临床免疫学检验：第15章 流式细胞仪分析技术及应用

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1、第十五章第十五章 流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用( (Chapter 17 Detection of complement and its applicationChapter 17 Detection of complement and its application) )临床免疫学检验临床免疫学检验第十五章第十五章第十五章第十五章 流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用临床免疫学检验临床免疫学检验临床免疫学检验临床免疫学检验第十五章第十五章 流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用第一节第一节 流式细胞仪的

2、分析及分选原理流式细胞仪的分析及分选原理第二节第二节 数据的显示与分析数据的显示与分析第三节第三节 流式细胞仪免疫分析的技术要求流式细胞仪免疫分析的技术要求第四节第四节 流式细胞术在免疫学检查中的应用流式细胞术在免疫学检查中的应用第十五章第十五章第十五章第十五章 流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用临床免疫学检验临床免疫学检验临床免疫学检验临床免疫学检验第一节第一节 流式细胞仪的分析及分选原理流式细胞仪的分析及分选原理流式细胞术（流式细胞术（流式细胞术（流式细胞术（flow cytometryflow cytometry，FCMFCM

3、）n是以流式细胞仪为检测手段的一项能快速、精确的对是以流式细胞仪为检测手段的一项能快速、精确的对单个细胞理化特性进行多参数定量分析和分选的技术。单个细胞理化特性进行多参数定量分析和分选的技术。n通过流式细胞仪我们可以干什么？通过流式细胞仪我们可以干什么？相对细胞大小相对细胞大小相对细胞颗粒密度和内部复杂度相对细胞颗粒密度和内部复杂度细胞表面及内部分子的表达（多参数）细胞表面及内部分子的表达（多参数）分离纯化细胞分离纯化细胞比较形态学观察，免疫组化比较形态学观察，免疫组化比较形态学观察，免疫组化比较形态学观察，免疫组化第十五章第十五章第十五章第十五章 流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及

4、应用流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用临床免疫学检验临床免疫学检验临床免疫学检验临床免疫学检验第一节第一节 流式细胞仪的分析及分选原理流式细胞仪的分析及分选原理一、流式细胞仪分析的工作原理一、流式细胞仪分析的工作原理一、流式细胞仪分析的工作原理一、流式细胞仪分析的工作原理喷嘴喷嘴荧光信号或侧向散射光荧光信号或侧向散射光荧光信号或侧向散射光荧光信号或侧向散射光前向散射光前向散射光前向散射光前向散射光鞘液鞘液激光激光激光激光第十五章第十五章第十五章第十五章 流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用临床免疫学检验临床免疫学检验临床

5、免疫学检验临床免疫学检验第一节第一节 流式细胞仪的分析及分选原理流式细胞仪的分析及分选原理n基本组成结构基本组成结构液流系统：样本，鞘液液流系统：样本，鞘液光学系统：激光光源，分色反光镜，光束成形器，光学系统：激光光源，分色反光镜，光束成形器，透镜组，光电倍增管透镜组，光电倍增管数据处理系统：计算机和软件数据处理系统：计算机和软件一、流式细胞仪分析的工作原理一、流式细胞仪分析的工作原理一、流式细胞仪分析的工作原理一、流式细胞仪分析的工作原理第十五章第十五章第十五章第十五章 流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用临床免疫学检验临床免疫学检

6、验临床免疫学检验临床免疫学检验第一节第一节 流式细胞仪的分析及分选原理流式细胞仪的分析及分选原理n基本组成结构基本组成结构n基本工作原理基本工作原理一、流式细胞仪分析的工作原理一、流式细胞仪分析的工作原理一、流式细胞仪分析的工作原理一、流式细胞仪分析的工作原理第十五章第十五章第十五章第十五章 流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用临床免疫学检验临床免疫学检验临床免疫学检验临床免疫学检验第一节第一节 流式细胞仪的分析及分选原理流式细胞仪的分析及分选原理n分选的基本原理分选的基本原理二、分选基本原理二、分选基本原理二、分选基本原理二、分选基

7、本原理第十五章第十五章第十五章第十五章 流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用临床免疫学检验临床免疫学检验临床免疫学检验临床免疫学检验第二节第二节 数据的显示与分析数据的显示与分析n前向散射光（前向散射光（FS）反映细胞或颗粒的大小反映细胞或颗粒的大小n侧向散射光（侧向散射光（SS）反映细胞或颗粒内部结构复杂程度、表面光滑程度反映细胞或颗粒内部结构复杂程度、表面光滑程度n荧光（荧光（FL）反映细胞或颗粒被染上荧光数量的多少反映细胞或颗粒被染上荧光数量的多少一、参数一、参数一、参数一、参数第十五章第十五章第十五章第十五章 流式细胞仪分析技

8、术及应用流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用临床免疫学检验临床免疫学检验临床免疫学检验临床免疫学检验第二节第二节 数据的显示与分析数据的显示与分析n前向散射光（前向散射光（SS）反映细胞或颗粒的大小反映细胞或颗粒的大小二、散射光的测定二、散射光的测定二、散射光的测定二、散射光的测定第十五章第十五章第十五章第十五章 流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用临床免疫学检验临床免疫学检验临床免疫学检验临床免疫学检验第二节第二节 数据的显示与分析数据的显示与分析n前向散射光（前向散射光（SS）反映细胞或颗粒的大

9、小反映细胞或颗粒的大小二、散射光的测定二、散射光的测定二、散射光的测定二、散射光的测定第十五章第十五章第十五章第十五章 流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用临床免疫学检验临床免疫学检验临床免疫学检验临床免疫学检验第二节第二节 数据的显示与分析数据的显示与分析n侧向散射光（侧向散射光（FS）反映细胞或颗粒内部结构复杂程度、表面光滑程度反映细胞或颗粒内部结构复杂程度、表面光滑程度二、散射光的测定二、散射光的测定二、散射光的测定二、散射光的测定第十五章第十五章第十五章第十五章 流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技

10、术及应用流式细胞仪分析技术及应用临床免疫学检验临床免疫学检验临床免疫学检验临床免疫学检验第二节第二节 数据的显示与分析数据的显示与分析n侧向散射光（侧向散射光（FS）反映细胞或颗粒内部结构复杂程度、表面光滑程度反映细胞或颗粒内部结构复杂程度、表面光滑程度二、散射光的测定二、散射光的测定二、散射光的测定二、散射光的测定第十五章第十五章第十五章第十五章 流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用临床免疫学检验临床免疫学检验临床免疫学检验临床免疫学检验第二节第二节 数据的显示与分析数据的显示与分析n荧光信号检测与放大器荧光信号检测与放大器反映细胞

11、或颗粒被染上荧光数量的多少反映细胞或颗粒被染上荧光数量的多少 激发光：荧光素吸收激光能量激发光：荧光素吸收激光能量 荧光：荧光素将吸收能量释放，释放较入射光波长更荧光：荧光素将吸收能量释放，释放较入射光波长更长的光量子长的光量子 荧光素抗体：荧光抗体与细胞抗原结合越多，产生的荧光素抗体：荧光抗体与细胞抗原结合越多，产生的荧光信号越强荧光信号越强 三、荧光测量三、荧光测量三、荧光测量三、荧光测量第十五章第十五章第十五章第十五章 流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用临床免疫学检验临床免疫学检验临床免疫学检验临床免疫学检验第二节第二节 数据

12、的显示与分析数据的显示与分析n荧光信号检测与放大器荧光信号检测与放大器反映细胞或颗粒被染上荧光数量的多少反映细胞或颗粒被染上荧光数量的多少三、荧光测量三、荧光测量三、荧光测量三、荧光测量第十五章第十五章第十五章第十五章 流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用临床免疫学检验临床免疫学检验临床免疫学检验临床免疫学检验第二节第二节 数据的显示与分析数据的显示与分析n荧光信号检测与放大器荧光信号检测与放大器反映细胞或颗粒被染上荧光数量的多少反映细胞或颗粒被染上荧光数量的多少放大器放大器 线性放大器线性放大器 对数放大器对数放大器三、荧光测量三、

13、荧光测量三、荧光测量三、荧光测量第十五章第十五章第十五章第十五章 流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用临床免疫学检验临床免疫学检验临床免疫学检验临床免疫学检验第二节第二节 数据的显示与分析数据的显示与分析n单参数直方图单参数直方图四、数据显示方式四、数据显示方式四、数据显示方式四、数据显示方式第十五章第十五章第十五章第十五章 流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用临床免疫学检验临床免疫学检验临床免疫学检验临床免疫学检验第二节第二节 数据的显示与分析数据的显示与分析n单参数直方图

14、单参数直方图四、数据显示方式四、数据显示方式四、数据显示方式四、数据显示方式第十五章第十五章第十五章第十五章 流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用临床免疫学检验临床免疫学检验临床免疫学检验临床免疫学检验第二节第二节 数据的显示与分析数据的显示与分析n单参数直方图单参数直方图四、数据显示方式四、数据显示方式四、数据显示方式四、数据显示方式第十五章第十五章第十五章第十五章 流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用临床免疫学检验临床免疫学检验临床免疫学检验临床免疫学检验第二节第二节 数

15、据的显示与分析数据的显示与分析n单参数直方图单参数直方图四、数据显示方式四、数据显示方式四、数据显示方式四、数据显示方式第十五章第十五章第十五章第十五章 流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用临床免疫学检验临床免疫学检验临床免疫学检验临床免疫学检验第二节第二节 数据的显示与分析数据的显示与分析n双参数散点图（点图）双参数散点图（点图）四、数据显示方式四、数据显示方式四、数据显示方式四、数据显示方式人外周血白细胞人外周血白细胞人外周血白细胞人外周血白细胞第十五章第十五章第十五章第十五章 流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用流式

16、细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用临床免疫学检验临床免疫学检验临床免疫学检验临床免疫学检验第二节第二节 数据的显示与分析数据的显示与分析n双参数散点图（点图）双参数散点图（点图）四、数据显示方式四、数据显示方式四、数据显示方式四、数据显示方式人外周血白细胞中的人外周血白细胞中的人外周血白细胞中的人外周血白细胞中的T T细胞细胞细胞细胞第十五章第十五章第十五章第十五章 流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用临床免疫学检验临床免疫学检验临床免疫学检验临床免疫学检验第二节第二节 数据的显示与分析数据的显示与分析n流式细胞仪的多参数分

17、析流式细胞仪的多参数分析四、数据显示方式四、数据显示方式四、数据显示方式四、数据显示方式人外周血白细胞中的人外周血白细胞中的人外周血白细胞中的人外周血白细胞中的T T细胞亚群细胞亚群细胞亚群细胞亚群“ “门门门门” ”的设置的设置的设置的设置第十五章第十五章第十五章第十五章 流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用临床免疫学检验临床免疫学检验临床免疫学检验临床免疫学检验第二节第二节 数据的显示与分析数据的显示与分析n流式细胞仪的多参数分析流式细胞仪的多参数分析四、数据显示方式四、数据显示方式四、数据显示方式四、数据显示方式“ “门门门门”

18、 ”的设置的设置的设置的设置第十五章第十五章第十五章第十五章 流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用临床免疫学检验临床免疫学检验临床免疫学检验临床免疫学检验第三节第三节 流式细胞仪免疫分析的技术要求流式细胞仪免疫分析的技术要求n制备单细胞悬液制备单细胞悬液外周血淋巴细胞样品的制备外周血淋巴细胞样品的制备培养细胞的样品制备培养细胞的样品制备 悬浮生长悬浮生长贴壁生长贴壁生长新鲜实体组织单细胞悬液的制备新鲜实体组织单细胞悬液的制备单细胞悬液的保存单细胞悬液的保存 深低温保存法深低温保存法 乙醇或甲醇保存法乙醇或甲醇保存法 甲醛或多聚甲醛固定

19、法甲醛或多聚甲醛固定法一、免疫检测样品的制备一、免疫检测样品的制备一、免疫检测样品的制备一、免疫检测样品的制备第十五章第十五章第十五章第十五章 流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用临床免疫学检验临床免疫学检验临床免疫学检验临床免疫学检验第三节第三节 流式细胞仪免疫分析的技术要求流式细胞仪免疫分析的技术要求n异硫氰酸荧光素（异硫氰酸荧光素（FITC）激发光：激发光：488nm绿色荧光绿色荧光nPE（藻红蛋白）（藻红蛋白）激发光：激发光：488nm橙色荧光橙色荧光二、免疫分析中常用的荧光染料与标记染色二、免疫分析中常用的荧光染料与标记染色

20、二、免疫分析中常用的荧光染料与标记染色二、免疫分析中常用的荧光染料与标记染色第十五章第十五章第十五章第十五章 流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用临床免疫学检验临床免疫学检验临床免疫学检验临床免疫学检验第三节第三节 流式细胞仪免疫分析的技术要求流式细胞仪免疫分析的技术要求二、免疫分析中常用的荧光染料与标记染色二、免疫分析中常用的荧光染料与标记染色二、免疫分析中常用的荧光染料与标记染色二、免疫分析中常用的荧光染料与标记染色第十五章第十五章第十五章第十五章 流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪

21、分析技术及应用临床免疫学检验临床免疫学检验临床免疫学检验临床免疫学检验第三节第三节 流式细胞仪免疫分析的技术要求流式细胞仪免疫分析的技术要求二、免疫分析中常用的荧光染料与标记染色二、免疫分析中常用的荧光染料与标记染色二、免疫分析中常用的荧光染料与标记染色二、免疫分析中常用的荧光染料与标记染色第十五章第十五章第十五章第十五章 流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用临床免疫学检验临床免疫学检验临床免疫学检验临床免疫学检验第三节第三节 流式细胞仪免疫分析的技术要求流式细胞仪免疫分析的技术要求二、免疫分析中常用的荧光染料与标记染色二、免疫分析中

22、常用的荧光染料与标记染色二、免疫分析中常用的荧光染料与标记染色二、免疫分析中常用的荧光染料与标记染色第十五章第十五章第十五章第十五章 流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用临床免疫学检验临床免疫学检验临床免疫学检验临床免疫学检验第三节第三节 流式细胞仪免疫分析的技术要求流式细胞仪免疫分析的技术要求n荧光染料荧光染料n荧光标记荧光标记直接免疫荧光染色法直接免疫荧光染色法间接免疫荧光染色法间接免疫荧光染色法n细胞自发荧光细胞自发荧光三、免疫分析中常用的荧光染料与标记染色三、免疫分析中常用的荧光染料与标记染色三、免疫分析中常用的荧光染料与标记

23、染色三、免疫分析中常用的荧光染料与标记染色第十五章第十五章第十五章第十五章 流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用临床免疫学检验临床免疫学检验临床免疫学检验临床免疫学检验第四节第四节 流式细胞术在免疫学检查中的应用流式细胞术在免疫学检查中的应用nT细胞（细胞（CD3 CD4 CD8）一、淋巴细胞及其亚群的分析一、淋巴细胞及其亚群的分析一、淋巴细胞及其亚群的分析一、淋巴细胞及其亚群的分析第十五章第十五章第十五章第十五章 流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用临床免疫学检验临床免疫学

24、检验临床免疫学检验临床免疫学检验第四节第四节 流式细胞术在免疫学检查中的应用流式细胞术在免疫学检查中的应用nT细胞（细胞（CD3 CD4 CD8）一、淋巴细胞及其亚群的分析一、淋巴细胞及其亚群的分析一、淋巴细胞及其亚群的分析一、淋巴细胞及其亚群的分析第十五章第十五章第十五章第十五章 流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用临床免疫学检验临床免疫学检验临床免疫学检验临床免疫学检验第四节第四节 流式细胞术在免疫学检查中的应用流式细胞术在免疫学检查中的应用nT细胞（细胞（CD3 CD4 CD8）一、淋巴细胞及其亚群的分析一、淋巴细胞及其亚群的分

25、析一、淋巴细胞及其亚群的分析一、淋巴细胞及其亚群的分析第十五章第十五章第十五章第十五章 流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用临床免疫学检验临床免疫学检验临床免疫学检验临床免疫学检验第四节第四节 流式细胞术在免疫学检查中的应用流式细胞术在免疫学检查中的应用nB细胞（细胞（CD19 CD5）一、淋巴细胞及其亚群的分析一、淋巴细胞及其亚群的分析一、淋巴细胞及其亚群的分析一、淋巴细胞及其亚群的分析第十五章第十五章第十五章第十五章 流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用临床免疫学检验临床

26、免疫学检验临床免疫学检验临床免疫学检验第四节第四节 流式细胞术在免疫学检查中的应用流式细胞术在免疫学检查中的应用nNK细胞（细胞（CD3-CD16+CD56+）一、淋巴细胞及其亚群的分析一、淋巴细胞及其亚群的分析一、淋巴细胞及其亚群的分析一、淋巴细胞及其亚群的分析第十五章第十五章第十五章第十五章 流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用临床免疫学检验临床免疫学检验临床免疫学检验临床免疫学检验第四节第四节 流式细胞术在免疫学检查中的应用流式细胞术在免疫学检查中的应用n细胞介导细胞毒试验细胞介导细胞毒试验n细胞内细胞因子测定细胞内细胞因子测定

27、二、淋巴细胞功能分析二、淋巴细胞功能分析二、淋巴细胞功能分析二、淋巴细胞功能分析T T细胞内细胞内细胞内细胞内IFN-IFN-g g g g的测定的测定的测定的测定第十五章第十五章第十五章第十五章 流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用临床免疫学检验临床免疫学检验临床免疫学检验临床免疫学检验第四节第四节 流式细胞术在免疫学检查中的应用流式细胞术在免疫学检查中的应用三、淋巴造血系统分化抗原及白血病免疫分型三、淋巴造血系统分化抗原及白血病免疫分型三、淋巴造血系统分化抗原及白血病免疫分型三、淋巴造血系统分化抗原及白血病免疫分型第十五章第十五章

28、第十五章第十五章 流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪分析技术及应用临床免疫学检验临床免疫学检验临床免疫学检验临床免疫学检验总结总结n掌握流式细胞仪的分析和分选原理掌握流式细胞仪的分析和分选原理n掌握掌握FS、SS、FL参数及其意义参数及其意义n熟悉单参数直方图和散点图，并能分析简单的流式图熟悉单参数直方图和散点图，并能分析简单的流式图n熟悉免疫检测的样品准备和常用的荧光染料熟悉免疫检测的样品准备和常用的荧光染料n掌握淋巴细胞流式检测的常用标记掌握淋巴细胞流式检测的常用标记n了解流式细胞术在免疫学检查中的应用了解流式细胞术在免疫学检查中的应用预习预习预习预习: : 第二十一章第二十一章第二十一章第二十一章 超敏反应性疾病及其免疫检测超敏反应性疾病及其免疫检测超敏反应性疾病及其免疫检测超敏反应性疾病及其免疫检测 第二十二章第二十二章第二十二章第二十二章 自身免疫性疾病及其免疫检测自身免疫性疾病及其免疫检测自身免疫性疾病及其免疫检测自身免疫性疾病及其免疫检测