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1、2.4 微生物检测的基本技术微生物检测的基本技术染色观察划线接种，分离纯化Foodmate 2004/3/131染色观察2革兰氏染色革兰氏染色18841884年丹麦医师年丹麦医师GramGram所发明所发明 3革革兰兰氏氏染染色色法法l1.涂片固定涂片固定w2.单染单染结晶紫结晶紫结晶紫结晶紫染液第一染液第一染液第一染液第一次次次次染色染色 1min 43.媒染媒染碘碘碘碘-碘化钾碘化钾碘化钾碘化钾溶液浸湿溶液浸湿30S4. 脱色脱色95%95%乙醇溶乙醇溶乙醇溶乙醇溶液液液液进行进行颜色洗脱颜色洗脱5.复复染染红色红色红色红色的藩的藩的藩的藩红染红染红染红染液液液液第第二次二次染色染色5l呈
2、现第二次染色的效果呈现第二次染色的效果红色红色红色红色；称革兰氏阴性菌革兰氏阴性菌革兰氏阴性菌革兰氏阴性菌（红阴红阴G -）细菌呈现第一次染色的细菌呈现第一次染色的细菌呈现第一次染色的细菌呈现第一次染色的效果紫色效果紫色效果紫色效果紫色，革兰氏阳革兰氏阳革兰氏阳革兰氏阳性菌（性菌（性菌（性菌（紫阳紫阳G）；6划线接种，分离纯化Inoculating an agar plate to obtain single colonies78灼烧灼烧91011生化反应来测定微生物的代谢产物，生化反应常用来生化反应来测定微生物的代谢产物，生化反应常用来鉴别一些在形态和其它方面不易区别的微生物。鉴别一些在形态
3、和其它方面不易区别的微生物。 微生物生化反应：微生物生化反应：糖酵解试验糖酵解试验 淀粉水解试验淀粉水解试验 V-P试验试验甲基红（甲基红（Methyl Red）试验）试验靛基质（靛基质（Imdole）试验）试验枸椽酸盐试验：枸椽酸盐试验：尿素酶（尿素酶（Urease）试验）试验三糖铁（三糖铁（TSI）琼脂试验）琼脂试验12糖酵解试验糖酵解试验 不同微生物分解利用糖类的能力有很大差异，或能利用或不能利用，能利用者，或产气或不产气。可用指示剂及发酵管检验。 13淀粉水解试验淀粉水解试验某些细菌可以产生分解淀粉的酶，把淀粉水解为麦芽糖或葡萄糖。淀粉水解后，遇碘不再变蓝色。 14V-P试验试验某些细
4、菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸缩合，脱羧成乙酰甲基甲醇，后者在强碱环境下，被空气中氧氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物，称VP（+）反应。15甲基红（甲基红（Methyl Red）试验）试验肠杆菌科各菌属都能发酵葡萄糖，在分解葡萄糖过程中产生丙酮酸，进一步分解中，由于糖代谢的途径不同，可产生乳酸，琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性产物，可使培养基PH值下降至pH4.5以下，使甲基红指示剂变红。16靛基质（靛基质（Imdole）试验）试验某些细菌能分解蛋白胨中的色氨酸，生成吲哚。吲哚的存在可用显色反应表现出来。吲哚与对二甲基氨基苯醛结合，形成玫瑰吲哚，为红色化
5、合物。 17枸椽酸盐试验枸椽酸盐试验某些细菌能利用枸椽酸盐作为碳源，及磷酸铵作为氮源，将枸椽酸盐分解为二氧化碳，培养基反应后成碱性，由于指示剂的作用，培养基变为兰色。18尿素酶（尿素酶（Urease）试验）试验有些细菌能产生尿素酶，将尿素分解、产生2个分子的氨，使培养基变为碱性，酚红呈粉红色。1、未接种2、尿素酶阳性3、尿素酶阴性19三糖铁（三糖铁（TSI）琼脂试验）琼脂试验本试验可同时观察乳糖和蔗糖发酵产酸或产酸产气（变黄）；产生硫化氢（变黑）。葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因量少，生成的少量酸，因接触空气而氧化，加之细菌利用培养基中含氮物质，生成碱性产物，故使斜面后来又变红，底部由于是在厌氧状态下，酸类不被氧化，所以仍保持黄色。 a. uninoculated b. little change/alkaline/-/- c. alkaline/acid/-/+ d. acid/acid/+/+ e. acid/acid/+/- slant color/butt color/gas production/hydrogen sulfide production20沙门氏菌的沙门氏菌的TSI试验试验21
