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1、颅内感染的实验室诊断颅内感染的实验室诊断技术新进展技术新进展1231.1 1.1 巢式PCRPCR (Nested PCRNested PCR)本法需设计引物两套,对脑脊液进行两步法基因扩增,检测其中含量低的病原体。巢式PCRPCR对革兰染色、培养或抗原检测阴性或不确定时更有检测价值。45TakahashiTakahashi等用巢式PCRPCR检测脑脊液中含量甚微的结核分枝杆菌,较传统的PCRPCR方法敏感度高出100010001000010000倍。FailaneFailane等对疑有BCNIBCNI的儿童脑脊液应用半巢式PCRPCR检测脑膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌和流感嗜血杆菌,阳性和阴性预测
2、值均为90%90%以上。TakahashiT,NakayamaT,TamuraM,etal.Nestedpolymerosechainreactionforassessingtheclinicalcourseoftuberculous.meningitisJNeurology,2005,64(10):1789-1793.FailaneL,WagnerM,CheskyM,etal.Simultaneousdetectionofnisseriameningitidis,haemophihtsinfluenzaeandStreptococcussp.bypolymerasechainreaction
3、forthediagnosisofbacterialmeningitisJ.ArqNeuropsiquiatr,2005,63(4):920-924.61.2 1.2 荧光定量PCRPCR (Real-Time Quantitative PCR RT-PCRReal-Time Quantitative PCR RT-PCR)RT-PCRRT-PCR是常规PCRPCR基础上加入荧光探针,具有准确性高、重复性好等特点,已广泛用于基因表达、病原体检测等领域。应用RT-PCRRT-PCR检测细菌性脑膜炎的病原菌,阳性检出率(39%)(39%)显著高于脑脊液培养(10%)(10%)。BrajonG,Ma
4、ndasD,LiciardiM,eta1.Developmentandfieldtestingofareal-timePCRassayforcaprinearthritis-encephaliis-Virus(CAEV)EJ3J.OpenVirolJ,2012,6(1):82-90ChibaN,MurayamaSY,MorozumiM,etal.RapiddetectionofeightcausativepathogensforthediagnosisofbacterialmeningitisbyrealtimePCRJ.JInfectChemother,2009,15(2):92-98.7应
5、用RT-PCRRT-PCR检测脑脊液中肺炎链球菌、流感嗜血杆菌和脑膜炎奈瑟菌敏感性和特异性分别达95.7%95.7%和94.3%94.3%,且不受抗菌药物应用影响。研究表明,RT-PCRRT-PCR的检测周期平均比传统PCRPCR短2424小时,有助于快速诊断,缩短患者住院时间并减少住院费用。 WuHM,CordeiroSM,HarcourtBH,etal.Accuracyofreal-timePCR,GramstainandcultureforStreptococcuspnemoniae,NeisseriameningitisandHaemoplilusinfluenzaemeningiti
6、sdiagnosisJ.BMCinfectionsDiseases,2013,13(4):26-35.DaheeJin,MD,TaeHoonHeo,MD,JungHyeByeon.Analysisofclinicalinformationandreversetranscriptase-polymerasechainreactionforearlydiagnosisofenteroviralmeningitisJ.KoreanJPediatr2015;58(11):446-450.81.3 1.3 基于16SrRNA16SrRNA基因序列分析技术16SrRNA16SrRNA基因核苷酸序列具有高度
7、保守性,存在于所有细菌的染色体基因组中,其在保守区之间有9 91010个变异区,利用16SrRNA16SrRNA可变区与恒定区的特性,设计细菌通用引物,能对临床分离的任何病原菌进行准确鉴定和定位及不同种属细菌的分类,较传统的细菌培养有更高敏感性。9应用16SrRNA16SrRNA基因扩增技术设计快速检测颅内感染常见病原菌的检测方法,能准确、快速且高效地检测脑脊液中病原菌。高通量测序技术与16SrRNA16SrRNA基因检测相结合,可以大幅度提高病原体检测速度并降低检测成本。 AliRezaMoayedi,AbdolazimNejatizadeh,MaryamMohammadian.Accura
8、cyofuniversalpolymerasechainreaction(PCR)fordetectionofbacterialmeningitisamongsuspectedpatientsJ.ElectronicPhysician,2015,12:1609-1612.AicuiLiu,ChaoWang,ZhijuanLiang.High-throughputsequencingof16SrDNAampliconscharacterizesbacterialcompositionincerebrospinalfluidsamplesfrompatientswithpurulentmening
9、itisJ.DrugDesign,DevelopmentandTherapy2015:944174429101.41.4 基因芯片检测技术:基因芯片技术是一种快速、高效、高通量的核酸分析技术,已广泛用于基因检测、药物或耐药基因的筛选、疾病相关基因的诊断、病原微生物感染的鉴定等领域。11侯晓霖等通过NCBINCBI数据库检索,筛选了包括脑膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、表皮葡萄球菌及其他凝固酶阴性葡萄球菌等化脓性脑膜炎常见细菌的多条16SrRNA16SrRNA序列特异性探针(覆盖脑膜炎常见病原菌90%90%的亚种),并根据临床流行情况变化进行探针增减来满足临床需
10、求。 侯晓霖侯晓霖, 梁志娟梁志娟, 王振海王振海. 化脓性脑膜炎脑脊液常见病原菌基因芯片的构建化脓性脑膜炎脑脊液常见病原菌基因芯片的构建J. 中国医科大学报中国医科大学报,2013,42(1):14-18.12刘志忠等应用基因芯片法检测临床脑脊液感染常见的1010个种(属)病原菌,包括金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、阴沟肠杆菌, ,与传统细菌培养比较符合率为97.0%97.0%,证实了芯片诊断技术筛查脑脊液病原菌的可行性,具有简便、快速、准确和高通量等优点,对临床样本检测及流行病学调查有重要意义。 刘志忠刘志忠, 张艳张艳, 石广志石
11、广志. 基因芯片法检测脑脊液病原菌的临床应用基因芯片法检测脑脊液病原菌的临床应用J/CD. 中华实验和临床感染病杂志中华实验和临床感染病杂志:电子版电子版,2013,6(3):210-213.13142.1 2.1 生物化学标志物2.1.1 2.1.1 乳酸(Lactic Acid)(Lactic Acid)脑脊液乳酸是脑组织能量代谢的底物,是鉴别细菌性及病毒性颅内感染常用的生化标志物之一,细菌性感染时其含量升高,病毒性感染时无显著改变。 MekitarianFilhoE,HoritaSM,GilioAE,eta1.Cerebrospinalfluidlactatelevelasadiagno
12、sticbiomarkerforbacterialmeningitisinchildrenJ.hatJEmergMed,2014,7:14.MorichiS,KasshiwagiY,TakekumaK,etal.Expressionofbrainderivedneurotrophicfactor(BDNF)incerespinalfluidandplasmaofchildrenwithmeningitisandencephslitis/enephalopathyJ.IntJNeurosci,2013,123(1):17-23.15SakushimaSakushima等对有关脑脊液乳酸检测在细菌
13、性颅内感染诊断价值的3333个研究进行荟萃分析发现,脑脊液乳酸含量升高诊断细菌性颅内感染的合并敏感性为93%93%,特异性为96%96%,当脑脊液乳酸35mg/dL35mg/dL时, ,诊断的特异性可高达99%99%。 SakushimaK,HayashinoY,KawaguchiT,eta1.Diagnosticaccuracyofcerebrospinalfluidlactatefordifferentiatingbacterialmeningitisfromasepticmeningitis:ameta-analysisJ.JInfect,2011,62(4):255-262162.1.
14、2 2.1.2 尿酸(Uric Acid(Uric Acid,UA)UA) 脑脊液中的UAUA是由脑细胞中核酸转化而来的,因此脑脊液UAUA含量可作为脑细胞损伤的指标。发生颅内感染时,脑脊液UAUA含量显著增高(40(40mol/L)mol/L),主要是由细菌感染致使脑细胞损伤、破坏,自身代谢增强所致,同时也可能是由于炎症刺激使血脑屏障通透性增高,UAUA移行入脑脊液,使脑脊液中的UAUA增高。 刘晓华.脑脊液中尿酸的测定及其在儿童病毒性脑炎中的意义J.齐齐哈尔医学院学报,2008,29(8):944172.1.3 2.1.3 一氧化氮(NONO)各种伤害性刺激均可诱发脑内各区NONO含量明显
15、升高,颅内感染患者脑脊液NONO含量均高于正常(20mol/L)(20mol/L),但就细菌或病毒感染而言差异无统计学意义(P0.05P0.05)NONO升高幅度与脑损伤程度有关,与感染病因无关,N0N0含量测定有助于脑脊液常规、生化正常的颅内感染的诊断。182.1.4 2.1.4 臭氧(Reactive Oxygen Species Reactive Oxygen Species )细菌性脑膜炎患者CSFCSF中臭氧含量明显高于非脑膜炎患者,其差异具有统计学意义。便捷的臭氧检测方式是目前主要的研究方向。 Anne-ClaireLukaszewicz1,ValrieFaivre1,HlneBo
16、ut.MulticenterTestingoftheRapidQuantificationofRadicalOxygenSpeciesinCerebrospinalFluidtoDiagnoseBacterialMeningitisJ.Journal,2015,May,26.192.2 2.2 脑脊液蛋白脑脊液蛋白20细菌性颅内感染发生时,脑脊液中上述各种蛋白的含量,除胱抑素C C外均较病毒性颅内感染时升高,而脑脊液胱抑素C C水平则以病毒性颅内感染升高显著。脑脊液中新型蛋白含量的测定因不受抗生素使用的干扰,为颅内感染病原菌的鉴别诊断提供了新的方向。JesseS,SteinackerP,Leh
17、nertS,eta1.AproteomicapproachforthediagnosisofbacterialmeningitisJ.PLoSOne,2010,5(4):e10079TsaiHC,ShiMH,LeeSS,eta1.ExpressionofmatrixmetalloproteinasesandtheirtissueinhibitorsintheserumandcerebrospinalfluidofpatientswithmeningitisJClinMicrobiolInfect,2011,17(5):780-784王艳,王谷声,周世俊.血清与脑脊液降钙素原检测在儿童中枢神经系
18、统感染的应用J右江医学,2012,40(3):347-348张丽琴.脑脊液免疫球蛋白、乳酸脱氢酶及腺苷脱氨酶检测在成人颅内感染鉴别诊断中的临床意义J中华医院感染学杂志,2012,22(8):1752-1754212.2.1 2.2.1 降钙素原 (ProcalcitoninProcalcitonin,PCTPCT)PCTPCT是人类降钙素(calcitonin)(calcitonin)的前体物质,19931993年由AssicotAssicot等首次报道其可作为细菌感染的早期标志物,20012001年国际脓毒症会议把PCTPCT作为脓毒症诊断指标之一。与CRPCRP、WBCWBC计数、中性粒细
19、胞比例不同,在某些自身免疫性疾病( (如类风湿病) ),PCTPCT无明显增高( (一般小于0.01ng/mL)0.01ng/mL)。22JerebJereb等发现若以脑脊液PCTPCT水平0.5ng/mL0.5ng/mL为阈值,其对细菌性脑膜炎和病毒性脑膜脑炎的阳性预测值分别为100%100%和74%74%。还有学者研究认为血清PCT0.05ng/mLPCT0.05ng/mL是诊断细菌性脑膜炎的指标,而局灶性感染和病毒性脑膜炎患者血清PCTPCT水平一般不会高于此值。 JerebM,KotarT,JureaT,eta1.Usefulnessofprocalcitoninfordiagnosi
20、sofinfectiveendocantifisJ.InternEmergMed,2009,4(3):221-226冯辉斌,周青山.促炎性细胞因子及降钙素原在颅内感染性质鉴别中的应用价值J.实用临床医药杂志,2013,17(13):17-1923 AlainViallon,ElisabethBotelho-Nevers,FabriceZeni.Clinicaldecisionrulesforacutebacterialmeningitis:currentinsightsJ.OpenAccessEmergencyMedicine2016:871624一项来自于2828项研究涵盖20582058个
21、患者荟萃研究显示,脑脊液PCTPCT诊断细菌性脑膜炎的敏感度和特性度分别为80%80%和86%86%。研究认为,脑脊液PCTPCT较脑脊液白细胞计数误诊率低,较血清PCTPCT敏感性高。 JensVikse,BrandonMichaelHenry,JoyeetaRoy.Theroleofserumprocalcitonininthediagnosisofbacterialmeningitisinadults:asystematicreviewandmeta-analysisJ.InternationalJournalofInfectiousDiseases2015(38):6876.Ting-
22、TingWei,Zhi-DeHu,Bao-DongQin.DiagnosticAccuracyofProcalcitonininBacterialMeningitisVersusNonbacterialMeningitisJ.Medicine,2016,(11):e3079.252.2.2 C2.2.2 C-反应蛋白 (C-reactive proteinC-reactive protein,CRPCRP)CRPCRP是人体被细菌感染或者创伤后反应最为敏感的一种急性时相蛋白。可以通过免疫荧光法进行定量检测,它是反映细胞和组织损伤的一种非特异性指标,正常情况下仅少量存在于人体体液中。 McCar
23、thyM,RosengartA,SchuetzAN,etal.Moldinfectionsofthecentralnervous.systemJ.NEnglJMed,2014;371(2):150-60.26CRPCRP升高可见于中枢神经系统炎症患者的脑脊液中并在恢复期消失。化脓性或结核性脑膜炎时,脑脊液、血清CRPCRP水平均明显增高;病毒性脑膜炎时CRPCRP升高仅见于脑脊液中,而血清中并不增高。 MallaKK,MallaT,RaoKS,eta1.IscerebrospinalfluidC-reactiveproteinabettertoolthanbloodC-reactiveprot
24、eininlaboratorydiagnosisofmeningitisinchildrenJ?SultanQaboosUnivMedJ,2013,13:93-99刘春虹,杜彦辉.中枢神经系统感染患者脑脊液IFN-、hCRP、NSE的变化及临床意义J.宁夏医学杂志,2013,35(6):485-487272.2.32.2.3 神经元特异性烯醇化酶 (Neuronspecific Enolase NSENeuronspecific Enolase NSE)NSENSE存在于脑神经元胞质中,脑损伤时,神经细胞崩解,血脑屏障破坏,NSENSE释放入脑脊液中,使其浓度升高,是神经元损害的敏感性标志物。
25、CNSICNSI可造成不同程度脑实质损伤,使脑脊液中NSENSE浓度增高,NSENSE升高可直接反应脑损害的存在。28病毒性脑炎病毒依靠细胞的胞饮作用穿透神经元细胞,造成对神经元的直接侵犯,胞释放NSENSE,因此病脑组NSENSE升高最为明显。结脑患者可导致脑梗死、脑水肿,可加重神经元损伤。所以NSENSE升高也比较明显。化脑组的病变主要在脑膜,脑实质损害相对较轻。 LibbeyJE,FujinamiRS.AdaptiveimmuneresponsetoviralinfectionsinthecentralnervoussystemJ.HandbClinNeurol,2014;123(3):
26、225-47.292.2.42.2.4 胆碱酯酶 (CholinesteraseCholinesterase,CHECHE)颅内感染时,由于血脑屏障被破坏,血浆中大分子CHECHE可能进入脑脊液中,从而使其CHECHE含量增加。颅内感染时,脑组织中的CHECHE可能被释放进入脑脊液中,从而使其在脑脊液中水平升高。30细菌性感染时CHECHE的上升幅度比病毒性感染更明显,可能是由于细菌性感染对血脑屏障的破坏更明显,血浆中CHECHE更易透过从而进入脑脊液所致。不同病毒对脑脊液CHECHE的活性影响不同,在已知的几种病毒中,柯萨奇B B组病毒(CVB)(CVB)对CHECHE活性的影响最大。 瞿少
27、刚,张秀萍.病毒性脑膜炎、脑炎患儿的病原分析及部分生化指标变化的l临床意义J.现代医药卫生,2006,22(6):798-800张秀萍,瞿少刚,章晓联,等.病毒性脑膜炎、脑炎脑脊液胆碱酯酶活性与血清病毒抗体的关系J.华中医学杂志,2004,28(2):107-108312.2.52.2.5 白细胞酯酶 (Leukocyte EsteraseLeukocyte Esterase,LETLET)LETLET是细胞内含有的一种特异性酶类,这种酶类只在中性粒细胞内存在。一些学者将尿液分析的白细胞酯酶试纸条用于脑脊液的细菌感染快速诊断。有资料表明,脑脊液中LETLET的检出与细菌培养阳性、潘氏试验阳性、
28、白细胞总数和蛋白质升高以及葡萄糖降低之间存在统计学上的相关性。 刘仁淳,肖正勤,卢森厅.白细胞酯酶检测在脑脊液细菌感染快速诊断中的应用J.广东医学,2008,29(2):277-278322.2.62.2.6 基质金属蛋白酶 (Matrix Metalloproteinase MMPsMatrix Metalloproteinase MMPs)MMPsMMPs是一组结构与功能同源的锌离子依赖性中性蛋白酶超基因家族,可由体内中性粒细胞,巨噬单核细胞及血管内皮细胞产生。在中枢神经系统感染性疾病中,MMP-9MMP-9参与多种病理生理活动,可协同降解多种细胞外基质(ECMECM)成分,促进炎症性浸润
29、的发生,破坏血脑屏障(BBBBBB)。SavarinC,BergmannCC,HintonDR,StohlmanSA.MMP-independentroleofTIMP-1atthebloodbrainbarrierduringviralencephalomyelitisJ.ASNNeuro.2013Nov26;5(5):e00127.33MMP-9MMP-9在化脓性脑膜炎脑脊液中水平增高表达增强, ,脑脊液中MMP-9MMP-9的水平与脑炎的严重程度具有很好的正性相关,这对病情的判断及预后有具有重要的评估意义。抑制MMP-9MMP-9的活性对治疗病毒性脑炎有辅助作用。目前认为TIMPsTIM
30、Ps是最重要的抑制物,但这一新途径由于技术的限制还有待探索。 IrmeliRoine,TuulaPelkonen,AnneliLauhio.ChangesinMMP-9andTIMP-1ConcentrationsinCerebrospinalFluidafter1WeekofTreatmentofChildhoodBacterialMeningitisJ.JClinMicrobiol,2015(53):23402342TsaiHC,ShiMH,LeeSS,eta1.ExpressionofmatrixmetaUopmteinasesandtheirtissueinhibitorsinthes
31、erumandcerebrospinalfluidofpatientswithmeningitisJ.ClinMiembiolInfect,2011,17:780-78434 2.2.7 2.2.7 腺苷脱氨酶 (Adenosine Aeaminase ADAAdenosine Aeaminase ADA)ADAADA是腺嘌呤核苷代谢中的重要酶类该酶的活性与淋巴细胞激活相关特殊病原菌感染如结核杆菌感染可激活淋巴细胞,引起ADAADA增高。相关研究发现细菌性颅内感染发生时,脑脊液中ADAADA升高以结核性脑膜炎为多,化脓性脑膜炎升高次之。 KarsenH,KorukST,KarahocagilM
32、K,eta1.ComparativeanalysisofcerebrospinalfluidadenosinedeaminaseactivityinmeningitisJSwissMedWkly.2011.141:w13214GopalChandraGhosh,BrijeshSharma.CSFADADeterminationinEarlyDiagnosisofTuberculousMeningitisinHIV-InfectedPatientsJ.Scientifica(Cairo).2016;2016:5820823.352.2.82.2.8 2-微球蛋白 (Beta-2 Microglo
33、bulinBeta-2 Microglobulin,2-MG-MG):2-MG-MG是一种小分子蛋白质,其存在于所有有核细胞表面,主要分布于淋巴细胞及巨噬细胞表面。正常脑脊液2-MG-MG含量很少,CNSICNSI时中枢神经系统内免疫系统被激活,产生大量淋巴细胞及巨噬细胞,使2-MG-MG合成增加,大量2-MG-MG由细胞表面脱落进入脑脊液。36当脑脊液中2-MG-MG含量明显升高时可能存在细菌性脑膜炎或结核性脑膜炎,同时进行结核感染相关检验,则2-MG-MG可以作为细菌性脑膜炎与其他类型脑膜炎鉴别诊断的一项辅助指标。2-MG-MG水平与细菌性脑膜炎病情的严重程度相关,检测脑脊液中2-MG-M
34、G水平可作为细菌性脑膜炎的诊断指标,并有助于观察疗效与预后。 蒋荷萍脑脊液乳酸、2-微球蛋白、c反应蛋白和酶活性测定在脑膜炎中的应用J检验医学,2012,27:609-611372.2.92.2.9 可溶性髓细胞触发受体1 1 (Soluble Triggering Receptor Expressed on Myeloid Soluble Triggering Receptor Expressed on Myeloid cells-lcells-l,STREM-1STREM-1)TREMTREM是主要表达于中性粒细胞及成熟单核细胞、巨噬细胞表面的免疫球蛋白超家族活化受体,具有活化炎性因子并抑
35、制抗炎因子的作用,从而在炎性反应的触发及放大过程中发挥作用。STREM-STREM-1 1是TREM-1TREM-1的可溶形式,在感染过程中被分泌到体液或血浆中。38细菌性脑膜炎时,脑脊液中的STREM-1STREM-1明显升高,以25ng/L25ng/L为界对细菌性脑膜炎诊断的灵敏度达90%90%,特异度达93.5%93.5%。随着感染的有效控制STREM-1STREM-1水平逐渐下降,动态检测脑脊液中STREM-1STREM-1水平可以反映感染控制情况。 郭光辉,蒋巧雅,柬振华.可溶性髓系细胞触发受体-1在细菌性脑膜炎诊断中的意义J.国际检验医学杂志,2011,32,951-952,954
36、禚志红,郭果,田培超等.可溶性髓样细胞触发受体-1、乳酸在细菌性脑膜炎患儿中的变化J.中华实用儿科临床杂志,2013,28:864-867392.2.102.2.10 S-100蛋白S-100被认为是神经元、胶质细胞损伤的标志物并且参与颅内感染的病理过程,对CNSICNSI病情判断和预后评估有重要的临床价值。40研究发现细菌性脑膜炎脑脊液中S-100含量明显高于病毒性脑膜炎,而且当S-100取值3.1ng/mL3.1ng/mL时,其鉴别细菌性脑膜炎与病毒性脑膜炎的灵敏度可达90%90%,特异度达100%100%。MRIMRI证实感染后存在神经元损伤患者的脑脊液S100S100 水平明显高于感染
37、后未损伤组及正常对照组。 JungK,GoerdtC,LangeP,eta1.TheuseofS100andTauproteinconcentrationsinthecerebrospinalfluidforthedifferentialdiagnosisofbacterialmeningitis:aretrospectiveanalysisJ.EurNeurel,2011,66:128-132ParkJW,SuhGI,ShinHE.AssociationbetweencerebrospinalfluidS100Bproteinandneuronaldamageinpatientswithce
38、ntralnervoussysteminfectionsJ.YonseiMedJ,2013,54(3):567-571.41急性期病毒性脑炎组脑脊液、血液S-100水平明显高于化脑组和对照组, ,提示病毒侵袭使主要存在于星形胶质细胞中的S-100大量释放入脑脊液。手足口病并病脑患儿脑脊液S-100水平与疾病严重程度密切相关, ,可用来预测病脑的发生。 原芳,乔静.S-100检测在婴幼儿中枢神经感染诊疗中的应用J.中国社区师,2014,14(32):117,119.费安兴.手足口病患儿血清及脑脊液中S100和NSE的表达与病毒性脑炎发生的相关性分析J.中国妇幼健康研究,2014(3):432-4
39、33,434.422.2.112.2.11 胱抑素C C (Cystatin-C (Cystatin-C,Cys-C)Cys-C)Cys-CCys-C为人体所特有, ,主要由柔脑膜合成, ,由有核细胞分泌产生, ,且无组织特异性, ,广泛分布在脑脊液、血液、唾液、尿液中, ,但以脑脊液中含量最高, ,浓度约为血清浓度的5 5倍左右。Cys-CCys-C的重要功能是抑制内源性半胱氨酸蛋白酶活性, ,是目前发现的对组织蛋白酶B B抑制作用最强的抑制剂。 武艳,孙静娜,肖志敏,等.中枢神经系统感染胱抑素C水平变化的临床意义J.现代中西医结合杂志,2012,21(13):1442-1443.43化脑早
40、期, ,脑组织细胞大量变性、坏死释放半胱氨酸蛋白酶, ,使脑脊液中Cys-CCys-C的分泌增加以抑制半胱氨酸蛋白酶的活性, ,而随着病程发展, ,细菌对有核细胞的破坏增多, ,脑脊液中Cys-CCys-C水平可能会下降。病毒性脑膜炎为急性非化脓性炎性反应, ,表现为脑膜充血、水肿, ,淋巴细胞和纤维蛋白浸润, ,细胞分泌Cys-CCys-C则较少。4445细菌性颅内感染脑脊液中TNF-TNF-仪水平显著升高,当TNF-TNF- 75.875.8pg/mlpg/ml时,鉴别细菌性及病毒性感染的敏感性及特异性均达100%100%。当IL-690pg/dLIL-690pg/dL时,鉴别细菌性及病毒
41、性感染的敏感性可达92.3%92.3%特异性可达100%100%。当IL-8773.5pg/dLIL-8773.5pg/dL时,鉴别细菌性及病毒性感染的敏感性达100%100%,特异性达76%76%。 PrasadR,KapoorR,SrivastavaR,MishraOP,SinghTB.CerebrospinalfluidTNF-,IL-6,andIL-8inchildrenwithbacterialmeningitisJ.PediatrNeurol2014;50:60-5.AbdelmoezAT,ZakyDZ,MaherAM.RoleofcerebrospinalfluidIL-8asa
42、markerfordifferentiationbetweenacutebacterialandasepticmeningitisJ.JEgyptSocParasitol2014;44:205-10.46在颅脑损伤和CNSICNSI致脑损伤等情况下,IL-1IL-1的水平及活性明显增高( (可超过30ng/L) 30ng/L) ,可以作为中枢神经系统感染的早期诊断指标。CNSICNSI脑脊液中可溶性白细胞介素2 2受体(slL-2R)(slL-2R)明显增高(1000pg/mL)(1000pg/mL),且化脑患者脑脊液中slL-2RslL-2R的增高较病毒性脑膜炎更显著(P0.05)(P20p
43、g/mL)(20pg/mL)。IFN-IFN-主要由活化的辅助性T1(Thl)T1(Thl)样细胞、活化的自然杀伤(NK)(NK)细胞产生,能增单核巨噬细胞的抗病毒能力,IFN-IFN-在病毒性脑炎患儿脑脊液中显著升高( (可达到28.7pg/mL) 28.7pg/mL) 。 MistchenkoAS,FomariMC,ViegasM,eta1.Detectionofinterleukin10incerebrospinalfluidofpatientswitllsubacutesclerosingpaneneephalitisJ.JNeumvirol,2005,1(I):66-69李山,李灵真
44、,孔繁元.颅内感染患者脑脊液和血清中IFN-、IL-10、S-100B蛋白含量的变化及其意义J.宁夏医科大学学报,2010,32(2):207-21048IFN-IFN-由结核分枝杆菌活化的Th1 Th1 细胞产生, ,诱导单核巨噬细胞的活化, ,在结脑的发病过程中起着重要作用。研究发现结脑患者脑脊液IFN-IFN-水平明显高于对照组, ,且随病程进展, ,脑脊液IFN-IFN-水平逐渐升高, ,提示其对结脑的辅助诊断及预后有一定的指导意义。IFN-IFN-对结脑的诊断敏感性为88.46%, 88.46%, 特异性为87.5% 87.5% 。 BekmurzayevaA,SypabekovaM
45、,KanayevaD.Tuberculosisdiagnosisusingimmunodominant,secretedantigensofMycobacteriumtuberculosisJ.Tuberculosis(Edinb),2013,93(4):381-388.4950NathanCBahr,DavidRBoulware.MethodsofrapiddiagnosisfortheetiologyofmeningitisinadultsJ.BiomarkMed,2014,8(9):10851103.5152多功能液相芯片分析系统 (LuminexLuminex技术)ELISPOTELI
46、SPOT酶联免疫斑点分析仪超敏多因子电化学发光分析仪 (Quick plex SQ120Quick plex SQ120)534.1 Luminex4.1 Luminex基本原理基本原理捕获分子捕获分子待测分子待测分子报告分子报告分子LuminexLuminex技术是在有色微球、激光技术、应用流体学及高速数字信号处技术是在有色微球、激光技术、应用流体学及高速数字信号处理技术的基础上发展起来的一种多功能的液相分析平台理技术的基础上发展起来的一种多功能的液相分析平台荧光编码微球荧光编码微球共价交联(抗体、抗原、核酸)共价交联(抗体、抗原、核酸)进行反应或者杂进行反应或者杂交交激光检测激光检测54液
47、相芯片的应用液相芯片的应用免疫学分析细胞因子检测受体配体分析酶分析蛋白质蛋白质相互作用分析蛋白质DNADNA相互作用分子核酸研究SNPSNP检测基因表达谱分析554.2 Elispot4.2 Elispot荧光款荧光款(ELR06 IFL) (ELR06 IFL) AID iSpot ReaderAID iSpot Reader是近年来在是近年来在EliSpot/FluoroSpot EliSpot/FluoroSpot 技技术上发展起来的最为先进的酶联术上发展起来的最为先进的酶联/ /荧光免疫斑点分析仪荧光免疫斑点分析仪酶联反应为基础的可见光酶联斑点分析(传统酶联反应为基础的可见光酶联斑点分
48、析(传统ELISPOT ELISPOT assayassay)和荧光斑点分析(以)和荧光斑点分析(以EliSpotEliSpot为基础的为基础的FluoroSpot assay)FluoroSpot assay)5657ELISPOTELISPOT法源自法源自ELISAELISA,又突破传统,又突破传统ELISAELISA法法ELISAELISA通过显色反应,在酶标仪上测定吸光度,与标准通过显色反应,在酶标仪上测定吸光度,与标准曲线比较得出定量的可溶性蛋白总量;而曲线比较得出定量的可溶性蛋白总量;而ELISPOTELISPOT通过通过显色反应在细胞分泌这种可溶性蛋白的相应位置上显现显色反应在细
49、胞分泌这种可溶性蛋白的相应位置上显现清晰可辨的斑点,可直接在显微镜下人工计数斑点或通清晰可辨的斑点,可直接在显微镜下人工计数斑点或通过过ELISPOTELISPOT分析系统对斑点进行计数分析系统对斑点进行计数由于是单细胞水平检测,由于是单细胞水平检测,ELISPOTELISPOT比比ELISAELISA和有限稀释法和有限稀释法等更为灵敏等更为灵敏ELISPOTELISPOT以刺激剂激活细胞时,不会影响活化细胞分泌以刺激剂激活细胞时,不会影响活化细胞分泌细胞因子细胞因子584.3 MSD-SQ1204.3 MSD-SQ120可用于检测物质的免疫原性、内分泌激素等,其特点是可用于检测物质的免疫原性
50、、内分泌激素等,其特点是快速、微量、准确快速、微量、准确MSDMSD电化学发光技术与传统酶联免疫分析电化学发光技术与传统酶联免疫分析ELISAELISA优势对比:优势对比:更高灵敏度与更宽的线性范围更高灵敏度与更宽的线性范围节省样本用量,可实现多重检测节省样本用量,可实现多重检测均一性、重复性高均一性、重复性高样本兼容度高,基质效应小样本兼容度高,基质效应小实验流程简便、快速、多元化实验流程简便、快速、多元化59对比对比ELISA节省样本用量,节省样本用量,可实现多重检测可实现多重检测更高灵敏度与更更高灵敏度与更宽的线性范围宽的线性范围样本兼容度高,样本兼容度高,基质效应小基质效应小实验流程简便、实验流程简便、快速、多元化快速、多元化均一性、均一性、重复性高重复性高信号稳定且不受信号稳定且不受显色顺序影响显色顺序影响6061谢谢!2016年7月62此课件下载可自行编辑修改,供参考!感谢您的支持,我们努力做得更好!63