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1、第十章第十章 DNA DNA的生物合成的生物合成 生命的起点生命的起点DNADNA复复复复制制制制RNARNA转录转录转录转录蛋白质蛋白质蛋白质蛋白质翻译翻译翻译翻译?第十章第十章第十章第十章 蛋白质的复制蛋白质的复制蛋白质的复制蛋白质的复制逆转录逆转录逆转录逆转录复制复制复制复制中心法则重点重点重点重点nDNA复制的基本规律复制的基本规律nDNA复制的酶学及拓扑学变化复制的酶学及拓扑学变化nDNA生物合成过程生物合成过程n逆转录现象和逆转录酶逆转录现象和逆转录酶nDNA损伤与修复损伤与修复n n人体体细胞人体体细胞人体体细胞人体体细胞2323对对对对染色体染色体染色体染色体n n各有一半来各
2、有一半来各有一半来各有一半来自于父母自于父母自于父母自于父母n核酸核酸DNA、RNAn 提问：提问：二者区别二者区别 ？n碱基（碱基（A、G、C、TA、G、C、U）n戊糖（脱氧核糖戊糖（脱氧核糖核糖）核糖）DNADNA合成合成合成合成复制复制复制复制体细胞染色体有丝分裂体细胞染色体有丝分裂体细胞染色体有丝分裂体细胞染色体有丝分裂n n第一节第一节第一节第一节 半保留复制半保留复制半保留复制半保留复制n n机制机制机制机制半保留复制半保留复制半保留复制半保留复制12保留了一半父代保留了一半父代保留了一半父代保留了一半父代DNADNA成份成份成份成份父父父父代代代代DNADNA半保留复制子子子子代
3、代代代DNADNA一、半保留复制的实验依据和意义一、半保留复制的实验依据和意义二、双向复制三、复制的半不连续性第二节第二节 DNA复制的酶学复制的酶学 n一、复制的化学反应一、复制的化学反应n（dATP）m+（dGTP）n+（dCTP）y+（dTTP）zn n（dAMP+dGMP+dCMP+dTMP）m+n+y+zn +n （m+n+y+z）PPi二、二、DNA聚合酶聚合酶大肠杆菌大肠杆菌DNA聚合酶聚合酶n 分类分类 n功能功能 53聚合聚合 n 53外切外切n 35外切外切n分子个数分子个数/细胞细胞 400 40 20n聚合能力聚合能力/分钟分钟/分子分子 600 50 105n基因突变
4、后的致死性 可能 不可能 可能（二）真核生物（二）真核生物DNA聚合酶聚合酶n分类分类 存在部位存在部位 功能功能n 细胞核细胞核 起使，引物酶，合成随从链起使，引物酶，合成随从链n 细胞核细胞核 无其他酶时起作用无其他酶时起作用n 线粒体线粒体 线粒体线粒体DNA复制复制n 细胞核细胞核 合成领头链，解螺旋酶合成领头链，解螺旋酶n 细胞核细胞核 校读、修复、填补缺口校读、修复、填补缺口三、三、DNA聚合酶外切酶活性聚合酶外切酶活性 和复制的保真性和复制的保真性n1.严格遵守严格遵守碱基配对规律碱基配对规律n2.聚合酶在复制延长中对聚合酶在复制延长中对碱基的选择碱基的选择功能功能n3.复制出错
5、时有复制出错时有即时的校读即时的校读功能功能四、复制中解链和四、复制中解链和DNA分子的拓扑学变化分子的拓扑学变化n（一）解螺旋酶（一）解螺旋酶n 与复制相关的基因：与复制相关的基因：dnaA、dnaB、dnaXn 相应的基因产物：相应的基因产物：DnaA、DnaBDnaXn DnaA：辨认复制起始点：辨认复制起始点：oriC（origin C）n DnaB：解开：解开DNA双螺旋双螺旋解螺旋酶解螺旋酶（二）（二）DNA拓扑异构酶拓扑异构酶(三）、单链三）、单链DNA结合蛋白（结合蛋白（SSB）n性质：由性质：由177177个氨基酸残基组成的相同四聚体个氨基酸残基组成的相同四聚体n 结合单链结
6、合单链DNADNA跨度约跨度约3232个核苷酸单位；个核苷酸单位；n 随着复制的进行而不断地结合、脱离随着复制的进行而不断地结合、脱离n 具有协同效应具有协同效应 功能：维持模板处于单链状态功能：维持模板处于单链状态n 保护单链免受核酸酶降解。保护单链免受核酸酶降解。四、引物酶与引发体四、引物酶与引发体n引物酶（引物酶（primase）：）：n 是是dnaG 的产物的产物n 为一种特殊的为一种特殊的RNA聚合酶；聚合酶；n 产物为长产物为长1020碱基的碱基的RNA链；链；n引发体（引发体（primosome）：）： DnaA（辨认起始点）、（辨认起始点）、DnaB（解螺旋酶）、（解螺旋酶）、
7、n DnaC、加上其他复制因子构成复合体，加上其他复制因子构成复合体， n 结合到模板结合到模板DNA上，引物酶进入后所构成的复合上，引物酶进入后所构成的复合 n 物。物。五、五、DNA连接酶连接酶五、五、DNA连接酶（连接酶（DNA ligase）n1.旋转酶旋转酶解开解开超螺超螺旋旋。第三节第三节第三节第三节 DNA DNA生物合成过程生物合成过程生物合成过程生物合成过程 一、复制的起始一、复制的起始完成复制后的染色体完成复制后的染色体完成复制后的染色体完成复制后的染色体子代细胞中的一条染色体子代细胞中的一条染色体子代细胞中的一条染色体子代细胞中的一条染色体旋旋旋旋转转转转酶酶酶酶n2.解
8、螺旋酶解螺旋酶在起点在起点双向双向双向双向打开打开螺旋螺旋复制起始处的复制起始处的DNA片段片段起点起点复制叉复制叉复制叉复制叉解螺旋酶解螺旋酶解螺旋酶解螺旋酶解开双链解开双链解开双链解开双链解解解解螺螺螺螺旋旋旋旋酶酶酶酶3. 3.DNADNA结合结合结合结合蛋白蛋白蛋白蛋白与单链与单链与单链与单链结合并向前结合并向前结合并向前结合并向前移动移动移动移动DNADNA结合蛋白结合蛋白结合蛋白结合蛋白起点起点起点起点提问提问：DNA结合蛋白的作用？结合蛋白的作用？A AT TGGC C防止单链复合防止单链复合起点起点起点起点A AT TC CC CA AT TT T小段小段小段小段RNARNA引
9、物引物引物引物U U磷酸核糖磷酸核糖磷酸核糖磷酸核糖RNARNA聚合酶聚合酶聚合酶聚合酶4. 4.RNARNA聚聚聚聚合酶合酶合酶合酶催化催化催化催化起点处通起点处通起点处通起点处通过碱基互过碱基互过碱基互过碱基互补补补补连接引连接引连接引连接引物物物物RNARNA链。链。链。链。作用作用确定起始部位，引导复制开始。确定起始部位，引导复制开始。3OH5PiPiPi3OH5PiPiPi3OH5PiPiPi为什么不能直接连接为什么不能直接连接DNA？RNA是真正的细胞是真正的细胞主人主人AUU G C二、二、二、二、新链新链新链新链5353延长延长延长延长（复制（复制（复制（复制DNADNA）开链
10、方向开链方向起点新链5 5新链3 3新链3 3新链5 5 ？ ？父代父代DNADNA两链方向相反两链方向相反 ！必必必必然然然然无无无无法法法法连连连连续续续续复复复复制制制制开链方向开链方向7 7 7 7. . . .均以均以均以均以5 5 5 53333方向形成前导链和滞后链方向形成前导链和滞后链方向形成前导链和滞后链方向形成前导链和滞后链由由由由冈崎片段冈崎片段冈崎片段冈崎片段连接成的新连接成的新连接成的新连接成的新DNADNA链称链称链称链称滞后链滞后链滞后链滞后链。与与与与复制叉复制叉复制叉复制叉移动方向相同，可以一直复制移动方向相同，可以一直复制移动方向相同，可以一直复制移动方向相
11、同，可以一直复制到底的新到底的新到底的新到底的新DNADNA链称链称链称链称前导链前导链前导链前导链。（三）滚环复制（三）滚环复制三、复制的终止三、复制的终止n（一）原核生物复制终止及不连续片段连接（一）原核生物复制终止及不连续片段连接（二）真核生物的端粒和端粒酶二）真核生物的端粒和端粒酶335555335533前导链前导链前导链前导链连续复制连续复制连续复制连续复制滞后链滞后链滞后链滞后链不连续复制不连续复制不连续复制不连续复制DNADNA复制为复制为5353半不连续半不连续复制。复制。半保留半保留半保留半保留复制结果复制结果复制结果复制结果半不连续半不连续半不连续半不连续复制过程复制过程复
12、制过程复制过程为什么进化出如此复杂的复制机制呢？为什么进化出如此复杂的复制机制呢？n在在RNA的监控下保持的监控下保持DNA复制的高度忠实性复制的高度忠实性n用用RNA引物控制起始，同时充分发挥了引物控制起始，同时充分发挥了DNA聚合聚合酶的纠错能力。酶的纠错能力。n n第四节第四节第四节第四节 DNA DNA的损伤和修复的损伤和修复的损伤和修复的损伤和修复n损伤损伤结构破坏、功能破坏结构破坏、功能破坏n一、突变的一、突变的意义意义n二、二、哪些因素会引起哪些因素会引起DNA损伤？损伤？n环境污染物环境污染物物理因素（紫外线、（电离、核）辐物理因素（紫外线、（电离、核）辐射）、化学诱变剂、射）
13、、化学诱变剂、病毒杂合等病毒杂合等。突变的意义突变的意义n1.突变是进化分化的分子基础突变是进化分化的分子基础n2.只有基因型改变的突变只有基因型改变的突变n3.致死性的突变致死性的突变n4.突变是某些疾病的突变是某些疾病的发病基础发病基础如如经经DNA为什么进化出如此复杂的为什么进化出如此复杂的复制机制呢？复制机制呢？修复后有缺陷修复后有缺陷，DNA就会就会发生突变发生突变发展成癌细胞发展成癌细胞三、突变分子改变的类型三、突变分子改变的类型n（一）、错配（一）、错配（点突变点突变）n（二）、缺失、插入和（二）、缺失、插入和框移突变框移突变n（三）、（三）、重排重排四、四、DNA损伤的修复损伤
14、的修复n1.光复活光复活T TT T紫外线紫外线紫外线紫外线(260nm)(260nm)T(胸腺嘧啶）二聚体胸腺嘧啶）二聚体双键打开双键打开双键打开双键打开紫外光紫外光紫外光紫外光T-TT-T二聚体二聚体二聚体二聚体可见光激活该可见光激活该可见光激活该可见光激活该酶酶酶酶只有高等哺乳动物该功能退化掉了。只有高等哺乳动物该功能退化掉了。例例 对细菌紫外诱变或杀灭时尽量保持暗环境。对细菌紫外诱变或杀灭时尽量保持暗环境。光复活酶结合于损伤部位光复活酶结合于损伤部位光复活酶结合于损伤部位光复活酶结合于损伤部位2.切除修复切除修复核酸酶核酸酶核酸酶核酸酶DNADNA聚合酶聚合酶聚合酶聚合酶DNADNA连
15、接酶连接酶连接酶连接酶属于复制前的修复。属于复制前的修复。属于复制前的修复。属于复制前的修复。3.重组修复重组修复n复制同时的修复复制同时的修复*复制复制复制复制DNADNA聚合酶、连接酶补缺聚合酶、连接酶补缺聚合酶、连接酶补缺聚合酶、连接酶补缺提问：提问：提问：提问：原损伤部位没有修复，对后代影响大吗？原损伤部位没有修复，对后代影响大吗？原损伤部位没有修复，对后代影响大吗？原损伤部位没有修复，对后代影响大吗？在后代中只有一个个体含有该条在后代中只有一个个体含有该条DNA，后代，后代越多，影响比例越小，等于消除影响。越多，影响比例越小，等于消除影响。*4.SOS修复修复nSOS求救信号求救信号
16、nDNA损伤严重，复制受到抑制，前几种方法难以奏效时：n诱导校对能力差的诱导校对能力差的DNA聚合酶形成，聚合酶形成，局部局部“乱配乱配”*进化、变种、癌症、诱变育种等等都是基于这一机理。进化、变种、癌症、诱变育种等等都是基于这一机理。n为了生存为了生存变变。第五节第五节第五节第五节 逆转录逆转录逆转录逆转录（RNARNA指导的指导的指导的指导的DNADNA合成）合成）合成）合成）n n某些病毒的生存方式。某些病毒的生存方式。某些病毒的生存方式。某些病毒的生存方式。n n如如如如 HIVHIV病毒、致癌病毒病毒、致癌病毒病毒、致癌病毒病毒、致癌病毒胞膜蛋白胞膜蛋白双分子层双分子层衣壳蛋白衣壳蛋
17、白RNA (病毒基因）病毒基因）破坏免疫识别机制，引起免疫系统失效！破坏免疫识别机制，引起免疫系统失效！破坏免疫识别机制，引起免疫系统失效！破坏免疫识别机制，引起免疫系统失效！逆转录酶逆转录酶逆转录酶逆转录酶辅助辅助辅助辅助T T细胞细胞细胞细胞- -给病给病给病给病原体加识别标记原体加识别标记原体加识别标记原体加识别标记的血液细胞的血液细胞的血液细胞的血液细胞逆转录病毒逆转录病毒DNADNA单链单链单链病毒单链病毒DNADNA复制互补链复制互补链异源重组异源重组病毒病毒RNARNA转录转录免疫系统的敌免疫系统的敌我识别机制失我识别机制失效！效！切割形成病毒切割形成病毒蛋白蛋白组合成组合成新病
18、毒新病毒并攻击并攻击下一个下一个目标目标指导形成病毒蛋白原链指导形成病毒蛋白原链治疗原理（鸡尾酒疗法）治疗原理（鸡尾酒疗法）n阻止阻止逆转录逆转录DNAn阻止阻止病毒蛋白原病毒蛋白原切割切割n n洁身自好洁身自好预防为主预防为主第五节第五节 逆转录现象和逆转录酶逆转录现象和逆转录酶5Sv8VxaXAcZCf$Eh&Hk(Jm+Mo1Or4Qt6Tw8VybXAd#Df$Fi*Hk)Kn+Mp2Pr4Ru6Tw9WybYBe#Dg%Gi*Il-Kn0Nq2Ps5Ru7Ux9WzcZBe!Eh%Gj(Jl-Lo1Nq3Qs5Sv8UxaXAcZCf$Eh&Hk(Jm+Lo1Or3Qt6Tv8Vyb
19、XAd#Df$Fi*Hk)Km+Mp2Or4Ru6Tw9WybYBe#Dg%Fi*Il)Kn0Np2Ps5Ru7Ux9WzcZBe!Eg%Gj(Il-Lo0Nq3Qs5Sv8UxaXzcZCf!Eh&Hj(Jm+Lo1Or3Qt6Tv8VyaXAd#Cf$Fi&Hk)Km+Mp2Or4Rt6Tw9VybYBd#Dg%Fi*Il)Kn0Np2Ps4Ru7Uw9WzcYBe!Eg%Gj(Il-Ln0Nq3Ps5Sv7UxaXzcZCf!Eh&Hj(Jm-Lo1Oq3Qt6Sv8VyaXAd#Cf$Fh&Hk)Jm+Mp1Or4Rt6Tw9VybYBd#Dg$Fi*Ik)Kn0Mp2Ps4Ru7Uw
20、9WzbYBe!Dg%Gj*Il-Ln0Nq3Ps5Sv7UxaWzcZCe!Eh&Gj(Jm-Lo1Oq3Qt5Sv8VxaXAdZCf$Fh&Hk)Jm+Mp1Or4Qt6Tw8VybYAd#Dg$Fi*Ik)Kn+Mp2Pr4Ru7Tw9WzbYBe!Dg%Gj*Il-Kn0Nq2Ps5Su7UxaWzcZCe!Eh%Gj(Jl-Lo1Nq3Qt5Sv8VxaXAdZCf$Eh&Hk(Jm+Mo1Or4Qt6Tw8VybXAd#Df$Fi*Hk)Kn+Mp2Pr4Ru7Tw9WybYBe#Dg%Gi*Il-Kn0Nq2Ps5Ru7Ux9WzcZBe!Eh%Gj(Jl-Lo1Nq3Qs5S
21、v8UxaXAcZCf$Eh&Hk(Jm+Lo1Or3Qt6Tv8VybXAd#Df$Fi*Hk)Km+Mp2Or4Ru6Tw9WybYBe#Dg%Fi*Il)Kn0Np2Ps5RuaXAdZCf$Fh&Hk(Jm+Mo1Or4Qt6Tw8VybYAd#Dg$Fi*Hk)Kn+Mp2Pr4Ru7Tw9WzbYBe#Dg%Gi*Il-Kn0Nq2Ps5Su7UxaWzcZBe!Eh%Gj(Jl-Lo1Nq3Qt5Sv8UxaXAcZCf$Eh&Hk(Jm+Mo1Or4Qt6Tv8VybXAd#Df$Fi*Hk)Kn+Mp2Or4Ru6Tw9WybYBe#Dg%Gi*Il-Kn0Np2Ps5Ru7
22、Ux9WzcZBe!Eh%Gj(Il-Lo0Nq3Qs5Sv8UxaXAcZCf$Eh&Hj(Jm+Lo1Or3Qt6Tv8VybXAd#Cf$Fi&Hk)Km+Mp2Or4Ru6Tw9WybYBd#Dg%Fi*Il)Kn0Np2Ps5Ru7Uw9WzcYBe!Eg%Gj(Il-Lo0Nq3Qs5Sv7UxaXzcZCf!Eh&Hj(Jm+Lo1Oq3Qt6Sv8VyaXAd#Cf$Fi&Hk)Km+Mp1Or4Rt6Tw9VybYBd#Dg%Fi*Ik)Kn0Mp2Ps4Ru7Uw9WzcYBe!Eg%Gj*Il-Ln0Nq3Ps5Sv7UxaXzcZCe!Eh&Gj(Jm-Lo1Oq3Qt
23、6Sv8VyaXAdZCf$Fh&Hk)Jm+Mp1Or4Rt6Tw8VybYAd#Dg$Fi*Ik)Kn0Mp2Ps4Ru7Tw9WzbYBe!Dg%Gj*Il-Ln0Nq2Ps5Su7UxaWzcZCe!Eh&Gj(Jm-Lo1Nq3Qt5Sv8VxaXAdZCf$Fh&Hk(Jm+Mo1Or4Qt6Tw8VybYAd#Dg$Fi*Hk)Kn+Mp2Pr4Ru7Tw9WzbYBe!Dg%Gi*Il-Kn0Nq2Ps5Su7UxaWzcZBe!Eh%Gj(Jl-Lo1Nq3Qt5Sv8Vxd#Dg$Fi*Ik)Kn0Mp2Ps4Ru7Uw9WzbYBe!Dg%Gj*Il-Ln0Nq3Ps5S
24、v7UxaWzcZCe!Eh&Gj(Jm-Lo1Oq3Qt5Sv8VxaXAdZCf$Fh&Hk)Jm+Mp1Or4Qt6Tw8VybYAd#Dg$Fi*Ik)Kn+Mp2Pr4Ru7Tw9WzbYBe!Dg%Gj*Il-Kn0Nq2Ps5Su7UxaWzcZCe!Eh%Gj(Jl-Lo1Nq3Qt5Sv8VxaXAdZFi*Ik)Kn0Mp2Ps4Ru7Uw9WzcYBe!Eg%Gj*Il-Ln0Nq3Ps5Sv7UxaXzcZCe!Eh&Gj(Jm-Lo1Oq3Qt6Sv8VyaXAdZCf$Fh&Hk)Jm+Mp1Or4Rt6Tw8VybYAd#Dg$Fi*Ik)Kn0Mp2Ps4Ru7
25、Tw9WzbYBe!Dg%Gj*Il-Ln0Nq2Ps5Su7UxaWzcZCe!Eh&Gj(Jm-Lr4Rt6Tw9VybYBd#Dg%Fi*Il)Kn0Mp2Ps4Ru7Uw9WzcYBe!Eg%Gj(Il-Ln0Nq3Ps5Sv7UxaXzcZCf!Eh&Gj(Jm-Lo1Oq3Qt6Sv8VyaXAd#Cf$Fh&Hk)Jm+Mp1Or4Rt6Tw9VybYAd#Dg$Fi*Ik)Kn0Mp2Ps4Ru7Uw9WzbYBe!Dg%Gj*Il-Ln0Nq3Ps5Su7UxaWzcZCe!Eh&Gj(Jm-Lo1Oq3Qt5Sv8VxaXAdZCf$Fh&Kn0Np2Ps5Ru7Uw9Wz
26、cYBe!Eg%Gj(Il-Lo0Nq3Ps5Sv7UxaXzcZCf!Eh&Hj(Jm+Lo1Oq3Qt6Sv8VyaXAd#Cf$Fi&Hk)Jm+Mp1Or4Rt6Tw9VybYBd#Dg%Fi*Ik)Kn0Mp2Ps4Ru7Uw9WzcYBe!Dg%Gj*Il-Ln0Nq3Ps5Sv7UxaXzcZCe!Eh&Gj(Jm-Lo1Oq3Qt6Sv8VxaXAdZCf$Fh&Hk)Jp2Ps5Ru7Ux9WzcYBe!Eg%Gj(Il-Lo0Nq3Qs5Sv8UxaXzcZCf!Eh&Hj(Jm+Lo1Or3Qt6Sv8VyaXAd#Cf$Fi&Hk)Km+Mp2Or4Rt6Tw9VybY
27、Bd#Dg%Fi*Il)Kn0Mp2Ps4Ru7Uw9WzcYBe!Eg%Gj(Il-Ln0Nq3Ps5Sv7UxaXzcZCf!Eh&Gj(Jm-Lo1Oq3Qt6Sv8VyaXAg%Gi*Il)Kn0Np2Ps5Ru7Ux9WzcZBe!Eg%Gj(Il-Lo0Nq3Qs5Sv8UxaXAcZCf!Eh&Hj(Jm+Lo1Or3Qt6Tv8VyaXAd#Cf$Fi&Hk)Km+Mp2Or4Ru6Tw9VybYBd#Dg%Fi*Il)Kn0Np2Ps4Ru7Uw9WzcYBe!Eg%Gj(Il-Lo0Nq3Ps5Sv7UxaXzcZCf!Ek)Kn+Mp2Pr4Ru6Tw9WybYBe#Dg
28、%Gi*Il-Kn0Np2Ps5Ru7Ux9WzcZBe!Eh%Gj(Jl-Lo0Nq3Qs5Sv8UxaXAcZCf$Eh&Hj(Jm+Lo1Or3Qt6Tv8VybXAd#Df$Fi&Hk)Km+Mp2Or4Ru6Tw9WybYBd#Dg%Fi*Il)Kn0Np2Ps5Ru7Ux9WzcYEh&Hk(Jm+Mo1Or4Qt6Tw8VybXAd#Df$Fi*Hk)Kn+Mp2Pr4Ru7Tw9WybYBe#Dg%Gi*Il-Kn0Nq2Ps5Su7Ux9WzcZBe!Eh%Gj(Jl-Lo1Nq3Qs5Sv8UxaXAcZCf$Eh&Hk(Jm+Mo1Or3Qt6Tv8VybXAd#Df$F
29、i*Hk)Km+Mp2Su7UxaWzcZCe!Eh&Gj(Jm-Lo1Nq3Qt5Sv8VxaXAdZCf$Fh&Hk(Jm+Mo1Or4Qt6Tw8VybYAd#Dg$Fi*Hk)Kn+Mp2Pr4Ru7Tw9WzbYBe#Dg%Gi*Il-Kn0Nq2Ps5Su7UxaWzcZBe!Eh%Gj(Jl-Lo1Nq3Qt5Sv8UBd#Dg$Fi*Ik)Kn0Mp2Ps4Ru7Uw9WzbYBe!Dg%Gj*Il-Ln0Nq3Ps5Sv7UxaWzcZCe!Eh&Gj(Jm-Lo1Oq3Qt5Sv8VxaXAdZCf$Fh&Hk)Jm+Mp1Or4Qt6Tw8VybYAd#Dg$Fi*Ik)
30、Kn+Mp2Pr4Ru7Tw9Wzf!Eh&Hj(Jm+Lo1Oq3Qt6Sv8VyaXAd#Cf$Fi&Hk)Jm+Mp1Or4Rt6Tw9VybYBd#Dg%Fi*Ik)Kn0Mp2Ps4Ru7Uw9WzcYBe!Dg%Gj*Il-Ln0Nq3Ps5Sv7UxaXzcZCe!Eh&Gj(Jm-Lo1Oq3Qt6SybYBe#Dg%Fi*Il)Kn0Np2Ps5Ru7Ux9WzcYBe!Eg%Gj(Il-Lo0Nq3Qs5Sv8UxaXzcZCf!Eh&Hj(Jm+Lo1Or3Qt6Sv8VyaXAd#Cf$Fi&Hk)Km+Mp2Or4Rt6Tw9VybYBd#Dg%Fi*Il)Kn0Qs
31、5Sv8UxaXAcZCf$Eh&Hk(Jm+Mo1Or3Qt6Tv8VybXAd#Df$Fi*Hk)Km+Mp2Or4Ru6Tw9WybYBe#Dg%Gi*Il)Kn0Np2Ps5Ru7Ux9WzcZBe!Eg%Gj(Il-Lo0Nq3Qs5Sv8UxaXAcZFi*Hk)Kn+Mp2Pr4Ru7Tw9WzbYBe!Dg%Gi*Il-Kn0Nq2Ps5Su7UxaWzcZBe!Eh%Gj(Jl-Lo1Nq3Qt5Sv8VxaXAcZCf$Eh&Hk(Jm+Mo1Or4Qt6Tv8VybXAd#Df$Fi*Hk)Kn+Mp2Pr4Ru6Tw9WybYBe#Dg%Gi*Il-Kn0Nt5Sv8V
32、xaXAdZCf$Fh&Hk)Jm+Mp1Or4Qt6Tw8VybYAd#Dg$Fi*Ik)Kn0Mp2Pr4Ru7Tw9WzbYBe!Dg%Gj*Il-Kn0Nq2Ps5Su7UAd#Cf$Fi&Hk)Km+Mp1Or4Rt6Tw9VybYBd#Dg%Fi*Ik)Kn0Mp2Ps4Ru7Uw9WzcYBe!Eg%Gj*Il-Ln0Nq3Ps5Sv7UxaXzcZCe!Eh&Gj(Jm-Lo1Oq3Qt6Sv8VyaXAdZCf$Fh&Hk)Np2Ps5Ru7Ux9WzcZBe!Eg%Gj(Il-Lo0Nq3Qs5Sv8UxaXzcZCf!Eh&Hj(Jm+Lo1Or3Qt6Tv8VyaXAd
33、#Cf$Fi&Hk)Km+Mp2Or4Rt6Tw9VybYBd#Dg%Fi*Il)Kn0Np2Ps4Ru7UwcZCf$Eh&Hk(Jm+Mo1Or3Qt6Tv8VybXAd#Df$Fi*Hk)Kn+Mp2Or4Ru6Tw9WybYBe#Dg%Gi*Il)Kn0Np2Ps5Ru7Ux9WzcZBe!Eh%Gj(Il-Lo0Nq3Qs5Sv8YAd#Dg$Fi*Ik)Kn+Mp2Pr4Ru7Tw9WzbYBe!Dg%Gi*Il-Kn0Nq2Ps5Su7UxaWzcZCe!Eh%Gj(Jl-Lo1Nq3Qt5Sv8VxaXAcZCf$Eh&Hk(Jm+Mo1Or4Uw9WzcYBe!Dg%Gj*I
34、l-Ln0Nq3Ps5Sv7UxaWzcZCe!Eh&Gj(Jm-Lo1Oq3Qt6Sv8VxaXAdZCf$Fh&Hk)Jm+Mp1Or4Qt6Tw8VybYAd#Dg$Fi*Ik)Kq3Qs5Sv7UxaXzcZCf!Eh&Hj(Jm+Lo1Or3Qt6Sv8VyaXAd#Cf$Fi&Hk)Km+Mp1Or4Rt6Tw9VybYBd#Dg%Fi*Il)Kn0Mp2Ps4Ru7Uw9WzcYBe!Hk(Jm+Lo1Or3Qt6Tv8VybXAd#Df$Fi*Hk)Km+Mp2Or4Ru6Tw9WybYBe#Dg%Fi*Il)Kn0Np2Ps5Ru7Ux9WzcZBe!Eg%Gj(Il-Lo0Nq3Qs5Sv8UxaXzcZCf!Eh&Hj(Jm+Lo1Ru7Tw9WzbY
