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1、食品微生物学实验李文亮课堂纪律n n严格遵守实验室规章制度n n严肃课堂纪律 不允许无故旷课、早退 迟到 工作服实验室安全和卫生n n安全实验室严禁吸烟。注意用水、防电和防火正确使用化学试剂和仪器u卫生每次实验需留下4位同学值日，协助保持实验室清洁实验报告n n姓名、班级和学号姓名、班级和学号姓名、班级和学号姓名、班级和学号n n实验题目实验题目实验题目实验题目n n实验原理实验原理实验原理实验原理n n实验操作实验操作实验操作实验操作n n实验结果实验结果实验结果实验结果n n画图画图画图画图n n文字描述文字描述文字描述文字描述n n分析和讨论分析和讨论分析和讨论分析和讨论n n思考题思考
2、题思考题思考题实验一实验一 细菌的单染色及细菌的单染色及油镜的使用油镜的使用n n实验目的实验目的n n实验原理实验原理n n实验材料实验材料n n实验步骤实验步骤n n实验结果实验结果n n问题与讨论问题与讨论一、实验目的n n学习并掌握普通光学显微镜的构造和油镜学习并掌握普通光学显微镜的构造和油镜的使用技术及维护的基本知识的使用技术及维护的基本知识n n学习微生物涂片、单染色的基本技术学习微生物涂片、单染色的基本技术n n初步认识细菌的形态特征，初步认识细菌的形态特征，n n学习简单的无菌操作技术学习简单的无菌操作技术二、实验原理1n显微镜的构造显微镜的构造 1.1.光学部分光学部分光学部
3、分光学部分: : : :目镜目镜目镜目镜 、 物镜物镜物镜物镜 、 照明装置照明装置照明装置照明装置( (聚光镜、聚光镜、聚光镜、聚光镜、 虹彩光虹彩光虹彩光虹彩光圈、圈、圈、圈、 反光镜等反光镜等反光镜等反光镜等) )。它使检视。它使检视。它使检视。它使检视物放大物放大物放大物放大, , , ,生成物象。生成物象。生成物象。生成物象。2.机械部分机械部分: :镜座、镜臂、镜筒、镜座、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台、载物台物镜转换器、载物台、载物台转移器、粗调节器、细调节器转移器、粗调节器、细调节器等部件等部件. .它起着支持它起着支持 调节调节 固定固定等作用等作用. .图图1-1-2 光学
4、显微镜的成像原理光学显微镜的成像原理倒立的虚像倒立的虚像n n显微镜的放大倍数和分辨率显微镜的放大倍数和分辨率显微镜的放大倍数和分辨率显微镜的放大倍数和分辨率 1.1.放大倍数放大倍数放大倍数放大倍数：物镜放大倍数：物镜放大倍数：物镜放大倍数：物镜放大倍数 目镜放目镜放目镜放目镜放大倍数大倍数大倍数大倍数 2.2. 显微镜的分辨率显微镜的分辨率显微镜的分辨率显微镜的分辨率: :是表示显微镜辨是表示显微镜辨是表示显微镜辨是表示显微镜辨析两点之间距离的能力。可用公式析两点之间距离的能力。可用公式析两点之间距离的能力。可用公式析两点之间距离的能力。可用公式表示为：表示为：表示为：表示为： D=D=/
5、2nsin(/2 )/2nsin(/2 ) 式中式中式中式中D D D D：物镜分辨出物体两点间的最物镜分辨出物体两点间的最物镜分辨出物体两点间的最物镜分辨出物体两点间的最短距离。短距离。短距离。短距离。 ：可见光的波长（平均：可见光的波长（平均：可见光的波长（平均：可见光的波长（平均0.550.550.550.55 m) m) m) m) n: n: n: n: 物镜和被检标本间介质的折射率。物镜和被检标本间介质的折射率。物镜和被检标本间介质的折射率。物镜和被检标本间介质的折射率。 ：镜口角（即入射角）。：镜口角（即入射角）。：镜口角（即入射角）。：镜口角（即入射角）。D值越小，分辨率越高，
6、看到的物象越清晰值越小，分辨率越高，看到的物象越清晰n n油镜使用的原理油镜使用的原理 油镜，即油浸接物镜。当光油镜，即油浸接物镜。当光油镜，即油浸接物镜。当光油镜，即油浸接物镜。当光线由反光镜通过玻片与镜头线由反光镜通过玻片与镜头线由反光镜通过玻片与镜头线由反光镜通过玻片与镜头之间的空气时，由于空气与之间的空气时，由于空气与之间的空气时，由于空气与之间的空气时，由于空气与玻片的密度不同，使光线受玻片的密度不同，使光线受玻片的密度不同，使光线受玻片的密度不同，使光线受到曲折，发生散射，降低了到曲折，发生散射，降低了到曲折，发生散射，降低了到曲折，发生散射，降低了视野的照明度。若中间的介视野的照
7、明度。若中间的介视野的照明度。若中间的介视野的照明度。若中间的介质是一层油（其折射率与玻质是一层油（其折射率与玻质是一层油（其折射率与玻质是一层油（其折射率与玻片的相近），则几乎不发生片的相近），则几乎不发生片的相近），则几乎不发生片的相近），则几乎不发生折射，增加了视野的进光量，折射，增加了视野的进光量，折射，增加了视野的进光量，折射，增加了视野的进光量，从而使物象更加清晰。从而使物象更加清晰。从而使物象更加清晰。从而使物象更加清晰。u根据公式根据公式D=/2nsin(/2 ) ，增大分母，使得增大分母，使得D值值减小，分辨率增大。减小，分辨率增大。1.1.不准擅自拆卸显微镜的任何部件不准擅
8、自拆卸显微镜的任何部件不准擅自拆卸显微镜的任何部件不准擅自拆卸显微镜的任何部件, , , ,以免损坏。以免损坏。以免损坏。以免损坏。2.2.镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以保证光洁度保证光洁度保证光洁度保证光洁度3.3.观察标本时，必须依次用低、中、高倍镜，最观察标本时，必须依次用低、中、高倍镜，最观察标本时，必须依次用低、中、高倍镜，最观察标本时，必须依次用低、中、高倍镜，最后用油镜。当目视接目镜时，特别在使用油后用油镜。当目视接目镜时，特别在使用油后用油镜。当目视
9、接目镜时，特别在使用油后用油镜。当目视接目镜时，特别在使用油镜时，切不可使用粗调节器，以免压碎玻片镜时，切不可使用粗调节器，以免压碎玻片镜时，切不可使用粗调节器，以免压碎玻片镜时，切不可使用粗调节器，以免压碎玻片或损伤镜面。或损伤镜面。或损伤镜面。或损伤镜面。4.4.拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜座，拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜座，拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜座，拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜座，不可单手拿，更不可倾斜拿。不可单手拿，更不可倾斜拿。不可单手拿，更不可倾斜拿。不可单手拿，更不可倾斜拿。5.5.显微镜应存放在阴凉干燥处，以免镜片滋生霉显微镜应存放
10、在阴凉干燥处，以免镜片滋生霉显微镜应存放在阴凉干燥处，以免镜片滋生霉显微镜应存放在阴凉干燥处，以免镜片滋生霉菌而腐蚀镜片菌而腐蚀镜片菌而腐蚀镜片菌而腐蚀镜片。显微镜保养和使用中的注意事项油镜的使用油镜的使用n n待后边演示二、实验原理2n n细菌的单染色细菌细胞微小，透明，不易观察，需染上颜色。细菌细胞微小，透明，不易观察，需染上颜色。利利用单一染料对细菌进行染色，使经染色后的菌体与背用单一染料对细菌进行染色，使经染色后的菌体与背景形成明显的色差，从而能更清楚地观察到其形态和景形成明显的色差，从而能更清楚地观察到其形态和结构。结构。 染色前必须固定细菌，其目的是：染色前必须固定细菌，其目的是：
11、一是杀死细菌并使菌体粘附于玻片上。一是杀死细菌并使菌体粘附于玻片上。二是增加其对染料的亲和力。常用的有加热和自然二是增加其对染料的亲和力。常用的有加热和自然风干固定两种方法。固定时尽量维持细胞原有的形态。风干固定两种方法。固定时尽量维持细胞原有的形态。 三、实验材料n n双筒普通光学显微镜双筒普通光学显微镜n n蕃红（沙黄）和美兰染色液。蕃红（沙黄）和美兰染色液。n n培养培养24h的大肠杆菌（的大肠杆菌（E.coliE.coli) )和枯草芽和枯草芽孢杆菌孢杆菌n n载玻片、接种环、酒精灯载玻片、接种环、酒精灯、香柏油、二、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸和镊子等。甲苯、擦镜纸、吸水纸和镊子等
12、。四、实验步骤一、制作大肠杆菌观察片一、制作大肠杆菌观察片现场演示现场演示无菌操作涂片涂片 干燥干燥 固定固定 染色染色 水洗水洗 干燥干燥 镜检镜检细菌的单染色细菌的单染色涂片涂片干燥干燥固定固定染色染色12min水洗、吸干镜检镜检二、显微操作现场演示现场演示1.低倍镜观察：粗调、细调。依次再进行中倍、高倍观察2.油镜观察：高倍镜下找到清晰的物象后，提升聚光镜，在标本中央滴一滴香柏油，使油镜镜头浸入香柏油中，细调至看清物象为止。3.换片：另换新片，必须从第1条开始操作。4.用后复原：观察完毕，上悬镜筒，先用擦镜纸擦去镜头上的油，然后再用擦镜纸沾取少量二甲苯擦去残留的油，最后用擦镜纸擦去残留的
13、二甲苯，后将镜体全部复原。注意：油镜使用完毕后一定要用二甲苯擦拭镜头三、口腔微生物的观察 1.在洁净无油腻的载片中央滴一小滴无菌水，用牙签取牙垢少许与水滴充分混匀，涂成薄膜。2.将涂片于室温中自然干燥后，按单染色法的步骤，进行固定、染色、水洗，干燥后镜检。四、细菌的特殊形态结构四、细菌的特殊形态结构n n芽孢：休眠体，不利环境下产生，耐受各种极端环境。n n荚膜：多糖，包裹在菌体外围，保护菌体n n鞭毛：运动，菌落形态。枯草杆菌芽孢的观察枯草杆菌芽孢的观察细菌鞭毛的观察细菌鞭毛的观察细菌荚膜的观察细菌荚膜的观察荚膜五、实验结果五、实验结果n n用油镜观察大肠杆菌、枯草芽孢杆菌以用油镜观察大肠杆菌、枯草芽孢杆菌以及口腔微生物的染色标本，并绘图。及口腔微生物的染色标本，并绘图。n n绘图表示绘图表示芽孢、荚膜、鞭毛的形态特征的形态特征。 六、问题与讨论六、问题与讨论1.涂片为何要固定？涂片为何要固定？固定加热时间过长会怎样？固定加热时间过长会怎样？2.使用油镜时，为什么必须用香柏油？使用油镜时，为什么必须用香柏油？3.镜检标本时，为什么先用低倍镜观察，而镜检标本时，为什么先用低倍镜观察，而不是直接用高倍镜或油镜观察？不是直接用高倍镜或油镜观察？本次实验课结束本次实验课结束请确保油镜头擦拭干净！请确保油镜头擦拭干净！
