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1、第七章第七章 糖类糖类糖的理化性质糖的理化性质2糖的结构测定糖的结构测定4糖的分类糖的分类3 1糖的提取分离3 3糖的提取分离三、糖的提取分离三、糖的提取分离1溶溶于于冷冷水水和和温温乙乙醇醇用用醇醇温温浸浸，铅铅盐盐沉沉淀淀，除除去去其他物质后结晶其他物质后结晶溶于温水，难溶溶于温水，难溶于冷水，不溶于于冷水，不溶于乙醇乙醇温水浸，温水浸，铅盐沉淀蛋白质铅盐沉淀蛋白质后脱铅，乙醇沉后脱铅，乙醇沉淀淀溶溶于于冷冷水水不不溶溶于于乙乙醇醇水水提提，铅铅盐盐沉沉淀淀，脱脱铅铅后乙醇沉淀后乙醇沉淀难难溶溶于于水水，可可溶溶于于稀稀碱碱用用稀稀NaOH提提取取，加加醇沉淀析出醇沉淀析出1. 糖的提取糖
2、的提取234三、糖的提取分离三、糖的提取分离Sevag 法法酶解法酶解法三氟三氯乙烷法三氟三氯乙烷法三氯三氯醋酸法醋酸法脱除蛋白脱除蛋白质的方法质的方法三、糖的提取分离三、糖的提取分离化学沉淀法化学沉淀法离子交换法离子交换法铅盐和铅盐和活性炭法活性炭法杂质的去除杂质的去除主要有主要有3种种2. 糖的分离糖的分离三、糖的提取分离三、糖的提取分离糖的糖的分离分离方法方法钙、锶及钡钙、锶及钡复盐形式法复盐形式法铅盐沉淀法铅盐沉淀法分级沉淀或分级沉淀或 分级溶解法分级溶解法活性炭柱色谱活性炭柱色谱纤维素柱色谱纤维素柱色谱淀粉柱色谱淀粉柱色谱离子交换法离子交换法季铵盐沉淀法季铵盐沉淀法 凝胶柱色谱凝胶柱
3、色谱制备型区域电泳制备型区域电泳第七章第七章 糖类糖类糖的理化性质糖的理化性质2糖的结构测定4糖的分类糖的分类3 1糖的提取分离糖的提取分离3 3糖的结构测定糖的结构测定四、糖的结构测定四、糖的结构测定 多多糖糖的的结结构构测测定定与与常常见见天天然然产产物物有有许许多多不不同同之之处处，本本节节不不做做详详细细介介绍绍。天天然然产产物物中中的的苷苷类类成成分分多多为为固固体体化化合合物物。其其结结构构鉴鉴定定应应通通过过以以下下各各项项程程序序进进行：行： 四、糖的结构测定四、糖的结构测定12345纯度的测定纯度的测定分子量的测定分子量的测定单糖种类的鉴定单糖种类的鉴定连接位置的鉴定连接位置
4、的鉴定苷键构型的鉴定苷键构型的鉴定基基本本步步骤骤四、糖的结构测定四、糖的结构测定( (一一) ) 纯度的测定纯度的测定 超超离离心心法法，高高压压电电泳泳法法，凝凝胶胶柱柱色色谱谱法法，旋旋光测定法光测定法四、糖的结构测定四、糖的结构测定( (二二) ) 分子量的测定分子量的测定 近近年年来来广广泛泛应应用用质质谱谱分分析析的的方方法法测测定定分分子子量量和和分分子子式式。苷苷类类化化合合物物一一般般极极性性较较大大，无无挥挥发发性性，遇遇热热气气化化时时易易于于分分解解，采用电子轰击质谱采用电子轰击质谱( (EI- -MS) )常常不能获得分子离子峰。常常不能获得分子离子峰。 四、糖的结构
5、测定四、糖的结构测定 现多采用化学电离质谱现多采用化学电离质谱( (CI- -MS) )、场解吸质、场解吸质谱谱( (FD- -MS) )、快原子轰击质谱、快原子轰击质谱( (FAB- -MS) )和电喷雾和电喷雾质谱质谱( (ESI- -MS) )等方法来获得分子离子蜂，尤其是等方法来获得分子离子蜂，尤其是ESI- -MS及及FAB- -MS两种质谱法更是目前测定苷类两种质谱法更是目前测定苷类分子量常用的方法。分子量常用的方法。四、糖的结构测定四、糖的结构测定( (三三) ) 单糖的鉴定单糖的鉴定1. 多糖的完全水解多糖的完全水解 常常用用稀稀酸酸水水解解，注注意意掌掌握握适适合合的的条条件
6、件使使多多聚聚糖糖完完全全水水解解，又不使水解下来的单糖变化或重新聚合。又不使水解下来的单糖变化或重新聚合。四、糖的结构测定四、糖的结构测定2. 糖的纸色谱（糖的纸色谱（ PC ） 糖糖类类的的PC常常用用的的展展开开剂剂大大多多为为含含水水的的溶溶剂剂系系统统，其其中中以以正正丁丁醇醇- -醋醋酸酸- -水水和和用用水水饱饱和和的的苯苯酚酚两两种种系系统统应应用用得得最最普普遍遍，如如正正丁丁醇醇- -醋醋酸酸- -水水( (4:1:5) )，乙乙酸酸乙乙酯酯- -吡啶吡啶- -水水( (2:1:2) )等。等。四、糖的结构测定四、糖的结构测定 糖糖类类的的Rf 值值与与溶溶剂剂的的含含水水
7、量量有有关关，因因此此配配制制展展开开剂剂时时必必须须注注意意，尤尤其其对对于于三三元元组组成成的的展展开开剂剂，其其混混合合比比例例更更应应力力求求准准确确，并并需需用用标标准准品品同同时时点点样作为对照。样作为对照。四、糖的结构测定四、糖的结构测定展开剂展开剂薄层色谱薄层色谱显色剂显色剂吸附剂吸附剂3. 糖的薄层色谱糖的薄层色谱四、糖的结构测定四、糖的结构测定 糖糖类类的的TLC常常选选用用硅硅胶胶薄薄层层，由由于于糖糖的的极极性性强强，一一般般点点样样量量不不能能大大于于5 ug，但但这这一一缺缺点点在在用用硼硼酸酸溶溶液液或或一一些些无无机机盐盐的的水水溶溶液液代代替替水水调调制制吸吸
8、附附剂剂进进行行铺铺板板时时得得到到克克服服，显显著著提提高高了了上上样样量量，并并改改善善分分离离效效果。果。吸附剂吸附剂四、糖的结构测定四、糖的结构测定 制制备备这这种种硅硅胶胶薄薄层层板板时时，所所用用的的盐盐一一般般是是强强碱碱弱弱酸酸( (或或中中强强酸酸) )盐盐，如如0.3mol/L的的磷磷酸酸氢氢二二钠钠或或磷酸二氢钠的水溶液。磷酸二氢钠的水溶液。 四、糖的结构测定四、糖的结构测定 糖类硅胶薄层色谱常用的展开剂为正丁醇糖类硅胶薄层色谱常用的展开剂为正丁醇- -丙丙酮酮- -水、正丁醇水、正丁醇- -醋酸醋酸- -水或正丁醇水或正丁醇- -吡啶吡啶- -水。水。展开剂展开剂四、糖
9、的结构测定四、糖的结构测定 糖糖的的PC或或TLC所所用用的的显显色色剂剂有有些些是是相相同同的的，其其显显色色原原理理主主要要是是利利用用糖糖的的还还原原性性或或由由于于形形成成糖糖醛醛后后引引起起的的呈呈色色反反应应。有有些些显显色色剂剂不不仅仅可可以以决决定定糖糖的的斑点的位置，尚可区分其类型。斑点的位置，尚可区分其类型。显色剂显色剂四、糖的结构测定四、糖的结构测定 常用的显色剂有苯胺常用的显色剂有苯胺- -邻苯二甲酸试剂、三苯邻苯二甲酸试剂、三苯四氮盐试剂四氮盐试剂( (TTC试剂试剂) )、间苯二酚、间苯二酚- -盐酸试剂、双盐酸试剂、双甲酮甲酮- -磷酸试剂等。磷酸试剂等。四、糖的
10、结构测定四、糖的结构测定苯胺苯胺- -邻苯邻苯二甲酸二甲酸显色剂对不同的糖往往显不同的颜色显色剂对不同的糖往往显不同的颜色已醛糖已醛糖糖醛酸糖醛酸戊醛糖戊醛糖棕色棕色棕色棕色红色红色间苯二间苯二酚酚- -盐酸盐酸紫色紫色蓝色蓝色蓝色蓝色四、糖的结构测定四、糖的结构测定 有有些些显显色色剂剂中中含含有有硫硫酸酸，因因此此只只能能用用于于TLC。例例如如茴茴香香醛醛- -硫硫酸酸试试剂剂、间间苯苯二二酚酚- -硫硫酸酸试试剂剂、- -萘萘酚酚- -硫硫酸酸试试剂剂、百百里里酚酚- -硫硫酸酸试试剂剂、酚酚- -硫硫酸酸试试剂剂等等，喷后一般要在喷后一般要在100左右加热数分钟至斑点显现。左右加热数
11、分钟至斑点显现。 以以CMC-Na为为粘粘合合剂剂的的硅硅胶胶薄薄层层板板，在在使使用用含含浓硫酸的显色剂时亦应注意加热的温度与时间。浓硫酸的显色剂时亦应注意加热的温度与时间。显色剂显色剂四、糖的结构测定四、糖的结构测定 气质联用技术可以简化糖结构分析工作。气质联用技术可以简化糖结构分析工作。应应 用用制备成三甲基硅醚等增加挥发性制备成三甲基硅醚等增加挥发性 难于挥发难于挥发用用NaBH4等还原成多元醇，制成乙酰等还原成多元醇，制成乙酰化物或三氟乙酰化物化物或三氟乙酰化物 形成端基异构体形成端基异构体4. 糖的气相色谱及气质联用色谱糖的气相色谱及气质联用色谱两个不利因素两个不利因素四、糖的结构
12、测定四、糖的结构测定5. 糖的离子交换色谱糖的离子交换色谱 应用糖的硼酸络合物进行离子交换应用糖的硼酸络合物进行离子交换四、糖的结构测定四、糖的结构测定( (四四) ) 多糖的部分酸水解多糖的部分酸水解 把把大大分分子子裂裂解解成成较较小小的的片片段段，部部分分酸酸水水解解产产物物的基本结构具有代表性。的基本结构具有代表性。四、糖的结构测定四、糖的结构测定1,3连接连接1,4连接连接生成脱生成脱氧糖酸氧糖酸生成生成3- -脱脱氧氧- -2- -羟甲羟甲基糖酸基糖酸( (五五) )多糖的碱水解多糖的碱水解速度为速度为后者后者的的10倍倍四、糖的结构测定四、糖的结构测定多糖全甲基化多糖全甲基化90
13、%甲酸全水解甲酸全水解H2SO4或三氟乙酸水解或三氟乙酸水解乙酰化新羟基乙酰化新羟基气相色谱分析气相色谱分析步骤步骤(六六) 多糖的甲基化多糖的甲基化四、糖的结构测定四、糖的结构测定( (七七) )多糖的多糖的Smith降解降解 每每开开裂裂一一个个C- -C消消耗耗一一分分子子过过碘碘酸酸。测测定定过过碘碘酸酸消消耗耗量量，甲甲酸酸生生成成量量和和剩剩余余糖糖的的比比例例可可推推测测多多糖的结构。糖的结构。四、糖的结构测定四、糖的结构测定Smith降解降解H( (八八) ) 糖的红外波谱糖的红外波谱 多多糖糖在在960cm-11500cm-1范范围围内内有有许许多多吸吸收收峰峰，确定苷键构型上主要观察确定苷键构型上主要观察730cm-1960cm-1 。四、糖的结果测定四、糖的结果测定
