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1、动物细胞工程动物细胞培养动物细胞培养动物细胞融合动物细胞融合单克隆抗体制备单克隆抗体制备动物体细胞动物体细胞核移植技术和克隆动物核移植技术和克隆动物1PPT学习交流思考与回忆：1 1、动物细胞全能性特点？、动物细胞全能性特点？ 随着细胞分化程度的提高而逐渐受到限制，分化潜能变窄。细胞核仍具有全能性。2PPT学习交流动物细胞培养动物细胞培养动物细胞融合动物细胞融合单克隆抗体技术单克隆抗体技术核移植核移植动物动物细胞细胞工程工程常用常用技术技术其它动物细胞工程的基础其它动物细胞工程的基础3PPT学习交流 一：动物细胞培养 二：核移植技术本节内容：本节内容：4PPT学习交流一、动物细胞培养的应用和概
2、念：一、动物细胞培养的应用和概念：1 1、概念：、概念：动物细动物细胞培养就是从动物胞培养就是从动物有机体中取出相关有机体中取出相关的的组织组织, ,将它分散将它分散成成单个细胞单个细胞, ,然后然后, ,放在适宜的放在适宜的培养基培养基中中, ,让这些让这些细胞生细胞生长和增殖长和增殖. .2、原理：、原理：细胞增殖细胞增殖5PPT学习交流定义：定义：人们通常将人们通常将动物组织动物组织消化后消化后的的初次培养初次培养称为原代称为原代培养。培养。胰蛋白酶处理胰蛋白酶处理取出组织取出组织胚胎或幼龄动物器官组织胚胎或幼龄动物器官组织剪碎剪碎单个细胞单个细胞细胞悬液细胞悬液转入培养瓶内培养转入培养
3、瓶内培养 （ 贴壁生长贴壁生长长成单层细胞。长成单层细胞。有有接触抑制接触抑制现象）现象）。原代培养原代培养3 3：过程：过程图示图示原代培养原代培养6PPT学习交流强调一：细胞贴壁过程强调一：细胞贴壁过程细胞贴壁：细胞贴壁：在培养瓶悬液中分散的细胞很快就贴在培养瓶悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。附在瓶壁上，称为细胞贴壁。培养瓶或培养皿壁要求：培养瓶或培养皿壁要求：表面光滑、无毒、易于表面光滑、无毒、易于帖附。帖附。7PPT学习交流当贴壁细胞分裂生当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时长到表面相互接触时, ,细胞就会停止分裂增细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细殖，这种现象称为细
4、胞的接触抑制。胞的接触抑制。强调二：接触抑制强调二：接触抑制8PPT学习交流 定义：定义： 当原代培养的细胞处于当原代培养的细胞处于接触抑制后接触抑制后, , 用用胰胰蛋白酶蛋白酶处理处理, ,使细胞从瓶壁上使细胞从瓶壁上脱离脱离下来下来, ,然后加入然后加入新的培养液新的培养液, ,将将细胞分离稀释细胞分离稀释, ,并并从原培养瓶内转从原培养瓶内转接到新的培养瓶内接到新的培养瓶内, ,这个过程称这个过程称传代培养传代培养. .（分瓶分瓶培养的过程培养的过程）传代培养传代培养9PPT学习交流3 3、总结：动物细胞、总结：动物细胞培养过程培养过程动物胚胎或幼龄动物的动物胚胎或幼龄动物的组织、器官
5、组织、器官配置细胞悬液配置细胞悬液剪碎用胰蛋白酶处理剪碎用胰蛋白酶处理1010代细胞代细胞转入培养瓶转入培养瓶40-5040-50代细胞代细胞传传代代培培养养无限传代无限传代单个细胞单个细胞加培养液稀释加培养液稀释传代传代1010代以内，代以内，遗传物质不改变，遗传物质不改变，保持保持正常正常二倍体核型二倍体核型。传代传代10-5010-50代左右，增长缓慢以至代左右，增长缓慢以至于完全停止，于完全停止，部分细胞核型可能部分细胞核型可能发生变化发生变化（遗传物质可能改变（遗传物质可能改变）为什么用胰蛋白酶处理？为什么用胰蛋白酶处理？分瓶分瓶传代培养传代培养原代培养特点：原代培养特点：细胞贴壁、
6、细胞贴壁、接触抑制接触抑制继续传代培养少部分细胞继续传代培养少部分细胞获得不获得不死性死性，细胞突变细胞突变，遗传物质已经遗传物质已经改变改变，等同于癌细胞等同于癌细胞。细细胞胞株株：一一般般说说遗遗传传物物质质未未改改变变细细胞胞系系：遗遗传传物物质质已已改改变变原原代代培培养养10PPT学习交流细胞株：传代细胞一般能传到细胞株：传代细胞一般能传到40-5040-50代，代，遗传物质一般不会发生改变遗传物质一般不会发生改变，叫细胞株。，叫细胞株。强调：细胞系、细胞株（强调：细胞系、细胞株（了解即可，老课本体系了解即可，老课本体系）细胞系：传代细胞系：传代5050代以后不能再传下去，代以后不能
7、再传下去，部分细胞部分细胞遗传物质发生了改变遗传物质发生了改变，能连续传，能连续传代，获得不死性，叫细胞系。代，获得不死性，叫细胞系。11PPT学习交流4.4.动物细胞培养的条件动物细胞培养的条件: :1 1）无菌无毒）无菌无毒 的环境：的环境： 适宜的温度：适宜的温度：人和哺乳动物细胞最适温度为人和哺乳动物细胞最适温度为36.50.5。适宜的酸碱度：适宜的酸碱度：PH：7.2-7.4液体合成培养基：（液体合成培养基：（糖、氨基酸）、促生长糖、氨基酸）、促生长因子、（水、无机盐、微量元素）因子、（水、无机盐、微量元素）等；通等；通常还需加入常还需加入血浆、血清等血浆、血清等天然成分。天然成分。
8、4 4）气体环境：）气体环境：2 2）营养：）营养：3 3）温度和）温度和pHpH：“95空气空气+5CO2”的混合气体培养箱。的混合气体培养箱。氧氧气是细胞代谢必须的；气是细胞代谢必须的； CO2维持培养维持培养液的液的PHPH。对培养液和所有培养用具对培养液和所有培养用具无菌处理；无菌处理；培养液培养液中中添加抗生素添加抗生素防止培养过程中污染；防止培养过程中污染；定期更定期更换培养液换培养液以清除代谢产物，防止对培养细胞以清除代谢产物，防止对培养细胞造成危害。造成危害。12PPT学习交流问题问题3 3：为什么用胰蛋白酶处理？：为什么用胰蛋白酶处理？问题问题1 1：、为什么选用动物胚胎或幼
9、龄个体的器官或组织做动物细：、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？胞培养材料？因为其细胞生命力旺盛，分裂能力强，分化程度低。因为其细胞生命力旺盛，分裂能力强，分化程度低。问题问题2 2、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？扩大细胞与培养液的接触面积，利与细胞吸收营养。扩大细胞与培养液的接触面积，利与细胞吸收营养。动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质，动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质，胰胰蛋白酶处理动物组织，可以使动物组织细胞间的蛋白质和蛋白酶处理动物组织，可以使动物组织细胞间的蛋白质和细胞外的其他成分
10、酶解，获得单个细胞。细胞外的其他成分酶解，获得单个细胞。 问题问题4 4：为什么用胰蛋白酶处理而不用胃蛋白酶？：为什么用胰蛋白酶处理而不用胃蛋白酶？动物细胞培养的最适动物细胞培养的最适PH值为值为7.2-7.4，胰蛋白酶作用的适，胰蛋白酶作用的适宜宜PH为为7.2-8.4，胃蛋白酶适宜，胃蛋白酶适宜PH为为2.胃蛋白酶在胃蛋白酶在PH为为7.2-7.4的动物细胞培养中无活性。的动物细胞培养中无活性。问题问题5 5：用胰蛋白酶处理不会把所培养的细胞消化掉吗？：用胰蛋白酶处理不会把所培养的细胞消化掉吗？控制好时间！长时间处理当然会损伤细胞。控制好时间！长时间处理当然会损伤细胞。13PPT学习交流问
11、题问题6 6、动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物、动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物组培培养基有何独特之处？组培培养基有何独特之处？问题问题7 7、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？培养成新个体？主要成分：（葡萄糖、氨基酸）、（水、无机盐）、维主要成分：（葡萄糖、氨基酸）、（水、无机盐）、维生素和动物血清等。独特之处有：生素和动物血清等。独特之处有：1 1、液体培养基、液体培养基 2 2、成分中有动物血清等成分中有动物血清等不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动
12、物个体育成新的动物个体问题问题8 8、动物细胞培养的原理：、动物细胞培养的原理： 细胞增殖。细胞增殖。问题问题9 9、目前使用的或冷冻保存的正常细胞通常在、目前使用的或冷冻保存的正常细胞通常在1010代以代以内，为什么？内，为什么？1010代以内的细胞代以内的细胞遗传物质不改变，保持正常二倍体核型。遗传物质不改变，保持正常二倍体核型。14PPT学习交流5.5.动物细胞培养技术的应用动物细胞培养技术的应用: :1.1.蛋白质生物制品的生产蛋白质生物制品的生产 如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体2.2.应用于基因工程应用于基因工程 主要用于作为受体细胞主要用于作为受体细胞
13、3.3.检测有毒物质，判断某种物质的毒性检测有毒物质，判断某种物质的毒性 4.4.细胞的生理、药理、病理研究细胞的生理、药理、病理研究 如用于筛选抗癌药物如用于筛选抗癌药物 15PPT学习交流植物组织培养和动物细胞培养的比较：植物组织培养和动物细胞培养的比较：见导学教程见导学教程P31P31表表比较项目比较项目植物组织培养植物组织培养动物细胞培养动物细胞培养原理原理细胞的全能性细胞的全能性细胞增殖细胞增殖培养基性质培养基性质固体培养基固体培养基液体培养基液体培养基培养基特有成分培养基特有成分蔗糖蔗糖 植物激素植物激素葡萄糖葡萄糖 促促- - - - 动物血清动物血清培养结果培养结果植物体植物体
14、细胞株、细胞系细胞株、细胞系培养目的培养目的快速繁殖、培育快速繁殖、培育无病毒植株无病毒植株获得细胞或细胞获得细胞或细胞分泌蛋白分泌蛋白取材取材植物幼嫩部分或植物幼嫩部分或花药花药胚胎或幼龄动物胚胎或幼龄动物的器官或组织的器官或组织其他条件其他条件无菌无毒，适宜无菌无毒，适宜条件条件无菌无毒，适宜无菌无毒，适宜条件条件16PPT学习交流二、动物体细胞核移植技术和克隆动物二、动物体细胞核移植技术和克隆动物1、定义：定义： 动物核移植是将动物的动物核移植是将动物的一个细胞一个细胞的细胞核的细胞核, ,移入一个已经移入一个已经去掉细胞核的卵母去掉细胞核的卵母细胞中细胞中. .使其重组并发育成一个使其
15、重组并发育成一个新的胚胎新的胚胎, ,这这个新的胚胎最终发育为个新的胚胎最终发育为动物个体动物个体. .3、分类：分类： 胚胎核移植、体细胞核移植。胚胎核移植、体细胞核移植。胚胎细胞分化程胚胎细胞分化程度低，恢复其全度低，恢复其全能性相对容易。能性相对容易。动物体细胞分化动物体细胞分化程度高，恢复其程度高，恢复其全能性十分困难全能性十分困难2、原理：原理： 动物细胞核具有全能性动物细胞核具有全能性17PPT学习交流4、体细胞核移植过程、体细胞核移植过程-示动物克隆示动物克隆-无性繁殖无性繁殖1.）克隆羊多）克隆羊多利培育过程：利培育过程：黑面绵羊去黑面绵羊去核卵母细胞核卵母细胞白面绵羊乳白面绵
16、羊乳腺细胞核腺细胞核细胞核移植细胞核移植重组细胞重组细胞电脉冲刺激电脉冲刺激早期重组胚胎早期重组胚胎胚胎移植胚胎移植另一头绵羊的子宫另一头绵羊的子宫妊娠、出生妊娠、出生克隆羊多利克隆羊多利特别注意：特别注意：克隆动物性状克隆动物性状与供体动物完全一样吗？与供体动物完全一样吗？不可能！不可能！因为：因为：一、供体动物只提供细胞核，一、供体动物只提供细胞核，而细胞质中的遗传物质（如而细胞质中的遗传物质（如线粒体线粒体DNA）来自于受体卵）来自于受体卵母细胞母细胞.二、生物的性状不仅与遗传二、生物的性状不仅与遗传物质有关，还受环境的影响。物质有关，还受环境的影响。供体供体受体受体代孕代孕受体受体18
17、PPT学习交流黑面绵羊去黑面绵羊去核卵母细胞核卵母细胞白面绵羊乳白面绵羊乳腺细胞核腺细胞核a重组细胞重组细胞电脉冲刺激电脉冲刺激早期重组胚胎早期重组胚胎b另一头绵羊的子宫另一头绵羊的子宫妊娠、出生妊娠、出生克隆羊多利克隆羊多利1、写出、写出AB所代表细胞工程名称：所代表细胞工程名称：a表示：表示： b表示表示: 2、实施细胞工程时，所需、实施细胞工程时，所需受体细胞大多采用卵母细胞受体细胞大多采用卵母细胞的原因：的原因：体积大，易操作。含有促使细胞核体积大，易操作。含有促使细胞核表达全能性的物质和营养条件。表达全能性的物质和营养条件。3 3、多利面部毛色是：、多利面部毛色是： 根据遗传学原理说
18、明判断依据。根据遗传学原理说明判断依据。4 4、若黑面绵羊的基因型为、若黑面绵羊的基因型为AA,AA,白白面绵羊的基因型为面绵羊的基因型为aaaa，则克隆羊，则克隆羊的基因型为的基因型为 核移植核移植胚胎移植胚胎移植白色白色多利全部的核基因都来自白面绵羊多利全部的核基因都来自白面绵羊aa19PPT学习交流 取供体细胞取供体细胞传代培养传代培养1010代代以内的细胞以内的细胞. .为什么？为什么？用的是去用的是去核的减数核的减数第二次分第二次分裂中期细裂中期细胞（胞（M中中期期）为什）为什么？么？激活方法：激活方法：激活目的：激活目的：促融方法：促融方法：电刺激电刺激胚胎移植至胚胎移植至代孕受体
19、内代孕受体内 妊娠、分娩妊娠、分娩2.）核移植流程）核移植流程供体：优质高产奶牛供体：优质高产奶牛受体：普通奶牛（卵受体：普通奶牛（卵母细胞的采集与培养）母细胞的采集与培养） 1.体积大，易体积大，易操作。操作。2.含有含有促使细胞核表促使细胞核表达全能性的物达全能性的物质和营养条件。质和营养条件。有人说它三个母有人说它三个母亲，对吗？亲，对吗？20PPT学习交流核移植流程核移植流程:1、供体细胞的采集与培养、供体细胞的采集与培养5、用物理或化学方法激活受体细胞，使其完成减、用物理或化学方法激活受体细胞，使其完成减数分裂进程。数分裂进程。6电刺激促融使供体核进入受体卵母细胞，构建重电刺激促融使
20、供体核进入受体卵母细胞，构建重组胚胎。组胚胎。4、将供体细胞注入去核卵母细胞、将供体细胞注入去核卵母细胞3、显微操作去除卵母细胞中的核、显微操作去除卵母细胞中的核2、受体卵母细胞的采集与体外培养、受体卵母细胞的采集与体外培养7、胚胎移植入代孕母牛体内、胚胎移植入代孕母牛体内8、妊娠分娩与供体遗传物质基础相同的犊牛。、妊娠分娩与供体遗传物质基础相同的犊牛。21PPT学习交流4.体细胞核移植技术的应用前景体细胞核移植技术的应用前景22PPT学习交流5.体细胞核移植技术存在的问题体细胞核移植技术存在的问题看书看书P49-50页页23PPT学习交流1.1.概念：概念： 动物细胞融合（动物细胞融合（ce
21、ll fusioncell fusion）也称细胞杂交）也称细胞杂交(cellhybridization),(cellhybridization),是指两个或多个动物细胞结合形成一个是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。细胞的过程。 融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核单核细细胞，称为胞，称为杂交细胞杂交细胞（hybrid cellhybrid cell）。）。一、动物细胞融合一、动物细胞融合2.2.2 2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体动物细胞融合与单克隆抗体24PPT学习交流灭活的病毒颗粒灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面黏附于细
22、胞表面细胞膜被细胞膜被病毒颗粒穿通病毒颗粒穿通细胞膜连接细胞膜连接细胞融合，形成杂种细胞细胞融合，形成杂种细胞（细胞膜具有一定的流动性）（细胞膜具有一定的流动性）并能进行正常的有丝分裂并能进行正常的有丝分裂2.过程：过程：两个完整的两个完整的杂交细胞杂交细胞有丝分裂有丝分裂融合融合灭活的病毒灭活的病毒不同不同DNA的的两个细胞两个细胞25PPT学习交流仙台病毒仙台病毒紫外线紫外线灭活灭活丧失感染活性（不感染细胞）丧失感染活性（不感染细胞）保留融合活性（诱导细胞融合）保留融合活性（诱导细胞融合）什么是什么是病毒的灭活？（教材病毒的灭活？（教材P52资料卡资料卡 ） 灭活是指用灭活是指用物理物理或
23、或化学化学手段使病毒手段使病毒失去感染能力失去感染能力，但是并但是并不破坏不破坏病毒的病毒的抗原抗原结构。结构。灭活病毒诱导细胞融合的原理灭活病毒诱导细胞融合的原理 病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。膜打开，细胞发生融合。26PPT学习交流3.3.原理：原理：细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞增殖细胞增殖4.诱导方式诱导方式物理法：物理法：化学法：化学法：生物法：生物法：
24、 灭活的病毒灭活的病毒电激、振动、离心电激、振动、离心聚乙二醇聚乙二醇（PEGPEG）例如：仙台病毒例如：仙台病毒5.意义意义突破有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能；突破有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能；重要用途：重要用途：制备单克隆抗体。制备单克隆抗体。制备单克隆抗体。制备单克隆抗体。27PPT学习交流项目项目项目项目动物细胞融合动物细胞融合动物细胞融合动物细胞融合植物体细胞杂交植物体细胞杂交植物体细胞杂交植物体细胞杂交原理原理原理原理细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性和和和和植物细胞的全能性植物细胞的全
25、能性植物细胞的全能性植物细胞的全能性融合前提融合前提融合前提融合前提 分散成单个细胞分散成单个细胞分散成单个细胞分散成单个细胞去除细胞壁去除细胞壁去除细胞壁去除细胞壁诱导方法诱导方法诱导方法诱导方法 聚乙二醇、离心、振动、聚乙二醇、离心、振动、聚乙二醇、离心、振动、聚乙二醇、离心、振动、电激、电激、电激、电激、灭活病毒灭活病毒灭活病毒灭活病毒聚乙二醇、离心、聚乙二醇、离心、聚乙二醇、离心、聚乙二醇、离心、振动、电激、振动、电激、振动、电激、振动、电激、结果结果结果结果获得杂交细胞或细胞产物获得杂交细胞或细胞产物获得杂交细胞或细胞产物获得杂交细胞或细胞产物 获得杂种植株获得杂种植株获得杂种植株获
26、得杂种植株用途用途用途用途制备单克隆抗体制备单克隆抗体制备单克隆抗体制备单克隆抗体培育作物新品种培育作物新品种培育作物新品种培育作物新品种意义意义意义意义使远缘杂交使远缘杂交使远缘杂交使远缘杂交成为可能成为可能成为可能成为可能克服克服克服克服远缘杂交障碍远缘杂交障碍远缘杂交障碍远缘杂交障碍细胞增殖细胞增殖28PPT学习交流二、单克隆抗体二、单克隆抗体 凡能够引起机体产生特异性免疫应答的物质叫做抗原。凡能够引起机体产生特异性免疫应答的物质叫做抗原。抗原：抗原：抗体抗体 当机体受到抗原刺激后产生，并能与该抗原发生特异当机体受到抗原刺激后产生，并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的蛋白质性结合的
27、具有免疫功能的蛋白质29PPT学习交流人们获得抗体的传统方法是人们获得抗体的传统方法是? ?将抗原注入动物体将抗原注入动物体, ,然后从动物血清中提取抗体然后从动物血清中提取抗体这种方法的缺点是什么这种方法的缺点是什么? ?效率低，产量有限，纯度低，动物抗体注入人体可能产生严重的效率低，产量有限，纯度低，动物抗体注入人体可能产生严重的过敏反应。过敏反应。运用已学知识，设想怎样获得单一类型的抗体？运用已学知识，设想怎样获得单一类型的抗体？虽然动物体内存在百万种以上抗体，但每一个虽然动物体内存在百万种以上抗体，但每一个B B淋巴细胞只分泌淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。可以通过克隆单一一种特异性抗体
28、。可以通过克隆单一B B淋巴细胞获得单一抗体淋巴细胞获得单一抗体能否用单个能否用单个B B淋巴细胞通过克隆形成的细胞群来产生单一类型的淋巴细胞通过克隆形成的细胞群来产生单一类型的抗体呢？抗体呢？理论上行得通。实际上，理论上行得通。实际上，B B淋巴细胞在体外不能无限增殖。淋巴细胞在体外不能无限增殖。怎样解决这一问题？怎样解决这一问题？肿瘤细胞和淋巴细胞融合肿瘤细胞和淋巴细胞融合思考思考30PPT学习交流科勒科勒米尔斯坦米尔斯坦荣获荣获19841984年诺贝尔生理学或医学奖年诺贝尔生理学或医学奖 如果把一种如果把一种B B淋巴细胞与能在体外大量增殖的淋巴细胞与能在体外大量增殖的骨髓瘤细胞进行融合
29、，所得到的骨髓瘤细胞进行融合，所得到的融合细胞融合细胞既能大量既能大量增殖，又能产生足够数量的特定抗体。增殖，又能产生足够数量的特定抗体。 31PPT学习交流动物细胞融动物细胞融合技术合技术B 、BB 、B瘤瘤 、瘤瘤、瘤瘤 、瘤、瘤HAT培养基上培养基上只有杂交瘤细只有杂交瘤细胞才能活胞才能活动物细胞培养动物细胞培养获得产生相应抗获得产生相应抗体的体的B淋巴细胞淋巴细胞稀释后在多孔培养板上培养，使每孔只含稀释后在多孔培养板上培养，使每孔只含一个杂交瘤细胞。培养一段时间后，进行一个杂交瘤细胞。培养一段时间后，进行专一抗体检测，筛选出呈阳性杂交瘤细胞。专一抗体检测，筛选出呈阳性杂交瘤细胞。1 1
30、、制备过程、制备过程32PPT学习交流1、作为诊断试剂作为诊断试剂：在临床生化诊断、病理组织定位、体在临床生化诊断、病理组织定位、体内肿瘤的定位等内肿瘤的定位等, ,与常规抗体相比与常规抗体相比, ,具有具有准确、高效、简准确、高效、简易、快速易、快速特点特点.2、用于治疗疾病和运载药物用于治疗疾病和运载药物：主要用于癌症治疗。主要用于癌症治疗。生物导弹：生物导弹：抗癌细胞的单克隆抗体抗癌细胞的单克隆抗体+ +放射性同位素放射性同位素+ +化学化学药物或细胞毒素药物或细胞毒素。（单克隆抗体：导向。准确找到癌细。（单克隆抗体：导向。准确找到癌细胞位置，原位杀死癌细胞。）胞位置，原位杀死癌细胞。）
31、2 2、单克隆抗体的优点：、单克隆抗体的优点： 特异性强，灵敏度高，可大量制备。特异性强，灵敏度高，可大量制备。3 3 3 3、单克隆抗体的应用、单克隆抗体的应用、单克隆抗体的应用、单克隆抗体的应用33PPT学习交流例题例题例题例题1 1 1 1：1975197519751975年，英国剑桥大学分子生物学年，英国剑桥大学分子生物学年，英国剑桥大学分子生物学年，英国剑桥大学分子生物学实验室的科勒和米尔斯坦，把小鼠实验室的科勒和米尔斯坦，把小鼠实验室的科勒和米尔斯坦，把小鼠实验室的科勒和米尔斯坦，把小鼠的淋巴细胞（脾细胞）和小鼠的骨的淋巴细胞（脾细胞）和小鼠的骨的淋巴细胞（脾细胞）和小鼠的骨的淋巴
32、细胞（脾细胞）和小鼠的骨髓瘤细胞融合起来，成为杂交瘤细髓瘤细胞融合起来，成为杂交瘤细髓瘤细胞融合起来，成为杂交瘤细髓瘤细胞融合起来，成为杂交瘤细胞，实现在体外大量生产抗体的目胞，实现在体外大量生产抗体的目胞，实现在体外大量生产抗体的目胞，实现在体外大量生产抗体的目的。实验过程如图所示。的。实验过程如图所示。的。实验过程如图所示。的。实验过程如图所示。(1)(1)(1)(1)淋巴细胞能与骨髓瘤细胞融合成一个细胞，两种细胞膜也能淋巴细胞能与骨髓瘤细胞融合成一个细胞，两种细胞膜也能淋巴细胞能与骨髓瘤细胞融合成一个细胞，两种细胞膜也能淋巴细胞能与骨髓瘤细胞融合成一个细胞，两种细胞膜也能“ “融合融合融
33、合融合” ” 在一起，说明细胞膜在一起，说明细胞膜在一起，说明细胞膜在一起，说明细胞膜 。(2)(2)(2)(2)单克隆抗体的准确定义应为单克隆抗体的准确定义应为单克隆抗体的准确定义应为单克隆抗体的准确定义应为 ( )( )( )( ) A A A A一类特殊抗体一类特殊抗体一类特殊抗体一类特殊抗体 B B B B无性繁殖系无性繁殖系无性繁殖系无性繁殖系 C C C C单一抗体细胞的无性繁殖第产生的抗体单一抗体细胞的无性繁殖第产生的抗体单一抗体细胞的无性繁殖第产生的抗体单一抗体细胞的无性繁殖第产生的抗体 D D D D单一抗体细胞的有性繁殖系产生的抗体单一抗体细胞的有性繁殖系产生的抗体单一抗体
34、细胞的有性繁殖系产生的抗体单一抗体细胞的有性繁殖系产生的抗体(3)(3)(3)(3)杂交瘤细胞繁殖进行的是杂交瘤细胞繁殖进行的是杂交瘤细胞繁殖进行的是杂交瘤细胞繁殖进行的是_分裂，其遗传性状分裂，其遗传性状分裂，其遗传性状分裂，其遗传性状_。 (4)(4)(4)(4)单克隆抗体注入体内后可以自动追踪抗原单克隆抗体注入体内后可以自动追踪抗原单克隆抗体注入体内后可以自动追踪抗原单克隆抗体注入体内后可以自动追踪抗原( ( ( (病原体或癌变细胞等病原体或癌变细胞等病原体或癌变细胞等病原体或癌变细胞等) ) ) )并并并并与之结合，而绝不攻击任何正常细胞，故称为与之结合，而绝不攻击任何正常细胞，故称为
35、与之结合，而绝不攻击任何正常细胞，故称为与之结合，而绝不攻击任何正常细胞，故称为“ “生物导弹生物导弹生物导弹生物导弹” ”这是利用了这是利用了这是利用了这是利用了 _ 。具有一定的流动性具有一定的流动性具有一定的流动性具有一定的流动性C C C C有丝有丝有丝有丝不变不变不变不变抗体能与抗原发生特异性结合的特点抗体能与抗原发生特异性结合的特点抗体能与抗原发生特异性结合的特点抗体能与抗原发生特异性结合的特点34PPT学习交流 例题例题例题例题22（1 1）在用动物细胞融合技术制备单克隆抗体时，）在用动物细胞融合技术制备单克隆抗体时，）在用动物细胞融合技术制备单克隆抗体时，）在用动物细胞融合技术
36、制备单克隆抗体时， 将抗原注射到小鼠体内，可获得将抗原注射到小鼠体内，可获得将抗原注射到小鼠体内，可获得将抗原注射到小鼠体内，可获得( (多选多选多选多选) ) （ ） A AT T淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞 B B效应效应效应效应B B淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞 C C抗体抗体抗体抗体 D D记忆细胞记忆细胞记忆细胞记忆细胞（2 2）下列关于单克隆抗体的制备和应用的叙述中，）下列关于单克隆抗体的制备和应用的叙述中，）下列关于单克隆抗体的制备和应用的叙述中，）下列关于单克隆抗体的制备和应用的叙述中， 正确的是正确的是正确的是正确的是 ( (多选多选多选多选) ) （ ） A AB
37、B淋巴细胞与骨髓瘤细胞的融合，一般需要灭活的仙台淋巴细胞与骨髓瘤细胞的融合，一般需要灭活的仙台淋巴细胞与骨髓瘤细胞的融合，一般需要灭活的仙台淋巴细胞与骨髓瘤细胞的融合，一般需要灭活的仙台 病毒或聚乙二醇诱导病毒或聚乙二醇诱导病毒或聚乙二醇诱导病毒或聚乙二醇诱导 B B融合后形成的杂交瘤细胞既能无限增殖，又能产生单克融合后形成的杂交瘤细胞既能无限增殖，又能产生单克融合后形成的杂交瘤细胞既能无限增殖，又能产生单克融合后形成的杂交瘤细胞既能无限增殖，又能产生单克 隆抗体隆抗体隆抗体隆抗体 C C体外培养时，一个体外培养时，一个体外培养时，一个体外培养时，一个B B淋巴细胞可以产生一种抗体，但不淋巴细
38、胞可以产生一种抗体，但不淋巴细胞可以产生一种抗体，但不淋巴细胞可以产生一种抗体，但不 能无限增殖能无限增殖能无限增殖能无限增殖 D D单克隆抗体与常规抗体相比，特异性强，灵敏度高，单克隆抗体与常规抗体相比，特异性强，灵敏度高，单克隆抗体与常规抗体相比，特异性强，灵敏度高，单克隆抗体与常规抗体相比，特异性强，灵敏度高， 优越性明显优越性明显优越性明显优越性明显 BCDBCD ACDACD35PPT学习交流已知细胞已知细胞已知细胞已知细胞合成合成合成合成DNADNA有有有有D D和和和和S S两条途径两条途径两条途径两条途径，其中，其中，其中，其中D D途径能被途径能被途径能被途径能被氨基嘌呤氨基
39、嘌呤氨基嘌呤氨基嘌呤阻断。阻断。阻断。阻断。人淋巴细胞中有这两种人淋巴细胞中有这两种人淋巴细胞中有这两种人淋巴细胞中有这两种DNADNA的合成途径，但一般不分裂增殖。的合成途径，但一般不分裂增殖。的合成途径，但一般不分裂增殖。的合成途径，但一般不分裂增殖。鼠骨鼠骨鼠骨鼠骨髓瘤细胞中尽管没有髓瘤细胞中尽管没有髓瘤细胞中尽管没有髓瘤细胞中尽管没有S S途径途径途径途径，但能不断分裂增殖，将这两种细胞在，但能不断分裂增殖，将这两种细胞在，但能不断分裂增殖，将这两种细胞在，但能不断分裂增殖，将这两种细胞在试管中混合，加聚乙二醇促融，获得杂种细胞。请回答：试管中混合，加聚乙二醇促融，获得杂种细胞。请回答
40、：试管中混合，加聚乙二醇促融，获得杂种细胞。请回答：试管中混合，加聚乙二醇促融，获得杂种细胞。请回答： （1 1）试管中除融合的杂种细胞外，还有）试管中除融合的杂种细胞外，还有）试管中除融合的杂种细胞外，还有）试管中除融合的杂种细胞外，还有 种融合细胞。种融合细胞。种融合细胞。种融合细胞。（2 2）设计一方法（不考虑机械方法），从培养液中分离出）设计一方法（不考虑机械方法），从培养液中分离出）设计一方法（不考虑机械方法），从培养液中分离出）设计一方法（不考虑机械方法），从培养液中分离出 杂种细胞，并说原理。杂种细胞，并说原理。杂种细胞，并说原理。杂种细胞，并说原理。 方法：方法：方法：方法：
41、。 原理：原理：原理：原理：培养液中加入氨基嘌呤，收集增殖的细胞培养液中加入氨基嘌呤，收集增殖的细胞培养液中加入氨基嘌呤，收集增殖的细胞培养液中加入氨基嘌呤，收集增殖的细胞加入氨基嘌呤后加入氨基嘌呤后加入氨基嘌呤后加入氨基嘌呤后, ,使使使使D D合成的途径阻断合成的途径阻断合成的途径阻断合成的途径阻断, ,所以仅所以仅所以仅所以仅D D合成途径的骨髓瘤细胞或彼此融合的细胞就不合成途径的骨髓瘤细胞或彼此融合的细胞就不合成途径的骨髓瘤细胞或彼此融合的细胞就不合成途径的骨髓瘤细胞或彼此融合的细胞就不能增殖能增殖能增殖能增殖, ,但杂种细胞则可以利用淋巴细胞中的但杂种细胞则可以利用淋巴细胞中的但杂种
42、细胞则可以利用淋巴细胞中的但杂种细胞则可以利用淋巴细胞中的S S途径合成途径合成途径合成途径合成DNADNA而增殖而增殖而增殖而增殖36PPT学习交流B体外培养体外培养骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞足够数量的细胞群足够数量的细胞群注射到注射到小鼠腹腔小鼠腹腔AC 下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌单克隆抗体的实验方案风杆菌单克隆抗体的实验方案2、该方案能达到预期效果吗？为什么？、该方案能达到预期效果吗？为什么？4、图中、图中B为为_过程，常用过程，常用_作为诱导剂，该细胞继作为诱导剂，该细胞继承承_的遗传特性，既能的
43、遗传特性，既能_,又能又能_。1、该实验方案的目的是、该实验方案的目的是_3、A是从小鼠的脾脏中取得是从小鼠的脾脏中取得_,该细胞能够产生该细胞能够产生_5、C过程指细胞培养，该过程包括过程指细胞培养，该过程包括_培养和培养和_培养两个阶段，其培养两个阶段，其中中_代以内的的细胞属于细胞株。代以内的的细胞属于细胞株。制备单克隆抗体制备单克隆抗体B细胞细胞抗体抗体细胞融合细胞融合灭活病毒灭活病毒双亲细胞双亲细胞分泌抗体分泌抗体无限增殖无限增殖原代原代传代传代50例例3 3：37PPT学习交流1.动物细胞工程技术的基础是：（）动物细胞工程技术的基础是：（）A动物细胞融合动物细胞融合B胚胎移植胚胎移
44、植C动物细胞培养动物细胞培养D核移植核移植课堂练习课堂练习; ;38PPT学习交流在动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正在动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的是（）确的是（）A结果是相同的结果是相同的B杂种细胞的形成过程基本相同杂种细胞的形成过程基本相同C操作过程中酶的作用相同操作过程中酶的作用相同D诱导融合的手段相同诱导融合的手段相同39PPT学习交流. 单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（ ） 淋巴细胞淋巴细胞小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞B淋巴细胞自身融合细胞淋巴细胞自身融合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞A BC D C40PPT学习交流
