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1、动物免疫学第五版第一章第一章绪论绪论天花病人天花病人(三)近代免疫学时期:(三)近代免疫学时期:1945年年1960年。年。型变态反应;免疫耐受现象;法氏囊的型变态反应;免疫耐受现象;法氏囊的免疫功能。免疫功能。(四)现代免疫学时期:(四)现代免疫学时期:1960年现在。年现在。胸腺的免疫功能;单克隆抗体技术;基因工胸腺的免疫功能;单克隆抗体技术;基因工程疫苗。程疫苗。三、免疫基本特性三、免疫基本特性1、识别特性:精确地识别自身和非自身。、识别特性:精确地识别自身和非自身。2、特异性:某种抗原剌激机体产生的免疫力,只、特异性:某种抗原剌激机体产生的免疫力,只针对相应物质。针对相应物质。3、记忆
2、性:免疫记忆。相同抗原物质再次进入时,、记忆性:免疫记忆。相同抗原物质再次进入时,将其更快更有效地消灭和排除。将其更快更有效地消灭和排除。四、免疫基本功能四、免疫基本功能1、抗传染、抗传染阻止进入;抑制体内繁殖;消灭繁殖的微生物阻止进入;抑制体内繁殖;消灭繁殖的微生物过高:传染性变态反应;过低:反复发病。过高:传染性变态反应;过低:反复发病。2、自身稳定:清除、自身稳定:清除衰老、破损细胞衰老、破损细胞。否则自身免。否则自身免疫病。疫病。3、免疫监视:清除、免疫监视:清除突变细胞突变细胞。否则肿瘤和。否则肿瘤和癌症。癌症。五、免疫学在兽医学科的应用五、免疫学在兽医学科的应用1、免疫诊断、免疫诊
3、断2、免疫预防、免疫预防3、免疫治疗、免疫治疗第二章第二章免疫系统免疫系统第一节第一节免疫组织器官免疫组织器官第二节第二节免疫细胞免疫细胞第三节第三节免疫相关因子免疫相关因子第一节免疫组织器官第一节免疫组织器官一、中央免疫器官一、中央免疫器官1、骨髓、骨髓(bonemarrow)免疫活性细胞发源地。免疫活性细胞发源地。哺乳动物兼有禽类法氏囊的功能。哺乳动物兼有禽类法氏囊的功能。2、胸腺、胸腺(thymus)功能:使功能:使T细胞分化成熟细胞分化成熟。前前T细胞(胸腺细胞)细胞(胸腺细胞),进入胸腺,进入胸腺,胸腺激胸腺激素作用下,转化为素作用下,转化为Tc(胸腺依赖淋巴细胞)(胸腺依赖淋巴细胞
4、)胸腺结构图示胸腺结构图示3、法氏囊(、法氏囊(bursaofFabricius)功能:功能:B细胞分化成熟细胞分化成熟。哺乳动物无法氏囊,由胚肝、脾以及胚胎末期哺乳动物无法氏囊,由胚肝、脾以及胚胎末期和出生后的骨髓代替。和出生后的骨髓代替。法氏囊结构图示法氏囊结构图示二、周围免疫器官二、周围免疫器官(secondaryimmuneorgans)1、脾脏、脾脏(spleen)体内最大的淋巴器官,产生抗体的主要器官。体内最大的淋巴器官,产生抗体的主要器官。(1)结构特点)结构特点脾索:吻合成网状的淋巴组织索脾索:吻合成网状的淋巴组织索红髓红髓脾窦脾窦非胸腺依赖区非胸腺依赖区脾脏(脾脏(BC)脾小
5、结脾小结白髓:沿动脉分布白髓:沿动脉分布于脾索之间于脾索之间淋巴鞘淋巴鞘胸腺依赖区胸腺依赖区(TC)(2)免疫功能)免疫功能(a)特异性免疫:)特异性免疫:体液免疫为主,细胞免疫为辅体液免疫为主,细胞免疫为辅。Bc:5065%,定居于非胸腺依赖区。,定居于非胸腺依赖区。Tc:3550%,定居于胸腺依赖区。,定居于胸腺依赖区。( b) 过过 滤滤 作作 用用 : 过过 滤滤 并并 清清 除除 血血 液液 中中 异异 物物 及及 衰衰 老、破损细胞。老、破损细胞。2、淋巴结(、淋巴结(lymphnode)(1)结构)结构浅皮质区浅皮质区皮质皮质深皮质区深皮质区胸腺依赖区(胸腺依赖区(TC:75)淋
6、巴结淋巴结髓索髓索非胸腺依赖区(非胸腺依赖区(BC:25)髓质髓质髓窦髓窦(2)功能)功能(a)免疫功能:)免疫功能:细胞免疫为主,体液免疫为辅细胞免疫为主,体液免疫为辅。Tc:75%,定居于胸腺依赖区,定居于胸腺依赖区Bc:25%,定居于非胸腺依赖区,定居于非胸腺依赖区(b)过滤作用:过滤淋巴液中微生物及异物。)过滤作用:过滤淋巴液中微生物及异物。第二节第二节免疫细胞免疫细胞一、免疫活性细胞(一、免疫活性细胞(T、BC)(一)来源:来自骨髓的多能干细胞分化的淋巴样干细胞。(一)来源:来自骨髓的多能干细胞分化的淋巴样干细胞。(二)分化(二)分化前前Tc成熟成熟Tc细胞免疫细胞免疫胸腺胸腺胸腺依
7、赖区胸腺依赖区骨髓多能骨髓多能淋巴样淋巴样干细胞干细胞干干c前前Bc成熟成熟Bc体液免疫体液免疫法氏囊法氏囊非胸腺依赖区非胸腺依赖区T细胞细胞红细胞红细胞T细胞细胞血小板血小板3、TC亚群及功能亚群及功能(1)辅助性)辅助性Tc(HelperTcell:TH):约占):约占Tc总量的总量的1/3。协助。协助Bc产生体液免疫反应,即产生体液免疫反应,即Bc需要需要TH传递抗原信息;协助细胞免疫传递抗原信息;协助细胞免疫反应的效应,即活化反应的效应,即活化TK。(2)抑制性)抑制性Tc(SuppressorTCell:Ts):):约占约占Tc总数的总数的10%,抑制体液免疫和细胞免疫。通过释放抑制
8、,抑制体液免疫和细胞免疫。通过释放抑制性因子,作用于性因子,作用于TH而起作用。而起作用。(3)杀伤性)杀伤性Tc(KillerTcell:TK):):占占Tc总数的总数的50%左右。识别和杀伤靶细胞。左右。识别和杀伤靶细胞。Tk的作用需的作用需Th的的活化。活化。二、吞噬细胞二、吞噬细胞包括包括血液中嗜中性粒细胞、单核细胞血液中嗜中性粒细胞、单核细胞;组织中组织中巨噬细胞巨噬细胞。(一)来源:骨髓多能干细胞。(一)来源:骨髓多能干细胞。(二)分化(二)分化红细胞系:红血球红细胞系:红血球原血细胞系粒细胞系:嗜中性粒细胞、嗜碱性粒细胞、原血细胞系粒细胞系:嗜中性粒细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细
9、胞嗜酸性粒细胞骨髓多巨核细胞系:血小板骨髓多巨核细胞系:血小板能干细胞淋巴样干细胞能干细胞淋巴样干细胞TC、BC、KC、NKC单核吞噬细胞单核细胞:游走于血液中单核吞噬细胞单核细胞:游走于血液中巨噬细胞:定居于组织中巨噬细胞:定居于组织中肝:星状细胞肝:星状细胞肺:尘细胞肺:尘细胞结缔组织:组织细胞结缔组织:组织细胞神经组织:小胶质细胞神经组织:小胶质细胞淋巴结、浆膜腔、脾:巨噬细胞淋巴结、浆膜腔、脾:巨噬细胞巨噬细胞巨噬细胞单核细胞单核细胞中性粒中性粒细胞细胞(三三)特点特点1、较强吞噬能力。、较强吞噬能力。2、识别能力。、识别能力。3、消化能力。、消化能力。4、细胞表面有、细胞表面有IgG
10、Fc段受体和补体段受体和补体C3受体受体。(四四)作用作用1、吞噬作用、吞噬作用:机体免疫力、病原微生物毒力、数量不同、:机体免疫力、病原微生物毒力、数量不同、吞噬结果不同。吞噬结果不同。完全吞噬完全吞噬:吞噬、杀灭并彻底消化降解异物。:吞噬、杀灭并彻底消化降解异物。不完全吞噬不完全吞噬:仅吞噬异物,不能将异物杀灭而长期存:仅吞噬异物,不能将异物杀灭而长期存于细胞内。吞噬细胞游走,将病原微生物带到其它组织于细胞内。吞噬细胞游走,将病原微生物带到其它组织器官引起全身感染,造成更大危害。器官引起全身感染,造成更大危害。肺肺巨巨噬噬细细胞胞吞吞噬噬大大肠肠杆杆菌菌巨噬细胞吞噬细菌巨噬细胞吞噬细菌2、
11、递呈抗原信息、递呈抗原信息将抗原决定簇小肽片段,移向细胞表面,向将抗原决定簇小肽片段,移向细胞表面,向具有相应抗原受体的具有相应抗原受体的TC、BC递呈抗原信息。递呈抗原信息。3、合成和分泌各种活性因子、合成和分泌各种活性因子溶菌酶、白介素溶菌酶、白介素1、干扰素、补体。、干扰素、补体。4、调节抗原量、调节抗原量抗原量合适,才能刺激机体产生特异性免疫反应。抗原量合适,才能刺激机体产生特异性免疫反应。抗原量过大,使抗原量过大,使TC、BC产生免疫麻痹,不能引起免产生免疫麻痹,不能引起免疫反应。此时,吞噬细胞大量消毁和贮存抗原,少释放。疫反应。此时,吞噬细胞大量消毁和贮存抗原,少释放。抗原量过小,
12、不足以刺激抗原量过小,不足以刺激TC、BC产生免疫反应。此产生免疫反应。此时,吞噬细胞将抗原集中,从而调节抗原量。时,吞噬细胞将抗原集中,从而调节抗原量。三、三、K细胞和细胞和NK细胞细胞(一)(一)来源来源骨髓多能干细胞骨髓多能干细胞淋巴样干细胞淋巴样干细胞胸腺胸腺直接分化直接分化法氏囊法氏囊TCKC、NKCBC(二)(二) 细胞特点及作用细胞特点及作用1、Kc(killcell)(1)细胞特点和数量:形态上不易与)细胞特点和数量:形态上不易与T、B细胞相细胞相区别,约占体内淋巴细胞区别,约占体内淋巴细胞10。(2)作用:主要以)作用:主要以ADCC效应杀伤大的细胞性抗效应杀伤大的细胞性抗原
13、,如病毒感染的宿主细胞、寄生虫细胞、肿瘤原,如病毒感染的宿主细胞、寄生虫细胞、肿瘤细胞移植的异体细胞。杀伤力强。细胞移植的异体细胞。杀伤力强。(3)ADCC效应效应抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用(抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用(antibodydependentcellmediatedcytotoxicity)。2、NK细胞细胞(naturalkillcell)(1)细细胞胞特特点点和和数数量量:占占淋淋巴巴细细胞胞数数不不超超过过10%。可可不不依依赖赖抗抗体体而而起起杀杀伤伤作作用用,故故又又称称自自发发的细胞介导的细胞毒作用。的细胞介导的细胞毒作用。(2)作作用用:杀杀伤伤肿肿瘤瘤细细胞
14、胞,杀杀伤伤力力比比Kc弱弱。不不依赖抗体,在早期发挥作用。依赖抗体,在早期发挥作用。四、其他免疫细胞四、其他免疫细胞1、嗜酸性粒细胞:表面有、嗜酸性粒细胞:表面有IgE受体,在抗寄生虫感受体,在抗寄生虫感染中起重要作用。染中起重要作用。2、嗜碱性粒细胞:表面有、嗜碱性粒细胞:表面有IgE受体,在受体,在I型变态反型变态反应中起作用。应中起作用。3、红细胞:表面有许多与免疫有关的物质,参与、红细胞:表面有许多与免疫有关的物质,参与免疫调节。免疫调节。第三节第三节免疫相关分子免疫相关分子一、抗体(见抗体部分)一、抗体(见抗体部分)二、补体(见非特异性免疫:补体)二、补体(见非特异性免疫:补体)三
15、、细胞因子(见特异性细胞免疫)三、细胞因子(见特异性细胞免疫)第三章抗原(第三章抗原(Antigen:Ag)第一节第一节抗原的概念抗原的概念刺激机体产生抗体和致敏淋巴细胞刺激机体产生抗体和致敏淋巴细胞(免疫原性免疫原性);与相应抗体、致敏淋巴细胞发生特异性结合与相应抗体、致敏淋巴细胞发生特异性结合反应反应(免疫反应性免疫反应性)。Ag+、Ag-、Agx第二节第二节构成抗原的条件构成抗原的条件一一、异异物物性性:机机体体以以外外的的物物质质。异异物物程程度度越越高高,免免疫疫原原性性越强。越强。异种动物血清异种动物血清异种物质异种物质病原微生物及其外毒素病原微生物及其外毒素人红细胞血型抗原人红细
16、胞血型抗原同种异体物质同种异体物质组织相溶性抗原组织相溶性抗原二、二、大分子物质大分子物质分子量越大,免疫原性越强。分子量越大,免疫原性越强。三、特定结构三、特定结构1、抗抗原原决决定定簇簇:抗抗原原内内部部和和表表面面的的很很多多化化学学活活性基团。性基团。决定抗原免疫原性、免疫反应性。决定抗原免疫原性、免疫反应性。2、载载体体:抗抗原原决决定定簇簇所所依依赖赖的的基基本本结结构构,起起稳稳定抗原决定簇、激活巨噬细胞及免疫记忆作用。定抗原决定簇、激活巨噬细胞及免疫记忆作用。抗原决定簇与抗体结合抗原决定簇与抗体结合第三节第三节抗原的类型抗原的类型一、根据抗原免疫原性分类一、根据抗原免疫原性分类
17、1完完全全抗抗原原:既既具具有有免免疫疫原原性性,又又具具有有特特异异反反应应性性的的抗抗原原。如各种微生物及其毒素、异种动物血清。如各种微生物及其毒素、异种动物血清。2半半抗抗原原:只只具具有有特特异异反反应应性性,不不具具免免疫疫原原性性的的抗抗原原。如如多多糖糖、类类脂脂、药药物物等等,但但半半抗抗原原与与载载体体蛋蛋白白质质结结合合后后具具有有了了免免疫疫原原性性,则则转变成完全抗原,半抗原根据特异反应性是否出现可见反应分:转变成完全抗原,半抗原根据特异反应性是否出现可见反应分:(1)复复合合半半抗抗原原:与与抗抗体体结结合合出出现现可可见见反反应应的的半半抗抗原原。这这种种复复合合抗
18、抗原原具具有有两两个个以以上上的的抗抗原原决决定定簇簇,与与抗抗体体的的结结合合价价为为多多价价,如如细细胞表面的多糖。胞表面的多糖。(2)简单半抗原:与抗体结合不出现可见反应的半抗原。这种简)简单半抗原:与抗体结合不出现可见反应的半抗原。这种简单半抗原只有一个抗原决定簇,与抗体的结合价为单价,如青霉单半抗原只有一个抗原决定簇,与抗体的结合价为单价,如青霉素。这种简单半抗原可抑制抗体与相应的完全抗原或复合半抗原素。这种简单半抗原可抑制抗体与相应的完全抗原或复合半抗原结合,不再出现可见反应,故又称阻抑半抗原。结合,不再出现可见反应,故又称阻抑半抗原。二、根据其刺激机体产生抗体是否需二、根据其刺激
19、机体产生抗体是否需Tc协同分:协同分:1、T细细胞胞依依赖赖性性抗抗原原:又又称称胸胸腺腺依依赖赖性性抗抗原原,这这种种抗抗原原需需要要Tc协协同同才才能能刺刺激激B细细胞胞活活化化,大大多多数抗原均属此类。数抗原均属此类。2、非、非Tc依赖性抗原:又称非胸腺依赖性抗原,依赖性抗原:又称非胸腺依赖性抗原,这种抗原可直接刺激这种抗原可直接刺激B细胞,使之活化,而不需细胞,使之活化,而不需Tc协同,如大肠杆菌脂多糖。协同,如大肠杆菌脂多糖。三、据抗原性质分类三、据抗原性质分类1、天然抗原、天然抗原2、人工抗原:人工化学改造天然抗原。、人工抗原:人工化学改造天然抗原。3、合成抗原:用氨基酸人工合成具
20、抗原性的多肽。、合成抗原:用氨基酸人工合成具抗原性的多肽。四、据抗原来源分类四、据抗原来源分类1、异种抗原:来自不同种属生物。、异种抗原:来自不同种属生物。2、同种异体抗原:血型抗原、组织相容性抗原。、同种异体抗原:血型抗原、组织相容性抗原。3、同种抗原:自身组织。、同种抗原:自身组织。五、据抗原存在部位分类五、据抗原存在部位分类1、表面抗原、表面抗原2、深部抗原、深部抗原六、据临床应用分类六、据临床应用分类1、凝集原、凝集原2、沉淀原、沉淀原3、病毒中和抗原、病毒中和抗原4、免疫保护性抗原、免疫保护性抗原5、血凝素抗原:有血凝性的病毒表面囊膜上的血、血凝素抗原:有血凝性的病毒表面囊膜上的血凝
21、素蛋白抗原。凝素蛋白抗原。第四节第四节重要的抗原重要的抗原一、细菌的重要抗原一、细菌的重要抗原1、菌体抗原(、菌体抗原(O抗原)抗原)2、鞭毛抗原(、鞭毛抗原(H抗原)抗原)3、荚膜抗原、荚膜抗原4、菌毛抗原、菌毛抗原二、病毒的重要抗原二、病毒的重要抗原1、囊膜抗原、囊膜抗原2、衣壳抗原、衣壳抗原3、可溶性抗原:病毒在宿主细胞内增殖释放的内、可溶性抗原:病毒在宿主细胞内增殖释放的内部抗原物质。部抗原物质。三、毒素抗原三、毒素抗原四、寄生虫抗原四、寄生虫抗原五、血型抗原:红细胞膜上存在的同种异型表面抗五、血型抗原:红细胞膜上存在的同种异型表面抗原。原。第四章抗体第四章抗体(Antibody:Ab
22、)Ab+、Ab-、Abx第一节第一节抗体的概念抗体的概念l有有机机体体在在抗抗原原刺刺激激下下产产生生的的,并并能能与与抗抗原原发发生生特特异异性性结结合的一类球蛋白的总称。合的一类球蛋白的总称。l抗血清抗血清:血清中含量最高。血清中含量最高。l-球蛋白球蛋白(丙种球蛋白丙种球蛋白):活性部位位于球蛋白的活性部位位于球蛋白的区。区。l免免疫疫球球蛋蛋白白(Immunoglobulin,Ig):1964年年,将将具具抗抗体体活性以及与抗体有关的球蛋白统称活性以及与抗体有关的球蛋白统称免疫球蛋白免疫球蛋白。lIg对酸、碱、热、光都较敏感,易破坏。对酸、碱、热、光都较敏感,易破坏。第二节第二节抗体产
23、生一般规律抗体产生一般规律一、初次反应:抗原首次进入机体所产生的免疫反应。特一、初次反应:抗原首次进入机体所产生的免疫反应。特点:点:1、有一定潜伏期有一定潜伏期抗原进入机体到血清中出现抗体的时间,一般活病抗原进入机体到血清中出现抗体的时间,一般活病毒毒2天,活的细菌天,活的细菌3-5天,类病素天,类病素2-3周周,蜂胶灭活苗蜂胶灭活苗57天,油苗天,油苗1014天。天。2、抗体量不高抗体量不高,只能达到最大量的,只能达到最大量的20-30%。3、先产生先产生IgM,将消失时,将消失时IgG达最大量,再过达最大量,再过2周出现周出现IgA。二、再次反应二、再次反应首次抗体未消失,相同抗原再次进
24、入所发生的首次抗体未消失,相同抗原再次进入所发生的免疫反应。特点:免疫反应。特点:1、无潜伏期无潜伏期2、抗体量大抗体量大:达初次反应的:达初次反应的10-50倍。倍。3、高峰期维持时间长,下降缓慢高峰期维持时间长,下降缓慢。4、主要是主要是IgG。三次、四次反应同上。不能无限注射抗原,否三次、四次反应同上。不能无限注射抗原,否则发生免疫耐受。则发生免疫耐受。三、回忆反应三、回忆反应首次抗体已消失,相同抗原再次进入所发生的首次抗体已消失,相同抗原再次进入所发生的免疫反应。特点:免疫反应。特点:1、有较短的潜伏期有较短的潜伏期,抗体量急剧上升抗体量急剧上升,2、抗体量很大抗体量很大。3、高峰期维
25、持时间长,下降缓慢高峰期维持时间长,下降缓慢,4、主要是主要是IgG。抗体产生规律图示抗体产生规律图示第三节第三节抗体基本结构和功能抗体基本结构和功能一、抗体分子的基本结构一、抗体分子的基本结构每每个个抗抗体体分分子子由由两两条条相相同同的的重重链链和和两两条条相相同同的的轻轻链链组组成成,重重链链之之间间,轻轻重重链链之之间间,链链内内均均由由二二硫键联结。硫键联结。二、轻链结构二、轻链结构轻链可变区轻链可变区(Variableregionofligntchain:VL)轻链稳定区轻链稳定区(Constantregionofligntchain:CL)。VL中含中含3个高变区。个高变区。三、
26、重链的结构三、重链的结构l重链可变区重链可变区(Variableregionofheavychain:VH),重链稳定区,重链稳定区(Constantregionofheavychain:CH),分别为,分别为CH1、CH2、CH3。lCH2区有补体结合位点,区有补体结合位点,CH2CH3又称又称Fc段。段。VH区含区含3-4个高变区。个高变区。lCH1区与区与CH2区之间的一段多肽链含较多脯氨酸区之间的一段多肽链含较多脯氨酸而不易折叠成立体结构,呈裸露状,但可转动,而不易折叠成立体结构,呈裸露状,但可转动,称枢纽区。称枢纽区。lCH2区虽有补体结合位点,但抗体未与抗原结合区虽有补体结合位点,
27、但抗体未与抗原结合时,抗体呈时,抗体呈”T”状,该位点被掩盖,故不能结状,该位点被掩盖,故不能结合补体而发挥免疫作用,但抗体与抗原结合后,合补体而发挥免疫作用,但抗体与抗原结合后,枢纽区转动,抗体呈枢纽区转动,抗体呈“Y”状,该位点暴露,而状,该位点暴露,而易结合补体。易结合补体。四、抗体的抗原结合部位四、抗体的抗原结合部位由重链高变区和轻链高变区构成与抗原决定簇由重链高变区和轻链高变区构成与抗原决定簇表面互补的分子构型而与抗原结合的,一个抗体表面互补的分子构型而与抗原结合的,一个抗体分子有两个抗原结合位点。分子有两个抗原结合位点。第四节第四节抗体种类抗体种类1、类类:根根据据CH氨氨基基酸酸
28、组组成成不不同同分分:IgG、IgA、IgM、IgD、IgE。2、亚类:根据、亚类:根据CH微细差异分:微细差异分:IgG1、IgG2、IgG3、IgG4IgA1、IgA2IgM1、IgM2IgD和和IgE还未发现亚类。还未发现亚类。第五节第五节各种抗体特性各种抗体特性一、一、IgG一个抗体分子构成。机体主要抗感染抗体。一个抗体分子构成。机体主要抗感染抗体。占血清占血清Ig总量的总量的75-80%。人的人的IgG能通过胎盘传给胎儿,但家畜不能,能通过胎盘传给胎儿,但家畜不能,但人畜的初乳中但人畜的初乳中IgG含量均较高,家畜从初乳获含量均较高,家畜从初乳获得母源得母源IgG。G1、G2、G3、
29、G4四个亚类。四个亚类。二、IgA1、血血清清型型IgA:血血清清中中含含量量仅仅次次于于IgG,约约占占5-25%。主主要要为为IgA1(占占血血清清IgA总总量量的的约约80%)。IgA1由由一一个个抗体分子构成。抗体分子构成。2、分分泌泌型型IgA:存存在在于于唾唾液液、泪泪液液、初初乳乳、呼呼吸吸道道、胃胃肠肠道道、胃胃液液等等分分泌泌液液中中,是是机机体体粘粘膜膜局局部部抗抗感感染染的的重重要要因因素素,又又称称局局部部抗抗体体。其其含含量量比比血血清清型型IgA高高6-8倍倍,主主要要为为IgA2,由由两两个个抗抗体体分分子子和和一一个个分分泌泌片片,一一个个J链链组组成成,抗感染
30、作用比血清型抗感染作用比血清型IgA强。强。三、IgM主要存在于血清,以五聚体通过主要存在于血清,以五聚体通过J链联结形成。链联结形成。常表现五个抗原结合价。常表现五个抗原结合价。在凝结作用,活化补体,溶菌作用等方面比在凝结作用,活化补体,溶菌作用等方面比IgG大大250倍。倍。感染初期起重要作用。感染初期起重要作用。四、IgD只在人、小白鼠中发现少量的游离只在人、小白鼠中发现少量的游离IgD,其它,其它动物未发现,量少,目前未发现具免疫活性。动物未发现,量少,目前未发现具免疫活性。五、IgE为单体,正常人畜为单体,正常人畜IgE含量很低,含量很低,I型变态反应型变态反应时显著升高。时显著升高
31、。五种抗体模式图五种抗体模式图第六节第六节抗体抗原性抗体抗原性(一)概念(一)概念:指抗体进入机体后,可作为抗原刺激指抗体进入机体后,可作为抗原刺激机体产生抗体,称为抗抗体。这种抗抗体能与相机体产生抗体,称为抗抗体。这种抗抗体能与相应的抗体发生结合产生特异性免疫反应。应的抗体发生结合产生特异性免疫反应。A种动物血清免疫种动物血清免疫B种动物产生的抗抗体,能种动物产生的抗抗体,能与与A种动物产生的各种抗体特异性结合。种动物产生的各种抗体特异性结合。第七节第七节抗体生物学活性抗体生物学活性一、特异性结合抗原一、特异性结合抗原:结构互补,决定其结合的特结构互补,决定其结合的特异性。异性。二、激活补体
32、二、激活补体G1、G2、G3、M:激活补体经典途径。:激活补体经典途径。G4、A、E、D:激活补体替代途径。:激活补体替代途径。三、细胞结合三、细胞结合1、IgG结合结合Kc:ADCC2、IgE结结合合肥肥大大细细胞胞、嗜嗜碱碱性性粒粒细细胞胞:I型型变变态态反应。反应。3、结合吞噬细胞:调理作用。、结合吞噬细胞:调理作用。第八节第八节单克隆抗体单克隆抗体(Monoclonalantibody:McAb)一、单克隆抗体的概念一、单克隆抗体的概念、概概念念:由由一一个个抗抗原原决决定定簇簇刺刺激激产产生生的的,只只与与该该抗抗原原决决定定簇簇特特异异结合的抗体。结合的抗体。、Ab与与多多克克隆隆
33、抗抗体体比比较较:多多克克隆隆抗抗体体是是由由多多种种抗抗原原决决定定簇簇刺刺激激多多种种Bc产产生生的的,具具有有高高度度的的异异质质性性,目目前前为为止止,还还不不能能用用任任何何一一种种方方法法提提纯纯只只针针对对某某一一特特定定抗抗原原决决定定簇簇的的同同质质性性抗抗体体。而而McAb是是由由一一个个Bc克克隆隆接接受受一一个个抗抗原原决决定定簇簇刺刺激激而而产产生生的的抗抗体体。因因此此,具具有有纯纯度度高高、专专一一性性强强、重重复复性性好好,且且能能在在动动物物体体内内、外外持持续续产产生生同质性抗体的优点。同质性抗体的优点。二、单克隆抗体技术二、单克隆抗体技术把把产产生生特特定
34、定抗抗体体的的Bc与与能能无无限限生生长长的的骨骨髓髓瘤瘤细细胞胞融融合合,形形成成Bc与与骨骨髓髓瘤瘤细细胞胞的的杂杂交交瘤瘤细细胞胞,并并通通过过克克隆隆化化杂杂交交瘤瘤细细胞胞后后扩扩大大培培养养所所产产生生的的抗抗体称单克隆抗体。体称单克隆抗体。、杂交瘤细胞制备及抗体检测:、杂交瘤细胞制备及抗体检测:()亲本细胞()亲本细胞A、免疫小鼠脾细胞、免疫小鼠脾细胞B、骨髓瘤细胞;无次黄嘌呤、骨髓瘤细胞;无次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸糖基鸟嘌呤磷酸糖基转化酶(转化酶(HGPRT酶)。酶)。C、饲养细胞;小鼠腹腔巨噬细胞或胸腺细胞。、饲养细胞;小鼠腹腔巨噬细胞或胸腺细胞。(2)选择培养基:)选择培养基:
35、HAT培养基,培养基,H为次黄嘌呤,为次黄嘌呤,T为胸腺嘧啶核酸,为胸腺嘧啶核酸,A为氨基嘌呤为氨基嘌呤。(3)细胞融合:细胞融合剂:)细胞融合:细胞融合剂:50%PEG。HAT选择培养。选择培养。HAT选择原理选择原理嘌呤合成旁路:次黄嘌呤(嘌呤合成旁路:次黄嘌呤(H)谷氨酰胺)谷氨酰胺HGPRT酶酶多种氨基酸多种氨基酸次黄嘌呤核苷酸黄嘌呤核苷酸次黄嘌呤核苷酸黄嘌呤核苷酸鸟嘌呤核苷酸鸟嘌呤核苷酸四氢叶酸四氢叶酸二氢叶酸二氢叶酸二氢叶酸还原酶二氢叶酸还原酶核酸合成核酸合成DNA主要途径主要途径氨基喋呤(氨基喋呤(A)尿核苷单磷酸尿核苷单磷酸胸腺嘧啶脱氧核苷酸胸腺嘧啶脱氧核苷酸嘧啶合成旁路:胸腺
36、嘧啶核苷(嘧啶合成旁路:胸腺嘧啶核苷(T)胸腺嘧啶核苷激酶胸腺嘧啶核苷激酶(4)抗体检测:小孔上清是否有特异性抗体。)抗体检测:小孔上清是否有特异性抗体。2、杂交瘤细胞的克隆化:有限稀释法,、杂交瘤细胞的克隆化:有限稀释法,710个细个细胞胞/ml。克隆。克隆2-3次。次。3、单克隆抗体的生产、单克隆抗体的生产(1)体体外外法法:克克隆隆的的阳阳性性细细胞胞用用完完全全1640进进行行细细胞胞扩扩大大培培养养,上上清清液液中中即即含含McAb。浓浓度度不不高高,只只能能达达到到10g/ml。(2)体内法:克隆的阳性细胞注射到同系小鼠腹腔,)体内法:克隆的阳性细胞注射到同系小鼠腹腔,710天后,
37、腹水和血液中含大量天后,腹水和血液中含大量McAb,浓度高,可达,浓度高,可达510mg/ml。但含有其它蛋白,须进一步纯化。但含有其它蛋白,须进一步纯化。4、细胞冷冻及复苏、细胞冷冻及复苏(1)冷冷冻冻:缓缓冻冻。加加入入冷冷的的含含10%二二甲甲基基亚亚砜砜的的完完全全1640。每。每5分钟下降分钟下降5,直至完全浸没在液氮中。,直至完全浸没在液氮中。(2)复苏:速融。立即置于)复苏:速融。立即置于37水浴,使之迅速融化,水浴,使之迅速融化,再扩大培养。再扩大培养。三、单克隆抗体的应用1、用于人、畜传染病、寄生虫病的诊断。、用于人、畜传染病、寄生虫病的诊断。2、用于人、畜传染病、寄生虫病的
38、预防和治疗。、用于人、畜传染病、寄生虫病的预防和治疗。3、用用于于抗抗原原结结构构的的研研究究:针针对对某某一一抗抗原原可可制制备备出出针针对对不不同同抗抗原原决决定定簇簇的的一一系系列列McAb,从从而而研研究究该该抗抗原原的的结结构构,以以及及与与该该抗抗原原关关系系密密切切的的其其它它抗抗原原在在结结构构上上的异同,如猪瘟强、弱毒有那些抗原决定簇是相同的,那些是不同的。的异同,如猪瘟强、弱毒有那些抗原决定簇是相同的,那些是不同的。4、用于微生物的分型。、用于微生物的分型。5、在、在DNA重组技术中的应用重组技术中的应用6、用、用McAb制备生物导弹的应用制备生物导弹的应用7、McAb作为
39、受体研究的工具作为受体研究的工具8、其他应用:人类遗传学、酶遗传学方面应用。、其他应用:人类遗传学、酶遗传学方面应用。第五章第五章细胞因子细胞因子第一节第一节细胞因子的概念细胞因子的概念细胞因子细胞因子(cytokinc:CK)是指一类由免疫细胞是指一类由免疫细胞(淋巴细胞、单核巨噬细胞)和相关细胞(成纤淋巴细胞、单核巨噬细胞)和相关细胞(成纤维细胞、内皮细胞)产生的、调节细胞功能的、维细胞、内皮细胞)产生的、调节细胞功能的、高活性、多功能多肽或蛋白质分子。不包括免疫高活性、多功能多肽或蛋白质分子。不包括免疫球蛋的、补体和一般生理细胞产物。球蛋的、补体和一般生理细胞产物。第二节第二节细胞因子共
40、同特点细胞因子共同特点一、细胞因子产生的多源性一、细胞因子产生的多源性一种细胞因子可由多种细胞产生;一种细胞因子可由多种细胞产生;一种细胞可逆生多种细胞因子。一种细胞可逆生多种细胞因子。二、生物学功能的多样性二、生物学功能的多样性一种细胞因子可具多种生物学功能,作用于多一种细胞因子可具多种生物学功能,作用于多种靶细胞;种靶细胞;不同细胞因子可对同种靶细胞产生相同的效应。不同细胞因子可对同种靶细胞产生相同的效应。3、生物学活力的高效性:、生物学活力的高效性:10-12mol/l即可发挥显著即可发挥显著的生物学效应。的生物学效应。4、合成分泌的快速性:产生细胞受刺激后,迅速、合成分泌的快速性:产生
41、细胞受刺激后,迅速合成,快速释放到细胞外发挥生物学效应。合成,快速释放到细胞外发挥生物学效应。5、生物学作用的双重性:、生物学作用的双重性:对机体有利:免疫调节、刺激造血、抗病毒、抗对机体有利:免疫调节、刺激造血、抗病毒、抗肿瘤肿瘤对机体不利:引起炎症。对机体不利:引起炎症。第三节第三节细胞因子的种类细胞因子的种类一、一、白白细胞介素(胞介素(interleukin,IL)是由活化的是由活化的单核巨噬核巨噬细胞或淋巴胞或淋巴细胞胞产生的生的一一类主要主要负责信号信号传递、联络白白细胞群、胞群、调节细胞的活化、增殖和分化作用的胞的活化、增殖和分化作用的细胞因子。胞因子。IL-1、IL-2.、IL
42、25。二、淋巴因子二、淋巴因子(一)肿瘤坏死因子(一)肿瘤坏死因子(tumornecrosisfactor:TNF)糖蛋白糖蛋白TNF-:LPS剌激剌激单核巨噬核巨噬细胞胞产生,抗生,抗肿瘤、免疫瘤、免疫调节作用。作用。TNF-:激活的:激活的T T细胞胞产生,生,杀伤肿瘤瘤细胞和移植的胞和移植的异体异体组织细胞。胞。(二)集落剌激因子:是作用于不同公化(二)集落剌激因子:是作用于不同公化阶段的骨髓造血段的骨髓造血前体前体细胞,促胞,促进其增殖和分化以形成各种血其增殖和分化以形成各种血细胞的蛋白胞的蛋白质。(三)转化生长因子(三)转化生长因子:调节细胞生长和分化的细:调节细胞生长和分化的细胞因
43、子。胞因子。(四)趋化因子:趋化中性粒细胞、单核细胞到感(四)趋化因子:趋化中性粒细胞、单核细胞到感染部位聚集,发挥吞噬和杀菌功能。染部位聚集,发挥吞噬和杀菌功能。三、干扰素(三、干扰素(IFN)干扰素(干扰素(interferon:IFN)是由干扰素诱生剂诱导动是由干扰素诱生剂诱导动物细胞产生的一类具高活性、多功能的可溶性糖蛋白。物细胞产生的一类具高活性、多功能的可溶性糖蛋白。IFN生物学活性具有种属特异性,即某种生物细胞产生物学活性具有种属特异性,即某种生物细胞产生的生的IFN,只作用于同种生物细胞。,只作用于同种生物细胞。(一)(一)I型型IFN:分:分IFN-、IFN-。具有广具有广谱
44、抗病毒、抗抗病毒、抗肿瘤、免疫瘤、免疫调节作用。作用。(二)(二)II型型IFN:即:即IFN-。生物学活性广,但比。生物学活性广,但比I型弱。型弱。第六章第六章免疫应答反应免疫应答反应第一节第一节非特异性免疫应答非特异性免疫应答一、非特异性免疫的概念和特点一、非特异性免疫的概念和特点动物在长期的进化过程中,在同外来侵入者、内动物在长期的进化过程中,在同外来侵入者、内部破坏者的斗争中所建立的、对多种异物都能发挥部破坏者的斗争中所建立的、对多种异物都能发挥防御作用的免疫力,称为非特异性免疫。防御作用的免疫力,称为非特异性免疫。特点:特点:1、作用发生迅速。、作用发生迅速。2、作用范围广、不具特异
45、性。、作用范围广、不具特异性。3、受遗传控制,很稳定。、受遗传控制,很稳定。4、作用强度弱,对毒力强、数量大的微生物作用小。、作用强度弱,对毒力强、数量大的微生物作用小。第二节、机体的防御屏障第二节、机体的防御屏障(一)皮肤粘膜屏障(一)皮肤粘膜屏障1、作用:、作用:阻止病原微生物进入机体内。但个别微生阻止病原微生物进入机体内。但个别微生物(布氏杆菌、鼻疽杆菌等)例外。物(布氏杆菌、鼻疽杆菌等)例外。2、作用机理、作用机理(1)皮肤角质层的机械阻挡作用。)皮肤角质层的机械阻挡作用。(2)正常菌群的拮抗作用。)正常菌群的拮抗作用。(3)特殊结构(鼻毛、气管纤毛、粘液)的机械排除作用。)特殊结构(
46、鼻毛、气管纤毛、粘液)的机械排除作用。(4)胃液、唾液、乳汁、泪液中乳酸、溶菌酶的抑菌和杀菌)胃液、唾液、乳汁、泪液中乳酸、溶菌酶的抑菌和杀菌作用。作用。(二)血脑屏障(二)血脑屏障1、作用:保护大脑、免除血液中病原微生物对大脑的、作用:保护大脑、免除血液中病原微生物对大脑的侵袭作用。侵袭作用。2、机理:大脑毛细血管紧密排列的内皮细胞层通过胞、机理:大脑毛细血管紧密排列的内皮细胞层通过胞饮作用,吞噬和消灭异物饮作用,吞噬和消灭异物。(三)血胎屏障(三)血胎屏障1、作用:阻止母体病原微生物进入胎儿,保护胎儿。、作用:阻止母体病原微生物进入胎儿,保护胎儿。但个别微生物(布氏杆菌、沙门氏菌)例外。但
47、个别微生物(布氏杆菌、沙门氏菌)例外。2、机理:由母体子宫内膜、胎儿绒毛尿囊膜组成屏障、机理:由母体子宫内膜、胎儿绒毛尿囊膜组成屏障结构,阻止病原微生物从母体进入胎儿。结构,阻止病原微生物从母体进入胎儿。第二节第二节参与非特异性免疫的细胞参与非特异性免疫的细胞一、非特异免疫细胞种类一、非特异免疫细胞种类(一)吞噬细胞:单核细胞、巨噬细胞、嗜中性粒(一)吞噬细胞:单核细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞细胞(二)(二)KC(三)(三)NKC(四)嗜酸性粒细胞(四)嗜酸性粒细胞(五)嗜碱性粒细胞(五)嗜碱性粒细胞二、非特异免疫细胞的功能二、非特异免疫细胞的功能(一)趋化作用(一)趋化作用(二)识别作用(二
48、)识别作用(三)吞噬作用(三)吞噬作用(四)消化杀灭作用(四)消化杀灭作用第三节第三节补体系统补体系统一、一、补体系统的组成补体系统的组成1、补体、补体存在于正常人、动物的新鲜血清中的一种球存在于正常人、动物的新鲜血清中的一种球蛋白。蛋白。C1C9,C1q、C1r、C1s。C12、备解素系统、备解素系统l始动因子(始动因子(IF)l备解素(备解素(P)lC3激活剂前体(激活剂前体(B因子)因子)lC3激活剂前体转化酶(激活剂前体转化酶(D因子)因子)3、补体调节因子、补体调节因子lC1抑制剂抑制剂lC3灭活剂灭活剂lC6灭活剂灭活剂lB因子抑制剂因子抑制剂l过敏毒素抑制剂过敏毒素抑制剂二、补体
49、激活的途径二、补体激活的途径1、C1途径。途径。(1)激激活活经经典典途途径径的的抗抗体体:IgG1、IgG2、IgG3、IgM的的Fc段上有补体结合位点,能激活此途径。段上有补体结合位点,能激活此途径。(2)激活过)激活过程程补体激活过程补体激活过程图解图解2、C3途径途径(1)激激活活旁旁路路途途径径的的物物质质:G-菌菌内内毒毒素素、酵酵母母多多糖、菊糖、糖、菊糖、IgG4、IgA。(2)特点)特点不不需需要要C1、C2、C4,所所以以机机体体中中缺缺乏乏C1、C2、C4时,补体同样能被激活;时,补体同样能被激活;对对靶靶细细胞胞的的杀杀灭灭作作用用比比经经典典途途径径弱弱;感感染染早早
50、期期抗体形成前发挥较大作用。抗体形成前发挥较大作用。(3)旁路途径激活过程旁路途径激活过程G菌内毒素、菌内毒素、酵母多糖、菊酵母多糖、菊IFDBBbC3C3bC3bBb糖、糖、IgG4、IgABaC3aC3bBbPC9C8C7C6C53C3bBb三、补体系统的调控三、补体系统的调控1、内源性调控:补体半衰期短,如、内源性调控:补体半衰期短,如C3b仅仅7分钟。分钟。2、外源性调控、外源性调控(1)C1抑制剂:灭活抑制剂:灭活C1s。(2)C3灭活剂:灭活灭活剂:灭活C3b。(3)C6灭活剂:灭活灭活剂:灭活C6。(4)B因子抑制剂:灭活因子抑制剂:灭活B因子。因子。(5)过敏毒素抑制剂:)过敏
51、毒素抑制剂:C3a和和C5a,称为,称为过敏毒素过敏毒素。过。过敏毒素抑制剂可将其灭活。敏毒素抑制剂可将其灭活。四、补体系统功能四、补体系统功能1、溶菌和杀菌补体、溶菌和杀菌补体细菌相应抗体细菌抗体复合物细菌彻底细菌相应抗体细菌抗体复合物细菌彻底溶解溶解死亡死亡表面结合、细菌仅失去致病表面结合、细菌仅失去致病力、仍存活,是可恢复的力、仍存活,是可恢复的2、中和病毒:病毒、中和病毒:病毒-Ab-C3、调理作用:、调理作用:Ag-Ab-C-吞噬细胞吞噬细胞4、免疫粘附作用:、免疫粘附作用:Ag-Ab-C-红细胞、白细胞、血小板红细胞、白细胞、血小板5、过过敏敏毒毒素素作作用用:适适量量的的C3a、
52、C5a趋趋化化吸吸引引吞吞噬噬细细胞胞在局部的杀伤作用。在局部的杀伤作用。第四节、正常体液中抗菌物质第四节、正常体液中抗菌物质一、溶菌酶一、溶菌酶破坏细菌细胞壁粘肽的分子结构。破坏细菌细胞壁粘肽的分子结构。对对G+菌杀伤力强,对菌杀伤力强,对G-菌杀伤力弱,对病毒无作用。菌杀伤力弱,对病毒无作用。二、干扰素二、干扰素1、概概念念:机机体体细细胞胞受受到到病病毒毒、某某些些细细菌菌、干干扰扰素素诱诱导导剂剂等等作作用下产生的小分子糖蛋白。用下产生的小分子糖蛋白。2、作用:干扰和抑制病毒繁殖而间接杀灭病毒。、作用:干扰和抑制病毒繁殖而间接杀灭病毒。3、机机理理:刺刺激激细细胞胞产产生生抗抗病病毒毒
53、蛋蛋白白,从从而而抑抑制制合合成成病病毒毒所所需需的酶、核酸、结构蛋白合成,病毒失去繁殖的原料。的酶、核酸、结构蛋白合成,病毒失去繁殖的原料。三、补体三、补体第五节第五节炎症反应炎症反应炎症反应是一种病理过程。炎症反应是一种病理过程。炎症反应也是一种防御和消灭异物的积极的炎症反应也是一种防御和消灭异物的积极的非特异性免疫反应。非特异性免疫反应。第二节特异性免疫应答第二节特异性免疫应答 一、特异性免疫应答的概念一、特异性免疫应答的概念动物机体免疫系统受到抗原刺激后,免疫细动物机体免疫系统受到抗原刺激后,免疫细胞对抗原分子识别并产生系列免疫连锁反应、表胞对抗原分子识别并产生系列免疫连锁反应、表现一
54、定生物学效应的过程。现一定生物学效应的过程。二、特异性免疫的特点及类型二、特异性免疫的特点及类型(一)特点(一)特点1、特异性:只针对某种特异抗原。、特异性:只针对某种特异抗原。2、免疫期:数月至数年至终生。、免疫期:数月至数年至终生。3、免疫记忆、免疫记忆4、后天获得、后天获得(二)类型(二)类型1、特异性细胞免疫应答:、特异性细胞免疫应答:TC负责。负责。2、特异性体液免疫应答:、特异性体液免疫应答:BC负责。负责。三、特异性细胞免疫应答三、特异性细胞免疫应答Tc接受抗原刺激产生的免疫反应,称为细胞接受抗原刺激产生的免疫反应,称为细胞免疫应答。免疫应答。细胞内寄生菌、立克次氏体、肿瘤细胞、
55、病细胞内寄生菌、立克次氏体、肿瘤细胞、病毒寄生细胞,多以细胞免疫为主。毒寄生细胞,多以细胞免疫为主。(一)细胞免疫过程(一)细胞免疫过程1、感应阶段、感应阶段抗原递呈细胞对抗原捕获、加工、递呈,抗原递呈细胞对抗原捕获、加工、递呈,Tc识别抗识别抗原的阶段。在周围免疫器官中进行。原的阶段。在周围免疫器官中进行。(1)抗原加工与递呈)抗原加工与递呈 外源性抗原递呈:外源性抗原递呈:带有带有MHCII类分子的细胞(单核巨类分子的细胞(单核巨噬细胞、树状突细胞、噬细胞、树状突细胞、BC、朗罕氏细胞),主要对外源性抗原、朗罕氏细胞),主要对外源性抗原递呈。巨噬细胞随机地或通过递呈。巨噬细胞随机地或通过F
56、cR、C3bR捕获抗原,以吞噬、捕获抗原,以吞噬、吞饮、吸附、调理等方式摄入抗原,抗原与溶酶体形成吞噬溶酶吞饮、吸附、调理等方式摄入抗原,抗原与溶酶体形成吞噬溶酶体后被水解成抗原多肽,与内质网转运来的体后被水解成抗原多肽,与内质网转运来的MHCII类分子结合类分子结合成抗原肽成抗原肽MHCII类分子复合物,由高尔基体运输至细胞表面,类分子复合物,由高尔基体运输至细胞表面,供供CD4的的TH细胞识别。细胞识别。内源性抗原递呈内源性抗原递呈带有带有MHCI类分子的细胞(所有有核细胞,如受病毒或胞内类分子的细胞(所有有核细胞,如受病毒或胞内菌感染的细胞、肿瘤细胞),主要对内源性抗原递呈。内源性抗菌感
57、染的细胞、肿瘤细胞),主要对内源性抗原递呈。内源性抗原经递呈细胞处理后,形成约原经递呈细胞处理后,形成约9个氨基酸的抗原肽,结合于个氨基酸的抗原肽,结合于MHCI类分子的肽结合区,形成肽类分子的肽结合区,形成肽MHCI类分子复合物,由高尔基类分子复合物,由高尔基体运输至细胞表面,供体运输至细胞表面,供CD8的的CTL细胞识别。细胞识别。(2)TC对抗原识别对抗原识别TH细胞对外源抗原的识别细胞对外源抗原的识别:TH细胞依靠其细胞表面细胞依靠其细胞表面的抗原受体的抗原受体TCR,识别抗原肽,识别抗原肽MHCII类分子复合物。类分子复合物。CD3、CD4、CD2、CD58、CD11a、CD54、C
58、D28、CD80等,是等,是TH识别抗原的共刺激信号。识别抗原的共刺激信号。CTL细胞对内源抗原的识别细胞对内源抗原的识别:CTL细胞依靠其细胞细胞依靠其细胞表面的抗原受体表面的抗原受体TCR,识别靶细胞抗原肽,识别靶细胞抗原肽MHCI类分类分子复合物,直接杀伤靶细胞。子复合物,直接杀伤靶细胞。2、反应阶段反应阶段(reactive stage)TH识别抗原后活化,转化为识别抗原后活化,转化为致敏淋巴细胞致敏淋巴细胞,再转化,再转化为为淋巴母细胞。淋巴母细胞。转化过程中,分泌系列细胞因子(如转化过程中,分泌系列细胞因子(如IL2、IL4等),等),在在IL2作用下,一部分转化为作用下,一部分转
59、化为效应效应TC(CTL、TD),发挥细胞免疫效应。),发挥细胞免疫效应。另一部分转化为另一部分转化为记忆记忆TC,不再继续分化,在机体不再继续分化,在机体中保持记忆,其寿命为数月或数年。中保持记忆,其寿命为数月或数年。3、效应阶段效应阶段(effective stage)(1)TK的的细细胞胞毒毒作作用用:经经活活化化的的TH产产生生的的IL2等细胞因子的活化,具有了杀伤力。等细胞因子的活化,具有了杀伤力。(2)TK释放释放穿孔素穿孔素,导致靶细胞溶解;释放,导致靶细胞溶解;释放淋巴毒素淋巴毒素,与靶细胞表面的相应受体结合,诱导,与靶细胞表面的相应受体结合,诱导靶细胞自杀。一个靶细胞自杀。一
60、个TK细胞在数小时内可连继杀细胞在数小时内可连继杀伤数十个靶细胞。伤数十个靶细胞。(3)细胞因子的作用)细胞因子的作用干扰素(干扰素(IFN)白白细胞介素(胞介素(interleukin,IL)(二)细胞免疫作用(二)细胞免疫作用1、抗感染作用、抗感染作用(1)对对胞胞内内菌菌(结结核核、布布氏氏、李李氏氏、沙沙氏氏、马马鼻鼻疽疽)的的抗感染作用。抗感染作用。(2)对病毒的抗感染作用。)对病毒的抗感染作用。(3)对真菌、寄生虫抗感染作用。)对真菌、寄生虫抗感染作用。2、抗肿瘤作用:、抗肿瘤作用:CTL、肿瘤坏死因子、穿孔素的作用。、肿瘤坏死因子、穿孔素的作用。3、免疫损伤作用、免疫损伤作用(1
61、)引起)引起型变态反应:型变态反应:TD细胞与淋巴因子引起。细胞与淋巴因子引起。(2)移植排斥反应)移植排斥反应(3)自身免疫病)自身免疫病细胞免疫应答图示细胞免疫应答图示四、特异性体液免疫四、特异性体液免疫应答应答Bc接受抗原刺激后引起的免疫反应。接受抗原刺激后引起的免疫反应。(一)体液免疫过程(一)体液免疫过程1、感应阶段、感应阶段指抗原递呈细胞对抗原捕获、加工、递指抗原递呈细胞对抗原捕获、加工、递呈,呈,Bc识别抗原的阶段。在周围免疫器官中进行。识别抗原的阶段。在周围免疫器官中进行。(1)抗原加工与递呈:同细胞免疫应答。)抗原加工与递呈:同细胞免疫应答。(2)BC对抗原的识别对抗原的识别
62、BC对对TI抗原(非胸腺依赖抗原)的识别抗原(非胸腺依赖抗原)的识别:TI1型抗型抗原(如细菌原(如细菌LPS、多聚鞭毛素),在高浓度时与、多聚鞭毛素),在高浓度时与BC的丝的丝裂原受体结合,而活化大多数裂原受体结合,而活化大多数BC;在低浓度时被;在低浓度时被BC表表面抗原受体识别,并将它们聚集于面抗原受体识别,并将它们聚集于BC表面而活化表面而活化BC。TI2型抗原(如肺炎链球菌多糖、型抗原(如肺炎链球菌多糖、D氨基酸聚合物),氨基酸聚合物),具有适当间隔的、高度重复的决定簇,能与高亲和力的具有适当间隔的、高度重复的决定簇,能与高亲和力的BC的的BCR交联而使交联而使BC活化。活化。BC对
63、对TD抗原(胸腺依赖抗原)的识别抗原(胸腺依赖抗原)的识别大部分抗原属大部分抗原属TD抗原,经过巨噬细胞处理抗原,经过巨噬细胞处理和递呈的抗原肽上含有两个抗原决定簇,一是供和递呈的抗原肽上含有两个抗原决定簇,一是供TH识别的载体决定簇,二是供识别的载体决定簇,二是供BC识别的抗原表识别的抗原表位(抗原决定簇)。巨噬细胞对抗原处理后递呈位(抗原决定簇)。巨噬细胞对抗原处理后递呈给给TH,BC识别识别TH上的抗原。上的抗原。2、反应阶段反应阶段无无活活性性的的Bc在在第第二二信信号号刺刺激激下下活活化化,第第一一信信号号是是BC与与TH接接触触而而识识别别抗抗原原决决定定簇簇;第第二二信信号号为为
64、活活化化的的TH产产生生的的IL4和和巨巨噬细胞释放的噬细胞释放的IL1。活活化化的的BC增增殖殖分分化化为为浆浆母母细细胞胞,多多数数再再分分化化成成浆浆细细胞胞,少少数数分化成记忆分化成记忆Bc,前者产生抗体,后者保持记忆。,前者产生抗体,后者保持记忆。TI抗抗原原:主主要要产产生生IgM,IgG很很少少,不不分分化化出出记记忆忆Bc,缺缺乏乏免疫记忆。免疫记忆。TD抗抗原原:先先IgM,后后IgG、IgA。分分化化出出记记忆忆Bc,有有免免疫疫记记忆。忆。3、效应阶段效应阶段指浆细胞产生抗体进入血循环或粘膜表面,发挥作用的阶段。指浆细胞产生抗体进入血循环或粘膜表面,发挥作用的阶段。抗体作
65、用特点:抗体作用特点:(1)高度特异性:只作用于相应的抗原,甚至抗原决定簇。)高度特异性:只作用于相应的抗原,甚至抗原决定簇。(2)分工合作)分工合作IgM:早期起作用。:早期起作用。IgG:主要对抗细菌,中和病毒和毒素。:主要对抗细菌,中和病毒和毒素。IgA:局部抗感染作用。:局部抗感染作用。(3)作用方式多样性作用方式多样性A、中和作用中和作用:中和病毒和毒素。:中和病毒和毒素。B、凝集作用凝集作用:凝集细菌。:凝集细菌。C、ADCC效应效应D、调理作用调理作用:促进吞噬功能。:促进吞噬功能。E、溶细胞作用溶细胞作用:抗体与细胞性抗原结合,活化补体,:抗体与细胞性抗原结合,活化补体,使细胞
66、溶解。使细胞溶解。F、免疫粘联作用免疫粘联作用:形成抗原抗体补体复合物,与红、:形成抗原抗体补体复合物,与红、白细胞、血小板的补体受体结合,彻底消灭抗原白细胞、血小板的补体受体结合,彻底消灭抗原的作用。的作用。(4)作用不彻底性:)作用不彻底性:(5)作作用用双双重重性性:消消灭灭抗抗原原性性异异物物对对机机体体有有利利;引引起起炎炎症症、组组织织坏坏死死(、型型变变态态反反应应),对机体不利。对机体不利。体液免疫过程体液免疫过程第七章第七章抗感染免疫抗感染免疫第一节第一节概念概念1、显显性性感感染染:微微生生物物毒毒力力大大于于机机体体抵抵抗抗力力,表表现现一定症状和病理变化。一定症状和病理
67、变化。2、隐隐性性感感染染:微微生生物物毒毒力力与与机机体体抵抵抗抗力力相相对对平平衡衡,不表现症状,有病理变化。不表现症状,有病理变化。3、抗传染免疫:微生物毒力小于机体抵抗力,不、抗传染免疫:微生物毒力小于机体抵抗力,不表现症状和病理变化。称抗传染免疫。表现症状和病理变化。称抗传染免疫。第二节第二节抗病毒感染免疫抗病毒感染免疫一、非特异性免疫抗抗病毒感染一、非特异性免疫抗抗病毒感染1、种属免疫(遗传免疫)、种属免疫(遗传免疫)2、吞噬细胞的吞噬作用、吞噬细胞的吞噬作用3、宿主年龄的抗病毒感染作用、宿主年龄的抗病毒感染作用4、皮肤粘膜的屏障作用、皮肤粘膜的屏障作用5、干扰素的抗病毒作用、干扰
68、素的抗病毒作用6、细胞因子的抗病毒作用、细胞因子的抗病毒作用二、特异性免疫抗病毒感染二、特异性免疫抗病毒感染(一)体液免疫抗病毒感染(一)体液免疫抗病毒感染中和抗体、血凝抑制抗体、补体结合抗体。中和抗体、血凝抑制抗体、补体结合抗体。(二)细胞免疫抗病毒感染(二)细胞免疫抗病毒感染细细胞胞毒毒作作用用:主主要要对对寄寄生生病病毒毒的的细细胞胞起起杀杀伤伤作作用。用。三、病毒逃逸机体免疫反应的方式三、病毒逃逸机体免疫反应的方式1、抗原变异或产生大量血清型不同的病毒株。、抗原变异或产生大量血清型不同的病毒株。2、抑制免疫应答、抑制免疫应答3、诱导免疫耐受:先天或幼龄感染后导致免疫耐、诱导免疫耐受:先
69、天或幼龄感染后导致免疫耐受。受。4、免疫选择:对免疫监视敏感的病毒被杀灭,不、免疫选择:对免疫监视敏感的病毒被杀灭,不敏感的存活下来。敏感的存活下来。第三节抗细菌感染免疫第三节抗细菌感染免疫一、抗胞外菌免疫一、抗胞外菌免疫1、化化脓脓性性球球菌菌:如如葡葡萄萄球球菌菌、链链球球菌菌,以以吞吞噬噬细胞、抗体发挥主要作用。细胞、抗体发挥主要作用。2、毒毒素素致致病病菌菌:主主要要以以抗抗毒毒素素发发挥挥作作用用,如如破破伤风梭菌。伤风梭菌。3、其其它它胞胞外外寄寄生生菌菌:如如大大肠肠杆杆菌菌、沙沙门门氏氏菌菌等等,主要以吞噬细胞、抗体、补体发挥抗传染作用。主要以吞噬细胞、抗体、补体发挥抗传染作用
70、。(二)抗胞内菌免疫(二)抗胞内菌免疫主要以细胞免疫、吞噬细胞发挥抗传染作用,主要以细胞免疫、吞噬细胞发挥抗传染作用,如结核杆菌、布氏杆菌等。如结核杆菌、布氏杆菌等。第八章免疫防治第八章免疫防治第一节第一节机体获得免疫力的方式机体获得免疫力的方式天然自动免疫:患传染病,隐性传染天然自动免疫:患传染病,隐性传染自动免疫自动免疫人工自动免疫:接种菌苗、疫苗、人工自动免疫:接种菌苗、疫苗、类毒素类毒素获得性免疫获得性免疫天然被动免疫:胎盘、初乳中母源抗体天然被动免疫:胎盘、初乳中母源抗体被动免疫被动免疫人工被动免疫:免疫血清、丙种球蛋白人工被动免疫:免疫血清、丙种球蛋白一、天然自动免疫一、天然自动免
71、疫动物隐性传染或传染病康复而自动获得的免疫动物隐性传染或传染病康复而自动获得的免疫力,称为天然自动免疫。力,称为天然自动免疫。不同病原微生物使动物获利的天然自动免疫力不同病原微生物使动物获利的天然自动免疫力和免疫期不同,有的免疫力低、免疫期短,有的和免疫期不同,有的免疫力低、免疫期短,有的免疫力坚强、免疫期长。免疫力坚强、免疫期长。二、人工自动免疫二、人工自动免疫(一)概念(一)概念将疫苗、类毒素等生物制品接种于动物,使将疫苗、类毒素等生物制品接种于动物,使其产生针对相应抗原的免疫力,以达到预防传染其产生针对相应抗原的免疫力,以达到预防传染病的目的,称人工自动免疫。如接种猪瘟兔化弱病的目的,称
72、人工自动免疫。如接种猪瘟兔化弱毒苗预防猪瘟。毒苗预防猪瘟。三、天然被动免疫三、天然被动免疫从胎盘(人)、初乳(人、畜)、卵黄(禽)从胎盘(人)、初乳(人、畜)、卵黄(禽)等天然获得母源抗体而形成的免疫力称为天然被等天然获得母源抗体而形成的免疫力称为天然被动免疫。动免疫。生产中尽量提高畜禽母源抗体水平(特别是引生产中尽量提高畜禽母源抗体水平(特别是引起幼畜禽致病的,母起幼畜禽致病的,母源抗体更重要);尽量使源抗体更重要);尽量使幼畜吃好初乳。幼畜吃好初乳。四、人工被动免疫四、人工被动免疫(一一)概概念念:人人为为给给动动物物体体内内注注射射含含特特异异性性抗抗体体的的高高免免血血清清或或淋淋巴巴
73、因因子子等等免免疫疫活活性性物物质质,使使机机体体立立刻刻获获得得免免疫疫力力,称为人工被动免疫。称为人工被动免疫。(二)特点(二)特点1、免疫活性物质是被动获得,而非自身产生。、免疫活性物质是被动获得,而非自身产生。2、免疫力出现快。、免疫力出现快。3、免疫力维持时间短,一般、免疫力维持时间短,一般2-3周。周。4、可能引起过敏反应。、可能引起过敏反应。(三)人工被动免疫生物制品(三)人工被动免疫生物制品1、抗菌血清、抗菌血清2、抗病毒血清、抗病毒血清3、抗毒素、抗毒素4、卵黄抗体、卵黄抗体(四)使用原则及注意事项(四)使用原则及注意事项1、尽尽早早使使用用:潜潜伏伏初初期期病病原原微微生生
74、物物刚刚进进入入体体内内,容容易易彻彻底底消消灭灭。如如已已大大量量繁繁殖殖,或或进进入入细细胞胞内,则作用减弱。内,则作用减弱。2、剂剂量量和和次次数数:一一般般剂剂量量较较大大,才才能能彻彻底底消消灭灭。预预防防时时可可注注射射一一次次,治治疗疗则则需需间间隔隔一一定定时时间间多次使用。多次使用。3、防止过敏反应。、防止过敏反应。第二节第二节疫苗种类疫苗种类一、死疫苗一、死疫苗用用物物理理的的或或化化学学的的方方法法,将将病病原原微微生生物物杀杀灭灭,使使之之失失去去致致病病性性,但但仍仍保保持持完完整整的的抗抗原原性性,进进入入机机体体能能刺刺激激机机体体产产生生特特异异性性免免疫疫反反
75、应应的的疫疫苗苗统统称称为死疫苗。如猪丹毒氢氧化铝甲醛苗。为死疫苗。如猪丹毒氢氧化铝甲醛苗。二、活疫苗二、活疫苗用用某某种种方方法法使使病病原原微微生生物物减减毒毒或或用用无无毒毒病病原原体制成的疫苗,称活疫苗。如猪瘟兔化弱毒疫苗。体制成的疫苗,称活疫苗。如猪瘟兔化弱毒疫苗。三、类毒素三、类毒素细细菌菌外外毒毒素素经经处处理理后后,对对机机体体毒毒力力减减弱弱,不不再再引引起起发发病病,仍仍保保持持抗抗原原性性,能能刺刺激激机机体体产产生生免免疫疫反应的一类生物制品,如破伤风类毒素。反应的一类生物制品,如破伤风类毒素。四、多联苗四、多联苗将用于同一动物的几种微生物用适当的方法将用于同一动物的几
76、种微生物用适当的方法混在一起制成的生物制品。混在一起制成的生物制品。五、多价苗五、多价苗将一种微生物的多种血清型毒株用适当的方将一种微生物的多种血清型毒株用适当的方法混在一起制成的生物制品。法混在一起制成的生物制品。六六、亚单位疫苗、亚单位疫苗用适当方法提取病原微生物具免疫活性的结用适当方法提取病原微生物具免疫活性的结构单位,去掉具毒性的结构单位,经浓缩而配制构单位,去掉具毒性的结构单位,经浓缩而配制成的疫苗。成的疫苗。七七、基因工程疫苗、基因工程疫苗将病原微生物具免疫原性的有用基因用酶切方将病原微生物具免疫原性的有用基因用酶切方法切下,抽提出来,重组到质粒载体上,再导入法切下,抽提出来,重组
77、到质粒载体上,再导入非致病微生物,培养非致病微生物而制成的疫苗,非致病微生物,培养非致病微生物而制成的疫苗,被称为第二代疫苗。被称为第二代疫苗。八、合成肽疫苗八、合成肽疫苗用人工的方法合成病原微生物具免疫原性的多用人工的方法合成病原微生物具免疫原性的多肽链而制成的疫苗。被称为第三代疫苗。如口蹄肽链而制成的疫苗。被称为第三代疫苗。如口蹄疫合成肽疫苗。疫合成肽疫苗。九、抗独特型抗体疫苗九、抗独特型抗体疫苗十、基因疫苗十、基因疫苗第三节第三节疫苗的使用疫苗的使用一、免疫方法一、免疫方法1、肌肌肉肉注注射射:腿腿肌肌注注射射勿勿刺刺伤伤神神经经;胸胸肌肌注注射射勿勿穿穿进进胸腔,刺伤心脏。胸腔,刺伤心
78、脏。2、皮下注射:、皮下注射:3、刺种法:、刺种法:4、滴眼或滴鼻、滴眼或滴鼻:疫苗滴进眼、鼻后,待眼闭、鼻吸气,:疫苗滴进眼、鼻后,待眼闭、鼻吸气,确保疫苗进入后才放下禽。确保疫苗进入后才放下禽。5、饮水免疫、饮水免疫:6、气雾免疫、气雾免疫:连续注射图示连续注射图示饮水免疫技术要点饮水免疫技术要点(1)增加疫苗用量,增加)增加疫苗用量,增加1/2-1倍量。倍量。(2)饮饮用用水水要要求求:不不含含氯氯,可可用用地地下下水水,深井水、冷开水,加深井水、冷开水,加0.2%脱脂奶。脱脂奶。(3)根据气候,断水)根据气候,断水2-4小时。小时。(4)饮水器充足,干净,不用金属饮水)饮水器充足,干净
79、,不用金属饮水器。器。(5)疫苗稀释水量适宜,不能太少、太多,)疫苗稀释水量适宜,不能太少、太多,2小时小时内饮完适宜。内饮完适宜。气雾免疫的技术要点气雾免疫的技术要点(1)增加疫苗用量,增加)增加疫苗用量,增加1/2-1倍量。倍量。(2)饮饮用用水水要要求求:不不含含氯氯,可可用用地地下下水水,深深井井水水、冷开水,加冷开水,加0.2%脱脂奶。脱脂奶。(3)气雾前宜增加鸡的密度。)气雾前宜增加鸡的密度。(4)雾粒大小适宜。)雾粒大小适宜。(5)气雾免疫时应关闭门窗,)气雾免疫时应关闭门窗,10-20分钟打开。分钟打开。(6)雏雏鸡鸡、幼幼鸡鸡气气雾雾前前2天天气气雾雾一一次次链链霉霉素素,1
80、000单位单位/鸡,防呼吸道疾病。鸡,防呼吸道疾病。二、合理的免疫程序二、合理的免疫程序免免疫疫程程序序就就是是指指对对畜畜或或禽禽进进行行各各种种疫疫苗苗免免疫疫的的免免疫疫时时间间,次数和顺序等。免疫程序设计应考虑的因素:次数和顺序等。免疫程序设计应考虑的因素:(1)疫病流行情况:以当地流行的疫病为主。)疫病流行情况:以当地流行的疫病为主。(2)抗体水平:包括母源抗体水平和免疫抗体水平。)抗体水平:包括母源抗体水平和免疫抗体水平。(3)不同疫病的发病特点与流行规律。)不同疫病的发病特点与流行规律。(4)生产目的:肉用、蛋用、种用。)生产目的:肉用、蛋用、种用。(5)饲养管理水平:粗放式(专
81、业户)与现代化养殖。)饲养管理水平:粗放式(专业户)与现代化养殖。(6)疫苗类型:选择适当的疫苗类型(活苗、死苗、联苗)疫苗类型:选择适当的疫苗类型(活苗、死苗、联苗等)。等)。(7)免疫方法。)免疫方法。(8)实际免疫效果。)实际免疫效果。三、三、影响疫苗免疫效果的因素影响疫苗免疫效果的因素1、抗原的性质和免疫原性、抗原的性质和免疫原性2、接种途径与病原体传染的免疫机制、接种途径与病原体传染的免疫机制3、接种剂量与免疫反应性、接种剂量与免疫反应性4、接种次数与间隔时间、接种次数与间隔时间5、有机体的免疫反应性:年龄、母源抗体干扰、有机体的免疫反应性:年龄、母源抗体干扰、机体健康状况。机体健康
82、状况。四、人工自动免疫的副作用四、人工自动免疫的副作用因因疫疫苗苗的的免免疫疫接接种种而而产产生生的的对对机机体体的的有有害害反反应应,称免疫预防的副反应。称免疫预防的副反应。1、一般反应、一般反应(1)局部反应:红肿热痛的炎症反应。)局部反应:红肿热痛的炎症反应。(2)全身反应:指轻度的体温反应,伴减食,)全身反应:指轻度的体温反应,伴减食,精神差,属正常反应,精神差,属正常反应,2、异常反应发生:表现为反应率超过规定范、异常反应发生:表现为反应率超过规定范围,临床症状严重,并有引起死亡。围,临床症状严重,并有引起死亡。第九章第九章免疫血清学技术免疫血清学技术第一节第一节一般特点一般特点一、
83、特异性和交叉性一、特异性和交叉性二、最适比和带现象二、最适比和带现象抗抗原原抗抗体体须须在在适适当当比比例例下下才才出出现现可可见见反反应应,比比例例越越合合适适,反反应应越越明明显显,这这个个比比例例称称为为抗抗原原抗抗体反应体反应最适比最适比。如如果果抗抗原原过过多多或或抗抗体体过过多多,则则抗抗原原抗抗体体不不能能形成大的复合物而不呈现可见反应,称为形成大的复合物而不呈现可见反应,称为带现象带现象。抗抗体体过过剩剩,一一个个抗抗体体分分子子只只能能结结合合一一个个抗抗原原,形成可溶性小分子复合物,称为形成可溶性小分子复合物,称为前带前带。抗抗原原过过剩剩,两两个个抗抗原原分分子子只只能能
84、与与一一个个抗抗体体结结合,仍为小分子复合物,称合,仍为小分子复合物,称后带后带。凝集反应常抗体过剩而出现前带凝集反应常抗体过剩而出现前带,一般固定,一般固定抗原浓度,稀释抗体。抗原浓度,稀释抗体。沉淀反应常抗原过多而出现后带沉淀反应常抗原过多而出现后带,一般固定,一般固定抗体浓度,稀释抗原。抗体浓度,稀释抗原。最适比和带现象图示最适比和带现象图示三、反应的二阶段性三、反应的二阶段性第第一一阶阶段段为为抗抗原原抗抗体体特特异异结结合合,无无可可见见反反应应,第第二二阶阶段段为为抗抗原原抗抗体体的的可可见见阶阶段段。前前者者快快,几几秒秒至几分钟,后者慢,几分钟,几十分钟或更久。至几分钟,后者慢
85、,几分钟,几十分钟或更久。四、反应的敏感性四、反应的敏感性极高敏感性,可检测极微量的抗原或抗体。极高敏感性,可检测极微量的抗原或抗体。第二节第二节凝集性实验凝集性实验一、凝集实验一、凝集实验(一)概念细菌、红细胞等颗粒性抗原与相应(一)概念细菌、红细胞等颗粒性抗原与相应抗体结合后,在有电解质存在下,抗原颗粒相互抗体结合后,在有电解质存在下,抗原颗粒相互凝集成肉眼可见的凝集小块,称为凝集反应。凝集成肉眼可见的凝集小块,称为凝集反应。(二)凝集试验类型(二)凝集试验类型1、玻片凝集实验、玻片凝集实验用已知的抗原(抗体)与待检的血清(或菌用已知的抗原(抗体)与待检的血清(或菌液)各一滴在玻片上混合,
86、数分钟后,出现颗粒液)各一滴在玻片上混合,数分钟后,出现颗粒性或絮状凝集。性或絮状凝集。玻片凝集实验图示玻片凝集实验图示2、试管凝集实验、试管凝集实验检测待检血清中是否存在相应抗体和测定抗检测待检血清中是否存在相应抗体和测定抗体的效价。体的效价。发生发生50%抗原凝集的血清最大稀释度称为该抗原凝集的血清最大稀释度称为该血清凝集价(或称滴度)。血清凝集价(或称滴度)。试管凝集实验图示试管凝集实验图示二、二、沉淀实验沉淀实验(一)概念(一)概念可溶性抗原可溶性抗原(细菌外毒素、菌体悬浮液、病毒、(细菌外毒素、菌体悬浮液、病毒、血清、组织液等)与相应抗体结合,在适量电解血清、组织液等)与相应抗体结合
87、,在适量电解质存在下,形成肉眼可见的白色沉淀。质存在下,形成肉眼可见的白色沉淀。(二)沉淀试验类型(二)沉淀试验类型1、环状沉淀实验、环状沉淀实验主要用于抗原定性,如炭疽主要用于抗原定性,如炭疽Ascoli氏反应。氏反应。环状沉淀实验图示环状沉淀实验图示2、琼脂扩散实验、琼脂扩散实验原原理理:1%琼琼脂脂凝凝胶胶孔孔径径约约85nm,能能允允许许抗抗原原抗抗体体在在其其中中自自由由扩扩散散,并并由由近近及及远远形形成成浓浓度度梯梯度度,二二者者在在比比例例适适当当处处相相遇遇,发发生生沉沉淀淀反反应应,形成白色沉淀带。形成白色沉淀带。琼脂扩散沉淀实验图示琼脂扩散沉淀实验图示3、对流免疫电泳、对
88、流免疫电泳(1)原原理理:在在pH8.6的的琼琼脂脂电电泳泳中中,琼琼脂脂中中含含琼琼脂脂果果胶胶,有有一一种种从从阳阳极极向向阴阴极极的的电电渗渗作作用用力力。大大部部分分抗抗原原带带较较强强的的负负电电,克克服服电电渗渗作作用用力力,向向阳阳极极泳泳动动。大大多多数数IgG带带微微弱弱负负电电,不不能能克克服服电电渗渗力力作作用用力力,反反向向阴阴极极倒倒退退。将将抗抗原原加加在在阴阴极极,抗体加在阳极,二者相遇形成沉淀线。抗体加在阳极,二者相遇形成沉淀线。第三节标记抗体技术第三节标记抗体技术一、荧光抗体技术一、荧光抗体技术(一)原理(一)原理将将具具有有荧荧光光特特性性的的荧荧光光材材料
89、料联联接接到到提提纯纯的的抗抗体体分分子子上上,制制成成荧荧光光抗抗体体。荧荧光光抗抗体体同同样样保保持持特特异异性性结结合合抗抗原原的的能能力力。当当抗抗原原与与荧荧光光抗抗体体结结合合,在在荧荧光光显显微微镜镜下下观观察察,即即可可对对待待检检的的抗抗原原进进行行定定性性和和定定位位。常常用用的的荧荧光光材材料料是是异异硫硫氰氰酸酸荧荧光光黄黄(FITC)。)。(二)荧光抗体检查法(二)荧光抗体检查法(1)直接法)直接法常常用用于于检检测测病病变变组组织织中中病病毒毒抗抗原原。病病理理组组织织冰冰冻冻切切片片或或触触片片,自自然然干干燥燥,冷冷丙丙酮酮固固定定15分分钟钟,加加荧荧光光抗抗
90、体体,3730-60分分钟钟,PBS冲冲洗洗,加加一一滴滴pH9.0缓缓冲冲甘甘油油,封封片片,显显微微镜镜观观察察,有有相相应应抗原的部位显黄绿色荧光。抗原的部位显黄绿色荧光。(2)间接法)间接法AgXAb+荧光抗体荧光抗体优优点点:荧荧光光亮亮度度更更强强,检检出出率率更更高高,制制备备一一种种荧光抗抗体,即可用该种动物的各种抗原检测。荧光抗抗体,即可用该种动物的各种抗原检测。缺点:非特异性增强。缺点:非特异性增强。(3)荧光补体法)荧光补体法AgXAb+荧光补体荧光补体优优点点:制制备备一一种种荧荧光光抗抗体体,可可用用于于各各种种Ag、Ab系系统统检测。检测。缺点:非特异性较强。荧光补
91、体不易保存。缺点:非特异性较强。荧光补体不易保存。(4)荧光抗补体法)荧光抗补体法AgXAb+补体荧光抗补体抗体补体荧光抗补体抗体优优点点:只只制制备备一一种种荧荧光光抗抗体体,即即可可用用于于各各种种Ag、Ab系统检测。系统检测。缺点:非特异性更强。缺点:非特异性更强。荧光抗体技术图示荧光抗体技术图示二、二、酶标抗体技术酶标抗体技术1、原理:将特定的酶联接于抗体分子上,制、原理:将特定的酶联接于抗体分子上,制成酶标抗体,抗原抗体特异性结合,并通过酶对成酶标抗体,抗原抗体特异性结合,并通过酶对底物的高效催化作用而显色,从而对抗原(抗体)底物的高效催化作用而显色,从而对抗原(抗体)进行定性,定位
92、,定量。常用酶有辣根过氧化物进行定性,定位,定量。常用酶有辣根过氧化物酶。酶。2、酶标抗体染色法、酶标抗体染色法常用于抗原的定性、定位。病理组织经冰冻切常用于抗原的定性、定位。病理组织经冰冻切片或石蜡切片后,用直接法(片或石蜡切片后,用直接法(Ag+酶标酶标Ab)或间)或间接法(接法(Ag+Ab+酶标抗酶标抗Ab)染色,加底物显色。)染色,加底物显色。本法优点是不需特殊的荧光显微镜设备,且标本本法优点是不需特殊的荧光显微镜设备,且标本可长期保存。可长期保存。3.ELISA(EnzymeLinkedimmunosorlentassay)即酶联免疫吸附实验。将抗原或抗体吸附于即酶联免疫吸附实验。将
93、抗原或抗体吸附于固相载体,在载体上进行免疫酶染色,底物显色固相载体,在载体上进行免疫酶染色,底物显色后肉眼或酶联免疫测定仪判定结果的一种方法。后肉眼或酶联免疫测定仪判定结果的一种方法。(1)固相载体)固相载体聚苯乙烯微孔型塑料板。聚苯乙烯微孔型塑料板。(2)包被)包被用用pH9.60.1M缓缓冲冲液液稀稀释释抗抗原原或或抗抗体体,0.1ml/孔,孔,4过夜。过夜。(3)封闭)封闭将包被板取出洗涤后,加入将包被板取出洗涤后,加入0.5%牛血清白蛋牛血清白蛋白或白或1%小牛血清封闭残存的孔隙,小牛血清封闭残存的孔隙,0.1ml/孔,孔,372小时。小时。(4)洗涤)洗涤(5)ELISA技术类型技术
94、类型A、间接、间接ELISA用于测定未知抗体。用于测定未知抗体。Ag+Abx酶标抗抗体底物酶标抗抗体底物间接间接ELISAB、双抗体夹心、双抗体夹心ELISA用于测定大分子抗原。用于测定大分子抗原。AbAgx酶标酶标Ab底物底物双抗体夹心双抗体夹心ELISAC、夹心间接、夹心间接ELISA用于测定多种大分子抗原。用于测定多种大分子抗原。Ab1AgxAb2酶标抗酶标抗Ab2抗体底物抗体底物夹心间接夹心间接ELISA(6)抗原抗体稀释及作用条件)抗原抗体稀释及作用条件保温液(保温液(1%BSA-吐温吐温-20-PBS)稀释,每一步)稀释,每一步加样均须在加样均须在37作用作用1-2h,以保证抗原抗
95、体间的,以保证抗原抗体间的结合。结合。(7)底物显色)底物显色临用前配制邻苯二胺(供氢体)临用前配制邻苯二胺(供氢体)-H2O2(底物)(底物)液,液,0.1ml/孔,孔,37,避光作用,避光作用20-30分钟。分钟。ELISA结果结果(8)结果判定)结果判定A、肉肉眼眼观观察察:阳阳性性者者呈呈棕棕褐褐色色,阴阴性性无无色色或或淡淡黄黄色色。颜颜色色的的深深浅浅反反映映检检测测样样品品中中抗抗原原或或抗抗体体的的浓度。浓度。B、酶联免疫吸附测定仪测定:分光光度计原理、酶联免疫吸附测定仪测定:分光光度计原理大大于于阴阴性性标标本本均均值值+两两个个标标准准差差0.2,判判为为“+”以以P/N值
96、表示:值表示:P为待测标本为待测标本OD值,值,N为阴性为阴性标本平均标本平均OD值,值,1.5判为阳性。判为阳性。酶联免疫测定仪酶联免疫测定仪三、三、放射免疫技术放射免疫技术1、原理、原理将放射性同位素标记于纯化的阳性抗原或抗体将放射性同位素标记于纯化的阳性抗原或抗体上,通过抗原抗体反应,测定其放射性强弱,从上,通过抗原抗体反应,测定其放射性强弱,从而对抗原、抗体进行定性、定量、定位测定。而对抗原、抗体进行定性、定量、定位测定。常用同位素有常用同位素有131I、3H。优点是特异性强,灵敏度高。其灵敏度可达纳优点是特异性强,灵敏度高。其灵敏度可达纳克(克(ng)级,比一般分析方法提高)级,比一
97、般分析方法提高103-106倍,广倍,广泛用于含量甚微又很重要的生物活性物质,如生泛用于含量甚微又很重要的生物活性物质,如生长激素长激素GH,在动物体内的代谢,分布和作用机,在动物体内的代谢,分布和作用机制研究。制研究。四、四、补体结合反应补体结合反应(一)原理(一)原理可溶性抗原与相应抗体结合后,能与定量补体可溶性抗原与相应抗体结合后,能与定量补体全部或部分结合,则不再引起致敏血球溶血,结全部或部分结合,则不再引起致敏血球溶血,结果阳性,如果抗原、抗体不相适应,则不能结合果阳性,如果抗原、抗体不相适应,则不能结合定量补体,补体反过来使致敏血球溶血,结果阴定量补体,补体反过来使致敏血球溶血,结
98、果阴性。补体量偏小,出现假阳性,偏大,则出现假性。补体量偏小,出现假阳性,偏大,则出现假阴性阴性。五、五、中和实验中和实验病毒抗原与相应中和抗体结合,使病毒失去吸病毒抗原与相应中和抗体结合,使病毒失去吸附细胞能力,或抑制其侵入和脱壳,失去感染力,附细胞能力,或抑制其侵入和脱壳,失去感染力,从而保护易感动物,或禽胚或单层细胞。从而保护易感动物,或禽胚或单层细胞。可用于病毒种型鉴定,病毒抗原分析,中和抗可用于病毒种型鉴定,病毒抗原分析,中和抗体效价测定。体效价测定。第十章变态反应(自学)第十章变态反应(自学)第一节过敏反应(第一节过敏反应(I型)型)第二节细胞毒型(第二节细胞毒型(II型)变态反应
99、型)变态反应第三节免疫复合物型(第三节免疫复合物型(III型)变态反应型)变态反应第四节迟发型(第四节迟发型(IV型)变态反应型)变态反应概念与分类概念与分类变变态态反反应应是是指指机机体体再再次次受受到到同同种种抗抗原原(或或半半抗抗原原)刺刺激激时时,出出现现的的一一种种过过度度的的、引引起起机机体体产生明显免疫损伤的异常免疫反应。产生明显免疫损伤的异常免疫反应。型型速发型速发型型型(抗体介导)(抗体介导)型型变态反应变态反应迟发型迟发型型型(无抗体介导)无抗体介导)第一节过敏反应(第一节过敏反应(型)型)一、发病机理一、发病机理变应原刺激过敏体质的机体产生较多变应原刺激过敏体质的机体产生
100、较多IgE。IgE牢固牢固结合到肥大细胞和嗜碱性粒细胞结合到肥大细胞和嗜碱性粒细胞FC受体,机体处于致受体,机体处于致敏状态,维持半年至数年。相同变应原再次进入,与细敏状态,维持半年至数年。相同变应原再次进入,与细胞表面胞表面IgE结合,引起细胞脱颗粒,释放药理活性物质。结合,引起细胞脱颗粒,释放药理活性物质。表现局部表现局部(呼吸道、消化道、皮肤呼吸道、消化道、皮肤),甚至全身性的过敏,甚至全身性的过敏反应疾病。反应疾病。IgG4亦可引起。亦可引起。二、特点二、特点1、IgE介导,其次介导,其次IgG4。2、发生和消退较快:几分钟至半小时发生。、发生和消退较快:几分钟至半小时发生。3、抗体为
101、亲细胞性。、抗体为亲细胞性。4、药理活性物质引起功能紊乱。、药理活性物质引起功能紊乱。5、明显个体差异:过敏体质机体发生。、明显个体差异:过敏体质机体发生。三、常见疾病三、常见疾病1、再次注射血清病、再次注射血清病2、药物过敏性休克:青霉素过敏。、药物过敏性休克:青霉素过敏。3、饲料、乳汁等引起。、饲料、乳汁等引起。四、诊断与防治四、诊断与防治1、诊断:皮肤试验;检测、诊断:皮肤试验;检测IgE。2、防治:肾上腺素、苯海拉明治疗。、防治:肾上腺素、苯海拉明治疗。第二节细胞毒型(第二节细胞毒型(型)变态反应型)变态反应一、发病机理一、发病机理特异性抗体(特异性抗体(IgG1、IgG2、IgG3、
102、IgM,IgA)与吸附在红细胞、白细胞、血小板上的抗)与吸附在红细胞、白细胞、血小板上的抗原结合,引起血细胞凝集、溶解。表现溶血性贫原结合,引起血细胞凝集、溶解。表现溶血性贫血,白细胞减少症,血小板减少症。血,白细胞减少症,血小板减少症。二、常见病型二、常见病型1、不相容输血反应、不相容输血反应2、药物性、药物性型变态反应:如磺胺。型变态反应:如磺胺。3、传染病性、传染病性型变态反应:如马传贫。型变态反应:如马传贫。第三节免疫复合物型(第三节免疫复合物型(型)变态反应型)变态反应一、发病机理一、发病机理抗原中等过剩,与抗体形成中等大小免疫复合物抗原中等过剩,与抗体形成中等大小免疫复合物(太大、
103、太小都不发病),为可溶状态,不易被吞噬细(太大、太小都不发病),为可溶状态,不易被吞噬细胞吞噬消除(大的才行),又不能通过肾小球滤孔排出胞吞噬消除(大的才行),又不能通过肾小球滤孔排出(小的才行),较长时间循环于血液中,沉积于多种器(小的才行),较长时间循环于血液中,沉积于多种器官(如心、肾、关节等)血管壁基底膜、肾小球基底膜官(如心、肾、关节等)血管壁基底膜、肾小球基底膜和关节滑膜等处,激活补体,引起局部病理损伤。和关节滑膜等处,激活补体,引起局部病理损伤。二、特点二、特点1、由抗体、由抗体IgG、IgM、IgA介导。介导。2、必须有补体参加。、必须有补体参加。3、抗抗原原抗抗体体在在血血循
104、循环环中中形形成成中中等等大大复复合合物物,沉沉积积于血管基底膜而引起局部病变。于血管基底膜而引起局部病变。4、嗜中性粒细胞浸润为主的出血坏死性炎症。、嗜中性粒细胞浸润为主的出血坏死性炎症。三、常见病型三、常见病型1、初次注射血清病。、初次注射血清病。2、过敏性肺炎、过敏性肺炎3、传染病引起:如马传贫、水貂阿留申病、非、传染病引起:如马传贫、水貂阿留申病、非洲猪瘟等。洲猪瘟等。第四节迟发型(第四节迟发型(型)变态反应型)变态反应一、发病机理一、发病机理抗原进入体内刺激抗原进入体内刺激Tc增殖为致敏淋巴细胞和记忆细胞,抗原再增殖为致敏淋巴细胞和记忆细胞,抗原再次进入,使致敏淋巴细胞释放各种细胞因
105、子,引起局部出血、水次进入,使致敏淋巴细胞释放各种细胞因子,引起局部出血、水肿、坏死,结果引起以单核巨噬细胞浸润为特征的炎性反应。肿、坏死,结果引起以单核巨噬细胞浸润为特征的炎性反应。二、特点二、特点1、无抗体、补体参与,由细胞介导。、无抗体、补体参与,由细胞介导。2、反应缓慢,持续时间长。、反应缓慢,持续时间长。3、抗原消除后,炎症消退,组织恢复。、抗原消除后,炎症消退,组织恢复。三、常见病型三、常见病型1、传传统统性性IV型型变变态态反反应应:如如牛牛结结核核、马马鼻鼻疽疽、牛牛布布氏氏。利利用用结结核核菌菌素素、鼻鼻疽疽菌菌素素、布布氏氏菌菌素素对对动动物物无无毒毒的的特特点点,皮皮内内接接种种动动物物,如如该该动动物物患患过过相相应应的的慢慢性性传传染染病病,则则在在注注射射局局部部引引起起IV型型变态反应,而用于传染病的诊断和检疫。变态反应,而用于传染病的诊断和检疫。2、接接触触性性皮皮炎炎:甲甲醛醛、植植物物树树脂脂等等引引起起以以皮皮炎炎为为主要症状的主要症状的型变态反应。型变态反应。第十一章第十一章粘膜免疫反应(自学)粘膜免疫反应(自学)作业作业1.变态反应的类型及发病机理变态反应的类型及发病机理2.变态反应诊断的原理及应用变态反应诊断的原理及应用3.粘膜免疫的作用,怎样提高粘膜免疫力粘膜免疫的作用,怎样提高粘膜免疫力结束语结束语谢谢大家聆听!谢谢大家聆听!235