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1、业界之最业界之最享誉全球享誉全球大赛璐手性分析方法筛选与优化 最新主要内容主要内容l l 手性色谱基础和大赛璐手性柱手性色谱基础和大赛璐手性柱手性色谱基础和大赛璐手性柱手性色谱基础和大赛璐手性柱l l 涂布型正相手性分析方法开发涂布型正相手性分析方法开发涂布型正相手性分析方法开发涂布型正相手性分析方法开发l l 涂布型反相手性分析方法开发涂布型反相手性分析方法开发涂布型反相手性分析方法开发涂布型反相手性分析方法开发l l 化学键合型手性分析方法开发化学键合型手性分析方法开发化学键合型手性分析方法开发化学键合型手性分析方法开发l l 常见手性分析问题与注意事项常见手性分析问题与注意事项常见手性分
2、析问题与注意事项常见手性分析问题与注意事项大赛璐手性分析方法筛选与优化 最新液液- -液萃取法液萃取法生物催化法生物催化法不对称合成法不对称合成法膜分离法膜分离法传感器法传感器法结晶法结晶法毛细管电泳毛细管电泳色谱法色谱法手性分离方法手性分离方法手性色谱技术手性色谱技术大赛璐手性分析方法筛选与优化 最新超临界超临界 ( (SFCSFC) ) 气相色谱气相色谱（GCGC） 薄层色谱薄层色谱（TLCTLC） 逆流色谱逆流色谱（CCCCCC） 模拟移动床模拟移动床 ( (SMBSMB) ) 高效液相色谱高效液相色谱（HPLCHPLC） 色谱法色谱法手性色谱技术手性色谱技术大赛璐手性分析方法筛选与优化
3、 最新方法方法精度精度说明说明旋光法旋光法低(5%) 非对映体异构体法非对映体异构体法高(0.1%)几十毫克.中等(2%)几毫克需要位移试剂.色谱法色谱法高高 (0.1%)(0.1%)微克微克- -毫克毫克HPLCHPLC、 、GCGC、 、SFCSFC对映体纯度测定方法及其比较对映体纯度测定方法及其比较几十毫克样品用量样品用量需要其它的手性化合物来制备非对映体需要真实样品大赛璐手性分析方法筛选与优化 最新手性色谱固定相法基本原理手性色谱固定相法基本原理操作简单操作简单 不需要预处理不需要预处理 准确度高准确度高即可用于对映体的常规分即可用于对映体的常规分即可用于对映体的常规分即可用于对映体的
4、常规分析，也可实现大规模制备析，也可实现大规模制备析，也可实现大规模制备析，也可实现大规模制备R RR R对映体分离对映体分离示意图示意图S SS SS SS SS SS SS SS SS SS SR,SR,S消旋体消旋体(racemate)(racemate)手手性性选选择择剂剂R RS SR RR RR RR RR RR RR RR R引入手性环境引入手性环境是实现手性分是实现手性分离的前提离的前提大赛璐手性分析方法筛选与优化 最新Daicel手性色谱柱一览表手性色谱柱一览表正相正相l直链淀粉衍生物直链淀粉衍生物 CHIRALPAK AD / AD-H/AD-3 CHIRALPAK AS
5、/ AS-H/AS-3 CHIRALPAK AY-H/AY-3 CHIRALPAK AZ-H/AZ-3l纤维素纤维素衍生物衍生物 CHIRALCEL OD / OD-H/OD-3 CHIRALCEL OJ / OJ H/OJ-3 CHIRALCEL OZ H /OZ-3 CHIRALCEL OA, OB, OC CHIRALCEL OF, OG, OK CHIRALCEL CA-1反相反相 CHIRALPAK AD -RH/AD-3R CHIRALPAK AS RH/AS-3R CHIRALCEL OD-RH/OD-3R CHIRALCEL OJ RH/OJ-3R CHIRALPAK AY R
6、H/AY-3R CHIRALCEL OZ RH/OZ-3R其它其它Chiral -AGP CROWNPAK CR (), ()CHIRALPAK OT(), OP ()CHIRALPAK WH, MA ()CHIRALPAK QD-AXCHIRALPAK QN-AX共价键合型共价键合型 CHIRALPAK IA/IA-3 CHIRALPAK IB/IB-3 CHIRALPAK IC/IC-3大赛璐手性分析方法筛选与优化 最新大赛璐固定相：大赛璐固定相：大赛璐固定相：大赛璐固定相： USPEPUSPEPUSPEPUSPEP中国药典中国药典中国药典中国药典大赛璐手性分析方法筛选与优化 最新涂布型正
7、相手性柱：涂布型正相手性柱：手性分析方法的建立和优化手性分析方法的建立和优化大赛璐手性分析方法筛选与优化 最新分析条件优化流程图分析条件优化流程图 (1 (1) )酸性酸性中性中性碱性碱性1.1.1.1.确认流动相中是否使用酸、碱添加剂确认流动相中是否使用酸、碱添加剂确认流动相中是否使用酸、碱添加剂确认流动相中是否使用酸、碱添加剂配制流动相配制流动相配制流动相配制流动相Hex/IPA/Hex/IPA/TFATFA= =7 70/0/3 30/0.10/0.1Hex/IPA/Hex/IPA/DEADEA= =7 70/0/3 30/0.10/0.1Hex/IPAHex/IPA= =7 70/0/
8、3 30 0样品样品样品样品大赛璐手性分析方法筛选与优化 最新碱性碱性样品样品添加物在分离中的作用添加物在分离中的作用添加物在分离中的作用添加物在分离中的作用mVMinutes0.01.02.03.04.05.06.07.002468101214161820222410.7413.96Hex/IPA/DEA=90/10/0.1流量：1.0mi/min. 温度：25、检测波长：（254）流动相Hex/IPA=90/10Hex/IPA/AcOH=90/10/0.1流动相Hex/IPA=90/10-0.10-0.050.000.050.100.150.200.250.300.35mV02468101
9、2141618202224262830Minutes10.940.40流量：1.0mi/min.温度：40、检测波长：（254）05101520253035mV0123456789101112131415Minutes6.667.52Minutes0.00.20.40.60.81.01.21.41.6mV0510152025303540酸性酸性样品样品（没出峰（没出峰 )（无法分离（无法分离 )大赛璐手性分析方法筛选与优化 最新添加物的种类和用量添加物的种类和用量添加物的种类和用量添加物的种类和用量样品酸碱性样品酸碱性样品酸碱性样品酸碱性添加物种类添加物种类添加物种类添加物种类添加量添加量添加
10、量添加量中性中性中性中性不需要不需要不需要不需要碱性碱性碱性碱性二乙胺二乙胺二乙胺二乙胺 (DEA)(DEA)(n-(n-丁胺丁胺丁胺丁胺* *1 1) )( (乙醇胺乙醇胺乙醇胺乙醇胺* *2 2) ) 0.50.5通常通常通常通常0.10.1酸性酸性酸性酸性三氟乙酸三氟乙酸三氟乙酸三氟乙酸 (TFA)(TFA)醋酸醋酸醋酸醋酸 0.50.5通常通常通常通常0.10.1*1 主要用于1级胺*2 主要用于1级氨基醇大赛璐手性分析方法筛选与优化 最新Column: AY-H (4.6*150mm)Temp: 35Flow:2.0ML/MINMobile phase: CO2/IPA/DEA =8
11、5/15/0.1不同添加剂对手性分离的影响不同添加剂对手性分离的影响不同添加剂对手性分离的影响不同添加剂对手性分离的影响Column: AY-H (4.6*150mm)Temp: 35Flow:1.2ML/MINMobile phase:CO2/IPA/1-propylamine =85/15/0.1大赛璐手性分析方法筛选与优化 最新对于一些特殊的样品：酸碱添加剂同时添加，优化分离对于一些特殊的样品：酸碱添加剂同时添加，优化分离对于一些特殊的样品：酸碱添加剂同时添加，优化分离对于一些特殊的样品：酸碱添加剂同时添加，优化分离Column: OZ-H (4.6*150mm)Temp: 35Flow
12、: 1.0 ml/minMobile phase:hexane/IPA/DEA(75/25/0.1)Column: OZ-H (4.6*150mm)Temp: 35Flow: 1.0 ml/minMobile phase:hexane/IPA/TFA(85/15/0.1)Column: OZ-H (4.6(150mm)Temp: 35Flow: 1.0 ml/minMobile phase:hexane/IPA/TFA/DEA(80/20/O.1/0.05)大赛璐手性分析方法筛选与优化 最新分析条件优化流程图分析条件优化流程图 (2 (2) )保留时间保留时间? ?长长长长适宜的分析时间(10
13、-30min.)短短短短增加增加 异异丙醇丙醇 增加增加 正已正已烷烷2.2.2.2.配制好流动相配制好流动相配制好流动相配制好流动相选择合适的手性柱选择合适的手性柱选择合适的手性柱选择合适的手性柱分析分析分析分析大赛璐手性分析方法筛选与优化 最新分析条件优化流程图分析条件优化流程图 （3 3）没有分离没有分离部分分离部分分离3.3.3.3.选择合适的手性柱选择合适的手性柱选择合适的手性柱选择合适的手性柱尝试别的手性柱尝试别的手性柱OK!OK!基线分离基线分离基线分离基线分离继续优化分析条件继续优化分析条件继续优化分析条件继续优化分析条件分离？分离？大赛璐手性分析方法筛选与优化 最新筛选结果筛
14、选结果筛选结果筛选结果0510152025303540455055600123456789101112131415Minutes4.684.82OB15mV1234567891011121314Minutes6.716.87OD05101520253035404550556065mV0-505101520253035mV0123456789101112131415Minutes6.667.52AD05101520253035404550556065mV0123456789101112131415OJmV01020304050607080mV012345678910111213144.7090A
15、S1501020304050607080901000123456789101112131415Minutes4.70OCMinutes1020304050607080mV0123456789101112131415Minutes4.3615OGMinutes001020304050607080mV01234567891011121314Minutes4.36OF色谱条件色谱条件流动相： Hex./IPA/ AcOH = 90/10/0.1流量：1.0ml/min.温度 ：40检测波长 ：UV254nm样品：选择效果最好的手性柱, 然后继续优化分析条件大赛璐手性分析方法筛选与优化 最新分析条件优
16、化流程图分析条件优化流程图 （4-A4-A）部分分部分分离离A.A.降低异丙醇浓度降低异丙醇浓度 B.B.调整温度调整温度C.C.更换醇类更换醇类4. 4. 4. 4.分析条件继续优化分析条件继续优化分析条件继续优化分析条件继续优化大赛璐手性分析方法筛选与优化 最新醇浓度的影响醇浓度的影响醇浓度的影响醇浓度的影响05101520253035mV012345678910 11 12 13 14 15Minutes6.667.52在多数情况下，降低醇的浓度可延长保持时间，改善分离度在多数情况下，降低醇的浓度可延长保持时间，改善分离度Column：AD, Temp.：40, Flow rate：1.
17、0ml/min. Hex./IPA/ AcOH =90/10/0.1Hex./IPA/ AcOH =100/1/0.1-0.50.00.51.01.52.02.53.03.5mV051015202530354045505560Minutes35.7743.71Sample：Flurbiprofen大赛璐手性分析方法筛选与优化 最新部分分部分分离离B.B.调整温度调整温度C.C.更换醇类更换醇类4. 4. 4. 4.分析条件继续优化分析条件继续优化分析条件继续优化分析条件继续优化分析条件优化流程图分析条件优化流程图 （4-B4-B）A.A.降低异丙醇浓度降低异丙醇浓度大赛璐手性分析方法筛选与优化
18、 最新温度的影响温度的影响温度的影响温度的影响Column：CHIRALPAK ADMobile phase： Hex./IPA/ AcOH =90/10/0.1, Flow rate：1.0ml/min. 2540Temp.： 5降低柱温降低柱温可增大可增大值，但会使峰形变宽值，但会使峰形变宽升高柱温升高柱温会减少会减少值，但会使峰形尖锋值，但会使峰形尖锋-0.50.00.51.01.52.02.53.03.54.04.55.05.56.00123456789101112131415Minutes8.7212.13:1.59mVMinutes0510152025303501234567891
19、011121314156.667.52:1.23mV01234567890123456789101112131415Minutes7.669.12:1.32大赛璐手性分析方法筛选与优化 最新Temp.： 25Rs: 1.99Temp.： 20Rs: 2.78Temp.： 15Rs: 3.56温度的影响温度的影响温度的影响温度的影响Column: CROWNPAK CR(+) (4.6*150 mm)Mobile phase: PH=1.0高氯酸高氯酸 Flow: 0.3 ml/minSample: 苏氨酸苏氨酸大赛璐手性分析方法筛选与优化 最新部分分部分分离离C C. .更换醇类更换醇类B.B
20、.调整温度调整温度4. 4. 4. 4.分析条件继续优化分析条件继续优化分析条件继续优化分析条件继续优化A.A.降低异丙醇浓度降低异丙醇浓度分析条件优化流程图分析条件优化流程图 （4-C4-C）大赛璐手性分析方法筛选与优化 最新由异丙醇换为乙醇由异丙醇换为乙醇-选择性增大选择性增大Hex./IPA/AcOH=90/10/0.1IPA和和EtOH有时会使峰形和有时会使峰形和值发生明显变化值发生明显变化Column：CHIRALPAK ADTemp.：40, Flow rate：1.0ml/min. Sample：Flurbiprofen05101520253035mV01234567891011
21、12131415Minutes6.667.52 =1.2305101520253001234567891011121314157.589.64 =1.45mVMinutesHex./EtOH/AcOH=95/5/0.1大赛璐手性分析方法筛选与优化 最新由异丙醇换为乙醇由异丙醇换为乙醇由异丙醇换为乙醇由异丙醇换为乙醇-更好的选择性更好的选择性更好的选择性更好的选择性Column: AY-H (4.6X250mm)Temp: 35Flow:1.0 ml/minMobile phase:hexane/IPA/DEA(90/10/O.1)Column: AY-H (4.6X250mm)Temp: 35
22、Flow:1.0 ml/minMobile phase:hexane/EtOH/DEA(90/10/O.1)大赛璐手性分析方法筛选与优化 最新IA-H80I20DEA0.1-1.0mlmin-35IA-M100DEA0.1-1.0mlmin-35OZ-H，Hexane/IPA /TFA/DEA= 80/20/0.1/0.05（v/v/v)，1.0 ml/min 极性模式极性模式极性模式极性模式-意想不到的分离效果意想不到的分离效果意想不到的分离效果意想不到的分离效果OZ-H，MeOH/DEA=100/0.1（v/v)，0.8 ml/min 大赛璐手性分析方法筛选与优化 最新涂布型正相柱手性方法
23、开发流程涂布型正相柱手性方法开发流程1.1.1.1.根据样品性质判断是否需要往流动相中加添加物根据样品性质判断是否需要往流动相中加添加物根据样品性质判断是否需要往流动相中加添加物根据样品性质判断是否需要往流动相中加添加物2.2.2.2.调整正己烷调整正己烷调整正己烷调整正己烷/ / / /醇的比例，从而选择适当的保留时间醇的比例，从而选择适当的保留时间醇的比例，从而选择适当的保留时间醇的比例，从而选择适当的保留时间3.3.3.3.优化方法优化方法优化方法优化方法a.a.a.a.流动相的醇浓度流动相的醇浓度流动相的醇浓度流动相的醇浓度降低醇的浓度能改善分离度，但会延长分析时间降低醇的浓度能改善分
24、离度，但会延长分析时间降低醇的浓度能改善分离度，但会延长分析时间降低醇的浓度能改善分离度，但会延长分析时间b.b.b.b.色谱柱温度色谱柱温度色谱柱温度色谱柱温度降低柱温能增加降低柱温能增加降低柱温能增加降低柱温能增加值，但会使峰形变宽值，但会使峰形变宽值，但会使峰形变宽值，但会使峰形变宽c.c.c.c.流动相中醇的种类流动相中醇的种类流动相中醇的种类流动相中醇的种类1.1.1.1.改换醇的种类改换醇的种类改换醇的种类改换醇的种类( ( ( (IPAEtOHIPAEtOHIPAEtOHIPAEtOH) ) ) )，有时会使选择性发生一些变化有时会使选择性发生一些变化有时会使选择性发生一些变化有
25、时会使选择性发生一些变化大赛璐手性分析方法筛选与优化 最新化学键合型多糖手性柱：化学键合型多糖手性柱：手性分析方法的建立和优化手性分析方法的建立和优化大赛璐手性分析方法筛选与优化 最新涂敷型（溶剂限制）涂敷型（溶剂限制）涂敷型（溶剂限制）涂敷型（溶剂限制） 正相正相正相正相: : 正己烷正己烷正己烷正己烷, , 异丙醇异丙醇异丙醇异丙醇, , 乙醇乙醇乙醇乙醇反相反相反相反相: : 水水水水, , 乙腈乙腈乙腈乙腈, , 甲醇甲醇甲醇甲醇, , 乙醇乙醇乙醇乙醇, , 异丙醇异丙醇异丙醇异丙醇l l在广泛的流动相条件下具有很强的手性分离能力在广泛的流动相条件下具有很强的手性分离能力在广泛的流动
26、相条件下具有很强的手性分离能力在广泛的流动相条件下具有很强的手性分离能力l l色谱试验过程中，用于溶解样品的溶剂没有任何限制色谱试验过程中，用于溶解样品的溶剂没有任何限制色谱试验过程中，用于溶解样品的溶剂没有任何限制色谱试验过程中，用于溶解样品的溶剂没有任何限制l l在各种溶剂中柱性能异常稳定在各种溶剂中柱性能异常稳定在各种溶剂中柱性能异常稳定在各种溶剂中柱性能异常稳定 键合型（通用所有溶剂）键合型（通用所有溶剂）键合型（通用所有溶剂）键合型（通用所有溶剂）CHIRALPAK IA/IB/ICCHIRALPAK IA/IB/IC研发背景研发背景大赛璐手性分析方法筛选与优化 最新CHIRALPA
27、K IA, IB, ICADADODODNew!大赛璐手性分析方法筛选与优化 最新键合型固定相的特点键合型固定相的特点键合型固定相的特点键合型固定相的特点l 流动相组分没有任何限制流动相组分没有任何限制l 可以选用任何有机溶剂溶解样品可以选用任何有机溶剂溶解样品l 新的手性选择性新的手性选择性l 可以再生，寿命长可以再生，寿命长l 正相与反相可以在同一支柱子上实现正相与反相可以在同一支柱子上实现大赛璐手性分析方法筛选与优化 最新AD-Hvs.IAAD-Hvs.IA对于一些化合物，分离于一些化合物，分离度可能度可能优于涂布型于涂布型大赛璐手性分析方法筛选与优化 最新分离度优于涂布型实例Colum
28、n:AD-H(4.6X250mm)Temp:35Flow:1.0ml/minMobilephase:hexane/IPA/DEA(90/10/0.1)Column:IA(4.6X150mm)Temp:35Flow:1.0ml/minMobilephase:hexane/IPA/DEA(90/10/0.1)AD-Hvs.IAAD-Hvs.IA大赛璐手性分析方法筛选与优化 最新由于在流动相中改善了溶解度，柱效优于涂布型Column:AD-H(4.6X250mm)Temp:35Flow:1.0ml/minSolubility:0.5mg/mlMobilephase:hexane/IPA(70/30)
29、Column:IA(4.6X250mm)Temp:35Flow:1.0ml/minSolubility:7.0mg/mlMobilephase:MtBE/MeOH(80/20)AD-Hvs.IAAD-Hvs.IA大赛璐手性分析方法筛选与优化 最新OD-Hvs.IBOD-Hvs.IB更高的柱效，更好的峰形Chromatographic Condition: Hexane/IPA, 90/10 (v/v)大赛璐手性分析方法筛选与优化 最新通过溶剂多样性优化手性分离OD-Hvs.IBOD-Hvs.IB大赛璐手性分析方法筛选与优化 最新IB含水流动相非水与水相体系通用大赛璐手性分析方法筛选与优化 最新
30、不同流动相体系下手性分离不同流动相体系下手性分离methaqualonemethaqualone02468101250100150200250300a=2.81MtBE/EtOHMtBE/EtOH95:595:5010200.000.010.020.030.040.05n n-hexane/CH-hexane/CH2 2ClCl2 275:2575:25a=2.36a=1.96012345678910 11 12 13 1400.10.20.3toluene/toluene/n n- -hexane/EtOHhexane/EtOH70:25:570:25:5024681012140.00.20
31、.40.60.81.0a=1.79n n-hexane/CHCl-hexane/CHCl3 350:5050:50010200.000.010.020.030.04a=1.70n n-hexane/methyl-hexane/methylacetateacetate80:2080:2002468101214050100150200250a=1.65n n-hexane/2-PrOH-hexane/2-PrOH80:2080:20010200.00.10.2a=1.63n n-hexane/THF-hexane/THF85:1585:15a=1.33024681012140.00.20.40.6
32、0.81.0n n-hexane/acetone-hexane/acetone85:1585:15CHIRALPAKCHIRALPAKIAIA柱应用实例柱应用实例大赛璐手性分析方法筛选与优化 最新修复再生后修复再生后（可使用各种强极性溶剂）（可使用各种强极性溶剂）柱性能受损柱性能受损（ 如受强吸附杂质的影响）如受强吸附杂质的影响）样品样品新色谱柱新色谱柱IA,IB,IC柱的修复再生柱的修复再生大赛璐手性分析方法筛选与优化 最新IAIA,IB,IC,IB,IC柱的修复再生柱的修复再生IA柱的修复再生方法：第一：第一：EtOH 0.EtOH 0.4 4ml/min 30minml/min 30mi
33、n第二：第二：DMF 0.3ml/min 3hDMF 0.3ml/min 3h第三：第三：EtOH 0.3ml/min 50minEtOH 0.3ml/min 50min第四：第四：H/E=90/10H/E=90/10还不行，再用下面条件还不行，再用下面条件第一：第一：EtOH 0.EtOH 0.4 4ml/min 30minml/min 30min第二：第二：THF 0.5ml/min 2hTHF 0.5ml/min 2h第三：第三：EtOH 0.EtOH 0.4 4ml/min 30minml/min 30min第四：第四：DMF 0.3ml/min 3hDMF 0.3ml/min 3h第
34、五：第五：EtOH 0.3ml/min 50minEtOH 0.3ml/min 50min第六：第六：H/E=90/10H/E=90/10大赛璐手性分析方法筛选与优化 最新IAIAIAIA,IB,IC,IB,IC,IB,IC,IB,IC柱的修复再生柱的修复再生柱的修复再生柱的修复再生IB IC柱的修复再生方法：第一：第一：EtOAc EtOAc 1ml/min 1ml/min 30min30min，有添加，有添加剂的剂的2h, 2h, 室室温保存温保存2 2天天第二：第二：H/I=90/10 H/I=90/10 1ml/min 1h1ml/min 1h大赛璐手性分析方法筛选与优化 最新键合型固
35、定相筛选一般流程键合型固定相筛选一般流程l 选用比较典型的溶剂组合作为起始筛选流动相选用比较典型的溶剂组合作为起始筛选流动相 Hexane/IPA（EtOH） Hexane/THF(DCM, EA) MtBE/ MeOH (IPA,EtOH） MtBE/ THF(DCM, EA) ACN/ MeOH (IPA,EtOH）l 如果分析物的溶解度不好，优先选用溶解度好的有机溶剂作为流动相组分如果分析物的溶解度不好，优先选用溶解度好的有机溶剂作为流动相组分l 使用多元流动相优化分离使用多元流动相优化分离大赛璐手性分析方法筛选与优化 最新多糖反相手性柱：多糖反相手性柱：多糖反相手性柱：多糖反相手性柱：
36、手性分析方法的建立和优化手性分析方法的建立和优化大赛璐手性分析方法筛选与优化 最新RH系列反相色谱柱参数系列反相色谱柱参数流动相流动相流动相流动相耐压耐压耐压耐压(MPa)温度范围温度范围温度范围温度范围()pHpH范围范围范围范围OD-RH水溶液水溶液水溶液水溶液/ /有机溶剂有机溶剂有机溶剂有机溶剂*1=90/100/1001054027OJ-RHAS-RH540*229*2,3AD-RH*1 *1 *1 *1 有机溶液有机溶液有机溶液有机溶液：醇（甲醇，乙醇，异丙醇）或乙腈醇（甲醇，乙醇，异丙醇）或乙腈醇（甲醇，乙醇，异丙醇）或乙腈醇（甲醇，乙醇，异丙醇）或乙腈* * * *2 pH2
37、pH2 pH2 pH7 7 7 7使用时，温度在使用时，温度在使用时，温度在使用时，温度在5 5 5 525252525*3 pH*3 pH*3 pH*3 pH超过超过超过超过8 8 8 8时，使用硼酸缓冲液时，使用硼酸缓冲液时，使用硼酸缓冲液时，使用硼酸缓冲液新新产品：品： AY-RH / OZ-RH大赛璐手性分析方法筛选与优化 最新根据样品性质选择流动相根据样品性质选择流动相样品性质OD-RH、OJ-RHAD-RH、AS-RH中性水/乙腈酸性磷酸水溶液(pH2)/乙腈0.1M 磷酸缓冲液(pH2)/乙腈碱性0.1M KPF6 水溶液/乙腈0.1M NaPF6水溶液/乙腈20mM 硼酸缓冲液
38、(pH9)/乙腈20mM 磷酸缓冲液(pH8)/乙腈HPLC-MS: HPLC-MS: 流流流流动动相条件相条件相条件相条件1） 酸性流动相： 甲酸、乙酸2） 碱性流动相： 碳酸氢氨（醋酸铵，甲酸铵）大赛璐手性分析方法筛选与优化 最新RH RH RH RH 反相系列手性筛选一般流程反相系列手性筛选一般流程反相系列手性筛选一般流程反相系列手性筛选一般流程大赛璐手性分析方法筛选与优化 最新反相流动相的反相流动相的pH值对分离度的影响值对分离度的影响 (AS-RH )中性化合物Benzoin酸性化合物N-CBZ-Norvaline碱性化合物Ofloxacin ethyl ester水溶液水溶液/CH
39、3CN=60/40流速：1.0ml/min.水溶液/CH3CN=60/40流速：1.0ml/min.水溶液/CH3CN=80/20流速：0.5ml/min.051015mV02468101214Minutes7.168.77024681012mV0123456789 10Minutes2.250.01.02.03.04.0mV0 5 1015202530354045505560Minutes27.79水磷酸水溶液(pH2)硼酸缓冲液(pH9)051015mV02468101214Minutes7.118.7005101520mV0.02.04.06.08.0Minutes4.174.69020
40、406080mV0 5 1015202530354045505560Minutes4.004.484.77051015mV02468101214Minutes6.978.53010203040506070mV0123456789 10Minutes1.850.02.04.06.08.00 5 1015202530354045505560Minutes30.7436.78大赛璐手性分析方法筛选与优化 最新有机溶剂种类对分离的影响有机溶剂种类对分离的影响水水/乙腈乙腈=50/50水水/乙醇乙醇=35/65水水/甲醇甲醇=25/752-Methyl-1-tetralone2-Phenyl-2-but
41、anol 手性柱手性柱： CHIRALPAK AD-RH 、流速流速：0.5ml/min、温度、温度：25大赛璐手性分析方法筛选与优化 最新反相柱分析条件优化的总结反相柱分析条件优化的总结1.1.1.1.根据样品性质选择流动相根据样品性质选择流动相根据样品性质选择流动相根据样品性质选择流动相中性，酸性样品对中性，酸性样品对中性，酸性样品对中性，酸性样品对4 4 4 4种反相柱的流动相是一致的。种反相柱的流动相是一致的。种反相柱的流动相是一致的。种反相柱的流动相是一致的。 但是，碱性样品对但是，碱性样品对但是，碱性样品对但是，碱性样品对OD-RHOD-RHOD-RHOD-RH、 、 、 、OJ-
42、RHOJ-RHOJ-RHOJ-RH的流动相和的流动相和的流动相和的流动相和AD-RHAD-RHAD-RHAD-RH、 、 、 、AS-RHAS-RHAS-RHAS-RH的流动相是不同的的流动相是不同的的流动相是不同的的流动相是不同的。 。 。 。2.2.2.2.探索适当的保留时间和流动相组成探索适当的保留时间和流动相组成探索适当的保留时间和流动相组成探索适当的保留时间和流动相组成3.3.3.3.其它优化条件其它优化条件其它优化条件其它优化条件a.a.a.a.水溶液和有机溶液比例水溶液和有机溶液比例水溶液和有机溶液比例水溶液和有机溶液比例多数情况下降低有机溶液的浓度能改善分离，但会延长分析时间多
43、数情况下降低有机溶液的浓度能改善分离，但会延长分析时间多数情况下降低有机溶液的浓度能改善分离，但会延长分析时间多数情况下降低有机溶液的浓度能改善分离，但会延长分析时间。1.1.1.1.色谱柱温度色谱柱温度色谱柱温度色谱柱温度降低柱温能增加降低柱温能增加降低柱温能增加降低柱温能增加值，但会使峰形变宽值，但会使峰形变宽值，但会使峰形变宽值，但会使峰形变宽。 。 。 。 有机溶剂的种类有机溶剂的种类有机溶剂的种类有机溶剂的种类1.1.1.1.有机溶剂的种类不同，其洗脱强度也不同。有时其分离效果也发生一些变化有机溶剂的种类不同，其洗脱强度也不同。有时其分离效果也发生一些变化有机溶剂的种类不同，其洗脱强
44、度也不同。有时其分离效果也发生一些变化有机溶剂的种类不同，其洗脱强度也不同。有时其分离效果也发生一些变化大赛璐手性分析方法筛选与优化 最新手性分析方法开发：手性分析方法开发：手性分析方法开发：手性分析方法开发：高通量、快速筛选高通量、快速筛选大赛璐手性分析方法筛选与优化 最新手性色谱柱组合筛选手性色谱柱组合筛选手性色谱柱手性色谱柱手性色谱柱手性色谱柱组合组合组合组合CHIRALPAK AD-H CHIRALPAK AS-H CHIRALCEL OD-HCHIRALCEL OJ-HCHIRALPAK AY-HCHIRALCEL OZ-HCHIRALPAK IA CHIRALPAK IBCHIRA
45、LPAK IC手性色谱柱尺寸手性色谱柱尺寸手性色谱柱尺寸手性色谱柱尺寸： 0.46cmI.D.15cmL大赛璐手性分析方法筛选与优化 最新组合筛选设备组合筛选设备IPA大赛璐手性分析方法筛选与优化 最新泵泵紫外检测器紫外检测器色谱柱自动切换阀色谱柱自动切换阀流动相流动相2自动进样器自动进样器组合筛选设备示意图组合筛选设备示意图流动相流动相1溶剂切换阀溶剂切换阀旋光检测器旋光检测器大赛璐手性分析方法筛选与优化 最新串联旋光检测器的好处串联旋光检测器的好处 11.1.用用UVUV检测器只出现检测器只出现“峰峰”的时候的时候 应用旋光检测器可确认其分离状况应用旋光检测器可确认其分离状况大赛璐手性分析
46、方法筛选与优化 最新2.2.可确认洗脱顺序可确认洗脱顺序串联旋光检测器的好处串联旋光检测器的好处 2大赛璐手性分析方法筛选与优化 最新若筛选没得到理想的分析条件时若筛选没得到理想的分析条件时1.1.1.1.调整流动相中醇的比例调整流动相中醇的比例调整流动相中醇的比例调整流动相中醇的比例2.2.2.2.更换流动相种类更换流动相种类更换流动相种类更换流动相种类3.3.3.3.调整流速调整流速调整流速调整流速4.4.4.4.调整温度调整温度调整温度调整温度5.5.5.5.尝试其他的色谱柱尝试其他的色谱柱尝试其他的色谱柱尝试其他的色谱柱大赛璐手性分析方法筛选与优化 最新手性色谱柱使用：手性色谱柱使用：
47、注意事项与疑难解析注意事项与疑难解析大赛璐手性分析方法筛选与优化 最新Daicel大部分手性柱是涂敷型产品，在市场上具有独特性。大部分手性柱是涂敷型产品，在市场上具有独特性。若导入错误的溶剂若导入错误的溶剂(CH2Cl2、乙酸乙酯、甲苯等、乙酸乙酯、甲苯等)，柱子会马上被破坏，柱子会马上被破坏。当流动相或样品溶液导入错误的溶剂时，柱压剧增，分离突然变差当流动相或样品溶液导入错误的溶剂时，柱压剧增，分离突然变差。一旦错误地使用了溶剂，重新恢复柱子性能的可能性很低。一旦错误地使用了溶剂，重新恢复柱子性能的可能性很低。若您遇到此类分析故障，请对照出厂报告重新确认柱子的性能或与大若您遇到此类分析故障，
48、请对照出厂报告重新确认柱子的性能或与大赛璐联系赛璐联系常见使用故障常见使用故障-溶剂错误溶剂错误 1大赛璐手性分析方法筛选与优化 最新DaicelDaicel正相手性柱的流动相和样品溶液不能使用水溶液正相手性柱的流动相和样品溶液不能使用水溶液若不小心导入水，柱子不会彻底受损若不小心导入水，柱子不会彻底受损。 。只需要使用色谱级无水乙醇低流速将水置换出来只需要使用色谱级无水乙醇低流速将水置换出来。 。常见使用故障常见使用故障- -溶剂错误溶剂错误 2 2大赛璐手性分析方法筛选与优化 最新将手性柱接入液相色谱仪之前将手性柱接入液相色谱仪之前将手性柱接入液相色谱仪之前将手性柱接入液相色谱仪之前所有溶
49、剂入口所有溶剂入口泵泵与进样阀之间定量环进样阀清洗液进样阀与柱子之间柱子与检测器之间检测器使用前彻底清洗管路使用前彻底清洗管路1.用水将HPLC所有管路彻底清洗（去除管路的无机盐去除管路的无机盐去除管路的无机盐去除管路的无机盐）2.用异丙醇将HPLC所有管路彻底清洗 （去除水去除水去除水去除水）3.用流动相将HPLC所有管路彻底清洗（置换醇置换醇置换醇置换醇）。大赛璐手性分析方法筛选与优化 最新l流动相或样品溶液过滤不彻底，固体颗粒堵塞管路或柱头，会引起柱压过高。流动相或样品溶液过滤不彻底，固体颗粒堵塞管路或柱头，会引起柱压过高。l样品中成分在柱头析出或强烈吸附，会引起柱压升高。样品中成分在柱
50、头析出或强烈吸附，会引起柱压升高。l流速过快，会引起柱压过高，特别是当使用粘度高的溶剂，流速过快，会引起柱压过高，特别是当使用粘度高的溶剂， 如如IPA, EtOH，流速应控制在，流速应控制在0.1-0.3 ml/minl 每种柱子有特定的承压范围，请仔细参照相应的每种柱子有特定的承压范围，请仔细参照相应的色谱柱说明书色谱柱说明书。l 彻底过滤流动相及样品溶液。彻底过滤流动相及样品溶液。l 样品预处理样品预处理l 更换流动相时，或者刚把柱子刚接上仪器的时候，逐步增加流速更换流动相时，或者刚把柱子刚接上仪器的时候，逐步增加流速l 仪器设定保护柱压仪器设定保护柱压原因：原因：后果：后果：l 长期超
51、压会引起柱头塌陷，反压上升，柱效下降。长期超压会引起柱头塌陷，反压上升，柱效下降。解决方法：解决方法：压力压力大赛璐手性分析方法筛选与优化 最新残留物在普通流动相中可长时间地稳定保留用醇洗涤可除去大部分的碱性残留物用酸洗涤也可除去碱性残留物用碱洗涤可除去酸性残留物如何避免如何避免“残留效应残留效应”大赛璐手性分析方法筛选与优化 最新欢迎您访问！欢迎您访问！大赛璐手性分析方法筛选与优化 最新谢谢!上海总部上海总部上海总部上海总部地址: 上海市外高桥保税区希雅路69号16号楼5层 C部 (200131) 电话：021-5046-0086 传真：021-5046-2321邮箱：网址： 北京分室北京分室北京分室北京分室地址: 北京市昌平区生命科学园路29号中关村生命 科学园创新大厦C-座-001B室 （102206）电话：010-8071-3195 邮箱：网址： 大赛璐手性分析方法筛选与优化 最新
