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1、实验六 植物细胞骨架的光学 显微镜观察一 实验目的1 通过对洋葱内皮细胞的处理，掌握植物细胞骨架的制备方法与显微形态观察。2 掌握考马斯亮蓝R250 对植物细胞骨架染色的方法。 二 实验原理n细胞骨架是由蛋白质丝组成的复杂网状结构，成分有微丝、微管和中间纤维。nTriton X-100可溶解抽提细胞中的蛋白质和脂质，但不破坏细胞骨架系统。n戊二醛固定、考马斯亮蓝R250染色，光学显微镜观察网状结构的由微丝组成的细胞骨架。三 实验仪器、材料和试剂n1 仪器、用具：普通光学显微镜等n2 材料：洋葱鳞茎n3 试剂： M-缓冲液 6mmol/L磷酸缓冲液 1% Triton X-100 0.2%考马斯
2、亮蓝R250三 实验仪器、材料和试剂n3 试剂： 3%戊二醛 50%、70%、95%乙醇 叔丁醇、正丁醇、二甲苯、中性树胶 四 实验方法()n1 洋葱鳞茎内表皮（1cm大小） 50ml烧杯（磷酸缓冲液）下沉n2 吸去缓冲液 加1% Triton X-100 2030 分钟n3 吸去Triton X-100 M-缓冲液洗 3次/10分钟n4 3%戊二醛固定 0.5-1小时四 实验方法n5 PH6.8 磷酸缓冲液洗 3次/10分钟n6 0.2%考马斯亮蓝R250染色 2030分钟n7 蒸馏水洗 1-2次装片观察n8 制作永久切片四 实验方法()n取洋葱内皮1cm 左右n置于含PBS 液的载玻片上n
3、湿润后，吸去PBSn加2 滴1%Triton X-100/M-缓冲液，5minn吸去缓冲液，加3%戊二醛-PB 溶液，固定30minn加PBS 洗2 次，共3minn加0.2%考马斯亮蓝R250 染色30minn用PBS 洗2 次，共2min，吸干n镜检并绘图n细胞骨架标本制作过程五 作业n1 绘出植物细胞骨架微丝结构图。n2 分析和论述在光学显微镜下观察到的细胞骨架的形态特征。n3 为什么用TritonX-100 的缓冲液处理材料？ 植物细胞骨架微丝结构图植物细胞骨架微丝结构图植物细胞骨架微丝结构图植物细胞骨架微丝结构图植物细胞骨架微丝结构图植物细胞骨架的形态特征n细胞骨架观察结果细胞骨架观
4、察结果n光学显微镜下洋葱内表皮细胞的轮廓清晰可见（如图），细胞壁及其分界明显。1010倍镜下可粗略观察到细胞内粗细不等的蓝色纤维、团块形成的网状结构。同一细胞内各处骨架的密集度不均匀，细胞核区域的纤维相对密集，蓝色浓重，甚至分辨不出网络结构，另外可见细胞壁区域有零星蓝色纤维分布；相邻细胞的密集程度基本一致，但有少数细胞有较大不同。植物细胞骨架的形态特征n细胞骨架观察结果细胞骨架观察结果n1040倍镜下可清楚观察到蓝色的网状结构确实由线性纤维交织成，纤维间的结合点稍膨大。细胞边缘骨架较稀疏，但可见由与胞壁相同走向的纤维形成的细胞质膜的轮廓，与细胞内部的纤维通过纵向的纤维相连。相邻细胞有纤维穿过胞间的细胞壁。调节显微镜焦距可观察到细胞不同横切面的网络结构的变化，表明细胞骨架以三维立体结构的形式分布在整个细胞内。
