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1、专题专题5 DNA5 DNA和蛋白质技术和蛋白质技术一、多聚一、多聚酶酶链式反式反应扩增增DNA片段片段1细胞内细胞内DNA复制与复制与PCR技术的比较技术的比较绢廊歧酝患暮能征坠丙漆沃袱僵锡疥追猛刮吃简柿生密龟憾演漆拆秆理叹高中生物选修1专题5DNA和蛋白质技术复习课件高中生物选修1专题5DNA和蛋白质技术复习课件细胞内胞内DNA复制复制PCR不不同同点点解旋解旋在解旋在解旋酶酶作用下作用下边解旋解旋边复制复制80100 高温高温解解旋旋，双，双链分开分开(变性变性)酶酶DNA解旋解旋酶酶、DNA聚合聚合酶酶TaqDNA聚合聚合酶酶引物引物 RNADNA或或RNA温度温度 体内温和条件体内温
2、和条件高温高温相相同同点点需提供需提供DNA复制的模板复制的模板四种脱氧核苷酸作原料四种脱氧核苷酸作原料子链延伸的方向都是从子链延伸的方向都是从5端到端到3端端都需要酶的催化都需要酶的催化皱汗邓讼废殊比崭其尹瞳至隧琅鹤滴读亏舜年磋崩罪邵渣轴皱邱哮蔷奔官高中生物选修1专题5DNA和蛋白质技术复习课件高中生物选修1专题5DNA和蛋白质技术复习课件2.PCR的反应过程的反应过程一般要一般要经历三十多次循三十多次循环，每次循，每次循环可分可分为变变性性复性复性延伸延伸三步。三步。学学.科科.网网 zxxk.3PCR技术反应过程中控制不同温度的意义技术反应过程中控制不同温度的意义(1)90 以上以上时变
3、变性，性，双双链DNA解聚解聚为单单链；(2)50 左右左右时复复性，两种引物与两条性，两种引物与两条单链DNA结合；合；(3)72 左右左右时延伸延伸，TaqDNA 聚合聚合酶酶促使促使DNA新新链的合成。的合成。奖裴薄坡抚饮槽眷鹅录商派我电炔雾攀组晋泅蕾卖役席脐刀续拄瑟招翼停高中生物选修1专题5DNA和蛋白质技术复习课件高中生物选修1专题5DNA和蛋白质技术复习课件【例】关于【例】关于DNA的复制，下列叙述正确的是的复制，下列叙述正确的是()A. DNA 聚合酶不能从头开始合成聚合酶不能从头开始合成DNA，只能从，只能从引物的引物的5端延伸端延伸DNA 链链 B. DNA 复制不需要引物复
4、制不需要引物 C. 引物与引物与DNA 母链通过碱基互补配对进行结合母链通过碱基互补配对进行结合D. DNA 的合成方向总是从子链的的合成方向总是从子链的3端向端向5端延端延伸伸 【答案】【答案】C C讥鳞稍碌冈樱踪骗妄凤币字陋斗报辟沂琼钒蘑进昂铲英烹昔婶诅差对康翻高中生物选修1专题5DNA和蛋白质技术复习课件高中生物选修1专题5DNA和蛋白质技术复习课件1多聚多聚酶酶链式反式反应(PCR)是一种体外迅速是一种体外迅速扩增增DNA片段的技片段的技术。PCR过程一般要程一般要经历30多次下述循多次下述循环：95 条件下使模板条件下使模板DNA变性、解性、解链55 条件下复性条件下复性(引物与引物
5、与DNA模板模板链结合合)72 条件条件下引物下引物链延伸延伸(形成新的脱氧核苷酸形成新的脱氧核苷酸链)。下列有。下列有关关PCR过程的叙述，不正确的是程的叙述，不正确的是()A变性性过程中破坏的是程中破坏的是DNA分子内碱基分子内碱基对之之间的的氢键，也可利用解旋，也可利用解旋酶酶实现B复性复性过程中引物与程中引物与DNA模板模板链的的结合是依靠合是依靠碱基互碱基互补配配对原原则完成的完成的C延伸延伸过程中需要程中需要DNA聚合聚合酶酶、ATP、4种核糖种核糖核苷酸核苷酸DPCR与与细胞内胞内DNA复制相比，其所需要复制相比，其所需要酶酶的的最适温度最适温度较高高【答案】C幕墩茬罩掳默匿乓府
6、硕集铸码蚊包色汪伍侠蛛页撂狂焕卉椒您崖急彻自莆高中生物选修1专题5DNA和蛋白质技术复习课件高中生物选修1专题5DNA和蛋白质技术复习课件二、二、DNA的粗的粗提取提取与与鉴定鉴定1基本原理基本原理(1)DNA在不同在不同浓度的度的NaCl溶液中的溶解度不同，溶液中的溶解度不同，在在0.14 mol/L的的NaCl溶液中的溶解度最低；溶液中的溶解度最低；(2)DNA不溶于酒精溶液；不溶于酒精溶液；(3)DNA不被蛋白不被蛋白酶酶所水解；所水解；学学.科科.网网 zxxk.(4)DNA可被二苯胺染成可被二苯胺染成蓝色。色。牌口珠万扶惊萄荣娜衬膳顷睬纶光匣声正眠垦油糙卿呻菩沃貌耶匈圃画晌高中生物选
7、修1专题5DNA和蛋白质技术复习课件高中生物选修1专题5DNA和蛋白质技术复习课件2方法目的方法方法目的目的溶于溶于NaCl溶液溶液中并稀中并稀释NaCl浓度度为2 mol/L时，DNA溶解，溶解，而部分蛋白而部分蛋白质发生生盐析而生成沉淀，通析而生成沉淀，通过过滤可除去部分蛋白可除去部分蛋白质及不溶于及不溶于NaCl溶液的溶液的杂质当当NaCl溶液稀溶液稀释至至0.14 mol/L时，DNA析出，析出，过滤可除去溶于可除去溶于NaCl中的部中的部分蛋白分蛋白质和其他和其他杂质加入嫩肉粉加入嫩肉粉嫩肉粉中含木瓜蛋白嫩肉粉中含木瓜蛋白酶酶，水解蛋白，水解蛋白质加入冷却酒精加入冷却酒精(95%)D
8、NA析出，除去溶于酒精的蛋白析出，除去溶于酒精的蛋白质加入二苯胺，加入二苯胺，并沸水浴并沸水浴鉴定定DNA穿玛芹达闭冒近妨相辨斩咸酬扼搭哥阎南吼跟亏镍酸酗来污臭启肌遂路痰高中生物选修1专题5DNA和蛋白质技术复习课件高中生物选修1专题5DNA和蛋白质技术复习课件(1)哺乳动物成熟的红细胞中不哺乳动物成熟的红细胞中不含细胞核，也没有含细胞核，也没有DNA，不适于作，不适于作DNA提取提取的材料，但却是提取血红蛋白的理想材料。的材料，但却是提取血红蛋白的理想材料。(2)实验过程中两次用到蒸馏水，第一次目实验过程中两次用到蒸馏水，第一次目的是使成熟的鸡血细胞涨破释放出的是使成熟的鸡血细胞涨破释放出D
9、NA，第，第二次目的是稀释二次目的是稀释NaCl溶液。溶液。芥艰裸厨漏劲恬纹挚脉操墅佰犯肚卯附曲喀锯达丁庞匪辜熏雾舵陈宛棚夕高中生物选修1专题5DNA和蛋白质技术复习课件高中生物选修1专题5DNA和蛋白质技术复习课件【例】下表是关于【例】下表是关于“DNA粗提取与鉴定粗提取与鉴定”实验中所使用实验中所使用的材料、操作及其作用的表述。正确的是的材料、操作及其作用的表述。正确的是()学学.科科.网网 zxxk.试剂操作操作作用作用A柠檬酸檬酸钠溶液溶液与与鸡血混合血混合防止血液凝固防止血液凝固B蒸蒸馏水水与与鸡血血细胞混合胞混合保持保持细胞形状胞形状C蒸蒸馏水水加入到溶解有加入到溶解有DNA的的N
10、aCl中中加速加速DNA的溶解的溶解D冷却的酒精冷却的酒精加入到加入到过滤后后DNA的的NaCl中中产生特定的生特定的颜色色反反应【答案】【答案】A谴星喉磅株系赁牢铃榜泼九凋樱窖痘勃揽烷啡壶洱冰蝗展离绪枚焉号政鞘高中生物选修1专题5DNA和蛋白质技术复习课件高中生物选修1专题5DNA和蛋白质技术复习课件1. 1. 实验中共实验中共3 3次过滤次过滤。过滤时使用的纱布层数与取其滤液或黏稠物有关。过滤时使用的纱布层数与取其滤液或黏稠物有关。第第1 1、3 3次要收集其滤液，使用的纱布为次要收集其滤液，使用的纱布为1 12 2层，第层，第2 2次要收集其滤出的黏次要收集其滤出的黏稠物，使用的纱布为多
11、层。稠物，使用的纱布为多层。2. 2. 实验中有实验中有6 6次搅拌次搅拌，除最后一次搅拌外，前，除最后一次搅拌外，前5 5次搅拌均要朝向一个方向，次搅拌均要朝向一个方向，并且在析出并且在析出DNADNA、DNADNA再溶解和提取中，各步搅拌均要轻缓，玻璃棒不要再溶解和提取中，各步搅拌均要轻缓，玻璃棒不要直插烧杯底部，以防止直插烧杯底部，以防止DNADNA分子断裂。分子断裂。3. 3. 实验中有实验中有两次使用蒸馏水两次使用蒸馏水。第一次加蒸馏水是为了使血细胞吸水膨胀。第一次加蒸馏水是为了使血细胞吸水膨胀破裂；第二次加蒸馏水是为了稀释破裂；第二次加蒸馏水是为了稀释NaClNaCl溶液使溶液使D
12、NADNA析出。析出。4. 4. 用用高盐浓度高盐浓度的溶液溶解的溶液溶解DNADNA，能除去在高盐中不能溶解的杂质；用低，能除去在高盐中不能溶解的杂质；用低盐浓度的溶解使盐浓度的溶解使DNADNA析出，能除去不能溶解在低盐溶液中的杂质。因此，析出，能除去不能溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶解与析出通过反复溶解与析出DNADNA，就能够除去与，就能够除去与DNADNA溶解度不同的多种杂质。溶解度不同的多种杂质。5. 5. 最后析出最后析出DNADNA必须使用必须使用冷酒精冷酒精( (至少在至少在55以下存放以下存放2424小时小时) )，并且将，并且将1 1份含份含DNADNA的的Na
13、ClNaCl溶液加入到溶液加入到2 2份的冷酒精中。如果悬浮在溶液中的份的冷酒精中。如果悬浮在溶液中的DNADNA丝状丝状物较少，可将混合液放入到冰箱中再冷却几分钟。物较少，可将混合液放入到冰箱中再冷却几分钟。刃读邯芜咆禽放静撬厂茨庐缺媒捻没惧疽嚣讹逆憾金彼波形孕椒雹通人朵高中生物选修1专题5DNA和蛋白质技术复习课件高中生物选修1专题5DNA和蛋白质技术复习课件1. (改编改编)在在DNA分子的粗提取实验中，两次向分子的粗提取实验中，两次向烧杯中加入蒸馏水的作用是烧杯中加入蒸馏水的作用是()A. 稀释血液、冲洗样品稀释血液、冲洗样品B. 使血细胞破裂、降低使血细胞破裂、降低NaCl浓度使浓度
14、使DNA析出析出C. 使血细胞破裂、增大使血细胞破裂、增大DNA溶解量溶解量D. 使血细胞破裂、提取含杂质较少的使血细胞破裂、提取含杂质较少的DNA 【答案】【答案】B 唇煌邦垒缓泼炊祥单谷住狂凯瞄俯弗朴丹浦粮吮奋整奠耕罩规酮陨掺桔脸高中生物选修1专题5DNA和蛋白质技术复习课件高中生物选修1专题5DNA和蛋白质技术复习课件2(2010年青年青岛模模拟)下列关于下列关于DNA粗提取与粗提取与鉴定的定的说法正确的是法正确的是()A氯化化钠的的浓度越低，度越低，DNA的溶解度越大的溶解度越大B人的血液不可代替人的血液不可代替鸡血血进行行该实验C柠檬酸檬酸钠的主要作用是加速血的主要作用是加速血细胞破
15、裂胞破裂D利用利用DNA易溶于酒精的特点可除去易溶于酒精的特点可除去DNA中的部分中的部分杂质【答案】B币现磋钢赛皖墟陨搬贫缔酗校喘迷豫威侨墩颂文指遵槐能虞泊才帖唯骚钵高中生物选修1专题5DNA和蛋白质技术复习课件高中生物选修1专题5DNA和蛋白质技术复习课件3向溶有向溶有DNA的的2 mol/L的的NaCl溶液中不断加溶液中不断加入蒸入蒸馏水，在水，在这个个过程中程中DNA和和杂质蛋白蛋白质的的溶解度溶解度变化情况分化情况分别是是 ()A减小；减小减小；减小 B增大；增大增大；增大C先减小后增大；增大先减小后增大；增大 D减小；增大减小；增大【答案】C测稠断菏专妈苏仰往锐屎仔粘檀羡锈剪方刑阿
16、臼数突水雕姐链离陶饮夕擅高中生物选修1专题5DNA和蛋白质技术复习课件高中生物选修1专题5DNA和蛋白质技术复习课件三、血三、血红蛋白的提取和分离蛋白的提取和分离1方法及原理方法及原理方法方法原理原理凝胶色凝胶色谱法法根据相根据相对分子分子质量质量的大小分离蛋白的大小分离蛋白质电泳法泳法各种分子各种分子带电性性质的差异以及分子的差异以及分子本本身身大小、形状的不同来分离蛋白大小、形状的不同来分离蛋白质洪马居澈再玫三线闹躇滑邯闷枪千咕霞帖洋呜桅巷滩峰未碌走钞穆近诊损高中生物选修1专题5DNA和蛋白质技术复习课件高中生物选修1专题5DNA和蛋白质技术复习课件2.实验操作程序实验操作程序(1)样品品
17、处理理红细胞的洗涤红细胞的洗涤：除去血：除去血浆蛋白等蛋白等杂质，以利于，以利于后后续步步骤的分离的分离纯化；化；血红蛋白的释放血红蛋白的释放：使：使红细胞胞涨破，血破，血红蛋白蛋白释放出来；放出来；分离血红蛋白溶液分离血红蛋白溶液：经过离心使血离心使血红蛋白和其蛋白和其他他杂质分离开来，便于下一步分离开来，便于下一步对血血红蛋白的蛋白的纯化。化。(2)粗分离粗分离透析：除去透析：除去样品中相品中相对分子量分子量较小小的的杂质。(3)纯化纯化：一般采用凝胶色：一般采用凝胶色谱法法对血血红蛋白蛋白进行分行分离和离和纯化。化。(4)纯度鉴定纯度鉴定：一般用：一般用SDS聚丙聚丙烯酰胺凝胶胺凝胶电泳
18、泳法来法来测定蛋白定蛋白质的分子量，即的分子量，即对血血红蛋白蛋白进行行纯度度鉴定。定。勘量猴眼衔兜角拷格门取僵纷镣旗声岿略悟馒款列膨蝎祝惟郊姑蚜脆柯楚高中生物选修1专题5DNA和蛋白质技术复习课件高中生物选修1专题5DNA和蛋白质技术复习课件 相对分子质量不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，而相对分子质量较大的蛋白质只部的通道，而相对分子质量较大的蛋白质只能在凝胶外部移动，移动速度快，因此蛋白能在凝胶外部移动，移动速度快，因此蛋白质分子彼此分离。质分子彼此分离。逊哑疹帕空瓣祁评峡靡痹
19、签霜糖完泞问始扒动们剃凰息想鸳艺只社损诞荣高中生物选修1专题5DNA和蛋白质技术复习课件高中生物选修1专题5DNA和蛋白质技术复习课件4(2009年南京年南京质检)下列有关蛋白下列有关蛋白质提取和提取和分离的分离的说法，法，错误的是的是 ()A透析法分离蛋白透析法分离蛋白质的原理是利用蛋白的原理是利用蛋白质不能通不能通过半透膜的特性半透膜的特性B采用透析法使蛋白采用透析法使蛋白质与其他小分子化合与其他小分子化合物分离开来物分离开来C离心沉降法通离心沉降法通过控制离心速率使分子大控制离心速率使分子大小、密度不同的蛋白小、密度不同的蛋白质分离分离D蛋白蛋白质在在电场中可以向与其自身所中可以向与其自
20、身所带电荷相同的荷相同的电极方向移极方向移动【答案】【答案】D D剥杯豆济独臂秧蟹监鳃油冻门屎叹崩歇位肋乙糜砸睦溜账攀霓逃扬砷趣绅高中生物选修1专题5DNA和蛋白质技术复习课件高中生物选修1专题5DNA和蛋白质技术复习课件5玫瑰精油称玫瑰精油称为“液体黄金液体黄金”，其提取方法，其提取方法()A只能用水蒸气蒸只能用水蒸气蒸馏法法 B可用蒸可用蒸馏法和法和压榨法榨法C可用蒸可用蒸馏法和萃取法法和萃取法 D可用可用压榨法和萃榨法和萃取法取法【答案】【答案】C笺墟币休歇铝栖睡枕焦巫挟糠霖癌允缨胳拟锨肾扇访执滴央四插舆倦扯儒高中生物选修1专题5DNA和蛋白质技术复习课件高中生物选修1专题5DNA和蛋白
21、质技术复习课件(2009年高考江年高考江苏卷卷)下列关于下列关于DNA和蛋白和蛋白质提取与分离提取与分离实验的叙述，正确的有的叙述，正确的有(双双选)()A提取提取细胞中的胞中的DNA和蛋白和蛋白质都需用都需用蒸蒸馏水水涨破破细胞胞B用不同用不同浓度度NaCl溶液反复溶解与析溶液反复溶解与析出出DNA可去除蛋白可去除蛋白质C蛋白蛋白质提取和分离提取和分离过程中程中进行透析可行透析可以去除溶液中的以去除溶液中的DNAD蛋白蛋白质和和DNA都可以用都可以用电泳的方法泳的方法进行分离行分离纯化化【答案】BD罚滦荔筛傍沈制症悍烈韩托姿震浸狡货拱蕴虾炎伍未衔汤棚烯莽机涅蛛裕高中生物选修1专题5DNA和蛋
22、白质技术复习课件高中生物选修1专题5DNA和蛋白质技术复习课件1(2008年江年江苏生物生物)下列叙述中下列叙述中错误的的是是()A改改变NaCl溶液的溶液的浓度只能使度只能使DNA溶溶解而不能使其析出解而不能使其析出B在沸水浴中，在沸水浴中，DNA遇二苯胺遇二苯胺试剂会会呈呈现蓝色色C用用电泳法可分离泳法可分离带电性性质、分子大小、分子大小和形状不同的蛋白和形状不同的蛋白质D用透析法可去除蛋白用透析法可去除蛋白质样品中的小分品中的小分子物子物质【答案】A嵌铅鹅挫卤肃近坞淌怠孪瘸腊欲逐鸡淑费蠕荐逛口离徒蜂寡术篇扰绳原掩高中生物选修1专题5DNA和蛋白质技术复习课件高中生物选修1专题5DNA和蛋
23、白质技术复习课件2(2008年山年山东理理综)科学家科学家发现家家蝇体体内存在一种抗菌活性蛋白。内存在一种抗菌活性蛋白。这种蛋白种蛋白质具具有极有极强强的抗菌能力，受到研究者重的抗菌能力，受到研究者重视。(1)分离分离该抗菌蛋白可用抗菌蛋白可用电泳法，其原理是泳法，其原理是根据蛋白根据蛋白质分子的分子的_、大小、大小及形状不同，在及形状不同，在电场中的中的_不同而不同而实现分离。分离。(2)可用金黄色葡萄球菌来可用金黄色葡萄球菌来检验该蛋白的体蛋白的体外抗菌特性。抗菌外抗菌特性。抗菌实验所用培养基中的牛所用培养基中的牛肉膏和蛋白肉膏和蛋白胨主要主要为细菌生菌生长提供提供_和和_。电荷电荷(带电
24、情况带电情况)迁移速度迁移速度碳源碳源 氮源氮源役柏戏饵炊午储羡林畏褥块法远晨砖议完檄您乒可奠字娶屏沮爪狗夸进雨高中生物选修1专题5DNA和蛋白质技术复习课件高中生物选修1专题5DNA和蛋白质技术复习课件(3)分分别在加入和未加入在加入和未加入该抗菌蛋白的培养抗菌蛋白的培养基中接种等量菌液。培养一定基中接种等量菌液。培养一定时间后，比后，比较两种培养基中菌落的两种培养基中菌落的_，确定，确定该蛋白蛋白质的抗菌效果。的抗菌效果。(4)细菌培养常用的接种方法有菌培养常用的接种方法有_和和_。实验结束后，束后，对使用使用过的培养基的培养基应进行行_处理。理。灭菌灭菌数量数量平板划线法平板划线法稀释涂布平板法稀释涂布平板法惯永湖呀岔肆利善尘颧陷凸厢圃碗邵沮诽辙节犯辉辙使叁娶碱柏遮曝良乒高中生物选修1专题5DNA和蛋白质技术复习课件高中生物选修1专题5DNA和蛋白质技术复习课件
