《十章节吸光光度法》由会员分享，可在线阅读，更多相关《十章节吸光光度法（78页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、十章节吸光光度法Stillwatersrundeep.流静水深流静水深,人静心深人静心深Wherethereislife,thereishope。有生命必有希望。有生命必有希望Al3+Cu2+KMnO4Ni2+Fe3+n n通过比较溶液颜色深浅而求得其浓度的分通过比较溶液颜色深浅而求得其浓度的分析方法称为比色分析法析方法称为比色分析法n n比色分析的基本依据是有色物质对光的选比色分析的基本依据是有色物质对光的选择性吸收作用。择性吸收作用。n n光吸收的本质：光吸收的本质：n n吸收光谱有原子吸收光谱和分子吸收光谱。吸收光谱有原子吸收光谱和分子吸收光谱。吸收光谱有原子吸收光谱和分子吸收光谱。吸收
2、光谱有原子吸收光谱和分子吸收光谱。n n原子吸收光谱是由原子（而不是分子）外层电子选择性地吸收某原子吸收光谱是由原子（而不是分子）外层电子选择性地吸收某原子吸收光谱是由原子（而不是分子）外层电子选择性地吸收某原子吸收光谱是由原子（而不是分子）外层电子选择性地吸收某些波长的电磁波而引起的，原子吸收分光光度法就是根据原子的些波长的电磁波而引起的，原子吸收分光光度法就是根据原子的些波长的电磁波而引起的，原子吸收分光光度法就是根据原子的些波长的电磁波而引起的，原子吸收分光光度法就是根据原子的这种性质建立起来的。这种性质建立起来的。这种性质建立起来的。这种性质建立起来的。n n分子吸收光谱是分子轨道中外
3、层电子吸收某一波长范围的能量而分子吸收光谱是分子轨道中外层电子吸收某一波长范围的能量而分子吸收光谱是分子轨道中外层电子吸收某一波长范围的能量而分子吸收光谱是分子轨道中外层电子吸收某一波长范围的能量而引起的，通常吸收的是紫外及可见光部分。这种价电子跃迁而产引起的，通常吸收的是紫外及可见光部分。这种价电子跃迁而产引起的，通常吸收的是紫外及可见光部分。这种价电子跃迁而产引起的，通常吸收的是紫外及可见光部分。这种价电子跃迁而产生的分子光谱又称为电子光谱。生的分子光谱又称为电子光谱。生的分子光谱又称为电子光谱。生的分子光谱又称为电子光谱。n n电子跃迁时必须伴有分子的振动和转动能级的变化，所以分子光电子
4、跃迁时必须伴有分子的振动和转动能级的变化，所以分子光电子跃迁时必须伴有分子的振动和转动能级的变化，所以分子光电子跃迁时必须伴有分子的振动和转动能级的变化，所以分子光谱不是线光谱而是带状光谱。若用红外光照射，不能引起电子的谱不是线光谱而是带状光谱。若用红外光照射，不能引起电子的谱不是线光谱而是带状光谱。若用红外光照射，不能引起电子的谱不是线光谱而是带状光谱。若用红外光照射，不能引起电子的跃迁，只能引起振动和转动能级的变化，这样引起的吸收光谱称跃迁，只能引起振动和转动能级的变化，这样引起的吸收光谱称跃迁，只能引起振动和转动能级的变化，这样引起的吸收光谱称跃迁，只能引起振动和转动能级的变化，这样引起
5、的吸收光谱称为振动转动光谱或红外光谱。它的吸收与分子结构密切相关，为振动转动光谱或红外光谱。它的吸收与分子结构密切相关，为振动转动光谱或红外光谱。它的吸收与分子结构密切相关，为振动转动光谱或红外光谱。它的吸收与分子结构密切相关，用于研究分子结构。用于研究分子结构。用于研究分子结构。用于研究分子结构。电磁波电磁波电磁波电磁波波长范围波长范围波长范围波长范围跃迁类型跃迁类型跃迁类型跃迁类型分析方法分析方法分析方法分析方法X-X-射线射线射线射线1010-1-1-10nm-10nmKK、L L层电子层电子层电子层电子X X射线光谱法射线光谱法射线光谱法射线光谱法远紫外光远紫外光远紫外光远紫外光10-
6、200nm10-200nm中层电子中层电子中层电子中层电子真空紫外光度法真空紫外光度法真空紫外光度法真空紫外光度法近紫外光近紫外光近紫外光近紫外光200-400nm200-400nm价电子价电子价电子价电子紫外光度法紫外光度法紫外光度法紫外光度法可见光可见光可见光可见光400-750nm400-750nm比色及可见光度法比色及可见光度法比色及可见光度法比色及可见光度法近红外光近红外光近红外光近红外光0.75-2.50.75-2.5 mm分子振动分子振动分子振动分子振动红外光谱法红外光谱法红外光谱法红外光谱法中红外光中红外光中红外光中红外光 2.5-502.5-50 mm第一节、吸光光度法概述第
7、一节、吸光光度法概述n n吸光光度法是基于物质对光的选择性吸收而建立吸光光度法是基于物质对光的选择性吸收而建立吸光光度法是基于物质对光的选择性吸收而建立吸光光度法是基于物质对光的选择性吸收而建立起来的分析方法，起来的分析方法，起来的分析方法，起来的分析方法，n n包括：包括：包括：包括：n n比色分析法，比色分析法，比色分析法，比色分析法，n n可见光度法，可见光度法，可见光度法，可见光度法，n n紫外分光光度法，紫外分光光度法，紫外分光光度法，紫外分光光度法，n n红外分光光度法。红外分光光度法。红外分光光度法。红外分光光度法。比色分析法和分光光度法特点比色分析法和分光光度法特点:n n(1
8、)(1)、灵敏度高、灵敏度高、灵敏度高、灵敏度高n n测定的最低浓度可达测定的最低浓度可达测定的最低浓度可达测定的最低浓度可达1010-5-51010-6-6mol/Lmol/L，相当于含量，相当于含量，相当于含量，相当于含量0.0010.0001%0.0010.0001%的微量组分的微量组分的微量组分的微量组分. .n n(2)(2)、准确度较高、准确度较高、准确度较高、准确度较高n n分光光度法的相对误差为分光光度法的相对误差为分光光度法的相对误差为分光光度法的相对误差为25%.25%.n n(3)(3)、操作简便，测定速度快、操作简便，测定速度快、操作简便，测定速度快、操作简便，测定速度
9、快 n n(4)(4)、应用广泛、应用广泛、应用广泛、应用广泛第二节、吸光光度法的基本原理第二节、吸光光度法的基本原理n n一、互补色光一、互补色光n n白光：复合光白光：复合光n n复合光复合光单色光单色光n n单色器单色器单色器单色器n n单色光单色光1单色光单色光2白光白光n n互补色光互补色光互补色光互补色光白白光光二、物质的颜色和对光的选择吸收二、物质的颜色和对光的选择吸收n n(1)(1)、光吸收程度最大处的波长，、光吸收程度最大处的波长，、光吸收程度最大处的波长，、光吸收程度最大处的波长，称为最大吸收波长，常用称为最大吸收波长，常用称为最大吸收波长，常用称为最大吸收波长，常用 m
10、axmax表表表表示示示示. .n n(2)(2)、光吸收曲线与物质特性有、光吸收曲线与物质特性有、光吸收曲线与物质特性有、光吸收曲线与物质特性有关，这些特性客作为物质定性鉴关，这些特性客作为物质定性鉴关，这些特性客作为物质定性鉴关，这些特性客作为物质定性鉴定的依据定的依据定的依据定的依据. .n n(3)(3)、组成量度不同的同种物质、组成量度不同的同种物质、组成量度不同的同种物质、组成量度不同的同种物质的溶液，在一定波长处吸光度随的溶液，在一定波长处吸光度随的溶液，在一定波长处吸光度随的溶液，在一定波长处吸光度随溶液的组成量度增加而增大，这溶液的组成量度增加而增大，这溶液的组成量度增加而增
11、大，这溶液的组成量度增加而增大，这个特性可作为物质定量分析的依个特性可作为物质定量分析的依个特性可作为物质定量分析的依个特性可作为物质定量分析的依据据据据. .IoItIaIo = Ia + It +IrIrn n设入射光，吸收光，透射光和反射光的强度依次为设入射光，吸收光，透射光和反射光的强度依次为设入射光，吸收光，透射光和反射光的强度依次为设入射光，吸收光，透射光和反射光的强度依次为I Io o，I Ia a，I It t，I Ir r，则他们之间的关系为，则他们之间的关系为，则他们之间的关系为，则他们之间的关系为:第三节第三节光吸收的基本定律光吸收的基本定律一、朗伯定律一、朗伯定律n n
12、溶液对光的吸收程度与液层厚度的成正比。溶液对光的吸收程度与液层厚度的成正比。二、比耳定律二、比耳定律溶液对光的吸收程度与浓度成正比。溶液对光的吸收程度与浓度成正比。n nKK为比例常数，它与入射光的波长，有色物质的性质和溶液为比例常数，它与入射光的波长，有色物质的性质和溶液为比例常数，它与入射光的波长，有色物质的性质和溶液为比例常数，它与入射光的波长，有色物质的性质和溶液的温度等因数有关的温度等因数有关的温度等因数有关的温度等因数有关. .n n上式表示当一束平行单色光通过均匀的溶液时，溶液对光上式表示当一束平行单色光通过均匀的溶液时，溶液对光上式表示当一束平行单色光通过均匀的溶液时，溶液对光
13、上式表示当一束平行单色光通过均匀的溶液时，溶液对光的吸收程度与溶液的组成量度和液层厚度的乘积成正比的吸收程度与溶液的组成量度和液层厚度的乘积成正比的吸收程度与溶液的组成量度和液层厚度的乘积成正比的吸收程度与溶液的组成量度和液层厚度的乘积成正比. .这这这这一定律称为朗伯一定律称为朗伯一定律称为朗伯一定律称为朗伯- -比耳定律，也称为比耳定律，也称为比耳定律，也称为比耳定律，也称为光吸收定律光吸收定律光吸收定律光吸收定律. .三、朗伯三、朗伯-比耳定律比耳定律四、透光率，吸光度，吸光系数，四、透光率，吸光度，吸光系数，摩尔吸光系数摩尔吸光系数n n当液层厚度当液层厚度当液层厚度当液层厚度b b的
14、单位为的单位为的单位为的单位为cmcm，组成量度，组成量度，组成量度，组成量度c c的单位为的单位为的单位为的单位为g/Lg/L时，则常数时，则常数时，则常数时，则常数KK用用用用a a表示，它表示，它表示，它表示，它的单位为的单位为的单位为的单位为LgLg-1-1cmcm-1-1，a a称为吸光系数称为吸光系数称为吸光系数称为吸光系数. .n n当当当当b b的单位为的单位为的单位为的单位为cmcm，组成量，组成量，组成量，组成量度度度度c c的单位为的单位为的单位为的单位为mol/Lmol/L时，则时，则时，则时，则常数常数常数常数KK用用用用 表示，它的单位表示，它的单位表示，它的单位表
15、示，它的单位为为为为LmolLmol-1-1cmcm-1-1， 称为称为称为称为摩尔吸光系数摩尔吸光系数摩尔吸光系数摩尔吸光系数. .n n摩尔吸光系数摩尔吸光系数摩尔吸光系数摩尔吸光系数 时有色物质在一定波长下的特征常数，时有色物质在一定波长下的特征常数，时有色物质在一定波长下的特征常数，时有色物质在一定波长下的特征常数，它可以衡量显色反应的灵敏度它可以衡量显色反应的灵敏度它可以衡量显色反应的灵敏度它可以衡量显色反应的灵敏度. .n n 值越大，表示该有色物质对该波长光的吸收能力越强，值越大，表示该有色物质对该波长光的吸收能力越强，值越大，表示该有色物质对该波长光的吸收能力越强，值越大，表示
16、该有色物质对该波长光的吸收能力越强，显色反应越灵敏显色反应越灵敏显色反应越灵敏显色反应越灵敏. .第四节、吸光光度法的仪器部件第四节、吸光光度法的仪器部件n n一、目视比色法一、目视比色法n n用肉眼比较被测溶液同标准溶液颜色深浅，以确用肉眼比较被测溶液同标准溶液颜色深浅，以确用肉眼比较被测溶液同标准溶液颜色深浅，以确用肉眼比较被测溶液同标准溶液颜色深浅，以确定被测物质含量的方法，称为玛纳斯比色法定被测物质含量的方法，称为玛纳斯比色法定被测物质含量的方法，称为玛纳斯比色法定被测物质含量的方法，称为玛纳斯比色法. .n n最常用的目视比色法是标准系列法最常用的目视比色法是标准系列法最常用的目视比
17、色法是标准系列法最常用的目视比色法是标准系列法. .n n标准系列法的优点是仪器简单，操作简便，而且可在复合标准系列法的优点是仪器简单，操作简便，而且可在复合标准系列法的优点是仪器简单，操作简便，而且可在复合标准系列法的优点是仪器简单，操作简便，而且可在复合光下进行测定光下进行测定光下进行测定光下进行测定. .其缺点是配制标准色阶比较费时，由于某其缺点是配制标准色阶比较费时，由于某其缺点是配制标准色阶比较费时，由于某其缺点是配制标准色阶比较费时，由于某些有色溶液不够稳定，常常现用现配些有色溶液不够稳定，常常现用现配些有色溶液不够稳定，常常现用现配些有色溶液不够稳定，常常现用现配. .C C1
18、1 C C2 2 C C3 3 C C4 4 C C5 5 C Cx x二、光电比色法与分光光度法二、光电比色法与分光光度法n n( (一一一一) )、基本原理和特、基本原理和特、基本原理和特、基本原理和特点点点点n n1 1、标准曲线法、标准曲线法、标准曲线法、标准曲线法n n光度法与目视法比较，其光度法与目视法比较，其光度法与目视法比较，其光度法与目视法比较，其优点是优点是优点是优点是: :用用用用光电池光电池光电池光电池代替肉眼代替肉眼代替肉眼代替肉眼进行测量，消除了肉眼的进行测量，消除了肉眼的进行测量，消除了肉眼的进行测量，消除了肉眼的主观误差，提高了分析结主观误差，提高了分析结主观误
19、差，提高了分析结主观误差，提高了分析结果的准确度果的准确度果的准确度果的准确度. .2、比较法、比较法.(二二)光度计的基本部件光度计的基本部件n n一般光度计是由光源，滤光片，比色皿，光电池和检一般光度计是由光源，滤光片，比色皿，光电池和检一般光度计是由光源，滤光片，比色皿，光电池和检一般光度计是由光源，滤光片，比色皿，光电池和检流计等五大部件组成流计等五大部件组成流计等五大部件组成流计等五大部件组成. .1、光源、光源2、单色器、单色器n n1 1、滤色片、滤色片、滤色片、滤色片n n目前普遍使用的是国产型目前普遍使用的是国产型目前普遍使用的是国产型目前普遍使用的是国产型光电比色计，有三种
20、配套光电比色计，有三种配套光电比色计，有三种配套光电比色计，有三种配套的滤光片（红色的滤光片（红色的滤光片（红色的滤光片（红色650650，绿色，绿色，绿色，绿色530530，蓝色，蓝色，蓝色，蓝色440440）n n2 2、棱镜、棱镜、棱镜、棱镜 n n3 3、光栅、光栅、光栅、光栅n n10001000条条条条/mm/mm3、比色皿、比色皿(吸收池吸收池)4、光电池或光电管、光电池或光电管5、检流计、检流计n n(二二)、分光光度计、分光光度计n n1、72型风光光度计型风光光度计n n2、75型分光光度计型分光光度计721型可见分光光度计型可见分光光度计n n特点：特点：特点：特点：n
21、n棱镜单色器。棱镜单色器。棱镜单色器。棱镜单色器。n nT.AT.A直读。直读。直读。直读。n n使用消光片，可供高含量使用消光片，可供高含量使用消光片，可供高含量使用消光片，可供高含量比色测定。比色测定。比色测定。比色测定。n n技术指标：技术指标：技术指标：技术指标：n n波长范围：波长范围：波长范围：波长范围：360800nm360800nmn n波长精度：波长精度：波长精度：波长精度：3nm(360600nm)3nm(360600nm)n n表面刻度：（表面刻度：（表面刻度：（表面刻度：（T T）01000100（A A）0202722型可见分光光度计型可见分光光度计n n特点：特点：
22、特点：特点：n n能在可见光谱区域内能在可见光谱区域内能在可见光谱区域内能在可见光谱区域内对物质作定性定量分对物质作定性定量分对物质作定性定量分对物质作定性定量分析。析。析。析。n n采用光栅单色器、具采用光栅单色器、具采用光栅单色器、具采用光栅单色器、具有波长精度高，单色有波长精度高，单色有波长精度高，单色有波长精度高，单色性好等优点。性好等优点。性好等优点。性好等优点。n n采用采用采用采用3 3位位位位LEDLED数字显示，数字显示，数字显示，数字显示，T.A.CT.A.C直读。直读。直读。直读。n n波长范围：波长范围：波长范围：波长范围：330330800nm800nmn n波长准确
23、度：波长准确度：波长准确度：波长准确度：2nm2nm752型紫外可见分光光度计型紫外可见分光光度计n n特点：特点：特点：特点：n n采用全息闪耀光栅单色器，具采用全息闪耀光栅单色器，具采用全息闪耀光栅单色器，具采用全息闪耀光栅单色器，具有波长精度高，单色性好，杂有波长精度高，单色性好，杂有波长精度高，单色性好，杂有波长精度高，单色性好，杂散光低等优点。散光低等优点。散光低等优点。散光低等优点。n n能自动切换钨卤灯和氘灯。能自动切换钨卤灯和氘灯。能自动切换钨卤灯和氘灯。能自动切换钨卤灯和氘灯。n n采用采用采用采用3 3位位位位LEDLED数字显示，具有数字显示，具有数字显示，具有数字显示，
24、具有T.A.CT.A.C直读能。直读能。直读能。直读能。n n技术指标技术指标技术指标技术指标: :n n波长范围：波长范围：波长范围：波长范围：200200800nm800nmn n稳定性：暗电流漂移稳定性：暗电流漂移稳定性：暗电流漂移稳定性：暗电流漂移0.50.5()3min()3min754型紫外可见分光光度计型紫外可见分光光度计n n 特点特点特点特点: :n n自动调整自动调整自动调整自动调整”0”0”和调整和调整和调整和调整”100”100”具有超群的测具有超群的测具有超群的测具有超群的测量读数重现性和稳定量读数重现性和稳定量读数重现性和稳定量读数重现性和稳定性性性性. .n n由
25、微处理机控制的打由微处理机控制的打由微处理机控制的打由微处理机控制的打印机可作实时记录印机可作实时记录印机可作实时记录印机可作实时记录. .n n可使用直线回归测量可使用直线回归测量可使用直线回归测量可使用直线回归测量线线线线, ,具有高准确度的浓具有高准确度的浓具有高准确度的浓具有高准确度的浓度运算程序度运算程序度运算程序度运算程序. .732型可见分光光度计型可见分光光度计n n自动调整自动调整自动调整自动调整“0”“100”“0”“100”，可直接消除比色皿配对误可直接消除比色皿配对误可直接消除比色皿配对误可直接消除比色皿配对误差。差。差。差。n n测量读数准确性高，重现测量读数准确性高
26、，重现测量读数准确性高，重现测量读数准确性高，重现性和稳定性佳。性和稳定性佳。性和稳定性佳。性和稳定性佳。n n有浓度直读，线性回归，有浓度直读，线性回归，有浓度直读，线性回归，有浓度直读，线性回归，定时打印，定时打印，定时打印，定时打印，GOTOGOTO以及光以及光以及光以及光谱扫描等高级功能。谱扫描等高级功能。谱扫描等高级功能。谱扫描等高级功能。7230g型可见分光光度计型可见分光光度计n n自动调零、自动调满度、自动调零、自动调满度、自动调零、自动调满度、自动调零、自动调满度、自动建立线性方程、自动建立线性方程、自动建立线性方程、自动建立线性方程、A A、C C自动切换，浓度直读。自动切
27、换，浓度直读。自动切换，浓度直读。自动切换，浓度直读。n n比色室能放置比色室能放置比色室能放置比色室能放置100nm100nm比色比色比色比色皿，并配有托架。皿，并配有托架。皿，并配有托架。皿，并配有托架。n n具有自动调节的波长调整具有自动调节的波长调整具有自动调节的波长调整具有自动调节的波长调整机构，调整时无须打机构，调整时无须打机构，调整时无须打机构，调整时无须打 开机开机开机开机壳。壳。壳。壳。n n灯源采用固定电压、灵敏灯源采用固定电压、灵敏灯源采用固定电压、灵敏灯源采用固定电压、灵敏度在全波长范围内由微机度在全波长范围内由微机度在全波长范围内由微机度在全波长范围内由微机自动控制。
28、自动控制。自动控制。自动控制。第五节第五节显色反应和显色条件的选择显色反应和显色条件的选择n n一、显色反应一、显色反应一、显色反应一、显色反应n nFeFe3+3+3NCS+3NCS- -=Fe(NCS)=Fe(NCS)33(血红色血红色血红色血红色) )n n应用于比色分析的显色反应必须符合下列要求应用于比色分析的显色反应必须符合下列要求应用于比色分析的显色反应必须符合下列要求应用于比色分析的显色反应必须符合下列要求: :n n(1)(1)、显色反应的灵敏度要高、显色反应的灵敏度要高、显色反应的灵敏度要高、显色反应的灵敏度要高. .n n(2)(2)、有色化合物组成要固定、有色化合物组成要
29、固定、有色化合物组成要固定、有色化合物组成要固定. .n n(3)(3)、有色化合物稳定性要高、有色化合物稳定性要高、有色化合物稳定性要高、有色化合物稳定性要高. .n n(4)(4)、反应选择性要高、反应选择性要高、反应选择性要高、反应选择性要高. .二、显色条件的选择二、显色条件的选择二、显色条件的选择二、显色条件的选择n n1 1、显色剂用量、显色剂用量、显色剂用量、显色剂用量二、显色条件的选择二、显色条件的选择二、显色条件的选择二、显色条件的选择n n2 2、溶液的酸度、溶液的酸度、溶液的酸度、溶液的酸度n npHpHA二、显色条件的选择二、显色条件的选择二、显色条件的选择二、显色条件
30、的选择n n3 3、显色时间、显色时间、显色时间、显色时间n ntmintminA二、显色条件的选择二、显色条件的选择二、显色条件的选择二、显色条件的选择n n4 4、显色温度、显色温度、显色温度、显色温度n nTTA第六节、吸光光度法的误差及测第六节、吸光光度法的误差及测量条件的选择量条件的选择n n一、偏离朗伯一、偏离朗伯一、偏离朗伯一、偏离朗伯- -比耳定比耳定比耳定比耳定律所引起的误差律所引起的误差律所引起的误差律所引起的误差n n1 1、不同波长的入射光，有的物、不同波长的入射光，有的物、不同波长的入射光，有的物、不同波长的入射光，有的物质的吸光系数质的吸光系数质的吸光系数质的吸光系
31、数a a是不同的是不同的是不同的是不同的. .n n2 2、由于介质不均匀而造成的、由于介质不均匀而造成的、由于介质不均匀而造成的、由于介质不均匀而造成的. .n n3 3、由于化学变化所致、由于化学变化所致、由于化学变化所致、由于化学变化所致. .二、仪器测量误差二、仪器测量误差n n当当当当A=0.434A=0.434时，测量值时，测量值时，测量值时，测量值相对误差最小相对误差最小相对误差最小相对误差最小. .三三.测量条件的选择测量条件的选择n n1 1、入射光波长的选择、入射光波长的选择、入射光波长的选择、入射光波长的选择2、吸光度读数范围的选择、吸光度读数范围的选择T T最小最小最小
32、最小=0.368,A=-logT=0.434=0.368,A=-logT=0.434， 3、参比溶液的选择、参比溶液的选择n n(1)(1)、当试液，显色剂及所用的其他试剂在测定波长处无、当试液，显色剂及所用的其他试剂在测定波长处无、当试液，显色剂及所用的其他试剂在测定波长处无、当试液，显色剂及所用的其他试剂在测定波长处无吸收时，可用纯溶剂吸收时，可用纯溶剂吸收时，可用纯溶剂吸收时，可用纯溶剂( (或蒸馏水或蒸馏水或蒸馏水或蒸馏水) )作参比作参比作参比作参比; ;n n(2)(2)、如果显色剂无吸收，而待测试液在此波长处有吸收，、如果显色剂无吸收，而待测试液在此波长处有吸收，、如果显色剂无吸
33、收，而待测试液在此波长处有吸收，、如果显色剂无吸收，而待测试液在此波长处有吸收，那么采用不加显色剂的待测试液作参比溶液那么采用不加显色剂的待测试液作参比溶液那么采用不加显色剂的待测试液作参比溶液那么采用不加显色剂的待测试液作参比溶液. .n n(3)(3)、如果显色剂和待测试液均有吸收，可将一份试液，、如果显色剂和待测试液均有吸收，可将一份试液，、如果显色剂和待测试液均有吸收，可将一份试液，、如果显色剂和待测试液均有吸收，可将一份试液，加入适当的掩蔽剂将待测组分掩蔽起来，使之不再与显色加入适当的掩蔽剂将待测组分掩蔽起来，使之不再与显色加入适当的掩蔽剂将待测组分掩蔽起来，使之不再与显色加入适当的
34、掩蔽剂将待测组分掩蔽起来，使之不再与显色剂反应，然后按操作步骤加入显色剂及其它试剂，以此作剂反应，然后按操作步骤加入显色剂及其它试剂，以此作剂反应，然后按操作步骤加入显色剂及其它试剂，以此作剂反应，然后按操作步骤加入显色剂及其它试剂，以此作参比溶液参比溶液参比溶液参比溶液. .试液试液试液试液显色剂显色剂显色剂显色剂参比液参比液参比液参比液无色无色无色无色无色无色无色无色蒸馏水蒸馏水蒸馏水蒸馏水有色有色有色有色无色无色无色无色不加显色剂的试液不加显色剂的试液不加显色剂的试液不加显色剂的试液有色有色有色有色无色无色无色无色( (将将将将 被被被被 测测测测 组组组组 分分分分 掩掩掩掩 蔽蔽蔽蔽
35、)显色剂试液显色剂试液显色剂试液显色剂试液第七节、吸光光度法的应用第七节、吸光光度法的应用n n一、示差分光光度法一、示差分光光度法一、示差分光光度法一、示差分光光度法n n在分光光度法中，当被测组分含量高时，常常偏离朗在分光光度法中，当被测组分含量高时，常常偏离朗在分光光度法中，当被测组分含量高时，常常偏离朗在分光光度法中，当被测组分含量高时，常常偏离朗伯伯伯伯- -比耳定律比耳定律比耳定律比耳定律. .为了克服这一缺点，改用标准溶液代替为了克服这一缺点，改用标准溶液代替为了克服这一缺点，改用标准溶液代替为了克服这一缺点，改用标准溶液代替空白溶液来调节仪器的空白溶液来调节仪器的空白溶液来调节
36、仪器的空白溶液来调节仪器的100%100%透光度，以提高方法准确透光度，以提高方法准确透光度，以提高方法准确透光度，以提高方法准确度度度度. .这种方法称为示差分光光度法，简称为示差法这种方法称为示差分光光度法，简称为示差法这种方法称为示差分光光度法，简称为示差法这种方法称为示差分光光度法，简称为示差法. .n n示差分光光度法与普通分光光度法在具体操作步骤上示差分光光度法与普通分光光度法在具体操作步骤上示差分光光度法与普通分光光度法在具体操作步骤上示差分光光度法与普通分光光度法在具体操作步骤上主要不同之处是主要不同之处是主要不同之处是主要不同之处是: :普通分光光度法采用试剂的空白溶液普通分
37、光光度法采用试剂的空白溶液普通分光光度法采用试剂的空白溶液普通分光光度法采用试剂的空白溶液作参比溶液，而示差分光光度法则采用一个组成量度作参比溶液，而示差分光光度法则采用一个组成量度作参比溶液，而示差分光光度法则采用一个组成量度作参比溶液，而示差分光光度法则采用一个组成量度与试样接近的标准溶液与试样接近的标准溶液与试样接近的标准溶液与试样接近的标准溶液( (组成量度已知组成量度已知组成量度已知组成量度已知) )代替空白溶液代替空白溶液代替空白溶液代替空白溶液作参比溶液，根据测得的吸光度进行含量计算作参比溶液，根据测得的吸光度进行含量计算作参比溶液，根据测得的吸光度进行含量计算作参比溶液，根据测
38、得的吸光度进行含量计算. .n n二、多组分的分析二、多组分的分析二、多组分的分析二、多组分的分析n n1. 1.吸收曲线不重叠吸收曲线不重叠吸收曲线不重叠吸收曲线不重叠n n2. 2.吸收曲线单向重叠吸收曲线单向重叠吸收曲线单向重叠吸收曲线单向重叠n n3. 3.吸收曲线双向重叠吸收曲线双向重叠吸收曲线双向重叠吸收曲线双向重叠本章小结本章小结n n1 1吸光光度法的原理吸光光度法的原理吸光光度法的原理吸光光度法的原理n n知道朗伯知道朗伯知道朗伯知道朗伯 比耳定律是吸光光度法的定量依据，掌握朗伯比耳定律是吸光光度法的定量依据，掌握朗伯比耳定律是吸光光度法的定量依据，掌握朗伯比耳定律是吸光光度
39、法的定量依据，掌握朗伯 比耳比耳比耳比耳定律的数学表达式及其意义，正确理解摩尔吸光系数的意义及单定律的数学表达式及其意义，正确理解摩尔吸光系数的意义及单定律的数学表达式及其意义，正确理解摩尔吸光系数的意义及单定律的数学表达式及其意义，正确理解摩尔吸光系数的意义及单位，并会有关计算，掌握互补色光的原理和影响朗伯位，并会有关计算，掌握互补色光的原理和影响朗伯位，并会有关计算，掌握互补色光的原理和影响朗伯位，并会有关计算，掌握互补色光的原理和影响朗伯 比耳定律比耳定律比耳定律比耳定律偏离的因素。掌握吸收曲线在吸光光度分析中的作用。偏离的因素。掌握吸收曲线在吸光光度分析中的作用。偏离的因素。掌握吸收曲
40、线在吸光光度分析中的作用。偏离的因素。掌握吸收曲线在吸光光度分析中的作用。2 2吸光光度法和测量条件的选择吸光光度法和测量条件的选择吸光光度法和测量条件的选择吸光光度法和测量条件的选择n n了解各种吸光光度法的原理、特点、区别及应用，掌握标准曲了解各种吸光光度法的原理、特点、区别及应用，掌握标准曲了解各种吸光光度法的原理、特点、区别及应用，掌握标准曲了解各种吸光光度法的原理、特点、区别及应用，掌握标准曲线的制作方法，并能根据标准曲线线的制作方法，并能根据标准曲线线的制作方法，并能根据标准曲线线的制作方法，并能根据标准曲线( (工作曲线工作曲线工作曲线工作曲线) )计算分析结果。知计算分析结果。
41、知计算分析结果。知计算分析结果。知道吸光光度法仪器的主要部件，掌握吸光光度法测量条件的选择道吸光光度法仪器的主要部件，掌握吸光光度法测量条件的选择道吸光光度法仪器的主要部件，掌握吸光光度法测量条件的选择道吸光光度法仪器的主要部件，掌握吸光光度法测量条件的选择和仪器的测量误差。和仪器的测量误差。和仪器的测量误差。和仪器的测量误差。n n3 3显色反应显色反应显色反应显色反应n n了解显色反应，掌握显色反应的要求和显色反应条件。了解显色反应，掌握显色反应的要求和显色反应条件。了解显色反应，掌握显色反应的要求和显色反应条件。了解显色反应，掌握显色反应的要求和显色反应条件。n n4 4吸光光度法的应用
42、吸光光度法的应用吸光光度法的应用吸光光度法的应用n n了解吸光光度法的应用，掌握单一组分的测量方法。了解吸光光度法的应用，掌握单一组分的测量方法。了解吸光光度法的应用，掌握单一组分的测量方法。了解吸光光度法的应用，掌握单一组分的测量方法。综合练习题：综合练习题：n n一、填空题：一、填空题：一、填空题：一、填空题：n n1 1可见分光光度法主要用于对试样溶液进行可见分光光度法主要用于对试样溶液进行可见分光光度法主要用于对试样溶液进行可见分光光度法主要用于对试样溶液进行_；以不同波长单色光作为入射光测得的某一溶液的吸光度为纵坐标，以不同波长单色光作为入射光测得的某一溶液的吸光度为纵坐标，以不同波
43、长单色光作为入射光测得的某一溶液的吸光度为纵坐标，以不同波长单色光作为入射光测得的某一溶液的吸光度为纵坐标，入射光波长为横坐标作图，所得曲线称为入射光波长为横坐标作图，所得曲线称为入射光波长为横坐标作图，所得曲线称为入射光波长为横坐标作图，所得曲线称为_。n n2 2为提高测定的准确度，溶液的吸光度应调节在为提高测定的准确度，溶液的吸光度应调节在为提高测定的准确度，溶液的吸光度应调节在为提高测定的准确度，溶液的吸光度应调节在_范围，这可通过控制溶液的范围，这可通过控制溶液的范围，这可通过控制溶液的范围，这可通过控制溶液的_和选用和选用和选用和选用_来实现。来实现。来实现。来实现。n n3 3常
44、用的参比溶液常用的参比溶液常用的参比溶液常用的参比溶液( (空白溶液空白溶液空白溶液空白溶液) )有有有有_、_和和和和_。n n4 4当温度和溶剂种类一定时，溶液的吸光度与当温度和溶剂种类一定时，溶液的吸光度与当温度和溶剂种类一定时，溶液的吸光度与当温度和溶剂种类一定时，溶液的吸光度与_和和和和_成正比，这称为成正比，这称为成正比，这称为成正比，这称为_定律。定律。定律。定律。n n5 5摩尔吸光系数摩尔吸光系数摩尔吸光系数摩尔吸光系数 是物质的是物质的是物质的是物质的_，其值越大，其值越大，其值越大，其值越大，表明溶液对入射单色光表明溶液对入射单色光表明溶液对入射单色光表明溶液对入射单色光
45、_，测定的，测定的，测定的，测定的_愈高。愈高。愈高。愈高。一般一般一般一般 大于大于大于大于_就可进行分光光度法测定。就可进行分光光度法测定。就可进行分光光度法测定。就可进行分光光度法测定。n n二、是非题：二、是非题：二、是非题：二、是非题：n n1 1分光光度法是根据溶液对光有选择性吸收及朗伯比分光光度法是根据溶液对光有选择性吸收及朗伯比分光光度法是根据溶液对光有选择性吸收及朗伯比分光光度法是根据溶液对光有选择性吸收及朗伯比耳定律对物质进行定性和定量分析的一种方法。耳定律对物质进行定性和定量分析的一种方法。耳定律对物质进行定性和定量分析的一种方法。耳定律对物质进行定性和定量分析的一种方法
46、。n n2 2分光光度法灵敏度高，特别适用常量组分的测定。分光光度法灵敏度高，特别适用常量组分的测定。分光光度法灵敏度高，特别适用常量组分的测定。分光光度法灵敏度高，特别适用常量组分的测定。n n3 3在分光光度分析中，吸光度愈大，测量的误差愈小。在分光光度分析中，吸光度愈大，测量的误差愈小。在分光光度分析中，吸光度愈大，测量的误差愈小。在分光光度分析中，吸光度愈大，测量的误差愈小。n n4 4当溶液中无干扰物质存在时，应选择波长为当溶液中无干扰物质存在时，应选择波长为当溶液中无干扰物质存在时，应选择波长为当溶液中无干扰物质存在时，应选择波长为maxmax的光的光的光的光作为入射光进行分光光度
47、法测定。作为入射光进行分光光度法测定。作为入射光进行分光光度法测定。作为入射光进行分光光度法测定。n n5 5可见分光光度计使用的吸收池是用石英制造的。可见分光光度计使用的吸收池是用石英制造的。可见分光光度计使用的吸收池是用石英制造的。可见分光光度计使用的吸收池是用石英制造的。n n三、选择题：三、选择题：三、选择题：三、选择题：1 1符合比耳定律的有色溶液浓度改变时，其最大的吸收峰符合比耳定律的有色溶液浓度改变时，其最大的吸收峰符合比耳定律的有色溶液浓度改变时，其最大的吸收峰符合比耳定律的有色溶液浓度改变时，其最大的吸收峰位置有何变化位置有何变化位置有何变化位置有何变化()()a a、向长波
48、移动、向长波移动、向长波移动、向长波移动b b、向短波移动、向短波移动、向短波移动、向短波移动c c、不改变，峰高也不改变、不改变，峰高也不改变、不改变，峰高也不改变、不改变，峰高也不改变d d、不改变，峰高改变、不改变，峰高改变、不改变，峰高改变、不改变，峰高改变2 2对显色反应产生影响的因素是下面哪一种对显色反应产生影响的因素是下面哪一种对显色反应产生影响的因素是下面哪一种对显色反应产生影响的因素是下面哪一种()()a a、显色酸度、显色酸度、显色酸度、显色酸度b b、比色皿、比色皿、比色皿、比色皿c c、测量波长、测量波长、测量波长、测量波长d d、仪器精密度、仪器精密度、仪器精密度、仪
49、器精密度n n5 5在光度法测定中，当试剂和显色剂均有颜色时，参比溶液可在光度法测定中，当试剂和显色剂均有颜色时，参比溶液可在光度法测定中，当试剂和显色剂均有颜色时，参比溶液可在光度法测定中，当试剂和显色剂均有颜色时，参比溶液可选用哪种溶液选用哪种溶液选用哪种溶液选用哪种溶液()()a a、水、水、水、水b b、加了试剂和显色剂的溶液、加了试剂和显色剂的溶液、加了试剂和显色剂的溶液、加了试剂和显色剂的溶液c c、将、将、将、将1 1份试液加入掩蔽剂掩蔽被测组分，再加试剂与显色剂份试液加入掩蔽剂掩蔽被测组分，再加试剂与显色剂份试液加入掩蔽剂掩蔽被测组分，再加试剂与显色剂份试液加入掩蔽剂掩蔽被测组
50、分，再加试剂与显色剂d d、未加显色剂只加入试剂的溶液、未加显色剂只加入试剂的溶液、未加显色剂只加入试剂的溶液、未加显色剂只加入试剂的溶液n n6 6朗伯朗伯朗伯朗伯- -比耳定律说明，当一束单色光通过均匀的有色溶液时，比耳定律说明，当一束单色光通过均匀的有色溶液时，比耳定律说明，当一束单色光通过均匀的有色溶液时，比耳定律说明，当一束单色光通过均匀的有色溶液时，有色溶液的吸光度与什么成正比有色溶液的吸光度与什么成正比有色溶液的吸光度与什么成正比有色溶液的吸光度与什么成正比()()a a、溶液的温度、溶液的温度、溶液的温度、溶液的温度b b、溶液的酸度、溶液的酸度、溶液的酸度、溶液的酸度c c、
51、溶液的浓度和液层厚度的乘积、溶液的浓度和液层厚度的乘积、溶液的浓度和液层厚度的乘积、溶液的浓度和液层厚度的乘积d d、有色络合物的稳定性、有色络合物的稳定性、有色络合物的稳定性、有色络合物的稳定性7 7属于紫外可见分光光度计波长范围是多少属于紫外可见分光光度计波长范围是多少属于紫外可见分光光度计波长范围是多少属于紫外可见分光光度计波长范围是多少nm()nm()a a、20020010001000b b、420420700700c c、360360800800d d、4004008008008 8在分光光度法中浓度测量的相对误差较小在分光光度法中浓度测量的相对误差较小在分光光度法中浓度测量的相对
52、误差较小在分光光度法中浓度测量的相对误差较小(4%)(4%)的吸光度的吸光度的吸光度的吸光度范围是多少范围是多少范围是多少范围是多少()()a a、0.010.010.09%0.09%b b、0.10.10.20.2c c、0.20.20.70.7d d、0.80.81.01.09 9在分光光度法中，测定结果的相对误差与被测物浓度的在分光光度法中，测定结果的相对误差与被测物浓度的在分光光度法中，测定结果的相对误差与被测物浓度的在分光光度法中，测定结果的相对误差与被测物浓度的关系如何关系如何关系如何关系如何()()a a、随浓度增大而增大、随浓度增大而增大、随浓度增大而增大、随浓度增大而增大b b、随浓度增大而减小、随浓度增大而减小、随浓度增大而减小、随浓度增大而减小c c、在浓度增大过程中出现一个最低值、在浓度增大过程中出现一个最低值、在浓度增大过程中出现一个最低值、在浓度增大过程中出现一个最低值d d、在浓度增大过程中出现一个最高值、在浓度增大过程中出现一个最高值、在浓度增大过程中出现一个最高值、在浓度增大过程中出现一个最高值
