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1、生殖辅助技术生殖辅助技术人体解剖学与组织胚胎学系1生育是人类的基本生理功能，是人类的一种本能。生育是人类的基本生理功能，是人类的一种本能。23一、男性生育能力明显下降一、男性生育能力明显下降 国家计划生育委员会科学技术研究所张国家计划生育委员会科学技术研究所张树成等人在论文中指出，男性精液质量随不树成等人在论文中指出，男性精液质量随不同年代呈明显降低，而中国男性精液质量也同年代呈明显降低，而中国男性精液质量也呈明显下降趋势。呈明显下降趋势。4 张树成等人得出了触目惊心的结论：男性精液质量明显下降。其中以精子数目男性精液质量明显下降。其中以精子数目的降低最为明显，降低的降低最为明显，降低40%以
2、上，精子活以上，精子活动率降低动率降低8.4%；精子正常形态降低了；精子正常形态降低了7.3%；精液量降低了；精液量降低了4.9%。5为什么男性的生育力竟下降得为什么男性的生育力竟下降得这么厉害？这么厉害？6张树成等人认为主要是张树成等人认为主要是环境因素所致，即环境环境因素所致，即环境对生育力的影响，男性对生育力的影响，男性比女性更敏感。比女性更敏感。 7生殖辅助技术：生殖辅助技术：o人工授精o体外授精与胚胎移植o显微授精技术o配子输卵管移植o供卵o供胚胎o种植前遗传学诊断8人工授精人工授精o定义：定义：由医师将精子注入到女性生殖道内，由医师将精子注入到女性生殖道内，包括阴道内、宫颈内、宫腔
3、内、输卵管内甚包括阴道内、宫颈内、宫腔内、输卵管内甚至卵泡内的精子注射。至卵泡内的精子注射。o分类：分类：o1、按精子来源：、按精子来源： 夫精人工授精（夫精人工授精（夫精人工授精（夫精人工授精（AIHAIHAIHAIH）：）：）：）：artificial insemination with artificial insemination with artificial insemination with artificial insemination with husband husband husband husband s sperms sperms sperms sperm 供精人工授
4、精（供精人工授精（供精人工授精（供精人工授精（AIDAIDAIDAID）：）：）：）：o2 2 2 2、按精子的注射部位：、按精子的注射部位：、按精子的注射部位：、按精子的注射部位：9人工授精的适应症人工授精的适应症o一、男方因素一、男方因素1.存在阻碍正常性交时精子进入阴道的解剖异存在阻碍正常性交时精子进入阴道的解剖异常因素：常因素：2.精神、神经因素：精神、神经因素：3.中度精液异常：中度精液异常：10o二、女方因素：二、女方因素：1.存在阻碍精子在女性生殖道运行的因素：存在阻碍精子在女性生殖道运行的因素：阴道与宫颈狭窄等阴道与宫颈狭窄等2.宫颈因素：如宫颈粘液宫颈因素：如宫颈粘液11人工
5、授精实施要素：人工授精实施要素：o足够数量和活力的正常形态精子足够数量和活力的正常形态精子o正常的排卵正常的排卵o至少有一条输卵管通畅并且功能正常至少有一条输卵管通畅并且功能正常12人工授精的方法：人工授精的方法：o一、女性的准备一、女性的准备1.自然周期人工授精自然周期人工授精：将精子在最接近排卵的：将精子在最接近排卵的时间段注入女性生殖道内（基础体温测量、时间段注入女性生殖道内（基础体温测量、B超检测、尿超检测、尿LH测试和宫颈粘液评分）测试和宫颈粘液评分）2.控制性诱导排卵控制性诱导排卵：FSH、hCG和黄体酮和黄体酮3.其他准备其他准备：阴道清洁度、盆腔检查和：阴道清洁度、盆腔检查和B
6、超、超、输卵管通水、输卵管造影等输卵管通水、输卵管造影等13o二、男性精子的准备二、男性精子的准备1.新鲜精液：新鲜精液：2.冻存精子的准备：冻存精子的准备：3.精子的洗涤精子的洗涤1415方法：方法：o早期的不清洗后穹隆注射法早期的不清洗后穹隆注射法o宫颈周围或宫颈管内人工授精：宫颈周围或宫颈管内人工授精：0.5-1ml宫颈管，其余在阴道前穹隆宫颈管，其余在阴道前穹隆o加用宫帽人工授精加用宫帽人工授精o宫腔内人工授精：常用、成功率较高宫腔内人工授精：常用、成功率较高16供精人工授精供精人工授精oAIDAID的适应症的适应症1.不可逆的无精子症，严重的少精症、弱精症和畸精症；2.男方因输精管结
7、扎后复通失败；3.射精障碍4.男方和（或）家族有不宜生育的严重遗传性疾病。5.对1-4,要解释同意后，行AID；17（一）女方条件（一）女方条件o年龄在生育期年龄在生育期o身体健康，完全能承受妊娠身体健康，完全能承受妊娠o卵巢功能正常和盆腔检查正常卵巢功能正常和盆腔检查正常o输卵管通畅输卵管通畅18（二）供精者条件（二）供精者条件o年龄、身高、五官等年龄、身高、五官等o无全身急慢性病无全身急慢性病o内外生殖器正常内外生殖器正常o无性传播性疾病无性传播性疾病o无各型肝炎无各型肝炎o本人和直系血亲无遗传病本人和直系血亲无遗传病oABO及及RH血型检查血型检查o精液检查精液检查19（三）供精者的筛选
8、程序（三）供精者的筛选程序 o1 1、 最初评估：最初评估：最初评估：最初评估： 供精者的年龄必须是在供精者的年龄必须是在供精者的年龄必须是在供精者的年龄必须是在22224545岁之间，能真岁之间，能真岁之间，能真岁之间，能真实提供本人及家族成员的一般病史和遗传病史，回实提供本人及家族成员的一般病史和遗传病史，回实提供本人及家族成员的一般病史和遗传病史，回实提供本人及家族成员的一般病史和遗传病史，回答医师提出的其它相关问题，按要求提供精液标本答医师提出的其它相关问题，按要求提供精液标本答医师提出的其它相关问题，按要求提供精液标本答医师提出的其它相关问题，按要求提供精液标本以供检查。精子库人员将
9、与供精者面谈。供精者不以供检查。精子库人员将与供精者面谈。供精者不以供检查。精子库人员将与供精者面谈。供精者不以供检查。精子库人员将与供精者面谈。供精者不应属于应属于应属于应属于AIDSAIDS的高危人群，没有性传播性疾病史，的高危人群，没有性传播性疾病史，的高危人群，没有性传播性疾病史，的高危人群，没有性传播性疾病史，没有全身性疾病和严重器质性疾病，无长期接触放没有全身性疾病和严重器质性疾病，无长期接触放没有全身性疾病和严重器质性疾病，无长期接触放没有全身性疾病和严重器质性疾病，无长期接触放射线和有毒物质，无吸毒、酗酒、同性恋等行为。射线和有毒物质，无吸毒、酗酒、同性恋等行为。射线和有毒物质
10、，无吸毒、酗酒、同性恋等行为。射线和有毒物质，无吸毒、酗酒、同性恋等行为。oo2 2、 精液分析：精液分析：精液分析：精液分析： 每次精液标本都必须用世界卫生组织规范方法每次精液标本都必须用世界卫生组织规范方法每次精液标本都必须用世界卫生组织规范方法每次精液标本都必须用世界卫生组织规范方法进行分析，包括精子密度、活动率、形态学等指标，进行分析，包括精子密度、活动率、形态学等指标，进行分析，包括精子密度、活动率、形态学等指标，进行分析，包括精子密度、活动率、形态学等指标，这些标本在冷冻前后均要进行分析比较，解冻后的这些标本在冷冻前后均要进行分析比较，解冻后的这些标本在冷冻前后均要进行分析比较，解
11、冻后的这些标本在冷冻前后均要进行分析比较，解冻后的精子活动率要达到精子活动率要达到精子活动率要达到精子活动率要达到40%40%以上。以上。以上。以上。 20oo3 3、 感染性疾病检测：感染性疾病检测：感染性疾病检测：感染性疾病检测： 所有的供精者都要进行血清所有的供精者都要进行血清所有的供精者都要进行血清所有的供精者都要进行血清HIVHIV抗体、乙肝两对抗体、乙肝两对抗体、乙肝两对抗体、乙肝两对半、丙肝抗体、梅毒、巨细胞病毒抗体等检测。对精液半、丙肝抗体、梅毒、巨细胞病毒抗体等检测。对精液半、丙肝抗体、梅毒、巨细胞病毒抗体等检测。对精液半、丙肝抗体、梅毒、巨细胞病毒抗体等检测。对精液进行淋病
12、、支原体、衣原体检查和细菌培养。进行淋病、支原体、衣原体检查和细菌培养。进行淋病、支原体、衣原体检查和细菌培养。进行淋病、支原体、衣原体检查和细菌培养。oo4 4、 医学和遗传评价：医学和遗传评价：医学和遗传评价：医学和遗传评价： 每个供精者都将进行一次体检，进行血型以及每个供精者都将进行一次体检，进行血型以及每个供精者都将进行一次体检，进行血型以及每个供精者都将进行一次体检，进行血型以及RHRH检测，还要进行血细胞染色体检查。他们的医疗和遗传检测，还要进行血细胞染色体检查。他们的医疗和遗传检测，还要进行血细胞染色体检查。他们的医疗和遗传检测，还要进行血细胞染色体检查。他们的医疗和遗传史将被遗
13、传医生进行评价，广东省计划生育专科医院人史将被遗传医生进行评价，广东省计划生育专科医院人史将被遗传医生进行评价，广东省计划生育专科医院人史将被遗传医生进行评价，广东省计划生育专科医院人类精子库还根据广东省遗传病的发病特点，增加对供精类精子库还根据广东省遗传病的发病特点，增加对供精类精子库还根据广东省遗传病的发病特点，增加对供精类精子库还根据广东省遗传病的发病特点，增加对供精者进行地中海贫血和葡萄糖者进行地中海贫血和葡萄糖者进行地中海贫血和葡萄糖者进行地中海贫血和葡萄糖6 6磷酸脱氢酶缺乏症的磷酸脱氢酶缺乏症的磷酸脱氢酶缺乏症的磷酸脱氢酶缺乏症的筛查。必要时还进行供精者的心理学评估。筛查。必要时
14、还进行供精者的心理学评估。筛查。必要时还进行供精者的心理学评估。筛查。必要时还进行供精者的心理学评估。oo5 5、 精液冻融复苏检查：精液冻融复苏检查：精液冻融复苏检查：精液冻融复苏检查： 成为供精者后，每次精液标本在冷冻前后均要进行成为供精者后，每次精液标本在冷冻前后均要进行成为供精者后，每次精液标本在冷冻前后均要进行成为供精者后，每次精液标本在冷冻前后均要进行评价，所有没有达到供精最低标准的标本都将被弃去。评价，所有没有达到供精最低标准的标本都将被弃去。评价，所有没有达到供精最低标准的标本都将被弃去。评价，所有没有达到供精最低标准的标本都将被弃去。所有的标本都要存放足够的时间（所有的标本都
15、要存放足够的时间（所有的标本都要存放足够的时间（所有的标本都要存放足够的时间（180180天的检疫期），天的检疫期），天的检疫期），天的检疫期），供精者要重复作感染性疾病的检测。供精者要重复作感染性疾病的检测。供精者要重复作感染性疾病的检测。供精者要重复作感染性疾病的检测。 21（四）实验室检查（四）实验室检查o1 1、染色体检查：、染色体检查：、染色体检查：、染色体检查：供精者必须染色体常规核型分析正供精者必须染色体常规核型分析正供精者必须染色体常规核型分析正供精者必须染色体常规核型分析正常。常。常。常。o2 2、传染性疾病的检查、传染性疾病的检查、传染性疾病的检查、传染性疾病的检查供精者乙
16、肝抗原抗体及丙肝抗体检查正常。供精者乙肝抗原抗体及丙肝抗体检查正常。供精者乙肝抗原抗体及丙肝抗体检查正常。供精者乙肝抗原抗体及丙肝抗体检查正常。供精者梅毒、淋病、供精者梅毒、淋病、供精者梅毒、淋病、供精者梅毒、淋病、 艾滋病检查阴性。艾滋病检查阴性。艾滋病检查阴性。艾滋病检查阴性。供精者衣原体、支原体、巨细胞病毒检查阴性。供精者衣原体、支原体、巨细胞病毒检查阴性。供精者衣原体、支原体、巨细胞病毒检查阴性。供精者衣原体、支原体、巨细胞病毒检查阴性。o3 3、精液常规分析及供精的质量要求、精液常规分析及供精的质量要求、精液常规分析及供精的质量要求、精液常规分析及供精的质量要求对供精者精液要做常规检
17、查。取精前要禁欲一对供精者精液要做常规检查。取精前要禁欲一对供精者精液要做常规检查。取精前要禁欲一对供精者精液要做常规检查。取精前要禁欲一周。精液质量要求高于世界卫生组织的标准：精液周。精液质量要求高于世界卫生组织的标准：精液周。精液质量要求高于世界卫生组织的标准：精液周。精液质量要求高于世界卫生组织的标准：精液液化时间液化时间液化时间液化时间10-6010-60分钟，容积为分钟，容积为分钟，容积为分钟，容积为2-62-6毫升，密度大于毫升，密度大于毫升，密度大于毫升，密度大于60x1060x106 6/ /毫升，成活率大于毫升，成活率大于毫升，成活率大于毫升，成活率大于60%60%，畸形率不
18、大于，畸形率不大于，畸形率不大于，畸形率不大于30%30%。精液进行常规细菌培养，以排除致病菌感染。精液进行常规细菌培养，以排除致病菌感染。精液进行常规细菌培养，以排除致病菌感染。精液进行常规细菌培养，以排除致病菌感染。o4 4、ABOABO血型及血型及血型及血型及RhRh血型血型血型血型 22（五）供精者知情同意书（五）供精者知情同意书 o1、提供精液的目的是为了治疗不育症，如同献血、提供精液的目的是为了治疗不育症，如同献血一样，是一种人道主义行为；一样，是一种人道主义行为； o2、提供精液应完全出于自愿，是无偿的，只能获、提供精液应完全出于自愿，是无偿的，只能获得误工、误餐及交通补贴等，不
19、能以经济利益而得误工、误餐及交通补贴等，不能以经济利益而为之；为之；o3、精液只能提供给国家卫生部批准的人类精子库，、精液只能提供给国家卫生部批准的人类精子库，而不能提供给其他单位或个人；而不能提供给其他单位或个人；o4、在提供精液前要经过严格的健康检查，供精者、在提供精液前要经过严格的健康检查，供精者要如实提供病史配合体格检查，提供血液、精液要如实提供病史配合体格检查，提供血液、精液等标本进行检测。健康检查不合格的不能作为供等标本进行检测。健康检查不合格的不能作为供精者，健康检查体格者与人类精子库签订供精精者，健康检查体格者与人类精子库签订供精协议书后，才能作为供精者；协议书后，才能作为供精
20、者；23o5、供精者的所有资料都由人类精子库专人保密、供精者的所有资料都由人类精子库专人保密保存，不会向受精者泄露，更不会向其他人泄保存，不会向受精者泄露，更不会向其他人泄露；露；o6、供精者至少提供、供精者至少提供30份精液标本；份精液标本；o7、供精者的精液，如果已有、供精者的精液，如果已有5位受精者受孕，位受精者受孕，该供精者的精液标本全部废除，今后亦不再作该供精者的精液标本全部废除，今后亦不再作为供精者；为供精者；o8、供精者不能追问受精者及出生后代的任何情、供精者不能追问受精者及出生后代的任何情况，对出生后代没有任何权利，也不承担任何况，对出生后代没有任何权利，也不承担任何义务义务。
21、24（六）捐精流程（六）捐精流程 o1.首先进行捐精咨询。首先进行捐精咨询。o2.引导排精，作精液检查。引导排精，作精液检查。o3.合格后抽血化验，约合格后抽血化验，约710天出报告。天出报告。 4.精液与化验正常者开始捐精，捐精前签订精液与化验正常者开始捐精，捐精前签订知情同意书。知情同意书。o5.每每35天前来捐精一次，每次均给予相应天前来捐精一次，每次均给予相应的交通、营养等补贴。的交通、营养等补贴。o6.六个月后再次复查，给予交通、营养等补六个月后再次复查，给予交通、营养等补贴。贴。 25（七）（七）AIDAID方法方法o女方准备：检查正常女方准备：检查正常o有关文件的签署有关文件的签
22、署o精液准备精液准备o授精方法：授精方法：1ml（阴道部宫颈处或宫颈管内）（阴道部宫颈处或宫颈管内）o随访随访26体外授精和胚胎移植体外授精和胚胎移植（in vitro fertilization and embryo transfer）o原理：将女方卵巢内的成熟卵母细胞取出，原理：将女方卵巢内的成熟卵母细胞取出，在体外与来自配偶的精子共同培养，发生授在体外与来自配偶的精子共同培养，发生授精过程。受精卵发育到胚胎阶段后，再将其精过程。受精卵发育到胚胎阶段后，再将其种植到子宫腔中继续发育生长成胎儿。种植到子宫腔中继续发育生长成胎儿。27（一）适应症（一）适应症o女方各种因素导致的配子运输障女方各
23、种因素导致的配子运输障碍碍o子宫内膜异位症子宫内膜异位症o男方因素：少、弱、畸精症等男方因素：少、弱、畸精症等o原因不明性不孕症原因不明性不孕症o顽固性多囊卵巢综合征顽固性多囊卵巢综合征281 1、控制性超排卵、控制性超排卵 在在实实施施IVF-ET手手术术中中，利利用用促促排排卵卵药药物物来来增增强强与与改改善善现现存存卵卵巢巢功功能能，企企图图达达到到不不受受自自然然周周期期所所限限制制，获获取取多多个个健健康康卵卵子子提提供供受受精精后后胚胚胎胎移移植植并并尽尽可可能能使使黄黄体体与与内内膜膜功功能能同同时能对妊娠发生与妊娠维持想适应。时能对妊娠发生与妊娠维持想适应。（二）基本步骤（二）
24、基本步骤293031322、取卵、取卵 在阴道在阴道B超引导下用穿刺针抽取卵泡。超引导下用穿刺针抽取卵泡。3、找卵、找卵 在在显显微微镜镜下下将将抽抽取取的的卵卵泡泡液液置置于于器器皿皿中中迅速寻找卵冠丘复合体（迅速寻找卵冠丘复合体（OCCCS）。）。3334354、受精（精液处理同人工授精）、受精（精液处理同人工授精） 卵卵冠冠丘丘复复合合体体经经孵孵育育46h后后加加入入适适当当数数量量的获能精子进行授精。的获能精子进行授精。5、观察、观察 16h后后剥剥除除颗颗粒粒细细胞胞，镜镜下下观观察察见见两两原原核核者者为为受受精精。继继续续培培养养3642小小时时观观察察胚胚胎胎分分裂裂到到48
25、细细胞胞可可考考虑虑行行胚胚胎胎移移植植。需需要要者者也也可培养到第可培养到第56天，做囊胚移植。天，做囊胚移植。365、种植、种植 将将胚胚胎胎吸吸入入移移植植管管中中，经经宫宫颈颈管管将将胚胚胎胎送送入宫腔卧床入宫腔卧床13h。6、黄体支持、黄体支持 移移植植后后注注射射黄黄体体酮酮，14天天后后行行血血-hCG测测定确定是否妊娠。定确定是否妊娠。37IVF383940oo胚胎的宫内移植胚胎的宫内移植胚胎的宫内移植胚胎的宫内移植1.1.移植时间：体外受精移植时间：体外受精移植时间：体外受精移植时间：体外受精后的后的后的后的42-45h42-45h。现多。现多。现多。现多在体外受精后在体外受
26、精后在体外受精后在体外受精后3 3天，天，天，天，有时培养到有时培养到有时培养到有时培养到5 5天至囊天至囊天至囊天至囊胚。胚。胚。胚。2.2.移植方法：检查是否移植方法：检查是否移植方法：检查是否移植方法：检查是否移植进去。移植进去。移植进去。移植进去。4142代孕母亲代孕母亲（卫生部暂禁）（卫生部暂禁）o先天性子宫缺如；先天性子宫缺如；o因病行子宫切除术；因病行子宫切除术；o女方有妊娠或分娩禁忌症；女方有妊娠或分娩禁忌症；43胚胎冷冻胚胎冷冻1983年人类第一次冷冻胚胎成功年人类第一次冷冻胚胎成功适应症适应症oIVF或或ICSI治疗中的多余胚胎；治疗中的多余胚胎；o胚胎移植发生困难；胚胎移
27、植发生困难；o胚胎种植前诊断等待结果；胚胎种植前诊断等待结果；o人工赠卵等待受者子宫内膜同步；人工赠卵等待受者子宫内膜同步；o建立胚胎库；建立胚胎库；44显微操作技术显微操作技术o显微受精技术：透明带部分切割、透明带下显微受精技术：透明带部分切割、透明带下受精法及单精子卵胞浆显微注射受精法及单精子卵胞浆显微注射o极体与卵裂球活检极体与卵裂球活检o卵浆置换、细胞核移植卵浆置换、细胞核移植o辅助孵出辅助孵出o嵌合体技术嵌合体技术4546机械法机械法PZD47显显微微操操作作辅辅助助受受精精48ICSIICSI受精的生物学特点：受精的生物学特点：o正常受精：产生顶体反应的精子与卵膜正常受精：产生顶体
28、反应的精子与卵膜 的的融合，卵子激活以及女性、男性原核形成。融合，卵子激活以及女性、男性原核形成。oICSI：注射时精子的顶体状态不明，而：注射时精子的顶体状态不明，而 卵与精子质膜的融合也不存在。卵与精子质膜的融合也不存在。单精子卵浆内注射单精子卵浆内注射49o适应症适应症1.严重少精症严重少精症2.弱畸精症弱畸精症3.少弱畸精症少弱畸精症4.无精症（阻塞性及非阻塞性）无精症（阻塞性及非阻塞性）5.以往以往IVF时卵母细胞均不受精或受精率低下时卵母细胞均不受精或受精率低下6.其他：其他：50ICSIICSI的禁忌症的禁忌症o染色体异常染色体异常o严重先天畸形严重先天畸形51ICSI ICSI
29、 的技术操作的技术操作精子来源及处理精子来源及处理o手淫法取精。手淫法取精。o附睾取精附睾取精:适用于阻塞性无精症。适用于阻塞性无精症。o近期有人用经皮精子抽吸法。近期有人用经皮精子抽吸法。52PESA法附睾取精53MESAMESA及附睾精子及附睾精子54o 睾丸取精：主要适用于非阻塞性无精症，切取睾丸取精：主要适用于非阻塞性无精症，切取一小块睾丸组织的一小块睾丸组织的 方法获取精子或精子细胞方法获取精子或精子细胞（开放式活检）。也可用细针组织抽吸睾丸活（开放式活检）。也可用细针组织抽吸睾丸活检法。检法。55活检枪及抽吸法睾丸取精活检枪及抽吸法睾丸取精56卵子的来源与处理卵子的来源与处理o卵子
30、一般在促超排卵后卵子一般在促超排卵后,经阴道经阴道B超介导超介导,用用16G或或17G穿刺针经阴道获取。穿刺针经阴道获取。o取卵后取卵后4小时，进行去卵丘结构处理。小时，进行去卵丘结构处理。57o设备；设备；o显微操作皿的准备；显微操作皿的准备；o显微注射；显微注射；o精子制动与获取；精子制动与获取；o固定卵子与注射；固定卵子与注射；显微注射显微注射58设设 备备5960ICSI示意图示意图61ICSI操作过程操作过程62ICSI过程(A)63ICSI过程(B)64o注射注射15-18小时后，检查是否受精小时后，检查是否受精（ICSI 后精卵结合过程一般较正常为快，后精卵结合过程一般较正常为快
31、，6小时内小时内33%可出现原核，可出现原核，8-20小时小时89%-91% 出现原核）。出现原核）。o受精卵继续培养受精卵继续培养24小时，观察有无卵裂小时，观察有无卵裂,然后经阴道移植然后经阴道移植3-4个质量优良的胚胎。个质量优良的胚胎。o剩余胚胎冷冻保存。剩余胚胎冷冻保存。656667ICSI妊娠的后代随访妊娠的后代随访对对ICSI安全性的忧虑：安全性的忧虑：FFICSIICSI操作对卵子是具创伤性的；操作对卵子是具创伤性的；操作对卵子是具创伤性的；操作对卵子是具创伤性的；FFICSIICSI在全面的动物实验之前就广泛应用于人类；在全面的动物实验之前就广泛应用于人类；在全面的动物实验之
32、前就广泛应用于人类；在全面的动物实验之前就广泛应用于人类；FF选用的精子原是属于被自然淘汰的；选用的精子原是属于被自然淘汰的；选用的精子原是属于被自然淘汰的；选用的精子原是属于被自然淘汰的；FF睾丸采集的精子可能未发育成熟，基因印迹尚未睾丸采集的精子可能未发育成熟，基因印迹尚未睾丸采集的精子可能未发育成熟，基因印迹尚未睾丸采集的精子可能未发育成熟，基因印迹尚未发发发发 育完成；育完成；育完成；育完成；FF少弱及无精子的缺陷是否会殃及后代。少弱及无精子的缺陷是否会殃及后代。少弱及无精子的缺陷是否会殃及后代。少弱及无精子的缺陷是否会殃及后代。68辅助辅助“破壳破壳”69辅助孵出辅助孵出(AH)(A
33、H)8 8细胞期细胞期细胞期细胞期AHAH晚期囊胚晚期囊胚晚期囊胚晚期囊胚AHAH7071种植前遗传学诊断种植前遗传学诊断721. PGD的指征的指征: o不孕夫妇中女方年龄较大不孕夫妇中女方年龄较大(如如35岁岁, 也也有有 人认为年龄更大者人认为年龄更大者)；o不孕夫妇患不孕夫妇患X-伴性遗传病或为伴性遗传病或为X-伴性遗伴性遗 传病的携带者，有传病的携带者，有X-伴性遗传病家伴性遗传病家 族史族史;o胚胎质量差，反复胚胎质量差，反复IVF失败；失败； o胚胎分裂过快；胚胎分裂过快；o严重男性因素不育；严重男性因素不育；73o夫妇中任何一方或双方有染色体核型异常夫妇中任何一方或双方有染色体
34、核型异常(数目及结构异常数目及结构异常)； o习惯性流产患者；习惯性流产患者；o不孕夫妇中一方或双方患有已明确为基因不孕夫妇中一方或双方患有已明确为基因突变所致疾病突变所致疾病(单基因遗传病单基因遗传病)，或为携带，或为携带者，或有家族史者，如染色体显性遗者，或有家族史者，如染色体显性遗 传病；传病；o染色体微缺失综合征；染色体微缺失综合征；o与精子发生相关的染色体微缺失。与精子发生相关的染色体微缺失。 742. PGD的方法的方法o取材取材: 内径为内径为540m的活检针。的活检针。o极体、极体、2-10细胞细胞(或更多或更多)胚胎的卵裂球细胚胎的卵裂球细胞、胚囊的壁滋养外胚层细胞。胞、胚囊
35、的壁滋养外胚层细胞。75取卵裂球过程取卵裂球过程76卵裂球活检卵裂球活检7778o聚合酶链反应聚合酶链反应(PCR)：n n单细胞单细胞单细胞单细胞PCRPCR、巢式、巢式、巢式、巢式PCRPCR、半巢式、半巢式、半巢式、半巢式PCRPCR，结合，结合，结合，结合 (linkage)PCR(linkage)PCR，荧光，荧光，荧光，荧光PCRPCR等。等。等。等。oPCR的扩增成功率在的扩增成功率在90%以上，个别以上，个别71%，极体，极体66.1%左右。左右。oPCR的优点：需要样本量少，快速。的优点：需要样本量少，快速。7980o荧光原位杂交荧光原位杂交 (Fluorescence in
36、 situ hybridization ， FISH)n n固定，特异探针固定，特异探针固定，特异探针固定，特异探针( (已标上荧光素已标上荧光素已标上荧光素已标上荧光素) )去杂交标记物，荧光去杂交标记物，荧光去杂交标记物，荧光去杂交标记物，荧光显微镜下观察有无发出不同颜色荧光的亮点及数目以显微镜下观察有无发出不同颜色荧光的亮点及数目以显微镜下观察有无发出不同颜色荧光的亮点及数目以显微镜下观察有无发出不同颜色荧光的亮点及数目以了解该极体了解该极体了解该极体了解该极体/ / 细胞是否正常。细胞是否正常。细胞是否正常。细胞是否正常。n n人类人类人类人类2222种常染色体及种常染色体及种常染色体
37、及种常染色体及XX，Y Y染色体的探针均已商品化染色体的探针均已商品化染色体的探针均已商品化染色体的探针均已商品化n n针对许多致病基因，基因突变位点的探针也已商品化。针对许多致病基因，基因突变位点的探针也已商品化。针对许多致病基因，基因突变位点的探针也已商品化。针对许多致病基因，基因突变位点的探针也已商品化。n n自行制备针对某一患者的特异探针。自行制备针对某一患者的特异探针。自行制备针对某一患者的特异探针。自行制备针对某一患者的特异探针。n n一次最多可杂交一次最多可杂交一次最多可杂交一次最多可杂交5-75-7种探针种探针种探针种探针( (不同颜色不同颜色不同颜色不同颜色) )。n n重复
38、重复重复重复FISHFISH的方法，的方法，的方法，的方法，n n常检测常检测常检测常检测X,Y,1,5,7,8,11,13,16,18,21,22X,Y,1,5,7,8,11,13,16,18,21,22号等较常号等较常号等较常号等较常发生异常的染色体。发生异常的染色体。发生异常的染色体。发生异常的染色体。81824. PGD发展评估及展望发展评估及展望oPGD产生之前的遗传性疾病的诊断、问产生之前的遗传性疾病的诊断、问 题；题；oPGD优势：优势：n n可以避免终止妊娠的痛苦和道德上的问题。可以避免终止妊娠的痛苦和道德上的问题。可以避免终止妊娠的痛苦和道德上的问题。可以避免终止妊娠的痛苦和
39、道德上的问题。n n提高了在高危夫妇中筛选出正常胚胎的效率。提高了在高危夫妇中筛选出正常胚胎的效率。提高了在高危夫妇中筛选出正常胚胎的效率。提高了在高危夫妇中筛选出正常胚胎的效率。累积妊娠率优于自然周期。累积妊娠率优于自然周期。累积妊娠率优于自然周期。累积妊娠率优于自然周期。n n目前结果：不影响种植前胚胎的发育；提高目前结果：不影响种植前胚胎的发育；提高目前结果：不影响种植前胚胎的发育；提高目前结果：不影响种植前胚胎的发育；提高种植率，降低流产率；种植率，降低流产率；种植率，降低流产率；种植率，降低流产率；PGDPGD后的产科结果与后的产科结果与后的产科结果与后的产科结果与常规常规常规常规I
40、VFIVF无明显区别。无明显区别。无明显区别。无明显区别。83oPGD发展相对缓慢的原因，与发展相对缓慢的原因，与ICSI比较比较n nPCRPCR、FISHFISH等方法的局限，嵌合体诊断困等方法的局限，嵌合体诊断困等方法的局限，嵌合体诊断困等方法的局限，嵌合体诊断困 难，早期胚胎细胞数量减少，极体难，早期胚胎细胞数量减少，极体难，早期胚胎细胞数量减少，极体难，早期胚胎细胞数量减少，极体PGDPGD的局的局的局的局限。限。限。限。n n大众对大众对大众对大众对PGDPGD的看法与接受程度。的看法与接受程度。的看法与接受程度。的看法与接受程度。n n相应的法律、法规。相应的法律、法规。相应的法
41、律、法规。相应的法律、法规。oPGD发展形势喜人。发展形势喜人。oPGD与围产诊断的互补和相辅相成。与围产诊断的互补和相辅相成。84卵浆置换卵浆置换8586辅助生育技术的发展方向辅助生育技术的发展方向o提高妊娠率和活产率，帮助不孕夫妇获得孩提高妊娠率和活产率，帮助不孕夫妇获得孩子；子；o实现真正的生育调控和计划生育；实现真正的生育调控和计划生育；o研究配子和胚胎发生发育的调控机制，发现研究配子和胚胎发生发育的调控机制，发现人类生殖的奥秘；人类生殖的奥秘；o研究辅助生育技术中的伦理问题，制定相应研究辅助生育技术中的伦理问题，制定相应的法规和法律；的法规和法律；o研究人类克隆问题。研究人类克隆问题。87
