妇科感染常见病原菌及检测方法

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1、 妇科感染常见病原菌及检测方法妇科感染常见病原菌及检测方法妇科感染常见疾病妇科感染常见疾病阴道病阴道病/阴道炎阴道炎尿道炎尿道炎子宫颈炎子宫颈炎盆腔感染盆腔感染子宫内膜炎子宫内膜炎输卵管卵巢脓输卵管卵巢脓肿肿输卵管炎症输卵管炎症妇科感染实验室检查的意义妇科感染实验室检查的意义很多很多妇科感染症状、体征有很多相似之科感染症状、体征有很多相似之处。临床床诊断本身既不敏感，也不特异断本身既不敏感，也不特异。 实验室室诊断可以：断可以：明确病原微生物，使治明确病原微生物，使治疗更具更具针对性；性；提高患者治提高患者治疗依从性；依从性；使患者更有可能遵从性伴使患者更有可能遵从性伴侣告知告知。病例一病例一

2、患者，女性，患者，女性，2424岁，已婚，孕，已婚，孕2525周。外阴瘙周。外阴瘙痒一周来就痒一周来就诊。妇检：宫高与妊娠月份相符高与妊娠月份相符, ,外阴潮外阴潮红、充血，、充血，见大量黄色大量黄色脓性分泌物。性分泌物。考考虑什么病？什么病？进一步做什么一步做什么检查？阴道炎阴道炎正常情况下阴道内寄居有大量需氧菌正常情况下阴道内寄居有大量需氧菌及及厌氧菌，形成氧菌，形成正常的阴道菌群正常的阴道菌群。任何原因将阴道菌群生任何原因将阴道菌群生态平衡打破，平衡打破，可形成可形成条件致病菌，引起阴道炎条件致病菌，引起阴道炎。 阴道粘膜生态系统阴道粘膜生态系统阴道炎阴道炎临床常床常见有：有：细菌性阴道

3、病、念珠菌性阴菌性阴道病、念珠菌性阴道炎、滴虫性阴道炎。道炎、滴虫性阴道炎。吴文湘, 廖秦平. 阴道炎的诊治进展J. 中国实用妇科与产科杂志, 2009(12):949-952.阴道炎相关病原实验室检查阴道炎相关病原实验室检查常见病原因子常见病原因子 诊断方法诊断方法最优标本最优标本 转运要求及最佳时间转运要求及最佳时间酵母菌酵母菌（ pH4.5 ） 盐水湿片和盐水湿片和 10KOH 阴道分泌物拭子阴道分泌物拭子 置于置于 0.5mL 生理盐水或转运生理盐水或转运拭子拭子 ，室温室温， 2h定量革兰染色定量革兰染色 阴道分泌物拭子阴道分泌物拭子 转运拭子送检，转运拭子送检，室温室温， 12hD

4、NA 杂交探针杂交探针 阴道分泌物拭子阴道分泌物拭子室温，室温，7d毛滴虫毛滴虫（ pH4.5 ） 盐水湿片盐水湿片 阴道分泌物拭子阴道分泌物拭子 置于盐水送检置于盐水送检， 室温室温， 30min30min（最佳）最佳）最佳）最佳） 2h2h快速抗原检查快速抗原检查 阴道上皮阴道上皮/分泌物拭子分泌物拭子 转运拭子或盐水送检，转运拭子或盐水送检， 室温，室温， 24hDNA 杂交探针杂交探针 阴道分泌物拭子阴道分泌物拭子室温，室温，7d培养培养 阴道分泌物拭子阴道分泌物拭子 直接放入直接放入 InPouch TV 培养培养系统送检系统送检室温，室温， 48h核酸扩增实验核酸扩增实验阴道拭子、

5、宫颈拭子、尿液、阴道拭子、宫颈拭子、尿液、液基细胞学标本、尿道拭子、液基细胞学标本、尿道拭子、直肠拭子、咽拭子直肠拭子、咽拭子室温，室温，7d病例病例1患者，女性，患者，女性，2424岁，已婚，孕，已婚，孕2525周。外阴瘙痒一周。外阴瘙痒一周来就周来就诊。妇检：宫高与妊娠月份相符高与妊娠月份相符, ,外阴潮外阴潮红、充血，、充血，见大量黄色大量黄色脓性分泌物。性分泌物。医生：医生： 根据病史及根据病史及临床表床表现可初步可初步诊断断为阴阴阴阴道炎道炎道炎道炎。取阴道分泌物拭子，嘱病人立即送取阴道分泌物拭子，嘱病人立即送取阴道分泌物拭子，嘱病人立即送取阴道分泌物拭子，嘱病人立即送检检，以明确病

6、原学，以明确病原学诊断。断。念珠菌性阴道炎念珠菌性阴道炎主要病原菌主要病原菌为： 白色假白色假丝酵母菌酵母菌 约占占80%-90% 光滑假光滑假丝酵母菌酵母菌 热带假假丝酵母菌酵母菌 近平滑假近平滑假丝酵母菌酵母菌约占占10%-20%念珠菌性阴道炎的实验室诊断念珠菌性阴道炎的实验室诊断1. pH 4.51. pH 4.51. pH 4.52. 2. 盐水湿片水湿片+10% KOH+10% KOH3.3.定量革定量革兰染色染色Nugent评分评分4. DNA4. DNA杂交探交探针线索细胞线索细胞KOH氢氧化氧化钾盐水湿片水湿片线索索细胞胞是是诊断断BVBV的最敏感特异的指的最敏感特异的指标。胺

7、试验胺试验将一滴阴道分泌物滴于玻片上，再加一滴将一滴阴道分泌物滴于玻片上，再加一滴10KOH，可，可闻到氨味或到氨味或鱼腥腥样气味，即气味，即胺胺试验阳性。阳性。10%KOH氢氧化氧化钾定量革定量革兰染色染色 Nugent评分分定量革定量革兰染色是染色是BV 诊断最特异的断最特异的检查。形态类别每个油镜视野菌体数 / 分值得分011 - 55 -3030加德纳菌加德纳菌/普雷沃菌普雷沃菌(革兰染色不定、球杆革兰染色不定、球杆菌菌)01234动弯杆菌动弯杆菌01234乳酸杆菌乳酸杆菌43210定量革定量革兰染色染色 Nugent评分分乳酸杆菌革乳酸杆菌革兰染色染色定量革定量革兰染色染色 Nuge

8、nt评分分阴道加德阴道加德纳菌革菌革兰染色染色定量革定量革兰染色染色 Nugent评分分动弯杆菌革弯杆菌革兰染色染色定量革定量革兰染色染色 Nugent评分分线索索细胞革胞革兰染色染色定量革定量革兰染色染色 Nugent评分分分数解分数解释标准：准： 0-3 分分 正常正常 4-7 分分 中介中介 7-10 7-10 分分 细菌性阴道炎菌性阴道炎定量革定量革兰染色染色 Nugent评分分乳酸杆菌乳酸杆菌0分，上皮分，上皮细胞周胞周围非常清楚。非常清楚。评分：分：0分分定量革定量革兰染色染色 Nugent评分分乳酸杆菌乳酸杆菌0分，少量分，少量杂菌，菌，见白白细胞和菌胞和菌丝。评分：分：1分分

9、诊断：断：BV阴性，但阴性，但诊断断为VVC定量革定量革兰染色染色 Nugent评分分乳酸杆菌乳酸杆菌2分，加德分，加德纳菌菌/普雷沃菌等普雷沃菌等 3分，分，动弯杆菌弯杆菌 1分。分。评分：分：6分分 诊断：断：BV中中间型型定量革定量革兰染色染色 Nugent评分分乳酸杆菌乳酸杆菌3分，加德纳菌分，加德纳菌/普雷沃菌等普雷沃菌等 3分，动分，动弯杆菌弯杆菌 4分。分。评分：评分：10分分 诊断：诊断：BV阴道毛滴虫阴道毛滴虫 阴道的致病性阴道的致病性厌氧寄生原虫，虫体氧寄生原虫，虫体为 8-45m，呈梨形或，呈梨形或椭圆形，无色透明，大小形，无色透明，大小为白白细胞的胞的2-3倍。倍。毛滴

10、虫性阴道炎的实验室诊断毛滴虫性阴道炎的实验室诊断1. pH 4.51. pH 4.52. 2. 盐水湿片水湿片3.3.快速抗原快速抗原检查4. DNA4. DNA杂交探交探针5. 5. 培养培养6. 6. 核酸核酸扩增增实验盐水湿片水湿片革兰染色革兰染色快速抗原快速抗原检查检测阴道毛滴虫特定的抗原阴道毛滴虫特定的抗原已有商品化已有商品化试剂最最优试验条件并不需要活的微生物条件并不需要活的微生物培养培养核酸扩增试验核酸扩增试验APTIMA Trichomonas vaginalis (ATV) test（Gen-Probe, Inc. San Diego, CA）是）是近期近期FDA 批准的批准

11、的检查，既可用于女性，既可用于女性TV 的的筛检，也可用于，也可用于诊断。断。可以使用多种可以使用多种标本本类型。型。一些一些实验室也可通室也可通过比比对，验证自己的自己的PCR方法。方法。病例二病例二患者，女性，患者，女性，4040岁，已婚，阴道分泌物增多，已婚，阴道分泌物增多，伴腰酸，偶有性生活后出血伴腰酸，偶有性生活后出血2 2年。年。检查外阴正外阴正常，常，宫颈肥大，肥大，度糜度糜烂，接触性出血。，接触性出血。考考虑什么病？什么病？进一步做什么一步做什么检查？子宫颈炎子宫颈炎子子宫颈可因各种致病因素的侵可因各种致病因素的侵袭而而发生炎症，生炎症，有急性和慢性两种。有急性和慢性两种。疾病

12、疾病致病菌致病菌急性宫颈炎急性宫颈炎沙眼衣原体、淋病奈瑟菌沙眼衣原体、淋病奈瑟菌慢性宫颈炎慢性宫颈炎性传播病原体性传播病原体：沙眼衣原体、：沙眼衣原体、淋病奈瑟菌、单纯疱疹病毒淋病奈瑟菌、单纯疱疹病毒内源性病原体内源性病原体：葡萄球菌、：葡萄球菌、链球菌、大肠杆菌等；链球菌、大肠杆菌等；部分与引起阴道炎的病原菌部分与引起阴道炎的病原菌相同相同尿道炎尿道炎是指尿道黏膜的炎症是指尿道黏膜的炎症 。多。多为致病菌逆行侵致病菌逆行侵入尿道引起。入尿道引起。疾病疾病致病菌致病菌淋病性尿道炎淋病性尿道炎 淋病奈瑟菌淋病奈瑟菌非淋病性尿道炎非淋病性尿道炎 沙眼衣原体、解脲支原体、沙眼衣原体、解脲支原体、阴道

13、毛滴虫、嗜血短杆菌、阴道毛滴虫、嗜血短杆菌、单纯疱疹病毒最常见单纯疱疹病毒最常见非特异性尿道炎非特异性尿道炎大肠埃希杆菌、链球菌属及大肠埃希杆菌、链球菌属及葡萄球菌属葡萄球菌属尿道炎尿道炎/宫颈炎相关病原炎相关病原实验室室检查常常常常见见病原因子病原因子病原因子病原因子 诊诊断方法断方法断方法断方法 最最最最优标优标本本本本 转运要求及最佳时间转运要求及最佳时间沙眼衣原体沙眼衣原体 核酸核酸扩增增实验尿液、尿液、宫颈内、阴道和内、阴道和/或尿或尿道拭子（直道拭子（直肠、咽部、咽部、结膜、膜、液基液基细胞学胞学标本）本） 实验室提供室提供转运装置，运装置， 室温，室温， 2d 杂交探交探针 宫颈

14、内或尿道拭子内或尿道拭子 实验室提供室提供转运装置，运装置， 室温，室温， 2d 培养培养宫颈内、尿道、内、尿道、结膜、膜、 NP、咽、直咽、直肠拭子拭子 实验室提供室提供转运装置，运装置， 4冷藏；冷藏； 2h 直接免疫直接免疫荧光染色光染色结膜拭子膜拭子 转运培养基，室温，运培养基，室温，2h淋病奈瑟菌淋病奈瑟菌 革革兰染色染色 尿道分泌物尿道分泌物 直接涂片或将拭子置于直接涂片或将拭子置于转运培养基，室温，立即运培养基，室温，立即核酸核酸扩增增实验尿液、尿液、宫颈内、阴道和内、阴道和/或尿或尿道拭子（直道拭子（直肠、咽部、咽部、结膜、膜、液基液基细胞学胞学标本）本） 实验室提供室提供转运

15、装置，运装置， 室温，室温， 2d 杂交探交探针 宫颈内或尿道拭子内或尿道拭子 实验室提供室提供转运装置，运装置， 室温，室温， 2d 培养培养 宫颈内、尿道、内、尿道、结膜、膜、 NP、咽、直咽、直肠拭子拭子 转运培养基，运培养基， 室温，室温， 1h，不要冷藏，不要冷藏 标本本尿道炎尿道炎/宫颈炎相关病原实验室检查宫颈炎相关病原实验室检查常常常常见见病原因子病原因子病原因子病原因子 诊诊断断断断实验实验 最最最最优标优标本本本本 转运要求及最佳时间转运要求及最佳时间阴道毛滴虫阴道毛滴虫 盐水湿片水湿片 宫颈内或尿道拭子内或尿道拭子 置于置于0.5mL盐水，水， 30min-2h 快速抗原快

16、速抗原检查宫颈内拭子内拭子 实验室提供室提供转运装置，运装置， 室温，室温， 24h 杂交探交探针宫颈内或阴道拭子内或阴道拭子 实验室提供室提供转运装置，运装置， 室温，室温， 7d 培养培养宫颈内或尿道拭子内或尿道拭子 直接接种在直接接种在InPouch TV培养系培养系统，2-5d核酸核酸扩增增实验阴道、阴道、宫颈内拭子，尿，液基内拭子，尿，液基细胞学胞学标本，尿道、直本，尿道、直肠、咽、咽部拭子部拭子实验室提供室提供转运装置，运装置， 室温，室温， 2d HSV直接免疫直接免疫荧光染色光染色病病变基底部刮取基底部刮取 床床边制片，室温，制片，室温，24h培养培养 病病变基底部刮取基底部刮

17、取 置于置于VTM/UTM，室温或，室温或置于冰上，置于冰上，2h核酸核酸扩增增实验病病变基底部刮取或分泌物拭子基底部刮取或分泌物拭子 实验室提供室提供转运装置运装置病例二病例二患者，女性，患者，女性，4040岁，已婚，阴道分泌物增多，已婚，阴道分泌物增多，伴腰酸，偶有性生活后出血伴腰酸，偶有性生活后出血2 2年。年。检查外阴正外阴正常，常，宫颈肥大，肥大，度糜度糜烂，接触性出血。，接触性出血。医生：医生：根据临床表现初步诊断为根据临床表现初步诊断为宫颈宫颈宫颈宫颈炎炎炎炎。取。取宫颈内拭子宫颈内拭子宫颈内拭子宫颈内拭子，嘱病人，嘱病人立即立即立即立即送检送检（注意保温），以明确感染病原体。（

18、注意保温），以明确感染病原体。淋病奈瑟菌淋病奈瑟菌革革兰染色染色 为革革兰阴性双球菌，似阴性双球菌，似肾形或咖啡豆状，常形或咖啡豆状，常成双排列，凹面相成双排列，凹面相对。 急性淋病患者的淋球菌常被吞噬于中性粒急性淋病患者的淋球菌常被吞噬于中性粒细胞胞内；慢性淋病患者的淋球菌多分布在内；慢性淋病患者的淋球菌多分布在细胞外。胞外。 简便、快速，可做出初步便、快速，可做出初步诊断。断。仅对男性患者男性患者进行涂片革行涂片革兰染色染色。 淋病奈瑟菌淋病奈瑟菌细胞内革兰阴性双球菌细胞内革兰阴性双球菌对对GC 特异性达特异性达95细胞外革兰阴性双球菌细胞外革兰阴性双球菌对对GC 特异性达特异性达10-2

19、9培养培养诊断淋病的重要手段断淋病的重要手段接种到接种到选择培养基培养基，置于，置于36、含、含5-10% CO2 ，湿湿润环境中培养。境中培养。如果床如果床边直接接种直接接种标本到本到选择培养基，加培养基，加CO2 药片形成气体片形成气体环境，培养敏感性会更好。境，培养敏感性会更好。培养培养初代培养生初代培养生长缓慢，慢，24小小时后可形成灰色后可形成灰色/湿湿润、半透明的小菌落（直径、半透明的小菌落（直径0.5-1mm）。）。氧化氧化酶阳性、触阳性、触酶阳性、葡萄糖阳性、葡萄糖产酸酸试验阳性阳性且且仅分解利用葡萄糖。分解利用葡萄糖。图片图片by陈东科陈东科核酸核酸扩增增试验已有商品化已有商

20、品化试剂盒。盒。优点是快速、准确，缺点是点是快速、准确，缺点是试验设备要求要求高。高。淋病奈瑟菌淋病奈瑟菌DNA 在感染成功治在感染成功治疗后，在后，在标本中仍可保留本中仍可保留3周之久，所以不能作周之久，所以不能作为治治疗评估指估指标。杂交探交探针目前目前FDA 已有批准的已有批准的GC的的杂交交试验试剂盒。盒。不可不可针对尿尿标本。本。病例三病例三病人，女，病人，女，24岁，主，主诉为持持续3天的天的轻度排度排尿困尿困难，化，化脓性阴道分泌物，性阴道分泌物，发热，并伴，并伴有中度的双有中度的双侧下腹痛。下腹痛。查体：子体：子宫和附件和附件压痛，化痛，化脓性性宫颈分泌物。分泌物。考考虑什么病

21、？什么病？进一步做什么一步做什么检查？盆腔炎盆腔炎盆腔炎症性疾病是女性上生殖道一系列疾盆腔炎症性疾病是女性上生殖道一系列疾病的病的总称。称。包括：包括： 子子宫内膜炎内膜炎 输卵管卵巢卵管卵巢脓肿 输卵管炎症卵管炎症 盆腔腹膜炎盆腔腹膜炎盆腔炎致病菌盆腔炎致病菌盆腔炎外源性病原体外源性病原体内源性病原体内源性病原体主要为性传播疾病主要为性传播疾病病原体：淋病奈瑟病原体：淋病奈瑟菌、沙眼衣原体、菌、沙眼衣原体、支原体等支原体等来自于原寄生于阴道来自于原寄生于阴道的正常菌群，包括：的正常菌群，包括：需氧菌和厌氧菌需氧菌和厌氧菌内源性病原体内源性病原体需氧菌及兼性需氧菌及兼性厌氧菌氧菌： 金黄色葡萄

22、球菌、金黄色葡萄球菌、链球菌、大球菌、大肠埃希菌、埃希菌、 阴道加德阴道加德纳菌等菌等厌氧菌：氧菌： 脆弱脆弱拟杆菌、消化杆菌、消化链球菌、普雷沃菌、真杆球菌、普雷沃菌、真杆菌等菌等 感染特点：容易形成盆腔感染特点：容易形成盆腔脓肿、感染性血栓、感染性血栓静脉炎，静脉炎，脓液有液有粪臭并有气泡臭并有气泡盆腔炎相关病原实验室检查盆腔炎相关病原实验室检查常见病原因常见病原因子子 诊断方法诊断方法最优标本最优标本 转运要求及最佳时间转运要求及最佳时间混合厌氧菌混合厌氧菌阴道菌从阴道菌从肠杆菌科、肠杆菌科、链球菌、链球菌、支原体支原体血培养和血培养和AST来评估少来评估少见病原见病原血，血，20mL注

23、入注入2瓶瓶，静脉穿刺采集静脉穿刺采集床边注入血培养瓶，床边注入血培养瓶，室温，室温，1h革兰染色革兰染色需氧和厌氧培养需氧和厌氧培养子宫内膜，输卵管子宫内膜，输卵管-卵巢脓肿和卵巢脓肿和/或输卵或输卵管内容物管内容物置入或注入无菌厌氧置入或注入无菌厌氧容器，室温，容器，室温，30min子宫内膜炎组织学证据子宫内膜炎组织学证据子宫内膜活检子宫内膜活检无菌容器，室温，无菌容器，室温，30min福尔马林容器，室温，福尔马林容器，室温，30min-4h淋病奈瑟菌淋病奈瑟菌沙眼衣原体沙眼衣原体阴道毛滴虫阴道毛滴虫核酸扩增试验核酸扩增试验尿液，宫颈内拭子尿液，宫颈内拭子实验室提供转运装置，实验室提供转运

24、装置，室温，室温，2dHIVHIV EIA抗体抗体血清血清促凝管，室温，促凝管，室温，2h病例三病例三病人，女，病人，女，24岁，主，主诉为持持续3天的天的轻度排尿度排尿困困难，化，化脓性阴道分泌物，性阴道分泌物，发热，并伴有中，并伴有中度的双度的双侧下腹痛。下腹痛。查体：子体：子宫和附件和附件压痛，痛，化化脓性性宫颈分泌物。分泌物。医生：医生：根据临床表现初步诊断为根据临床表现初步诊断为急性盆急性盆急性盆急性盆腔炎腔炎腔炎腔炎。进一步送检至少一套血培养，抽。进一步送检至少一套血培养，抽取脓肿置于厌氧容器尽快送检，并取宫取脓肿置于厌氧容器尽快送检，并取宫颈内拭子送检，必要时取子宫内膜活检，颈内

25、拭子送检，必要时取子宫内膜活检，以明确感染病原体。以明确感染病原体。盆腔炎相关厌氧菌培养流程 分离培养分离培养挑取菌落挑取菌落需氧培养需氧培养厌氧培养厌氧培养厌氧培养厌氧培养生长生长不生长不生长生长生长专性厌氧菌：专性厌氧菌：做第二次耐氧试验做第二次耐氧试验形态染色形态染色 菌落特征菌落特征 生化反应生化反应 药敏鉴定药敏鉴定 气相色谱气相色谱厌氧（厌氧（+）需氧（需氧（-）兼性厌氧菌兼性厌氧菌标本标本肉眼观察肉眼观察染色镜检染色镜检直接涂片染色直接涂片染色镜检 在接种在接种时做涂片，革做涂片，革兰染色并染色并镜检：观察察脓细胞的有无及特殊情况，胞的有无及特殊情况，细菌与菌与细胞之胞之间的相关

26、性。的相关性。观察有无察有无细菌，微生物的菌，微生物的类型和大概的数型和大概的数量以及有无芽量以及有无芽孢、形状和位置、着色及菌、形状和位置、着色及菌体特征。体特征。大致推断微生物的种大致推断微生物的种类，如梭菌、放，如梭菌、放线菌、菌、拟杆菌、消化球菌和消化杆菌、消化球菌和消化链球菌等。球菌等。常见盆腔炎相关厌氧菌形态特征拟杆菌、普雷沃菌属产气荚膜梭菌，破伤风梭菌双歧杆菌属，真杆菌属乳酸杆菌属，放线菌属消化链球菌属，消化球菌属常见盆腔炎相关厌氧菌形态特征革革兰阴性杆菌，两端阴性杆菌，两端钝圆着色深，中着色深，中间着着色浅不均匀，且有空泡，色浅不均匀，且有空泡，长短不一短不一拟杆菌杆菌常见盆腔

27、炎相关厌氧菌形态特征革革兰阳性粗短两端阳性粗短两端钝圆杆菌，无芽杆菌，无芽孢，中，中性粒性粒细胞也很少且胞也很少且变形破碎，形破碎，标本来自本来自战伤或肢体或肢体严重重肿胀者者产气气荚膜梭菌膜梭菌常见盆腔炎相关厌氧菌形态特征革革兰阳性杆菌，菌体有分枝，呈棒状或阳性杆菌，菌体有分枝，呈棒状或栅状排列状排列放放线菌菌革革兰阴性阴性厌氧菌氧菌鉴定（定（CLSI M35-A2）革革兰阳性阳性厌氧菌氧菌鉴定（定（CLSI M35-A2）商品化的商品化的鉴定定试剂我们使用的是商品化的厌氧菌鉴定卡API 20A和ANC病例三病例三该患者患者脓液涂片液涂片见革革兰阴性杆菌，染色不阴性杆菌，染色不均，两端均，两端圆而深染，中而深染，中间不着色或染色不着色或染色较浅，似浅，似为空泡。空泡。病例三脓液培养：在液培养：在厌氧血平板上生氧血平板上生长良好，形良好，形成成圆形、微凸、光滑、形、微凸、光滑、边缘整整齐、半透明、半透明、灰白色，不溶血的菌落。需养平板上不生灰白色，不溶血的菌落。需养平板上不生长。病例三API鉴定卡定卡鉴定定为脆弱脆弱拟杆菌杆菌谢谢! !