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1、 实验一斐林试剂置换法测定还原糖的含斐林试剂置换法测定还原糖的含量量一、实验原理糖类包括多糖、双糖和单糖，其中单糖和某糖类包括多糖、双糖和单糖，其中单糖和某些双糖具有游离的羰基，称为些双糖具有游离的羰基，称为还原糖还原糖，多糖，多糖和蔗糖无还原性。利用糖的还原性，与斐林和蔗糖无还原性。利用糖的还原性，与斐林试剂（氧化剂）中的二价铜离子还原为一价试剂（氧化剂）中的二价铜离子还原为一价铜，进行氧化还原反应，而进行测定铜，进行氧化还原反应，而进行测定. .非还原非还原糖必须转化为还原糖，再进行测定。糖必须转化为还原糖，再进行测定。斐林试剂中酒石酸钾钠铜是一种氧化剂，斐林试剂中酒石酸钾钠铜是一种氧化剂
2、，反应的终点可用次甲基蓝作指示剂，在反应的终点可用次甲基蓝作指示剂，在碱性、碱性、沸腾沸腾环境下还原呈无色。根据斐环境下还原呈无色。根据斐林试剂完全还原所需的还原糖量，计算林试剂完全还原所需的还原糖量，计算出样品还原糖量。出样品还原糖量。二、试剂与材料1、斐林试剂 甲 69.3g CuSO4.5H2O 1000ml 50ml/组 乙 346g 酒石酸钾钠+100gNaOH 1000ml 50ml/组2、1%次甲基蓝 1g次甲基蓝+100ml水/班 棕色瓶保存3、0.2%标准G 2gG105烘干到恒重加水到 1000ml 2000ml/班 4、碱式滴定管5、样品溶液：待测G液样品1：稀释20倍，
3、1000ml /班样品2：稀释50倍，1000ml /班6、电炉 三、操作方法1、斐林试剂标定A 取甲液5ml+乙液5ml，（注意：甲液与乙液混合可生成氧化亚铜沉淀，应将甲液加入乙液，使开始生成的氧化亚铜沉淀重溶）置于250ml三角瓶中，加入10ml水，并从滴定管中加入0.2%的标准G若干毫升（约23ml） 。（量控制在后滴定时消耗G在0.51.0ml) B 电炉上加热至沸，并保持微沸2分钟，加2滴1%次甲基蓝溶液，趁沸以每两秒1滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液用0.2%标准G滴定至蓝色消失，有红棕色沉淀，溶液清亮为终点止。记录耗用的G量为V0,必须在1min内完成。注意：还原的次甲基蓝易被空气
4、中的氧氧化，恢复成原来的蓝色，所以滴定过程中必须保持溶液成沸腾状态，并且避免滴定时间过长。 2、定糖预备试验 同1法取斐林试剂，加10ml样品液，摇匀于电炉上加热至沸，保持微沸2分钟，加2滴1%次甲基蓝，用0.2%G滴定至蓝色消失。记录耗用的G量为V13 3、样品中还原糖测定、样品中还原糖测定 同上法吸取斐林试剂加同上法吸取斐林试剂加1010mlml样品液样品液( (预预先稀释先稀释) )，补加（补加（V V0 0VV1 1）mlml水水，并从滴定管，并从滴定管中预先加入（中预先加入（V V1 1-1-1）ml 0.2%Gml 0.2%G，摇匀至电炉摇匀至电炉上加热至沸，上加热至沸，保持保持2
5、 2minmin微沸微沸，加入，加入2 2滴滴1%1%次次甲基蓝，继续用甲基蓝，继续用G G滴定至蓝色消失。记录消滴定至蓝色消失。记录消耗的标准耗的标准G G体积为体积为V V毫升。毫升。四、结果计算还原糖含量还原糖含量( (以以G G计计) ) （ g/ml) g/ml) = =（Vo-V) *0.002 *1/10 * nVo-V) *0.002 *1/10 * n 式中式中Vo- Vo- 斐林试剂标定值，斐林试剂标定值，ml ml V- V- 样品糖液测定值，样品糖液测定值，ml ml 0.002- 0.002- 标准标准GSGS液浓度，液浓度，g/mlg/ml 10- 10- 样品糖液
6、体积，样品糖液体积，ml ml n- n- 样品稀释倍数样品稀释倍数 五、注意事项五、注意事项本方法测定的是一类具有还原性质的糖，包本方法测定的是一类具有还原性质的糖，包括葡萄糖、果糖、乳糖、麦芽糖等，只是结括葡萄糖、果糖、乳糖、麦芽糖等，只是结果用葡萄糖或其他转化糖的方式表示，所以果用葡萄糖或其他转化糖的方式表示，所以不能误解为还原糖不能误解为还原糖=葡萄糖或其他糖。但如葡萄糖或其他糖。但如果已知样品中只含有某一种糖，如乳制品中果已知样品中只含有某一种糖，如乳制品中的乳糖，则可以认为还原糖的乳糖，则可以认为还原糖=某糖。某糖。分别用葡萄糖、果糖、乳糖、麦芽糖标准品配制分别用葡萄糖、果糖、乳糖
7、、麦芽糖标准品配制标准溶液分别滴定等量已标定的费林氏液，所消标准溶液分别滴定等量已标定的费林氏液，所消耗标准溶液的体积有所不同。证明即便同是还原耗标准溶液的体积有所不同。证明即便同是还原糖，在物化性质上仍有所差别，所以还原糖的结糖，在物化性质上仍有所差别，所以还原糖的结果只是反映样品整体情况，并不完全等于各还原果只是反映样品整体情况，并不完全等于各还原糖含量之和。如果已知样品只含有某种还原糖，糖含量之和。如果已知样品只含有某种还原糖，则应以该还原糖做标准品，结果为该还原糖的含则应以该还原糖做标准品，结果为该还原糖的含量。如果样品中还原糖的成分未知，或为多种还量。如果样品中还原糖的成分未知，或为多种还原糖的混合物，则以某种还原糖做标准品，结果原糖的混合物，则以某种还原糖做标准品，结果以该还原糖计，但不代表该糖的真实含量。以该还原糖计，但不代表该糖的真实含量。五、分析讨论五、分析讨论六、思考题：六、思考题： 1、查阅资料还原糖测定检测方、查阅资料还原糖测定检测方法有哪些？其原理是什么？法有哪些？其原理是什么？ 2、总结本实验方法检测还原糖、总结本实验方法检测还原糖应注意哪些事项？应注意哪些事项？
