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1、一、转基因食品检测一、转基因食品检测转基因食品也称基因改造食品或基因修基因食品也称基因改造食品或基因修饰食品食品 ( GeneticallyModifiedFood，GMF)。近几年，随着近几年，随着转基因食品的快速基因食品的快速发展，展，转基因食品的安全性受到广泛关注，因而基因食品的安全性受到广泛关注，因而对转基因食品的基因食品的检测是非常必要的。是非常必要的。利用利用PCR 方法方法检测转BT 基因水稻基因水稻原理：由于原理：由于 Bt 水稻基因中含有水稻基因中含有CaMV35S（花椰菜花叶病毒）启启动子、根瘤子、根瘤农杆菌的杆菌的NOS终止子止子和和Cry1Ac基因，因此，在基因，因此，
2、在检测水稻中是否含有水稻中是否含有转基因水稻成分基因水稻成分时，可，可选择检测CaMV35S启启动子、子、NOS终止子和止子和Cry1Ac基因的存在与否，如果存在，基因的存在与否，如果存在，即可即可说明其中存在明其中存在转基因水稻成分。基因水稻成分。方法：方法：经DNA的提取，的提取，PCR扩增，通增，通过凝胶凝胶电泳泳来判断来判断样品是否品是否为BT转基因水稻基因水稻实验步骤实验步骤1将新鲜嫩叶放于瓷质的研钵中，将人适量的液氮进行研磨，待叶片磨至粉末状后加入适量的CTAB。2500l 65预热的CTAB 70保温30min，不时颠倒混匀。3450l酚/氯仿/异戊醇，颠倒混匀至溶液呈乳浊状但不
3、要震荡，离心10000rpm， 3min，取上清。4加入450 l 氯仿，混匀后离心10000rpm，3min，取上清。5加入600l异丙醇，颠倒混匀，-20放置30min。612000rpm，4/5min，弃上清。7用800l预冷的70乙醇洗涤沉淀（注意不要吹散沉淀）。8离心后吸去残余乙醇。9待乙醇挥发后加入20-50l TE缓冲液（含1RNase A），温和混匀。10取5l样品进行琼脂糖凝胶电泳，其余的样品-20保存。CaMV35S 启动子是一段长 195bp 的碱基序列，如图1所示，经过PCR扩增后，在凝胶电泳检测中，其条带位置在200bp左右。电泳结果电泳结果NOS终止子是一段长165
4、bp的碱基序列，如图2所示，经过PCR扩增后，在凝胶电泳检测中，其条带位置在100bp至200bp中间位置。Cry1Ac基因是一段长301bp的碱基序列， 如图3所示，经过PCR扩增后，在凝胶电泳检测中，其条带位置在300bp左右。tRNALeu： 植物叶绿体内源参照基因，长180bp，如图4，经PCR扩增后，在凝胶电泳检测中， 其条带位置在200bp左右。在这种方法中，在这种方法中，DNA 的提取是关键，的提取是关键，PCR 的的成功与否关系到整个实验的准确性。成功与否关系到整个实验的准确性。核酸检测能为转基因水稻的筛选鉴定及为核酸检测能为转基因水稻的筛选鉴定及为安全性评价提供直接的数据，成
5、为转基因安全性评价提供直接的数据，成为转基因水稻安全性检验中一项重要的技术手段。水稻安全性检验中一项重要的技术手段。二、天然毒素的检测技术ELISA（酶联免疫吸附剂测定）酶联免疫吸附剂测定）试剂盒盒检测黄曲黄曲霉毒素霉毒素黄曲霉毒素：黄曲霉毒素： 1993年黄曲霉毒素被世界年黄曲霉毒素被世界卫生生组织(WHO)的的癌症研究机构划定癌症研究机构划定为1类致癌物，是一种毒性极致癌物，是一种毒性极强强的的剧毒物毒物质。在天然。在天然污染的食品中以黄曲霉毒素染的食品中以黄曲霉毒素B1最最为多多见，其毒性和致癌性也最，其毒性和致癌性也最强强。 B1是最危是最危险的致癌物，的致癌物，经常在玉米，花生，常在
6、玉米，花生，棉花种子，一些干果中常能棉花种子，一些干果中常能检测到。到。 Analyte = antigen Analyte =antibodyIncubate, wash酶联免疫酶联免疫(ELISA)原理：原理：1. Coat solid phase withantigen when analysing antibody antibody when analysing antigen2. Block free binding sites. Incubate. Wash. Analyte =antigen Analyte =antibody3. Add sample. Incubate. Wa
7、sh Analyte =antigen Analyte =antibody4. Add conjugate. Incubate. Wash. Analyte =antigen Analyte =antibodyE E E E5. Add substrate 6. Incubate, stop, measure colour change Colourless ENZYMEODCONCENTRATION江涛等成功地制江涛等成功地制备出出针对黄曲霉毒素具有黄曲霉毒素具有高高亲合力、高特异性的合力、高特异性的单克隆抗体，建立克隆抗体，建立了了检测食品中食品中总黄曲霉毒素的黄曲霉毒素的间接接竞争争 E
8、LISA 检测方法，方法，为开展全国性开展全国性总黄曲霉黄曲霉毒素毒素污染染调查提供了技提供了技术支持。支持。龚燕等通燕等通过改改进产处理，使理，使ELISA检测黄黄曲霉素灵敏度达到曲霉素灵敏度达到0.1g/kg。二、现代分子检测技术在食品检二、现代分子检测技术在食品检测中的优势测中的优势分子检测技术作为一种基因水平的检测技分子检测技术作为一种基因水平的检测技术，具有灵敏度高、选择性好、响应快等术，具有灵敏度高、选择性好、响应快等优点，是新时期食品安全的战略制高点之优点，是新时期食品安全的战略制高点之一，也是食品安全领域关注的热点之一。一，也是食品安全领域关注的热点之一。例如，黄曲霉毒素例如，
9、黄曲霉毒素传统的的检测方法方法较繁繁琐、成本高、准确、成本高、准确度差。度差。薄膜层析法薄膜层析法和和液相色谱法液相色谱法是目前国内绝大多数检测机构都是目前国内绝大多数检测机构都在使用的方法，由于其检测周期长，程序复杂，所需试剂在使用的方法，由于其检测周期长，程序复杂，所需试剂繁多等缺点已远远不能满足现代检测要求。繁多等缺点已远远不能满足现代检测要求。近几年出近几年出现的新的新检测方法是在方法是在传统检测方法的基方法的基础上，将上，将酶酶联免疫技免疫技术应用于毒素的用于毒素的检测。相关科研。相关科研单位研制的位研制的酶酶联免疫免疫(ELISA)试剂盒，盒，检测食品中的黄曲霉毒素食品中的黄曲霉毒素 B1，结果表明其抗原果表明其抗原转化率化率为89.14%，抗体效价、灵敏度、特异，抗体效价、灵敏度、特异性与国性与国际类似似产品相当。品相当。转基因食品主要基因食品主要检测方法有：血清学方法有：血清学检测方法，方法，PCR检测方法和基因芯片方法和基因芯片检测等等现代分子代分子检测技技术。THANKS FOR LISTEN !
