第三章 实验动物微生物学

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1、第三章第三章 实验动物微生物学和实验动物微生物学和寄生虫学及其质量控制寄生虫学及其质量控制上海交通大学医学院实验动物科学部上海交通大学医学院实验动物科学部姚一康姚一康第二节第二节 实验动物微生物学实验动物微生物学 和寄生虫学等级分类和寄生虫学等级分类第三节第三节 合格动物群中常见合格动物群中常见 微生物和寄生虫污染微生物和寄生虫污染 * *第五节第五节 实验动物微生物学实验动物微生物学和寄生虫学质量检测和寄生虫学质量检测第第一一节节 实验动物传染病流行实验动物传染病流行的基本环节及卫生防疫的基本环节及卫生防疫第一节第一节 实验动物传染病流行的实验动物传染病流行的基本环节基本环节及卫生防疫及卫生

2、防疫 实验动物的体表、粘膜实验动物的体表、粘膜和消化道内容物中微生物和消化道内容物中微生物共生微生物丛共生微生物丛共生微生物丛共生微生物丛病原体病原体病原体病原体条件致病条件致病条件致病条件致病烈性传染病烈性传染病烈性传染病烈性传染病对宿主有益对宿主有益对宿主有益对宿主有益对动物和实验对动物和实验对动物和实验对动物和实验产生不良影响产生不良影响产生不良影响产生不良影响实验动物群实验动物群实验动物群实验动物群全部毁灭全部毁灭全部毁灭全部毁灭影响人类健康影响人类健康影响人类健康影响人类健康Page 5传染源传染源传播途径传播途径易感动物易感动物传染病流行的基本环节传染病流行的基本环节Page 6一

3、、一、传染源传染源（1）人源性）人源性（2）动物源性物源性引起传染的条件引起传染的条件（1）要有病原性和一定的毒力）要有病原性和一定的毒力（2）侵入体内的病原体要达到一定的数量）侵入体内的病原体要达到一定的数量 （3） 病原体要有适当的侵入病原体要有适当的侵入门户Page 7二、二、传播途径传播途径 （1）直接传染直接传染：健康：健康动物与患病物与患病动物（包括携物（包括携带病原体病原体动物）直接接触而感染。如狂犬病毒、猴物）直接接触而感染。如狂犬病毒、猴B病病毒、艾滋病病毒等。毒、艾滋病病毒等。 水平水平传播：播：实验动物群体中互相的物群体中互相的传播。播。传播播途径包括消化道、呼吸道或皮肤

4、粘膜途径包括消化道、呼吸道或皮肤粘膜创伤等。如沙等。如沙门氏菌常氏菌常经消化道感染；仙台病毒常消化道感染；仙台病毒常经呼吸道；布氏杆呼吸道；布氏杆菌病常由配种直接感染等。菌病常由配种直接感染等。 垂直垂直传播：由母体通播：由母体通过胎胎盘将病原体将病原体传给胎儿，胎儿，例如支原体、例如支原体、细小病毒等。小病毒等。Page 8（2）间接传播间接传播间接传播间接传播非生物性非生物性传播：播：a、经空气空气飞沫、沫、尘埃埃传播；播；b、以、以饲料、料、垫料料传播；播；c、经饮水和水和饮水用具水用具传播；播；d、经笼器具器具传播。播。生物性生物性传播：播：a、节肢肢动物：物：苍蝇、蚊子、蚊子、蟑螂、

5、蚤、虱、蜱、螂、蚤、虱、蜱、螨等。等。 b、野生、野生动物：物：野生野生啮齿类动物物，常携，常携带各种病原体，例如携各种病原体，例如携带流行性出血流行性出血热病毒的野鼠病毒的野鼠污染染实验动物的物的垫料、料、饲料。料。c、实验动物：从外部物：从外部购入的入的实验动物，未物，未经严格格检疫和隔离。疫和隔离。d、操作人、操作人员不注意不注意卫生防疫生防疫传染病原体；有些人染病原体；有些人兽共患病，也共患病，也可可经人人传播播给实验动物，例如物，例如结核、布氏杆菌病等。核、布氏杆菌病等。Page 9切断传播途径切断传播途径是控制是控制传染病的传染病的主要措施主要措施。Page 10三三、易感动物易感

6、动物与下列因素有关与下列因素有关1）种）种类（品系、品种）（品系、品种） 2）年）年龄 3）营养状况养状况 4）机体的抵抗力）机体的抵抗力5）机体防御器官状况）机体防御器官状况Page 11 传染源、传播途径和易感动物传染源、传播途径和易感动物是传染病传播的三个是传染病传播的三个基本环节，缺少任何一个环节，新的传染病就不可能基本环节，缺少任何一个环节，新的传染病就不可能发生，也不可能造成传染病在实验动物中的流行。发生，也不可能造成传染病在实验动物中的流行。而而当传染病流行已经形成时，切断任何一个环节，流行当传染病流行已经形成时，切断任何一个环节，流行即告终止即告终止。传染源传染源传播途径传播途

7、径易感动物易感动物Page 12 疫苗接种和疫苗接种和药物治物治疗是是预防防传染病的有效手段。染病的有效手段。 但是实验动物一般不采取疫苗接种和药物治疗，主要由但是实验动物一般不采取疫苗接种和药物治疗，主要由于实验动物的特殊性于实验动物的特殊性： 1、应用疫苗或治用疫苗或治疗制制剂可能干可能干扰实验结果。果。 2、经过治治疗或免疫的或免疫的动物，外表健康，但可能物，外表健康，但可能 是是带菌或菌或带毒者，可能成毒者，可能成为潜在的潜在的传染源。染源。 3、对小型小型实验动物，治物，治疗措施可能在措施可能在经济上不适宜。上不适宜。Page 13四、四、实验动物卫生防疫实验动物卫生防疫主要包括以下

8、几个方面的内容主要包括以下几个方面的内容： 1 1、平时的预防措施平时的预防措施 2 2、发生疫病时的扑灭措施、发生疫病时的扑灭措施 3 3、消毒措施消毒措施 4 4、隔离措施、隔离措施Page 14消毒消毒灭菌主要方法菌主要方法物理性物理性灭菌消毒菌消毒（1）高高压蒸汽蒸汽灭菌菌：饲料、料、垫料、器具等消毒。料、器具等消毒。 预真空蒸汽：真空蒸汽：131 ，4； 一般蒸汽一般蒸汽灭菌：菌：121 ，20-25。（2）高）高热煮沸：器械、煮沸：器械、笼具、水瓶等消毒具、水瓶等消毒100 (20min)。（3）干烤消毒：可达）干烤消毒：可达180-280(15min30min) 。（4）火焰消毒

9、：温度可达）火焰消毒：温度可达300 ，主要用于不，主要用于不锈钢 笼具、金属器械、具、金属器械、墙壁的消毒。壁的消毒。（5）照射消毒照射消毒灭菌菌：紫外：紫外线、-射射线等，用于空气、等，用于空气、饲料、料、垫 料和器具的消毒料和器具的消毒。（6）微波微波灭菌菌：工：工业微波炉，家用微波炉。小包装微波炉，家用微波炉。小包装饲料。料。Page 15 化学消毒化学消毒 是使用化学是使用化学药物物喷洒、浸泡、擦拭、熏蒸洒、浸泡、擦拭、熏蒸等，以达等，以达到消毒到消毒灭菌的目的。常用化学消毒方法包括菌的目的。常用化学消毒方法包括液体消毒液体消毒和蒸汽消毒和蒸汽消毒。 （1）液体消毒）液体消毒剂：包括

10、石炭酸、：包括石炭酸、过氧乙酸、来氧乙酸、来苏水、次水、次氯酸等。酸等。 （2）熏蒸消毒熏蒸消毒：包括福：包括福尔马林林和三聚甲和三聚甲醛等。等。 第二节第二节 实验动物微生物学实验动物微生物学 和寄生虫学等级分类和寄生虫学等级分类Page 17实验动物微生物学和寄生虫学等级分类1.普通普通动物（物（conventional animal）CV2.清清洁动物（物（clean animal）CL3.无特定病原体无特定病原体动物（物（specific pathogen free animal) SPF4.无菌无菌动物（物（germ free animal）GF和和悉生悉生动物（物（gnotobio

11、tic animal) GN一、普通动物一、普通动物 conventional animal(CV) 必须是不携带主要人必须是不携带主要人兽共患病原体和动物烈性传染病的兽共患病原体和动物烈性传染病的病原体。病原体。 普通动物普通动物 饲育在饲育在开放环境开放环境里里, ,使用的垫使用的垫料和饲料料和饲料, ,只消毒不灭菌只消毒不灭菌; ;其饮水须符其饮水须符合城市饮用水标准。合城市饮用水标准。 普通动物只能用于教学实验和某些普通动物只能用于教学实验和某些科研工作的预实验。科研工作的预实验。 清洁动物清洁动物clean clean animal(CNanimal(CN) ) 必须是不携带主要人兽

12、共患病必须是不携带主要人兽共患病原体和动物烈性传染病的病原体，原体和动物烈性传染病的病原体， 又又不携带对动物危害大和对科不携带对动物危害大和对科学研究干扰大的病原体学研究干扰大的病原体。 亦称最少疾病动物亦称最少疾病动物 , MinimalMinimal Disease animal(MD)Disease animal(MD)。清洁动物清洁动物生活生活在屏障环境中在屏障环境中。所用的垫料，饲料，所用的垫料，饲料，饮水，手术饮水，手术器械和用具等均应经过高压蒸汽消器械和用具等均应经过高压蒸汽消毒毒。工作人员需穿无菌服装才能工作人员需穿无菌服装才能进行饲育或实验操作。进行饲育或实验操作。无特定病

13、原体动物无特定病原体动物Specific pathogen free Animal(Specific pathogen free Animal(SPFSPF) ) 又又不携带对动物危害大和对科学研不携带对动物危害大和对科学研究干扰大的病原体；究干扰大的病原体； 还不携带主还不携带主要潜在感染或条件致病菌和对科要潜在感染或条件致病菌和对科学实验干扰大的病原体的动物。学实验干扰大的病原体的动物。 不携带主要人兽共患病原体和不携带主要人兽共患病原体和动物烈性传染病的病原体；动物烈性传染病的病原体； SPFSPF动物的饲育通常是动物的饲育通常是: :先培育出无菌动物或悉先培育出无菌动物或悉生动物生动物

14、; ;然后然后, ,再将其后代转再将其后代转移到屏障环境内饲育繁殖建移到屏障环境内饲育繁殖建群。群。 无菌动无菌动物物 germ free germ free animal(GF)animal(GF) 动物体内外动物体内外无可检出的无可检出的一切一切生命体的动物生命体的动物。 此种动物在自然界中并不存在此种动物在自然界中并不存在, ,必须用人为的方法培育必须用人为的方法培育。无菌动物的取得和饲育环境无菌动物的取得和饲育环境子宫摘除术（剖腹产）子宫摘除术（剖腹产）饲育在隔离环境（隔离器内）饲育在隔离环境（隔离器内）一切用品经过严格包装、严格灭菌一切用品经过严格包装、严格灭菌后，通过传递仓送入隔离

15、器后，通过传递仓送入隔离器通过手套进行间接实验操作通过手套进行间接实验操作悉生动物悉生动物 gnotobiotic animal(GN(GN) ) 动物体内外所携动物体内外所携带的生命体是已知的。带的生命体是已知的。 此种动物原是无菌动此种动物原是无菌动物人为的将指定微生物丛定居物人为的将指定微生物丛定居其体内外。其体内外。GF、GN和和SPF隔离环境隔离环境GF动物动物植入植入植入植入GN动物动物污染污染污染污染GF动物动物 植入污染污染污染污染屏障环境屏障环境SPF动物动物实验动物微生物学分类模拟图实验动物微生物学分类模拟图人兽共患病原体、动物烈性传染病病原体动物主要传染病原体、对实验干扰

16、大的病原体条件致病病原体、影响实验德微生物所有微生物已知微生物普通级动物普通级动物清洁级动物清洁级动物SPF级动物级动物无菌动物无菌动物悉生动物悉生动物不同微生物学等级的不同微生物学等级的实验动物比较实验动物比较项项项项 目目目目GFGFGFGFSPFSPFSPFSPFCVCVCVCV传传传传 染染染染 病病病病无无无无无无无无有或可能有有或可能有有或可能有有或可能有寄寄寄寄 生生生生 虫虫虫虫无无无无很少很少很少很少有或可能有有或可能有有或可能有有或可能有实实实实 验验验验 结结结结 果果果果准确准确准确准确较准确较准确较准确较准确有疑问有疑问有疑问有疑问应应应应 用用用用 动动动动 物物物

17、物 数数数数少量少量少量少量少量少量少量少量多或大量多或大量多或大量多或大量长期实验效果长期实验效果长期实验效果长期实验效果可能好可能好可能好可能好可能好可能好可能好可能好困难困难困难困难死死死死 亡亡亡亡 率率率率很低很低很低很低低低低低高高高高长期实验存活率长期实验存活率长期实验存活率长期实验存活率约约约约100100100100约约约约9090909040404040左右左右左右左右实验标准设计实验标准设计实验标准设计实验标准设计可能可能可能可能可能可能可能可能不可能不可能不可能不可能统统统统 计计计计 价价价价 值值值值很好很好很好很好较好较好较好较好不准确不准确不准确不准确实验结果的

18、价值实验结果的价值实验结果的价值实验结果的价值很高很高很高很高高高高高有疑问有疑问有疑问有疑问实验动物微生物学标准实验动物微生物学标准国家或国家或国际组织国际组织动动 物物应排除应排除病毒项目病毒项目ICLASICLAS小鼠小鼠小鼠小鼠/ / / /大鼠大鼠大鼠大鼠14/914/9中国中国小鼠小鼠小鼠小鼠/ / / /大鼠大鼠大鼠大鼠5+6/75+6/7芬兰芬兰小鼠小鼠小鼠小鼠/ / / /大鼠大鼠大鼠大鼠16/816/8日本日本小鼠小鼠小鼠小鼠/ / / /大鼠大鼠大鼠大鼠8/98/9美国美国小鼠小鼠小鼠小鼠/ / / /大鼠大鼠大鼠大鼠（9 9）10/810/8澳大利亚澳大利亚小鼠小鼠小鼠

19、小鼠/ / / /大鼠大鼠大鼠大鼠13/813/8荷兰荷兰小鼠小鼠小鼠小鼠/ / / /大鼠大鼠大鼠大鼠11/1011/10实验动物微生物学标准实验动物微生物学标准国家或国家或国际组织国际组织动动 物物细菌真菌细菌真菌支原体支原体ICLASICLAS小鼠小鼠小鼠小鼠/ / / /大鼠大鼠大鼠大鼠13/1213/12中国中国小鼠小鼠小鼠小鼠/ / / /大鼠大鼠大鼠大鼠8+8/9+78+8/9+7芬兰芬兰小鼠小鼠小鼠小鼠/ / / /大鼠大鼠大鼠大鼠11+9/10+911+9/10+9日本日本小鼠小鼠小鼠小鼠/ / / /大鼠大鼠大鼠大鼠10/1010/10美国美国小鼠小鼠小鼠小鼠/ / / /

20、大鼠大鼠大鼠大鼠（1616）13/1213/12澳大利亚澳大利亚小鼠小鼠小鼠小鼠/ / / /大鼠大鼠大鼠大鼠12/1212/12荷兰荷兰小鼠小鼠小鼠小鼠/ / / /大鼠大鼠大鼠大鼠7/187/18Page 32小鼠小鼠应排除病毒排除病毒项目目淋巴淋巴细胞脉胞脉络丛脑膜炎病毒膜炎病毒 汉坦病毒坦病毒鼠痘病毒鼠痘病毒小鼠肝炎病毒小鼠肝炎病毒仙台病毒仙台病毒 小鼠肺炎病毒小鼠肺炎病毒呼呼肠孤病毒孤病毒III型型小鼠小鼠细小病毒小病毒小鼠小鼠脑脊髓炎病毒脊髓炎病毒小鼠腺病毒小鼠腺病毒多瘤病毒多瘤病毒Lymphocytic Choriomeningitis Virus HantavirusEctro

21、melia VirusMouse Hepatitis VirusSendai VirusPneumonia Virus of MiceReovirus type IIIMinute Virus of miceTheilers Mouse Encephalomyelitis VirusMouse AdenovirusPolyoma Virus Page 33大鼠大鼠应排除病毒排除病毒项目目汉坦病毒坦病毒仙台病毒仙台病毒小鼠肺炎病毒小鼠肺炎病毒呼呼肠孤病毒孤病毒III型型大鼠大鼠细小病毒小病毒RV株株大鼠大鼠细小病毒小病毒H-1株株大鼠冠状病毒大鼠冠状病毒/大鼠延泪腺炎病毒大鼠延泪腺炎病毒Hant

22、avirusSendai VirusPneumonia Virus of MiceReovirus type IIIRat ParvovirusRat ParvovirusRat Coronavirus/Sialodacryoadenitis Virus第三节第三节 实验动物群中常见微生物实验动物群中常见微生物 和寄生虫污染及其控制和寄生虫污染及其控制一一. .普通普通级动物级动物中弓形虫污染中弓形虫污染 二二. .清洁级动物中的仙台病毒和小鼠肝炎病清洁级动物中的仙台病毒和小鼠肝炎病毒毒的污染的污染三三.SPF.SPF级动物中绿脓杆菌、金黄色葡萄球级动物中绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌和肺炎克雷伯氏

23、菌细菌的污染菌和肺炎克雷伯氏菌细菌的污染 弓形虫是一种人畜共患的弓形虫是一种人畜共患的寄生虫，小鼠，大鼠，地鼠，豚鼠，寄生虫，小鼠，大鼠，地鼠，豚鼠，家兔和非人灵长类实验动物及猫，家兔和非人灵长类实验动物及猫，牛，羊，猪等都能感染。牛，羊，猪等都能感染。一一. .普通级合格动物中弓形虫污染普通级合格动物中弓形虫污染 弓形虫是细胞内寄生弓形虫是细胞内寄生虫，根据不同发育阶段分为五型：虫，根据不同发育阶段分为五型：滋养体和包囊出现在中间宿主体滋养体和包囊出现在中间宿主体内，裂殖体，配子体和卵囊只出内，裂殖体，配子体和卵囊只出现在终宿主猫体内。现在终宿主猫体内。滋养体滋养体滋养体滋养体排出体外,发育

24、成熟,具感染性卵卵卵卵 囊囊囊囊口,鼻,咽,呼吸道粘膜,眼结膜和皮肤机 体有免 适疫 宜 发 育宿主体内无性繁殖,引起发病急性力 条无 件症 下 终宿主 受 精 宿主产生 状 免疫力 感 染 肠绒毛上皮 细胞内发育包包包包 囊囊囊囊裂殖体裂殖体裂殖体裂殖体合 子雌雄配子体雌雄配子体雌雄配子体雌雄配子体滋养体滋养体滋养体滋养体经猫消化道侵入肠上皮细胞发育繁殖 危害性：弓形虫感染可引起肠粘膜和肠系膜淋弓形虫感染可引起肠粘膜和肠系膜淋巴，心、眼、肾上腺、脾、脑、肺、肝、巴，心、眼、肾上腺、脾、脑、肺、肝、胎盘及肌肉组织的坏死和损伤。胎盘及肌肉组织的坏死和损伤。小鼠感染后会严重影响实验结果。小鼠感染后

25、会严重影响实验结果。影响妊娠期胎儿发育。影响妊娠期胎儿发育。 在病畜和带虫者的肉、内在病畜和带虫者的肉、内脏、血液、渗出液和排泄物中脏、血液、渗出液和排泄物中均有弓形虫，甚至从乳汁中也均有弓形虫，甚至从乳汁中也能分离出弓形虫，也可引起感能分离出弓形虫，也可引起感染染。弓形虫污染的预弓形虫污染的预 防防 实验动物设施内要保持清实验动物设施内要保持清洁，定期消毒。洁，定期消毒。 严格阻断猫及其排泄物对设严格阻断猫及其排泄物对设施、饲料、垫料和饮水的污染。施、饲料、垫料和饮水的污染。 消灭野鼠，驱走野猫，不饲消灭野鼠，驱走野猫，不饲养一切宠物。养一切宠物。二二. .清洁级合格动物中的清洁级合格动物中

26、的仙台病毒和小鼠肝炎仙台病毒和小鼠肝炎病毒病毒的污染的污染 仙台病毒属于副粘病仙台病毒属于副粘病毒科毒科, ,副粘病毒属。副粘病毒属。 现在认为现在认为: :啮齿类实验动啮齿类实验动物是仙台病毒唯一自然宿主。物是仙台病毒唯一自然宿主。 传播途径：仙台病毒除了仙台病毒除了鼻鼻内途径内途径外，其它途径均不引起外，其它途径均不引起小鼠的自然感染。小鼠的自然感染。 偶尔可在肾、肝、偶尔可在肾、肝、脾、等器官发现病毒，但在尿、脾、等器官发现病毒，但在尿、血和肠内则没有病毒。血和肠内则没有病毒。 不同品系小鼠对仙台病毒感染不同品系小鼠对仙台病毒感染的易感性和敏感性明显不同。的易感性和敏感性明显不同。在自发

27、性流行中抵抗力大的小鼠如在自发性流行中抵抗力大的小鼠如SJL/j等等死亡率接近死亡率接近0，高度易感小鼠如，高度易感小鼠如Swiss裸裸鼠则可接近鼠则可接近100。感染的裸鼠其疾病症状出现的时间比有免感染的裸鼠其疾病症状出现的时间比有免疫机能的小鼠稍晚，并伴有进行性消瘦。疫机能的小鼠稍晚，并伴有进行性消瘦。在较长的时间里陆续死亡。在较长的时间里陆续死亡。 普通级鼠群中仙台病毒感染普通级鼠群中仙台病毒感染是最难控制的病毒感染之一是最难控制的病毒感染之一。 凡新引进的动物必须凡新引进的动物必须经经8 8周检疫周检疫( (检查引入动物和检查引入动物和“哨哨兵兵”动物的病毒抗体动物的病毒抗体) )。

28、一旦在屏障环境内一旦在屏障环境内的的鼠群中检出仙台病毒抗体鼠群中检出仙台病毒抗体阳性，若不及时清除所有阳性，若不及时清除所有被感染动物，将导致屏障被感染动物，将导致屏障设施的失败。设施的失败。防疫：两种方法防疫：两种方法 1.1.消灭已感染消灭已感染鼠群鼠群, ,重引符重引符合标准的种鼠合标准的种鼠或用无菌技术或用无菌技术剖腹取胎重建剖腹取胎重建繁殖群。繁殖群。2.2.暂停繁殖，在暂停繁殖，在相对静止条件下相对静止条件下保存这种非繁殖保存这种非繁殖群直至感染消除群直至感染消除( (约约2 2个月个月) )，然，然后恢复繁殖。后恢复繁殖。小鼠肝炎病毒小鼠肝炎病毒( (mice hepatitis

29、 virus mice hepatitis virus MHV)MHV) 属冠状病毒科，冠属冠状病毒科，冠状病毒属，与人冠状病毒状病毒属，与人冠状病毒 ( (普通普通感冒可有肺炎感冒可有肺炎) )，大鼠冠状病毒，大鼠冠状病毒 ( (新生大鼠肺炎新生大鼠肺炎) )，大鼠唾液腺病，大鼠唾液腺病毒毒( (唾液腺，泪腺炎唾液腺，泪腺炎) )同属。有多同属。有多种毒株。种毒株。 消瘦型肝炎病毒是实验小鼠消瘦型肝炎病毒是实验小鼠最重要的病毒感染之一。最重要的病毒感染之一。 临床表现为肝炎，脑炎和肠临床表现为肝炎，脑炎和肠炎。炎。 多数情况下是亚临床感染或慢性感多数情况下是亚临床感染或慢性感染。染。 呈世界

30、范围性分布，无明显的季节呈世界范围性分布，无明显的季节性差异。性差异。 MHV传播方式有经传播方式有经空空气气和和接触接触两种。两种。 小鼠是唯一能自然感小鼠是唯一能自然感染染MHV;通过脑内接种通过脑内接种,可实验感可实验感染棉鼠染棉鼠,大鼠和地鼠大鼠和地鼠,但兔和豚鼠无但兔和豚鼠无反应。反应。 MHV是普通级实验小鼠是普通级实验小鼠难难以清除以清除的病毒之一。的病毒之一。 唯有对小鼠进行剖腹取胎术唯有对小鼠进行剖腹取胎术,结合结合屏障环境内维持饲养屏障环境内维持饲养,才能培育无才能培育无MHV感染的清洁级以上小鼠。感染的清洁级以上小鼠。 必须注意必须注意MHV垂直传播的可能性。垂直传播的可

31、能性。防疫防疫 通过定期检测通过定期检测, ,有有利及时发现屏障环境内的鼠群中鼠肝利及时发现屏障环境内的鼠群中鼠肝炎病毒感染。及时消灭被感染的鼠群炎病毒感染。及时消灭被感染的鼠群, , 重新引进符合重新引进符合标准的种群。标准的种群。 同步交配代乳同步交配代乳方法重建繁殖群。方法重建繁殖群。 用无菌技术剖腹用无菌技术剖腹取胎重建繁殖群。取胎重建繁殖群。 暂停繁殖方法重暂停繁殖方法重建繁殖群。建繁殖群。同步交配同步交配-把把MHVMHV阳性鼠群中阳性鼠群中怀孕母鼠自然分娩的新生鼠在分怀孕母鼠自然分娩的新生鼠在分娩后的娩后的2424小时内传给符合标准的小时内传给符合标准的代乳鼠带乳。然后在代乳鼠代

32、乳鼠带乳。然后在代乳鼠3 3周周龄龄,6,6周龄和周龄和1212周龄进行血清学检周龄进行血清学检测测, ,可获可获MHVMHV阴性小鼠。阴性小鼠。 暂停繁殖法暂停繁殖法：从感染群中移去所从感染群中移去所有新生鼠有新生鼠, ,离乳鼠和妊娠鼠。停止繁离乳鼠和妊娠鼠。停止繁殖殖1515周周, ,可排除感染。可排除感染。 1515周后出生的第一代新生鼠在周后出生的第一代新生鼠在3 34 4周龄周龄MHVMHV血清阳性血清阳性, ,四周后因从母方获四周后因从母方获得的抗体衰退而血清阴性。得的抗体衰退而血清阴性。 在第二代小鼠在第二代小鼠3 39 9周龄周龄MHVMHV血清血清阴性。阴性。三三.SPF.S

33、PF级实验动物中的细级实验动物中的细菌污染菌污染 2.2.金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌 3.3.肺炎克雷伯氏杆菌肺炎克雷伯氏杆菌 1.1.绿脓杆菌绿脓杆菌 绿脓杆菌是动物和人类绿脓杆菌是动物和人类胃肠道的一种常在菌。胃肠道的一种常在菌。 实验动物可经口咽和胃肠途径实验动物可经口咽和胃肠途径感染；感染； 常可在小鼠的口咽部和肠道发常可在小鼠的口咽部和肠道发现。现。 该菌可导致该菌可导致封闭封闭群小鼠群小鼠(Swiss-Webster)和近交系小鼠和近交系小鼠(C3H)斜颈和斜颈和转圈症状转圈症状，被看作是小鼠疾患的主要被看作是小鼠疾患的主要细菌病原。细菌病原。 对免疫环境遭受损害或对免疫环境遭受

34、损害或抑制的宿主，绿脓杆菌可穿过局部抑制的宿主，绿脓杆菌可穿过局部淋巴环境和血管环境，导致淋巴环境和血管环境，导致致死性致死性败血症败血症。由工作人员带由工作人员带入屏障环境入屏障环境。 在常规小鼠在常规小鼠群的饮水器中群的饮水器中能检到绿脓杆能检到绿脓杆菌菌。 在温暖、潮湿的在温暖、潮湿的环境中环境中( (如如SPFSPF小小鼠饲养室的淋浴鼠饲养室的淋浴更衣处更衣处) )也常检到也常检到这种菌这种菌。绿脓杆绿脓杆菌来源菌来源 要预防要预防绿脓杆菌绿脓杆菌, ,就必须定期就必须定期对对SPFSPF小鼠小鼠进行微生物进行微生物学监测，及学监测，及时淘汰被感时淘汰被感染的鼠群。染的鼠群。 通过酸化

35、通过酸化( (用盐酸调用盐酸调PH2.5)PH2.5)氯化氯化( (10ppm)10ppm)饮饮水来预防饮水器对水来预防饮水器对SPFSPF小鼠的感染小鼠的感染; ; 对屏障环境的淋浴更衣室常规进行彻底打扫消毒灭菌，并要求进入屏障环境的工作人员严格执行操作规程和个人防护用品的穿戴。金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌 在小鼠皮肤和粘膜上，常检在小鼠皮肤和粘膜上，常检到致病的金黄色葡萄球菌和一般不致到致病的金黄色葡萄球菌和一般不致病的表皮葡萄球菌。虽然金黄色葡萄病的表皮葡萄球菌。虽然金黄色葡萄球菌还没有被广泛看作实验小鼠的原球菌还没有被广泛看作实验小鼠的原发性疾病，但有些文献中报道了其作发性疾病，但有些

36、文献中报道了其作为皮肤感染，淋巴感染或粘膜感染病为皮肤感染，淋巴感染或粘膜感染病原学因子。原学因子。小鼠自发性葡萄球菌感染与小鼠自发性葡萄球菌感染与 幼鼠幼鼠比成鼠易感。比成鼠易感。 无胸腺裸小鼠因缺少保护性被毛无胸腺裸小鼠因缺少保护性被毛并缺乏并缺乏T T细胞而经常发生皮肤细胞而经常发生皮肤和眼窝的葡萄球菌感染。和眼窝的葡萄球菌感染。 屏障环境的操作管理有关。屏障环境的操作管理有关。营养及营养及小鼠品系，小鼠品系， 据对据对SPFSPF设施的细菌学监测设施的细菌学监测发现，从健康发现，从健康SPFSPF小鼠分离的金小鼠分离的金黄色葡萄球菌的噬菌体型常与黄色葡萄球菌的噬菌体型常与从动物从动物管

37、理员体表分离的品系管理员体表分离的品系一致。一致。 通常不通常不能治疗或根除金黄能治疗或根除金黄色葡萄球菌，色葡萄球菌， 饲养人员和实验人员严格执行隔离措施和操作细则。 唯有通过定期检唯有通过定期检测及时淘汰患鼠；测及时淘汰患鼠；酸化饮水；饲料和酸化饮水；饲料和垫料彻底灭菌；经垫料彻底灭菌；经常更换垫料；常更换垫料； 防疫防疫克雷伯氏菌克雷伯氏菌 人和动物的肠道常在人和动物的肠道常在菌，是与人和动物泌尿，呼吸道菌，是与人和动物泌尿，呼吸道感染有关的条件性致病菌。感染有关的条件性致病菌。 小鼠自发爆发的疾病小鼠自发爆发的疾病临床症状是：食欲不振，弓背，临床症状是：食欲不振，弓背，被毛粗乱，打喷嚏

38、及呼吸深快。被毛粗乱，打喷嚏及呼吸深快。 为了从受感染为了从受感染的小鼠中清除这种病原体，的小鼠中清除这种病原体，就需要进行剖腹产和严格就需要进行剖腹产和严格的屏障环境的屏障环境操作、管理操作、管理。第五节第五节 实验动物微生物学实验动物微生物学 和寄生虫学质量检测和寄生虫学质量检测一一. .检测目的检测目的二二. .检测方法检测方法三三. .检测规则检测规则一、检测目的一、检测目的1.1.排除人兽共患病，确排除人兽共患病，确保从事实验动物生产的保从事实验动物生产的饲养饲养人员人员和动物实验的和动物实验的科研或教学科研或教学人员身体健人员身体健康。康。2.排除危害实验动物的排除危害实验动物的常

39、见病多发病，确保常见病多发病，确保实实验动物种群的健康验动物种群的健康，为，为生命科学研究提供生命科学研究提供合格合格的实验动物。的实验动物。1 1对新引进的普通级动物进对新引进的普通级动物进行检疫，防止人兽共患病原体行检疫，防止人兽共患病原体或动物烈性传染病带入实验动或动物烈性传染病带入实验动物种群，或传播给实验人员。物种群，或传播给实验人员。2 2定期对生产繁殖的实验动定期对生产繁殖的实验动物种群进行抽样检测，及时了物种群进行抽样检测，及时了解实验动物生产群体中微生物解实验动物生产群体中微生物学和寄生虫学质量；必要时作学和寄生虫学质量；必要时作出淘汰或降级处理。出淘汰或降级处理。3 3当实

40、验动物种群发生传染病当实验动物种群发生传染病流行时，检出感染途径，提出控流行时，检出感染途径，提出控制或预防措施。制或预防措施。4 4对实验动物生产或实验设施对实验动物生产或实验设施进行静态和动态检测，及时掌握进行静态和动态检测，及时掌握实验动物环境条件，了解是否符实验动物环境条件，了解是否符合实验动物国家标准。合实验动物国家标准。 3.3.研究确定实验动物微研究确定实验动物微生物学和寄生虫学等级标生物学和寄生虫学等级标准的划分，和不同等级实准的划分，和不同等级实验动物的微生物学和寄生验动物的微生物学和寄生虫学质量指标。虫学质量指标。4.4.确保使用实验动物作检确保使用实验动物作检测的测的药品

41、和生物制品的质药品和生物制品的质量量，保证进行动物实验的，保证进行动物实验的科学研究成果和各种动物科学研究成果和各种动物试验试验结果的可靠性、准确结果的可靠性、准确性和重复性。性和重复性。二二. . 检测方法检测方法原则原则1.1.国内外通用国内外通用, ,比较成熟比较成熟, ,便于便于交流。交流。2.2.可操作性强，检测结果易判可操作性强，检测结果易判断，检测率较高。断，检测率较高。3.3.易实现标准化和规范化，便易实现标准化和规范化，便于推广。于推广。国家推荐性标准国家推荐性标准实验动物实验动物 微生物学检测方法微生物学检测方法1 14 4GB/T14926.1GB/T14926.1149

42、26.6414926.6420012001实验动物实验动物 寄生虫学检测方法寄生虫学检测方法GB/T18448.118448.102001 1. 1. 实验动物病毒学检测方法实验动物病毒学检测方法 目前我国对实验动物病毒学检测目前我国对实验动物病毒学检测通常使用通常使用血清学血清学方法，包括：方法，包括：1.1.酶联免疫吸附试验酶联免疫吸附试验（ ELISA ELISA ）2.2.免疫荧光试验免疫荧光试验（ IFAIFA）3.3.免疫酶染色试验免疫酶染色试验（ IEA IEA ）4.4.血球凝集血球凝集（HAHA）和和血球凝集抑制血球凝集抑制（HIHIHIHI）试验试验2. 2. 实验动物细菌

43、学检测方实验动物细菌学检测方法法 通常采用细菌分离和通常采用细菌分离和培养方法。根据培养基上菌落培养方法。根据培养基上菌落特征，将分离到的可疑菌落作特征，将分离到的可疑菌落作生化鉴定。生化鉴定。 检测人员的实际工作经验，直接检测人员的实际工作经验，直接影响到其对检测结果的判断准确性。影响到其对检测结果的判断准确性。 对部分细菌，如沙门氏菌，对部分细菌，如沙门氏菌，支原体等已开展血清学方法检测。支原体等已开展血清学方法检测。3. 3. 实验动物寄生虫学检测方法实验动物寄生虫学检测方法 通常在光学显微镜下查通常在光学显微镜下查找寄生虫的虫体、虫卵或孢子。找寄生虫的虫体、虫卵或孢子。对人兽共患的弓形

44、虫，则采用各对人兽共患的弓形虫，则采用各种血清学的方法进行检测。种血清学的方法进行检测。三三. .检测规则检测规则1.1.检测频率检测频率 以以间隔间隔2 2 3 3个月个月为宜。在实为宜。在实验动物的国家标准中，即规定验动物的国家标准中，即规定：每每3 3个月至少检测个月至少检测1 1次。次。 病原体刚侵入实验动物群体时病原体刚侵入实验动物群体时, ,较易分离到病原体较易分离到病原体; ; 而当流行趋于而当流行趋于平静可能分离不到病原体平静可能分离不到病原体, ,但特异性但特异性抗体的检出率上升。通常在抗体的检出率上升。通常在2 3个个月月内，抗体检出率不会下降太大。内，抗体检出率不会下降太

45、大。 随着时间的推移，某些个体的抗体随着时间的推移，某些个体的抗体效价水平会下降，以及新生的非感染效价水平会下降，以及新生的非感染动物增加，使抗体阳性动物的检出大动物增加，使抗体阳性动物的检出大量减少。量减少。2.2.取样数量取样数量 通常对于动物群体中感染通常对于动物群体中感染率高的病原体，只需少量采样就能率高的病原体，只需少量采样就能检出；而当感染动物比例低时，若检出；而当感染动物比例低时，若不增加取样数量，就可能漏检。不增加取样数量，就可能漏检。 因此，可根据实验动物群体中病原因此，可根据实验动物群体中病原体的感染率决定取样数量。如病原体的感染率决定取样数量。如病原体感染率为体感染率为1

46、 1，要检出感染动物至，要检出感染动物至少应取样少应取样100100只。只。病原体检测取样数量病原体检测取样数量感染率感染率 % % 检测可信度检测可信度99999595909090902 22 21 180803 32 22 270704 43 32 260605 54 43 350507 75 54 440409 96 65 5303013139 97 720 20 2121141411111010444429292222 达标的实验动物须排除的病原体感染达标的实验动物须排除的病原体感染率应为率应为“0 0”, ,取样数量须达取样数量须达60-90%60-90%以上，以上，其检测结果的可信

47、度方可达到其检测结果的可信度方可达到95-99%95-99%。 而啮而啮齿类实验动物采样，通常都牺牲被检测动齿类实验动物采样，通常都牺牲被检测动物物; ; 且实验动物寄生虫学质量检测通常与且实验动物寄生虫学质量检测通常与微生物学质量检测同时进行，而病原体的微生物学质量检测同时进行，而病原体的感染率不可能相同。感染率不可能相同。 因此因此, ,在标准中采在标准中采用的取样数量和取样方法，将适当用的取样数量和取样方法，将适当参考实参考实验动物群体大小，兼顾绝大多数病原体的验动物群体大小，兼顾绝大多数病原体的感染率，以决定取样数量感染率，以决定取样数量; ;并规定取样点并规定取样点。实验动物不同生产

48、群体取样数实验动物不同生产群体取样数群体规模，只群体规模，只取样数量，只取样数量，只51005001050020每只隔离器检测每只隔离器检测2 2只只活体取样活体取样 对实验动物的活体取样未对实验动物的活体取样未作规定。作规定。 无特殊要求时，对鸡、兔、无特殊要求时，对鸡、兔、犬和猴的活体取样，可在生产犬和猴的活体取样，可在生产繁殖设施内进行。繁殖设施内进行。第十章第十章生生 物物 安安 全全一、生物安全的概念一、生物安全的概念 针对生物医学专业或现代针对生物医学专业或现代生物技术的开发和应用，造成生物技术的开发和应用，造成对人体健康和生态环境的潜在对人体健康和生态环境的潜在威胁，而应采取的一

49、系列有效威胁，而应采取的一系列有效预防和控制的措施。预防和控制的措施。二、广义的生物安全二、广义的生物安全(1)(1)人类的健康与安全人类的健康与安全; ;(2)(2)人类赖以生存的农业生物的安全人类赖以生存的农业生物的安全; ;(3)(3)与人类生存息息相关的生物多样与人类生存息息相关的生物多样性，即环境生物安全。性，即环境生物安全。野生动物所感染的各种微生物 生生物物危危害害 实验人员或饲实验人员或饲养人员养人员生活环境生活环境的污染的污染 生态环境、生物生态环境、生物多样性存在着潜多样性存在着潜在着威胁在着威胁不合格实验动物所携带的各种人兽共患病的病原体三、忽视生物安全的行为三、忽视生物

50、安全的行为 1.午餐与标本同存于实验室冰箱内；午餐与标本同存于实验室冰箱内； 2.在实验室内抽烟、进食、喝饮料；在实验室内抽烟、进食、喝饮料； 3.不戴手套清洗未消毒的玻璃器皿；不戴手套清洗未消毒的玻璃器皿； 4.穿着实验服去食堂午餐、到会场开会；穿着实验服去食堂午餐、到会场开会； 5.随意使用来源不清，质量不明的动物进行实随意使用来源不清，质量不明的动物进行实验；验； 6.生物垃圾与生活垃圾混淆一起处理；生物垃圾与生活垃圾混淆一起处理； 7.坚持使用传统的超净工作台，不添置生物安坚持使用传统的超净工作台，不添置生物安全柜；全柜；超净台级生物安全柜级生物安全柜四、超净台与生物安全柜四、超净台与

51、生物安全柜五、五、WHO对感染性微生物分类标准对感染性微生物分类标准等级危险度传播结果对人和城乡社会的危险度低。不可能引起人类疾病，或引起兽医学上重要动物疾病的微生物。对人有中等危险度，对城乡社会有轻微危险性。对人或动物虽有致病性，但对实验室工作人员，对社会、家畜、环境等不会造成重大灾害的病原体。在实验室内接触可能发生严重感染，但有有效的防治方法，传播可能性不大。对人危险度高，对城乡危险性低。人感染了会引起重症疾病，但传播给其他人的可能性低对人和地区社会有高度危险性能引起人或动物的重症疾病，患者易于直接或间接传播给其他人。六、中国对病原体危害性分级六、中国对病原体危害性分级危险级别危害程度第1

52、类病原体实验室感染机会多，感染后发病的可能性大，症状重并可危及人员生命，缺乏有效的预防措施；传染性强，对人群危害性大的烈性传染病，包括国内未发现的或虽已发现，但无有效防治的传染病病原体第2类病原体实验室感染机会多，感染后症状较重，可危及人员生命，发病后不易治疗，对人群危害较大的传染病的病原体。第3类病原体具一般危害性，能引起实验室感染机会较少，在一般微生物学实验室中采用一般措施能控制感染和传播，或有对之有效的免疫预防的病原体。第4类病原体可用于制造生物制品的各种减毒、弱毒及不属于第1、第2和第3类的各种低致病微生物。生物安全实验操作的要求生物安全实验操作的要求生物安生物安全水平全水平实验操作实

53、验操作实验操作实验操作安全设备安全设备安全设备安全设备设施设施设施设施1常规微生物学操作常规微生物学操作常规微生物学操作常规微生物学操作无特殊需要无特殊需要无特殊需要无特殊需要基础实验室基础实验室基础实验室基础实验室2执行上述操作外，还需要：执行上述操作外，还需要：执行上述操作外，还需要：执行上述操作外，还需要：穿实验服，戴手套口罩穿实验服，戴手套口罩穿实验服，戴手套口罩穿实验服，戴手套口罩全部污染废弃物均需灭菌全部污染废弃物均需灭菌全部污染废弃物均需灭菌全部污染废弃物均需灭菌标注生物危害标志标注生物危害标志标注生物危害标志标注生物危害标志 易产生气溶胶的实验操作需易产生气溶胶的实验操作需易产

54、生气溶胶的实验操作需易产生气溶胶的实验操作需使用使用使用使用级或级或级或级或级生物超净工级生物超净工级生物超净工级生物超净工作台。作台。作台。作台。 基础实验室基础实验室基础实验室基础实验室制定进入实制定进入实制定进入实制定进入实验室规章制验室规章制验室规章制验室规章制度。度。度。度。 3执行上述操作外，还需要：执行上述操作外，还需要：执行上述操作外，还需要：执行上述操作外，还需要：穿着专用实验服穿着专用实验服穿着专用实验服穿着专用实验服加强出入管理加强出入管理加强出入管理加强出入管理感感感感染染染染性性性性材材材材料料料料的的的的实实实实验验验验室室室室操操操操作作作作必必必必须须须须在在在

55、在级级级级或或或或级级级级生生生生物物物物超超超超净净净净工工工工作台内进行作台内进行作台内进行作台内进行密密密密封封封封性性性性能能能能较较较较好好好好的的的的安安安安全全全全实实实实验设施验设施验设施验设施4执行上述操作外，还需要：执行上述操作外，还需要：执行上述操作外，还需要：执行上述操作外，还需要：经经经经过过过过更更更更衣衣衣衣室室室室更更更更换换换换专专专专用用用用实实实实验验验验服服服服后进室；离室时须经淋浴。后进室；离室时须经淋浴。后进室；离室时须经淋浴。后进室；离室时须经淋浴。全部废弃物彻底灭菌后排出。全部废弃物彻底灭菌后排出。全部废弃物彻底灭菌后排出。全部废弃物彻底灭菌后排

56、出。全全全全部部部部操操操操作作作作在在在在级级级级生生生生物物物物超超超超净净净净工工工工作作作作台台台台内内内内进进进进行行行行。或或或或穿穿穿穿着着着着供供供供氧氧氧氧的的的的正正正正压压压压太太太太空空空空服服服服，在在在在级级级级或或或或级级级级生物超净工作台内进行。生物超净工作台内进行。生物超净工作台内进行。生物超净工作台内进行。能彻底密闭能彻底密闭能彻底密闭能彻底密闭的高度安全的高度安全的高度安全的高度安全实验设施。实验设施。实验设施。实验设施。第三章练习题第三章练习题1.传染病和非传染病的区别是：传染病和非传染病的区别是： 。A传染病具有传染性和流行性传染病具有传染性和流行性

57、B传染病可引起动物死亡传染病可引起动物死亡C传染病可影响干扰实验结果传染病可影响干扰实验结果 D患病机体内发生特异性反应患病机体内发生特异性反应2被病原体污染的笼具、垫料、水、空气等，可认为是传染病传被病原体污染的笼具、垫料、水、空气等，可认为是传染病传播的播的 。A传染源传染源 B传播途径传播途径 C传播媒介传播媒介 D病源携带者病源携带者 3.实验兔用兔瘟疫苗免疫后就不会爆发兔瘟流行，这是从实验兔用兔瘟疫苗免疫后就不会爆发兔瘟流行，这是从 来阻断来阻断传染病的。传染病的。 A 传染源传染源 B传播途径传播途径 C易感动物易感动物 D传播媒介传播媒介4.传染病流行的三个基本环节是传染病流行的

58、三个基本环节是 、 、和、和 。第三章练习题第三章练习题5.根据国标规定，清洁级动物微生物和寄生虫质量每根据国标规定，清洁级动物微生物和寄生虫质量每 月至少检测月至少检测1次。次。 A 1 B 2 C 3 D 4 6.在下列普通动物必须排除的病原体中，不属于人兽共患的病原体在下列普通动物必须排除的病原体中，不属于人兽共患的病原体是是 。 A.鼠痘病毒鼠痘病毒 B. 沙门氏菌沙门氏菌 C.弓形虫弓形虫 D.流行性出血热病毒流行性出血热病毒7.弓形虫感染宿主后的靶器官是弓形虫感染宿主后的靶器官是 。A.肝肝 B.脑脑 C.眼眼 D.无选择无选择8.悉生动物来自于悉生动物来自于 级动物。级动物。 A.无菌无菌 B. SPF C. 普通普通 D. 清洁清洁9.无菌动物是指无菌动物是指 。 A. 无任何可查到细菌的动物。无任何可查到细菌的动物。 B. 无任何细菌的动物。无任何细菌的动物。 C. 体内外无可检出的一切生命体的动物体内外无可检出的一切生命体的动物 。 D. 体内外无感染的一体内外无感染的一切生命体的动物切生命体的动物 。 10. SPF级实验动物中常见的细菌污染是：级实验动物中常见的细菌污染是： 、 和和 。结束结束谢谢谢谢