细胞生物学课件:银染的真相

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1、银染的真相-关于核仁组织区不得不说的二三事纯手打,勿喷银染法 银染法是生物科学常用的试验方法,种类有很多,具体染色机制尚不明确,大致原理是银离子被还原成银颗粒沉淀在蛋白质表面从而显色,染色的程度与蛋白中的一些特殊的基团有关,不含或者很少含半胱氨酸残基的蛋白质有时候呈负染。在这里,我们可以用银染法来研究rRNA转录的活性核仁核仁是转录加工rRNA和装配核糖体亚基的场所核仁组织区NOR位于核仁的纤维中心,这里存在rRNA基因也就是rDNA,也是核仁的染色质区。之所以叫他核仁组织区,是因为就是他组织的核仁的形成。在细胞分裂间期,他的rDNA是从染色质延伸过来,在核仁组织区成袢环状,每个袢环称为一个核

2、仁组织者(如图)在分裂期,这些DNA袢环又螺旋化为染色体的一部分,具体位置是在染色体的次缢痕部位(如图),具体在人类上,是13、14、15、21、22这几条染色体。然后,rRNA就是在这样的一个地方合成的,具体合成过程与所谈的主题无太多关系,不多赘述。核仁组织区银染法原理核仁组织区银染法原理当NOR在间期转录时,产生一种与转录活动密切相关的酸性蛋白在基因附近(C23,B23),此蛋白含有大量S-H基团和二硫键,可保留至中期并能将染液中的银离子还原为金属银而显现为黑色。而没有转录活性的NOR则不会被染色,所以银染法可在中期染色体上显示具有转录活性的NOR数目,而且,染色的深黑程度,还可以反应出基因的活性高低。 核仁成周期性变化,在前期结束时才完全消失,此时rDNA已经收缩成为次缢痕,不再进行转录活动,因此相应的蛋白质水平也随之降低,这一情况也可以被银染法表示为银染颗粒颜色较浅或者根本不见银染颗粒Ag-NOR。细胞分裂末期后,染色体解旋,NOR又开始合成rRNA,重组核仁,那些个酸性蛋白质又将回到原有水平。 注意:染色时间要把握好,不能太长,还要注意避光,不然硝酸银分解满屏都是银颗粒一些小疑问1.银染颗粒的数目能不能表示转录活性?2.在检索B23和C23蛋白的具体功能和情况时,看到有一份期刊的文章说B23主要存在于核仁的颗粒区,这和我们所说的原理有一些违背? 完了完了THE END

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