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1、鸡红细胞的融合鸡红细胞的融合实验报告实验报告2024/8/12实验原理实验原理实验原理实验原理主要内容主要内容主要内容主要内容实验目的实验目的实验目的实验目的实验用品实验用品实验用品实验用品需要注意的问题需要注意的问题需要注意的问题需要注意的问题1 12 23 34 4实验步骤实验步骤实验步骤实验步骤5 56 67 7数据记录及处理数据记录及处理数据记录及处理数据记录及处理结果分析及讨论结果分析及讨论结果分析及讨论结果分析及讨论绘图绘图2024/8/12一、实验目的一、实验目的（1）了解）了解PEG诱导细胞融合的基本原理诱导细胞融合的基本原理（2）通过细胞融合实验，初步掌握细胞融合技）通过细胞
2、融合实验，初步掌握细胞融合技术术 2024/8/12二、实验用品二、实验用品（1）器材：生物显微镜、离心机、恒温水浴）器材：生物显微镜、离心机、恒温水浴箱、滴管、离心管、试管架、盖玻片、载箱、滴管、离心管、试管架、盖玻片、载玻片、烧杯、吸水纸玻片、烧杯、吸水纸（2）试剂：）试剂：0.85%生理盐水、生理盐水、50%PEG、GKN溶液、溶液、Alsever溶液溶液（3）实验材料：鸡红细胞）实验材料：鸡红细胞2024/8/12三、实验原理三、实验原理 同种或异种细胞在一定介质（如病毒、化学因子或电同种或异种细胞在一定介质（如病毒、化学因子或电场）的诱导下，可发生细胞间的的融合，形成较大的场）的诱导
3、下，可发生细胞间的的融合，形成较大的双核或多核细胞。聚乙二醇（双核或多核细胞。聚乙二醇（PEG)可与水分子借氢键可与水分子借氢键结合，在高浓度（结合，在高浓度（50%）的）的PEG的溶液中，自由水消的溶液中，自由水消失，导致细胞脱水而发生质膜结构的变化，引起细胞失，导致细胞脱水而发生质膜结构的变化，引起细胞融合，融合，PEG融合技术的关键是要选择合适的相对分子融合技术的关键是要选择合适的相对分子质量（质量（10006000）、浓度（）、浓度（30%50%）以及作用）以及作用时间。时间。2024/8/12四、实验步骤四、实验步骤（1）鸡血与）鸡血与Alsever溶液按溶液按1:4混匀，混匀，4冰
4、箱中冰箱中保存保存（2）取）取1ml细胞悬液，加细胞悬液，加Alsever溶液稀释溶液稀释2025倍倍（3）取上稀释悬液）取上稀释悬液1ml，加，加5ml0.85%生理盐水混生理盐水混匀匀2024/8/12（4）1000rpm离心上述溶液离心上述溶液5min，去上清液，重，去上清液，重复操作复操作3次次（5）第三次离心去上清液后，加）第三次离心去上清液后，加GKN 0.5ml制成制成10%悬液，放在悬液，放在37水浴箱预热水浴箱预热23min（6）逐滴）逐滴0.25ml的的50%的的PEG溶液，边加边溶液，边加边摇匀，摇匀，37恒温静置恒温静置15min（7）取上述液一滴，盖上盖玻片，镜检）取
5、上述液一滴，盖上盖玻片，镜检2024/8/12五、数据记录及处理五、数据记录及处理观察四个视野中的细胞，记录鸡血细胞融合情况如下表所观察四个视野中的细胞，记录鸡血细胞融合情况如下表所示示视野细胞核视野细胞核总数总数视野内融合视野内融合细胞核数细胞核数 2核细胞核细胞3核细胞核细胞所有细胞核所有细胞核总数总数所有融合细所有融合细胞核总数胞核总数2024/8/122、数据处理：由上表原始数据得视野内发生融合的、数据处理：由上表原始数据得视野内发生融合的细胞核数为细胞核数为12个，视野内所有细胞核总数为个，视野内所有细胞核总数为105个，由公式：个，由公式：融合率融合率=视野内发生融合的细胞核数视野内发生融合的细胞核数/视野内所有细视野内所有细胞核数胞核数 100% =12/105 100% =11.4%3、实验结果：鸡红细胞的融合率为、实验结果：鸡红细胞的融合率为11.4%2024/8/12七、结果分析及讨论七、结果分析及讨论 2024/8/12八、绘图八、绘图
