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1、血液生理实验n n家兔红细胞沉降率测定家兔红细胞沉降率测定n n家兔红细胞渗透脆性测定家兔红细胞渗透脆性测定n n家兔红细胞比容测定家兔红细胞比容测定n n人人ABOABO血型的测定血型的测定n n家兔红细胞计数家兔红细胞计数n n家兔血液凝固时间测定家兔血液凝固时间测定一、红细胞沉降率测定n n血沉：红细胞沉降率（血沉：红细胞沉降率（erythrocyte sedimentation erythrocyte sedimentation tate,ESRtate,ESR ）n n红细胞膜表面的带有负电荷形成红细胞膜表面的带有负电荷形成zetazeta电位，使红电位，使红细胞互相排斥而保持悬浮稳
2、定性，沉降很慢。细胞互相排斥而保持悬浮稳定性，沉降很慢。n n但在病理情况下，血浆纤维蛋白原或球蛋白增多，但在病理情况下，血浆纤维蛋白原或球蛋白增多，致使红细胞致使红细胞zetazeta电位降低，彼此易于沾边成缗钱电位降低，彼此易于沾边成缗钱状，此种聚集的红细胞团块与血液接触的总面积状，此种聚集的红细胞团块与血液接触的总面积缩小，受到血浆的阻力减弱而使血沉加快缩小，受到血浆的阻力减弱而使血沉加快 临床意义n n非特异性检查非特异性检查n n生理性增快：生理性增快：妇女月经血沉略增快，可能与子宫内膜破妇女月经血沉略增快，可能与子宫内膜破伤及出血有关，妊娠伤及出血有关，妊娠3 3个月以上血沉逐渐增
3、快。个月以上血沉逐渐增快。n n病理性增快病理性增快 ：各种炎症，组织损伤及坏死，恶性肿瘤，各种炎症，组织损伤及坏死，恶性肿瘤，各种原因导致的高球蛋白血症各种原因导致的高球蛋白血症 ，贫血：，贫血：n n n n血沉减慢意义较小，血沉减慢意义较小，可因红细胞数量明显增多及纤维蛋可因红细胞数量明显增多及纤维蛋白原含量严重减低所致见于各种原因所致的脱水血浓缩、白原含量严重减低所致见于各种原因所致的脱水血浓缩、真性红细胞增多症和弥漫性血管内凝血等真性红细胞增多症和弥漫性血管内凝血等实验方法n n试剂与器材：5%柠檬酸钠，韦氏长管n n1、取充分抗凝的血液2ml,吸取至0刻度处。n n2、固定于血沉架
4、上，记录时间，自然沉降，1小时后记录血浆层高度。即血沉(mm/h)n n家兔：2-7 mm/h红细胞渗透脆性(osmotic fragility)2、红细胞渗透脆性测定n n红细胞在低渗盐水中，水分透过细胞膜可使红细胞逐渐胀大而破坏。n n本试验是测定红细胞对各种浓度的低渗溶液的抵抗力。红细胞对低渗溶液抵抗力与其厚度和膜结构有关，厚度越大，膜面积与体积比值越小，对低渗溶液的抵抗力小，则渗透脆性越高。 n n1.红细胞脆性增加： 遗传性球形红细胞增多症，自身免疫性溶血性贫血伴球形红细胞增多者。 n n2.红细胞脆性减低 见于各型海洋性贫血，包括轻型，重型海洋性贫血及血红蛋白增多病。缺铁性贫血，镰
5、状红细胞贫血以及其它红细胞面积/体积比例增大情况，如肝病等n n人：人：n n最大脆性（开始溶血）：最大脆性（开始溶血）：0.42%0.42%0.45%0.45%氯化钠氯化钠溶液溶液 n n最小脆性（完全溶血）：最小脆性（完全溶血）：0.28%0.28%0.32%0.32%氯化钠氯化钠溶液溶液 n n兔：兔：n n最大脆性（开始溶血）：最大脆性（开始溶血）：0.42%0.42%0.46%0.46%氯化钠氯化钠溶液溶液 n n最小脆性（完全溶血）：最小脆性（完全溶血）：0.34%0.34%0.32%0.32%氯化钠氯化钠溶液溶液 实验步骤n n1 1、制备梯度低渗（注射器抽取、制备梯度低渗（注射
6、器抽取NaClNaCl溶液）溶液）试剂试剂1 12 23 34 45 56 67 78 89 91% 1% NaClNaCl1.21.21.41.41.61.61.81.82.02.02.22.22.62.63.63.64.04.0蒸馏蒸馏水水2.82.82.62.62.42.42.22.22.02.01.81.81.41.40.40.4浓度浓度%0.300.300.350.350.400.400.450.450.500.500.550.550.600.600.900.901 1n n2、移液枪抽取兔血液50ul,滴入溶液,摇匀.在室温下放置1小时.n n3、观察混合液的颜色。（不要晃动）n
7、n下层混浊红色，上层无色或极淡红色。（不溶血）n n下层混浊红色，上层透明红色。 （部分溶血）n n完全为透明红色。 （完全溶血）下层混浊红色，上层无色或极淡红色。（不溶血）下层混浊红色，上层透明红色。 （部分溶血）完全为透明红色。 （完全溶血）1、红细胞比容测定(hematocrit)血细胞（血细胞（40-50%）：）： 红细胞红细胞 白细胞白细胞 血小板血小板 血浆血浆/ /清（清（55%）兔约兔约33-50%33-50%n n血细胞比容血细胞比容(hematocrit)： 细胞在血中所占的容积百分比细胞在血中所占的容积百分比n n男：男：40-50% n n女：女：37-48% n n新
8、生儿：新生儿：55%实验步骤n n1、置备抗凝血，已制备好。n n2、沿管壁缓慢注入刻度离心管n n3、离心前注意配平，以3000r/min 离心30分钟，记录红细胞体积。再以同样速度离心5分钟。记录红细胞体积。4、ABO血型的测定(blood group)1.1.血型血型血型血型: :指红细胞膜上特异的抗原类型。分为血型指红细胞膜上特异的抗原类型。分为血型指红细胞膜上特异的抗原类型。分为血型指红细胞膜上特异的抗原类型。分为血型和血型和血型和血型和血型2.2.凝集原：凝集原：凝集原：凝集原：人类红细胞膜上存在不同的特异糖蛋白抗原，人类红细胞膜上存在不同的特异糖蛋白抗原，人类红细胞膜上存在不同的
9、特异糖蛋白抗原，人类红细胞膜上存在不同的特异糖蛋白抗原，称为凝集原。称为凝集原。称为凝集原。称为凝集原。3.3.凝集素：凝集素：凝集素：凝集素：血浆中存在着能与红细胞膜上相应凝集原发血浆中存在着能与红细胞膜上相应凝集原发血浆中存在着能与红细胞膜上相应凝集原发血浆中存在着能与红细胞膜上相应凝集原发生反应的抗体，称为凝集素。生反应的抗体，称为凝集素。生反应的抗体，称为凝集素。生反应的抗体，称为凝集素。4.4.凝集：凝集：凝集：凝集：将含有不同凝集原的血液混合，将会发生红细将含有不同凝集原的血液混合，将会发生红细将含有不同凝集原的血液混合，将会发生红细将含有不同凝集原的血液混合，将会发生红细胞聚集成
10、簇，这种现象称为红细胞凝集。胞聚集成簇，这种现象称为红细胞凝集。胞聚集成簇，这种现象称为红细胞凝集。胞聚集成簇，这种现象称为红细胞凝集。1. ABO1. ABO血型系统由红细胞膜上的凝集原血型系统由红细胞膜上的凝集原血型系统由红细胞膜上的凝集原血型系统由红细胞膜上的凝集原AA和凝集原和凝集原和凝集原和凝集原BB决定。决定。决定。决定。 AA型：红细胞膜上只含凝集原型：红细胞膜上只含凝集原型：红细胞膜上只含凝集原型：红细胞膜上只含凝集原AA B B型：红细胞膜上只含凝集原型：红细胞膜上只含凝集原型：红细胞膜上只含凝集原型：红细胞膜上只含凝集原BB AB AB型：同时存在型：同时存在型：同时存在型
11、：同时存在AA和和和和BB两种凝集原两种凝集原两种凝集原两种凝集原 OO型：既不存在凝集原型：既不存在凝集原型：既不存在凝集原型：既不存在凝集原AA也不存在凝集原也不存在凝集原也不存在凝集原也不存在凝集原BB2. 2. 检测方法：根据有无凝集现象检测检测方法：根据有无凝集现象检测检测方法：根据有无凝集现象检测检测方法：根据有无凝集现象检测实验步骤n n材料；显微镜，采血针、玻片、标准血清、牙签、酒精等。 n n取玻片作好标记，并将标准血清A、B分别滴在两端。n n消毒采血部位，针刺破皮肤，将血滴在血清内，用牙签混匀。n n观察凝集情况。判断血型。注意事项n n严格消毒n n一人一针n n滴血采
12、用悬滴法n n必要时用显微镜观察凝集家兔红细胞计数(red cell counting)n n原理：n n稀释法计数单位体积的红细胞数（6.70.6*106/ml）n n主要材料：n n血球计数板、载玻片、盖玻片、吸管、试管架、eppendorf管、吸头、吸头盒、显微镜、细胞悬液 计数板构造n n实验步骤：n n1、血液稀释n n2、盖玻片盖在计数板上，滴出少量血液（避免过多或过少），使溶液借毛细管现象流入计数室，静置2-3分钟。n n3、观察是否分布均匀（相差20个以上）。n n4、高倍镜下观察四角与正中的中方格红细胞总数。n n数上不数下，数左不数右n n5、计算n n6、清洗0.05mm
13、n n计数池与盖玻片高度为0.1mm,中方格边长为0.2mm，n n5个中方格容积为0.02mm2。n n红细胞数：5个中方格计数的红细胞稀释倍数注意事项n n1、稀释均匀n n2、细胞悬液避免过多或过少n n2、各格均匀血液凝固时间测定(blood clotting time)n n目的和要求n n学习玻片法测定血液凝固时间n n掌握血液凝固的基本原理血血液液凝凝固固途途径径纤溶纤溶纤溶纤溶抗凝抗凝可以用自身血液或家兔血液n n材料和器械n n采血针和计时器n n实验步骤：n n1、消毒指尖后，采血针刺破皮肤，血液自然流出，用玻片接下第一滴血，记录时间。（家兔耳缘静脉采血，或剪切取血滴在玻片
14、上）n n2、每隔30秒用针尖挑血一次，直到挑起纤维细丝，时间即为凝血时间。凝血时间的测定法( 试管法)n取内径8 mm 的试管2 支。用消毒干燥的注射器自兔心脏采血2 ml, 去针头, 将血液沿管壁缓慢注入试管中, 每管1ml, 凝血时间记录自血液进入注射器时开始计时, 每隔30s 将试管倾斜一次, 角度约30 度, 观察血液是否流动。直至试管倾斜到90 度血液不再流动而完全凝固为止, 停止计时, 此即为凝血时间n n人体正常值为2-8分钟。n n家兔凝血时间：试管法：147-246sn n n n本实验是检测机体的 哪种或哪几种凝血系统，为什么？实验报告需要提供的结果：n n血沉的数据n n红细胞比容的数据n n渗透脆性的范围n n个人血型n n家兔红细胞计数n n家兔凝血时间思考题n n分析红细胞脆性的意义n n影响血沉的的主要因素n n红细胞比容测定时出现误差的原因。n n如果有标准A型红细胞和标准B型红细胞，但无标准血清时，能否进行血型鉴定？ n n为什么血型相同的人之间输血仍要做交叉配血试验？ n nABO血型系统有无母子血型不合导致的新生儿溶血情况。n n哪些因素会影响红细胞计数的准确性n n说明血液凝固的基本过程n n测定凝血时间有什么实际意义n n本次实验是检测机体的哪种或哪几种凝血系统。
