园艺植物组织培养复习过程

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1、园艺植物组织培养内 容（4学时）第一节 概说第二节 园艺植物组织培养的应用第三节 园艺植物原生质体培养和体细胞杂交第四节 原生质体融合与园艺植物改良植物组织培养作为一门生物技术近30年发展迅速，广泛应用于农业、园艺、林业、医药。农业生产中进行优良植物种类的快快速繁殖速繁殖，脱除病毒脱除病毒和辅助育种辅助育种等，并产生巨大的经济效益。现代农业必须用生物技术“提升”，“植物组织培养”就是用生物技术提升农业的重要科学手段。园艺植物离体无性繁殖园艺植物离体无性繁殖简称离体繁殖简称离体繁殖（in vitroin vitro propagation propagation)、微微型繁殖型繁殖（microp

2、ropagationmicropropagation)，是指利用离体是指利用离体培养技术将来自优良植株的茎尖、腋芽、叶培养技术将来自优良植株的茎尖、腋芽、叶片、鳞片等器官、组织和细胞进行离体培养，片、鳞片等器官、组织和细胞进行离体培养，并在短期内获得大量遗传性一致的个体的方并在短期内获得大量遗传性一致的个体的方法（技术）。法（技术）。用这种方法得到的植株群体来自一个单株用这种方法得到的植株群体来自一个单株（或一个单芽），它们遗传组成相同，这些（或一个单芽），它们遗传组成相同，这些株群可称株群可称单株无性系单株无性系。近近400种植物离体繁殖已获成功。兰花、无子种植物离体繁殖已获成功。兰花、无子

3、西瓜、马铃薯、杨树等已在种苗生产上广泛西瓜、马铃薯、杨树等已在种苗生产上广泛应用。应用。园艺植物离体无性繁殖的意义（优越性）园艺植物离体无性繁殖的意义（优越性）繁殖速度快，经济效益高繁殖速度快，经济效益高占用空间小，不受季节限制，占用空间小，不受季节限制，便于工厂化育苗便于工厂化育苗繁殖各种珍稀、涉危苗木和繁殖各种珍稀、涉危苗木和突变体，为育种服务突变体，为育种服务离体繁殖周期：离体繁殖周期：13个月个月繁殖系数：几十繁殖系数：几十几百倍几百倍又称快繁又称快繁离体繁殖是建立在离体繁殖是建立在体细胞系的基础上，体细胞系的基础上，是在人工控制的环是在人工控制的环境条件下，不会造境条件下，不会造成性

4、状分离，也不成性状分离，也不会退化，同时还可会退化，同时还可避免病虫害的侵染。避免病虫害的侵染。手指玫瑰手指玫瑰 菊花的组培快繁（一）外植体材料选择与灭菌一）外植体材料选择与灭菌 选取长势健壮的植株作为外植体母株，以培养出大量选取长势健壮的植株作为外植体母株，以培养出大量的无病植株。的无病植株。 在外植体的选择上，可以选取生长健壮嫩在外植体的选择上，可以选取生长健壮嫩茎和叶片作为材料。流水洗去表面灰尘，在超净工作台用茎和叶片作为材料。流水洗去表面灰尘，在超净工作台用75 %酒精处理酒精处理2030 s，再用无菌水冲洗，再用无菌水冲洗35 次，转入次，转入0.1 %升汞溶液浸泡升汞溶液浸泡710

5、 min，再用无菌水冲洗，再用无菌水冲洗46 次，次，用滤纸吸干水分。用滤纸吸干水分。（二）诱导、继代培养（二）诱导、继代培养 在无菌条件下，用剪刀将外植体茎段切成在无菌条件下，用剪刀将外植体茎段切成0. 51 cm 长小段，水平放置接种；叶片切成长小段，水平放置接种；叶片切成5mm5mm小块，下表皮朝下水平放置接入初代小块，下表皮朝下水平放置接入初代培养基中，接种完成后即转入培养室进行初代培培养基中，接种完成后即转入培养室进行初代培养，培养温度养，培养温度2228 ，光强，光强10004000 Lx。1.间接再生途径间接再生途径 茎段和叶片接种到培养基上，均可以从一周茎段和叶片接种到培养基上

6、，均可以从一周内，明显可以看到茎段和叶片开始膨大。内，明显可以看到茎段和叶片开始膨大。20d后后产生愈伤组织，产生愈伤组织，30d愈伤组织分化出芽。愈伤组织分化出芽。2.直接再生途径直接再生途径 茎段和叶片接种到培养基上，均可以从一周茎段和叶片接种到培养基上，均可以从一周内，明显可以看到茎段和叶片开始膨大。但是内，明显可以看到茎段和叶片开始膨大。但是20d后不产生愈伤组织，直接分化出芽。后不产生愈伤组织，直接分化出芽。菊花再生植株菊花再生植株（三）生根、移栽（三）生根、移栽 当培养基中的植株出芽当培养基中的植株出芽后，再将其转入到生根后，再将其转入到生根培养基中，诱导其生根。培养基中，诱导其生

7、根。或通过无根嫩茎扦插生或通过无根嫩茎扦插生根。根。 1.试管生根试管生根 切取切取3cm左右无根嫩茎，转插到左右无根嫩茎，转插到1/2MS+NAA0.1培培养基中，经两周即可生根，然后移栽驯化。移栽初养基中，经两周即可生根，然后移栽驯化。移栽初期保持高湿度条件，营养钵基质浇透水，取出生根期保持高湿度条件，营养钵基质浇透水，取出生根的试管苗，洗掉附加在根部的培养基，用竹签在基的试管苗，洗掉附加在根部的培养基，用竹签在基质上打一小孔，将幼苗插入基质中。然后家设小拱质上打一小孔，将幼苗插入基质中。然后家设小拱棚以保湿，随着幼苗的生长，逐渐降低空气湿度和棚以保湿，随着幼苗的生长，逐渐降低空气湿度和基

8、质含水量，转为正常的管理阶段。基质含水量，转为正常的管理阶段。 2.扦插生根扦插生根 利用菊花无根嫩茎易于生根的特点，也利用菊花无根嫩茎易于生根的特点，也可免去试管生根这道程序。剪取可免去试管生根这道程序。剪取23cm无无根苗，插植到珍珠岩或蛭石的基质中，基根苗，插植到珍珠岩或蛭石的基质中，基质事先用生根激素溶液浸透，质事先用生根激素溶液浸透，10d后生根率后生根率可达可达95%100%。菊花炼苗菊花炼苗菊花移栽苗菊花移栽苗园艺植物离体无性繁殖的方式园艺植物离体无性繁殖的方式器官发生型器官发生型(organogenesis type)(organogenesis type)胚状体发生型胚状体发

9、生型(embryogenesis type)(embryogenesis type)不定芽型（不定芽型（adventitious bud type)adventitious bud type)器官型器官型(organ type)(organ type)原球茎型原球茎型(protocorm type)(protocorm type)球茎芽型球茎芽型 块茎型块茎型鳞茎型鳞茎型孢子型孢子型根茎型根茎型 微枝扦插型微枝扦插型 器官发生型器官发生型(organogenesis type)：诱导器官外植体产生诱导器官外植体产生愈伤组织愈伤组织，经分化培，经分化培养形成芽、根再生成植株的方式。养形成芽、根再

10、生成植株的方式。技术关键：技术关键：外植体诱导产生的愈伤组织要早外植体诱导产生的愈伤组织要早期挑选，使其来源尽量一致。期挑选，使其来源尽量一致。特点：特点：繁殖速度快；培养经愈伤组织阶段再繁殖速度快；培养经愈伤组织阶段再生成植株，遗传性不稳定，易产生变异。生成植株，遗传性不稳定，易产生变异。芦荟、烟草、油菜等芦荟、烟草、油菜等 无菌母株制备无菌母株制备增殖、分化增殖、分化植株再生及鉴定植株再生及鉴定炼苗和移植炼苗和移植基基本本程程序序与与技技术术培养基中激素配比培养基中激素配比激素种类及浓度激素种类及浓度基本培养基组成基本培养基组成渗透压渗透压逐步过渡逐步过渡培养基筛选培养基筛选材料灭菌材料灭

11、菌芦荟组织培养快速繁殖材料和培养基材料和培养基1015cm高的芦荟幼苗高的芦荟幼苗愈伤组织诱导培养基愈伤组织诱导培养基 MS(1-6mg/L)BA+(0.1-0.5mg/L)NAA分化培养基分化培养基MS(2-4mg/L)BA+(0.1-0.5mg/L)NAA生根培养基生根培养基MS(0.1-0.5mg/L)IBA+(2-5mg/L)多效唑多效唑繁殖方法繁殖方法愈伤组织培养愈伤组织培养 外植体：茎尖外植体：茎尖外植体消毒：酒精升汞外植体消毒：酒精升汞培养基：愈伤组织诱导培养基培养基：愈伤组织诱导培养基培养条件：温度培养条件：温度 252 光照光照 10002000lx 1012h/d培养时间培

12、养时间 1525d （形成愈伤）（形成愈伤）繁殖方法繁殖方法继代培养继代培养种子种子 愈伤切块愈伤切块培养基及条件培养基及条件 同愈伤组织培养同愈伤组织培养培养时间培养时间 1030分化培养分化培养种子种子 愈伤切块愈伤切块培养基培养基 分化培养基分化培养基培养条件培养条件 同愈伤组织培养同愈伤组织培养培养时间培养时间 3050d （出芽，叶）（出芽，叶）生根培养生根培养材料材料 3cm高的幼苗高的幼苗培养基培养基 生根培养基生根培养基培养条件培养条件 同愈伤培养同愈伤培养培养时间培养时间 15d炼苗炼苗 选材选材 苗高苗高510cm，健壮，健壮清洗培养基，喷水清洗培养基，喷水 条件条件 15

13、 25，6080湿度，湿度，1224h移栽移栽移入驯化苗圃（蛭石组成）移入驯化苗圃（蛭石组成） 1520d 移入苗圃移入苗圃胚状体发生型胚状体发生型(embryogenesis type)(embryogenesis type)：指园艺植物器官、组织和细胞外植体经培指园艺植物器官、组织和细胞外植体经培养脱分化形成胚状体再成苗的方式。养脱分化形成胚状体再成苗的方式。技术关键：技术关键：提高不同外植体胚状体发生及提高不同外植体胚状体发生及萌发率和提高胚状体同步化率。萌发率和提高胚状体同步化率。特点：特点：胚状体发生数量多、速度快、结构胚状体发生数量多、速度快、结构完整，繁殖系数高；遗传性稳定。完整

14、，繁殖系数高；遗传性稳定。甘蔗、胡萝卜、石刁柏等甘蔗、胡萝卜、石刁柏等 胚状体（胚状体（embryoid）：）：指在组织培养中，指在组织培养中，由一个非合子细胞由一个非合子细胞(体细胞体细胞)，经胚胎发生和，经胚胎发生和胚胎发育过程（经过原胚、球形胚、心形胚胎发育过程（经过原胚、球形胚、心形胚、鱼雷胚和子叶胚胚、鱼雷胚和子叶胚5个时期），形成具有个时期），形成具有双极性的胚状结构。双极性的胚状结构。合合子子心心型型胚胚 正正在在萌萌发发的的体体胚胚合子胚与体胚比较合子胚与体胚比较针叶松体细胞胚及体胚萌发生长针叶松体细胞胚及体胚萌发生长花椰菜体胚发育的不同阶段花椰菜体胚发育的不同阶段菊花花瓣体细

15、胞胚胎发生及体胚发育过程的扫描电镜观察菊花花瓣体细胞胚胎发生及体胚发育过程的扫描电镜观察不定芽型（不定芽型（adventitious bud type)：选取具有顶芽和腋芽的短枝选取具有顶芽和腋芽的短枝无菌培养，诱导芽萌发成苗无菌培养，诱导芽萌发成苗或增殖产生许多不定芽发育或增殖产生许多不定芽发育成苗，将新萌生的枝条再转成苗，将新萌生的枝条再转接继代，重复芽到苗的增殖接继代，重复芽到苗的增殖过程，最后使其生根形成植过程，最后使其生根形成植株的方式。株的方式。技术关键：技术关键：打破顶端优势，打破顶端优势，促使腋芽增殖并促其生根。促使腋芽增殖并促其生根。特点：特点：繁殖率高、保持物种繁殖率高、保

16、持物种的遗传稳定性，多用于林木的遗传稳定性，多用于林木的繁殖。的繁殖。器官型器官型(organ type)指直接从茎、叶、鳞片等外植体上诱导不指直接从茎、叶、鳞片等外植体上诱导不定芽或带芽的休眠器官（如小鳞茎、小球定芽或带芽的休眠器官（如小鳞茎、小球茎、小块茎）产生再生成植株的方式。茎、小块茎）产生再生成植株的方式。技术关键：技术关键：对培养基要求高，控制好激素对培养基要求高，控制好激素浓度，避免愈伤组织发生。浓度，避免愈伤组织发生。优点：优点：繁殖率高，速度较快；遗传性稳定。繁殖率高，速度较快；遗传性稳定。三倍体无籽西瓜、甘蔗、香蕉、香石竹、三倍体无籽西瓜、甘蔗、香蕉、香石竹、丝石竹等丝石竹

17、等 原球茎型原球茎型(protocorm type)兰属特有的方式，兰属特有的方式，即外植体经培养产即外植体经培养产生原球茎，再直接生原球茎，再直接长成植株。长成植株。原球茎：兰科植物组织培养中形成的一种原球茎：兰科植物组织培养中形成的一种特殊的中间繁殖体，是呈珠粒状、由胚性特殊的中间繁殖体，是呈珠粒状、由胚性细胞组成、基部生假根、类似嫩茎的器官。细胞组成、基部生假根、类似嫩茎的器官。圆球茎可以增殖形成原球茎丛。圆球茎可以增殖形成原球茎丛。球茎芽型球茎芽型 叶柄表面产生圆球形小突起叶柄表面产生圆球形小突起球茎芽，一球茎芽，一端出芽一端出根端出芽一端出根 遗传性较稳定，球茎芽可直接放入土中种遗传

18、性较稳定，球茎芽可直接放入土中种植植 唐唐菖菖蒲蒲观观叶叶海海棠棠块茎型块茎型 叶片或叶柄上形成粒状芋块，进一步分叶片或叶柄上形成粒状芋块，进一步分化出芽和根化出芽和根块茎芽可为繁殖系母体，不断切割繁殖块茎芽可为繁殖系母体，不断切割繁殖移栽，成活率高移栽，成活率高 。花叶芋花叶芋 鳞茎型鳞茎型 鳞片近轴面或边缘直接形成带根的小鳞茎鳞片近轴面或边缘直接形成带根的小鳞茎 在试管内形成小鳞茎需较长时间在试管内形成小鳞茎需较长时间 百合百合 郁金香郁金香孢子型孢子型 用成熟或未成熟的孢子进行培养用成熟或未成熟的孢子进行培养 孢子繁殖最困难的是表面消毒，萌发时孢子繁殖最困难的是表面消毒，萌发时间较长间较

19、长 地钱地钱狼尾蕨狼尾蕨根茎型根茎型 蕨类具有横向的茎及直立的短根茎，为蕨类具有横向的茎及直立的短根茎，为组织培养的最佳外植体。组织培养的最佳外植体。 根状茎上产生蕨叶及根，繁殖速度较孢根状茎上产生蕨叶及根，繁殖速度较孢子型快子型快肾蕨等肾蕨等 微枝扦插型微枝扦插型 带芽的小插条在试管内进行无菌扦插带芽的小插条在试管内进行无菌扦插 为木本植物进行快速繁殖的主要方式为木本植物进行快速繁殖的主要方式 葡萄、杨树葡萄、杨树 1、快繁、快繁利用适宜的植物材料(外植体)，通过组织培养的途径，使之分生出新的植株个体，即为组培苗。这种繁殖方式称为微繁或快繁。二、园艺植物组织培养的意义二、园艺植物组织培养的意

20、义微繁有许多优势微繁有许多优势繁殖速度快，通常一年内可以繁殖数以万计的，较为整齐一致的种苗，大大提高繁殖系数。特别对于难繁殖的园艺植物的名贵品种、稀有种质的繁殖推广具有重要意义。一个兰花的茎尖一年内可育成400万个原球茎，一个草莓茎尖一年内可育出成苗3000万株。 占用空间小，一间30平方米的培养室可以放置一万多个瓶子，足以同时繁殖几万株种苗。可以培养脱毒种苗。器官培养为无性繁殖，可以最大限度的保存种质。（1）培育单倍体提高育种效率，改良品种提高育种效率，改良品种花药培养花药培养：把发育到一定阶段的花药接把发育到一定阶段的花药接种在人工培养基上，使其发育和分化成种在人工培养基上，使其发育和分化

21、成植株的过程植株的过程花粉培养：花粉培养：从花药中分离出花粉粒使之从花药中分离出花粉粒使之成为分散或游离的状态，通过培养使其成为分散或游离的状态，通过培养使其脱分化并发育成植株的过程脱分化并发育成植株的过程目的是获得单倍体植株目的是获得单倍体植株迅速获得纯合型材料，缩短育种年限迅速获得纯合型材料，缩短育种年限获得育种中间材料获得育种中间材料与诱变育种相结合可以提高诱变频率与诱变育种相结合可以提高诱变频率与细胞融合相结合，使这一育种途径更具有实与细胞融合相结合，使这一育种途径更具有实际应用意义际应用意义作为遗传工程受体更为有效作为遗传工程受体更为有效用作基础遗传研究的各个领域用作基础遗传研究的各

22、个领域 培养方法培养方法 花药看护培养花药看护培养花粉悬浮培养花粉悬浮培养固液双层培养固液双层培养花粉或小孢子的分离花粉或小孢子的分离花粉或小孢子培养花粉或小孢子培养7 7天天1414天天2121303040后后曼陀罗的花药培养曼陀罗的花药培养 一、胚培养的类型：一、胚培养的类型：分为成熟胚培养和幼胚培养两种。分为成熟胚培养和幼胚培养两种。(2)园艺植物胚与胚乳培养园艺植物胚与胚乳培养第四章第四章 胚胎培养和胚乳培养胚胎培养和胚乳培养被子植物双受精（被子植物双受精（double fertilization): 二倍体合子二倍体合子 三倍体胚乳三倍体胚乳幼胚培养幼胚培养: Hanning（190

23、4）；）；Laibach（1925） 最先付诸应用的植物细胞工程技术：最先付诸应用的植物细胞工程技术：20世纪世纪20年代建立的幼胚培养和胚胎拯救年代建立的幼胚培养和胚胎拯救（embryo rescue)技术技术中国学者在裸子植物胚胎培养方面的工作中国学者在裸子植物胚胎培养方面的工作1934 清华的李继侗和沈同发现银杏胚乳提清华的李继侗和沈同发现银杏胚乳提取物可刺激离体胚生长取物可刺激离体胚生长1941 Van Overbeek 发现椰乳对幼胚发育发现椰乳对幼胚发育的促进作用的促进作用1943 罗士韦和王伏雄在罗士韦和王伏雄在Science发文章，发文章，离体培养云南松和云南杉幼胚成功。离体培

24、养云南松和云南杉幼胚成功。胚乳培养的意义胚乳培养的意义胚乳：三倍体胚乳：三倍体 胚乳细胞中储存大量淀粉、蛋白质和脂类，胚乳细胞中储存大量淀粉、蛋白质和脂类，是研究这些产物代谢工程的理想系统是研究这些产物代谢工程的理想系统 完全由薄壁细胞组成的均质组织，是实验形完全由薄壁细胞组成的均质组织，是实验形态发生学研究的极好材料。态发生学研究的极好材料。 胚乳植株三倍体，高产、优质、果实无籽胚乳植株三倍体，高产、优质、果实无籽1940 La Rue 最先培养胚乳最先培养胚乳1970 Bhojwani 白花寄生获得胚乳植株白花寄生获得胚乳植株1977，1978 母锡金母锡金 王大元王大元第一节第一节 胚胎

25、培养胚胎培养一、成熟胚培养一、成熟胚培养 盾片在胚吸收营养上有重要作用盾片在胚吸收营养上有重要作用 胚胎培养可以解除种皮抑制作用胚胎培养可以解除种皮抑制作用 MS适用于多种植物成熟胚培养适用于多种植物成熟胚培养 成功例子：杂种桃成熟胚培养与新品种培育成功例子：杂种桃成熟胚培养与新品种培育植物胚胎的发育时期植物胚胎的发育时期二、幼胚培养二、幼胚培养 幼胚在胚珠中异养，离体培养必须提供足够的营养和适宜幼胚在胚珠中异养，离体培养必须提供足够的营养和适宜的条件。的条件。 双子叶植物胚胎的发育时期：合子（双子叶植物胚胎的发育时期：合子（zygote），二细胞原），二细胞原胚（胚（two-celled p

26、roembryo），球形胚（），球形胚（globular embryo），心形胚（），心形胚（heart-shaped embryo），鱼雷形胚），鱼雷形胚（torpedo-shaped embryo），拐杖形胚（），拐杖形胚（walking-stick-shaped embryo），倒），倒U形胚（形胚（inverted U-shaped embryo），成熟胚（），成熟胚（mature embryo） 心形胚以后的双子叶胚较易培养，球形胚很难培养。心形胚以后的双子叶胚较易培养，球形胚很难培养。 单子叶植物胚胎的发育时期与双子叶植物有很大不同。单子叶植物胚胎的发育时期与双子叶植物有很大不同。

27、 幼胚的培养幼胚的培养常用培养基：常用培养基：Nitsch、MS、1/2MS 禾谷类也用禾谷类也用N6和和B5 幼胚培养需要的蔗糖浓度高于成熟胚，可用代幼胚培养需要的蔗糖浓度高于成熟胚，可用代 谢上惰性的甘露醇部分代替蔗糖来调节渗透压。谢上惰性的甘露醇部分代替蔗糖来调节渗透压。 VB1和生物素对胚胎发育有重要作用。和生物素对胚胎发育有重要作用。一般不需要外用激素。一般不需要外用激素。八分成熟的椰乳对幼胚促进最明显。八分成熟的椰乳对幼胚促进最明显。胚乳看护培养（胚乳看护培养（nurse culture）弱光或黑暗培养弱光或黑暗培养防止幼胚的提前萌发防止幼胚的提前萌发幼胚的提前萌发幼胚的提前萌发：

28、未成熟胚在培养基上未发育为：未成熟胚在培养基上未发育为成熟胚，而提前生长为瘦弱和畸形幼苗的现象。成熟胚，而提前生长为瘦弱和畸形幼苗的现象。抑制幼胚提前萌发的因素：提高培养基中蔗糖浓抑制幼胚提前萌发的因素：提高培养基中蔗糖浓度（度（10）；加入）；加入ABA（0.010.2mg/L）和酪）和酪蛋白水解物（蛋白水解物（200500mg/L）；高温（）；高温（32）、）、强光培养。强光培养。ABA可抑制幼胚吸水，使其脱水干燥，发育成熟。可抑制幼胚吸水，使其脱水干燥，发育成熟。操作实例和经验操作实例和经验双培养基双培养基大麦幼胚培养基：大麦幼胚培养基：B51/2MS 无机盐无机盐MS有机成分有机成分

29、普适于各种普适于各种禾谷类幼胚培养禾谷类幼胚培养肌醇添加肌醇添加胚胎培养的应用胚胎培养的应用 11、拯救杂种胚获得稀有杂种、拯救杂种胚获得稀有杂种胚胎拯救胚胎拯救：种间或属间杂交时，两个基因组表达：种间或属间杂交时，两个基因组表达不协调，多数情况下胚乳最先败育，胚仍然健不协调，多数情况下胚乳最先败育，胚仍然健康，可通过离体胚培养将杂种幼胚培养成植株，康，可通过离体胚培养将杂种幼胚培养成植株，称为胚胎拯救。称为胚胎拯救。 把握好胚胎拯救的时间；盾片的作用；冷把握好胚胎拯救的时间；盾片的作用；冷处理；先诱导杂种胚产生愈伤，再分化出杂种处理；先诱导杂种胚产生愈伤，再分化出杂种植株。植株。胚胎培养的应

30、用胚胎培养的应用22、产生单倍体：染色体消除之后，剥离胚培养、产生单倍体：染色体消除之后，剥离胚培养3、缩短育种周期：打破休眠、缩短育种周期：打破休眠4、稀有植物的繁殖：、稀有植物的繁殖：Makapuno第二节第二节 胚乳培养和三倍体的产生胚乳培养和三倍体的产生多数情况多数情况先诱导胚乳细胞增生愈伤组织先诱导胚乳细胞增生愈伤组织，再诱导，再诱导愈伤分化器官或胚状体愈伤分化器官或胚状体 胚和胚乳一起培养有利于胚乳愈伤形成，胚和胚乳一起培养有利于胚乳愈伤形成，但之后就应去掉，免得胚愈伤与之混淆但之后就应去掉，免得胚愈伤与之混淆胚乳培养的应用前景：胚乳培养的应用前景： 胚乳细胞分裂不规则，胚乳植株中

31、既有三胚乳细胞分裂不规则，胚乳植株中既有三倍体，也有许多非整倍体。倍体，也有许多非整倍体。三倍体的经济价值：无籽果实；生物量高；品质三倍体的经济价值：无籽果实；生物量高；品质好；获得三体以进行基因定位。好；获得三体以进行基因定位。植物胚胎发生过程：植物胚胎发生过程： 原胚球形胚心型胚鱼雷胚子叶胚原胚球形胚心型胚鱼雷胚子叶胚 球球形形胚胚前前期期心心型型胚胚前前期期鱼鱼雷雷胚胚球球形形胚胚1、成熟胚培养、成熟胚培养 成熟胚为子叶期以后的胚，其在简单的培成熟胚为子叶期以后的胚，其在简单的培养基上即可萌发生长。对营养条件要求不严格。养基上即可萌发生长。对营养条件要求不严格。 主要用来繁殖不易萌发植物

32、，或研究胚和胚乳主要用来繁殖不易萌发植物，或研究胚和胚乳及子叶的关系等。及子叶的关系等。台湾红豆杉成熟胚培养台湾红豆杉成熟胚培养牡丹成熟胚的离体培养与快速繁殖牡丹成熟胚的离体培养与快速繁殖 2、幼胚培养方法、幼胚培养方法 远缘杂种胚，要在其夭折前培养。远缘杂种胚，要在其夭折前培养。 分离：分离：先取出胚珠，剥离珠被，取出完整的先取出胚珠，剥离珠被，取出完整的幼胚，后培养。幼胚，后培养。 培养培养：胚离体培养发育时期分为异养期和自：胚离体培养发育时期分为异养期和自养期。在心形期转入自养生长。对于难培养的养期。在心形期转入自养生长。对于难培养的幼胚，可利用胚乳看护培养。幼胚，可利用胚乳看护培养。黄

33、瓜远缘杂种幼胎培养黄瓜远缘杂种幼胎培养3、胚培养的应用、胚培养的应用（1）克服远缘杂交不亲和性）克服远缘杂交不亲和性如利用如利用“胚胎拯救（胚胎拯救（ Embryo rescue）”技术获得远缘杂种。技术获得远缘杂种。（2）打破种子休眠，缩短育种周期）打破种子休眠，缩短育种周期（3）提高种子萌发率）提高种子萌发率特别是对于一些长期营养繁殖的植物种子。特别是对于一些长期营养繁殖的植物种子。4、种质保存、种质保存种质保存种质保存:利用天然或人工创造的适宜环境，利用天然或人工创造的适宜环境，使个体中所含有的遗传物质保持其遗传完使个体中所含有的遗传物质保持其遗传完整性，高活力，能通过繁殖将遗传物质传整

34、性，高活力，能通过繁殖将遗传物质传递下去。递下去。5、进行生理生化、细胞学、遗传学等领域的基础研究优势：优势：（1）环境可控；（2）因材料来源广泛、发现早、母本清晰因此为体细胞突变的研究提供了基础。第三节第三节 园艺植物组织培养的应用园艺植物组织培养的应用一、器官培养和离体繁殖一、器官培养和离体繁殖1、保持母系优良种性、保持母系优良种性大多数果树和观赏植物都是高度杂合的，大多数果树和观赏植物都是高度杂合的，后代种子变异广泛与母本差异大后代种子变异广泛与母本差异大2、繁殖速度快、系数大、周期短、占用空、繁殖速度快、系数大、周期短、占用空间小。间小。二、胚抢救二、胚抢救在园艺植物上的应用：1、抢救

35、发育不良或早期退化胚及进行早熟、无籽品种的育种；2、克服远缘杂交不亲和；3、用于柑橘合子胚抢救、三倍体育种及获得柑橘无病毒苗。 远缘杂交可以引进优良野生种质资源，提高抗性和品质，扩大基因库。菊花由于同源性差异，双亲生理上的不协调，胚与胚乳的不亲和等原因，远缘杂交很难得到种子，或者得到了也不萌发，或萌发后夭亡。 利用生物技术可以克服远缘杂交障碍，克服受精前不亲和现象，而胚拯救技术被认为 是 克 服 受 精 后 障 碍 的 有 效 手 段 。Watannabe（1977 ）利用两个二倍体的野生菊（Chrysanthemurn boreale和 C.makinoi ）和多倍体栽培菊花杂交后进行胚拯救，获得不同倍性的杂种，杂种的外部形态性状相似于多倍体，同时还得到孤雄生殖的单倍体。三、单倍体育种三、单倍体育种利用植物仅有的1套染色体套染色体的配子体而形成纯系的育种技术称其为单倍体育种。目前，世界上有200多种植物成功地再生出单倍体植株，其中我国首先报道的有40多种。花药培养是获得单倍体植株的主要途径，在园艺植物中成功的报道很多，17属20多种，如杨树、桑树、银杏、苹果、马铃薯、葡萄、柑橘、荔枝、龙眼、四季海棠、芦笋、辣椒、茄子和白菜等。