮沸5 min，冷却后测其，冷却后测其525 nm吸光度。以煮沸吸光度。以煮沸5 min的灭活酶液作空白对照的灭活酶液作空白对照。以每分钟内以每分钟内吸光度变化吸光度变化0.01为为1个个PPO活力单位（活力单位（U）。）。 A：样品管在样品管在525 nm的吸光度；的吸光度；VT：提取酶液总体积，：提取酶液总体积，ml；W：样品鲜重，：样品鲜重，g；Vs：测定用酶液体积，：测定用酶液体积，ml；T：反应时间，：反应时间，min。
