肿瘤免疫及肿瘤标记物检测

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1、肿瘤免疫及肿瘤标记物检测 一 肿瘤相关基因 二 肿瘤抗原 三 抗肿瘤免疫效应 四 免疫逃逸 五 免疫诊断和治疗 六 肿瘤标记物的检测肿瘤免疫学瘤免疫学Tumorimmunology 是研究肿瘤抗原、机体的免疫功能与肿是研究肿瘤抗原、机体的免疫功能与肿瘤发生发展的相互关系、机体对肿瘤的免瘤发生发展的相互关系、机体对肿瘤的免疫应答及其抗肿瘤免疫效应机制、肿瘤的疫应答及其抗肿瘤免疫效应机制、肿瘤的免疫诊断和免疫防治的科学。免疫诊断和免疫防治的科学。一一 肿瘤相关基因瘤相关基因 细胞癌变过程中发生改变的基因细胞癌变过程中发生改变的基因. .l 癌基因癌基因l抑癌基因抑癌基因l调控基因控基因(一一)癌基

2、因癌基因(oncogene) 是动物细胞及致癌病毒基因组内固有的一是动物细胞及致癌病毒基因组内固有的一段功能单位。正常情况下癌基因表达受严密控段功能单位。正常情况下癌基因表达受严密控制，当胞内调控机制受损时，癌基因可过度激制，当胞内调控机制受损时，癌基因可过度激活并异常表达，从而导致正常细胞癌变。活并异常表达，从而导致正常细胞癌变。根据其来源可分为根据其来源可分为l virus oncogenel cellular oncogenel proto-oncogene 19681968年年 Duesberg Duesberg 等首次发现，等首次发现，因基因来自病毒而被命名为病毒因基因来自病毒而被命

3、名为病毒癌基因。癌基因。 Rous Rous 肉瘤病毒：基因组肉瘤病毒：基因组“编编码酪氨酸蛋白激酶码酪氨酸蛋白激酶”基因，证实基因，证实它在细胞转化中起关键作用它在细胞转化中起关键作用 存在于正常的细胞基因组中，与病毒存在于正常的细胞基因组中，与病毒癌基因有同源序列，具有促进正常细胞癌基因有同源序列，具有促进正常细胞生长、增殖、分化和发育等生理功能。生长、增殖、分化和发育等生理功能。在正常细胞内未激活的细胞癌基因叫原在正常细胞内未激活的细胞癌基因叫原癌基因，当其受到某些条件激活时，结癌基因，当其受到某些条件激活时，结构和表达发生异常，能使细胞发生恶性构和表达发生异常，能使细胞发生恶性转化。转

4、化。存在于正常细胞基因组中存在于正常细胞基因组中未激活的细胞未激活的细胞癌基因，是人体正常细胞中的一种癌基因，是人体正常细胞中的一种正常正常基因基因，调控细胞生长和分化。，调控细胞生长和分化。 广泛存广泛存在于生物界中，从酵母到人类细胞中都在于生物界中，从酵母到人类细胞中都存在。存在。 1. 1. 蛋白激酶类蛋白激酶类 2. 2. 信息传递蛋白类信息传递蛋白类 3. 3. 生长因子及其受体类生长因子及其受体类4. 4. 核内蛋白类核内蛋白类 (二二) 抑癌基因抑癌基因 tumor suppressor gene 正常细胞抑癌基因能抑制细胞转化和肿瘤发正常细胞抑癌基因能抑制细胞转化和肿瘤发生。多

5、数肿瘤细胞都存在抑癌基因的改变。生。多数肿瘤细胞都存在抑癌基因的改变。 抑癌基因的丢失、失活及癌基因的激活与肿瘤抑癌基因的丢失、失活及癌基因的激活与肿瘤的发生、发展密切相关。的发生、发展密切相关。 主要功能主要功能 1 1 诱导终末分化；诱导终末分化； 2 2 维持基因稳定；维持基因稳定； 3 3 触发衰老，诱导细胞程序性死亡；触发衰老，诱导细胞程序性死亡； 4 4 调节细胞生长；调节细胞生长； 5 5 抑制蛋白激酶活性；抑制蛋白激酶活性； 6 6 改变改变DNADNA甲基化酶活性；甲基化酶活性； 7 7 调节组织蛋白酶活性调节组织蛋白酶活性 ； 8 8 调节血管形成调节血管形成 ； 9 9

6、促进细胞间联系等促进细胞间联系等目前已被发现并克隆的抑癌基因包括目前已被发现并克隆的抑癌基因包括P53P53、P16P16、RbRb、WT-1WT-1、MTSMTS、多发性、多发性结肠癌基因等结肠癌基因等。 (三三) 肿瘤瘤细胞胞转移基因移基因 转移抑制基因移抑制基因 肿瘤细胞转移基因的激活肿瘤细胞转移基因的激活和和/ /或或转移抑制转移抑制基因失活均可诱发肿瘤细胞转移表型而导致基因失活均可诱发肿瘤细胞转移表型而导致转移的发生转移的发生. . 此类基因本身并不引起正常细胞癌变，而此类基因本身并不引起正常细胞癌变，而是参与其调控作用。是参与其调控作用。目前发现癌基因癌基因 有有100100多个：

7、多个：rasras基因家族参与多种肿瘤的形基因家族参与多种肿瘤的形成与发展，成与发展，8282年以来，在膀胱癌、乳腺癌、结年以来，在膀胱癌、乳腺癌、结肠癌、肾癌、肝癌、肺癌、胰腺癌、胃癌、及肠癌、肾癌、肝癌、肺癌、胰腺癌、胃癌、及造血系肿统瘤中，均检出了造血系肿统瘤中，均检出了rasras癌基因的异常；癌基因的异常；mycmyc基因参与细胞凋亡，基因参与细胞凋亡，c-mycc-myc基因与多种肿瘤基因与多种肿瘤发生发展有关。发生发展有关。抗癌基因抗癌基因 有数十个：有数十个：nm23nm23基因是肿瘤转移抑制基基因是肿瘤转移抑制基因。因。p16p16是比是比p53p53更重要的一种新型抗癌基因

8、；更重要的一种新型抗癌基因；SARISARI参与并抑制一种关键蛋白质，这种蛋白质在参与并抑制一种关键蛋白质，这种蛋白质在90%90%的的人类癌症中都过度表达。人类癌症中都过度表达。 转移基因移基因（metastasis genemetastasis gene）有一些）有一些? ?是直接促进转移发生的关键基因，其存在或表是直接促进转移发生的关键基因，其存在或表达增强会引起侵袭转移的发生达增强会引起侵袭转移的发生转移相关基因移相关基因（ metastasis-associated gene metastasis-associated gene）有一些有一些? ?只涉及转移的某个阶段，并非参与整个转

9、移过只涉及转移的某个阶段，并非参与整个转移过程。程。二二 肿瘤抗原瘤抗原 是指细胞癌变过程中出现的新抗原及过度表达的抗原物质的总称。 产生机制生机制1 1细胞癌变过程中合成了新的蛋白质分子；2异常糖基化导致蛋白的特殊降解产物；3基因突变使正常蛋白质分子的结构发生改变；4正常情况下处于隐蔽状态的抗原表位暴露出来；5多种膜分子的异常表达；尤其是信号传导分子。6胚胎抗原或分化抗原的异常表达。 研究主要研究主要历程程u 2020世纪最初世纪最初: :寻找和证实肿瘤抗原，没取得明显进展寻找和证实肿瘤抗原，没取得明显进展 2020世纪世纪5050年代年代: :纯种小鼠的培育成功，证实了化学致纯种小鼠的培育

10、成功，证实了化学致癌剂甲基胆蒽癌剂甲基胆蒽( (mcthvlmcthvl，holanthreneholanthrene，MCA)MCA)诱发小鼠发诱发小鼠发生的肉瘤所表达的移植排斥抗原是肿瘤抗原，证实了肿生的肉瘤所表达的移植排斥抗原是肿瘤抗原，证实了肿瘤抗原的存在。瘤抗原的存在。 2020世纪世纪6060年代年代: :证明淋巴、巨噬细胞和抗体等抗肿瘤证明淋巴、巨噬细胞和抗体等抗肿瘤效应。效应。 2020世纪世纪7070年代年代: :单抗问世，推动了肿瘤免疫诊断技术单抗问世，推动了肿瘤免疫诊断技术和肿瘤免疫治疗的发展。和肿瘤免疫治疗的发展。 2020世纪世纪8080年代年代: :肿瘤抗原、肿瘤抗

11、原、MHCMHC分子、分子、T T杀伤机制等有杀伤机制等有更深了解。更深了解。 2020世纪世纪9090年代年代: :多种人类肿瘤抗原基因克隆成功，多种人类肿瘤抗原基因克隆成功，肿瘤标志物检测，推动了肿瘤免疫学发展。肿瘤标志物检测，推动了肿瘤免疫学发展。分分类及其特征及其特征 按特异性分类按特异性分类 肿瘤特异性抗原（肿瘤特异性抗原（TSA)TSA) 肿瘤相关性抗原肿瘤相关性抗原 (TAA) (TAA)TSA TSA 是肿瘤细胞特有是肿瘤细胞特有的，或只存在于某种的，或只存在于某种肿瘤细胞而不存在于肿瘤细胞而不存在于正常细胞的新抗原。正常细胞的新抗原。又称又称TSTATSTA或或TRATRA。

12、 TAATAA是指非肿瘤细胞所特是指非肿瘤细胞所特有的、正常细胞和其他组有的、正常细胞和其他组织上也存在的抗原，只是织上也存在的抗原，只是其含量在细胞癌变时明显其含量在细胞癌变时明显增高。只表现出量的变化增高。只表现出量的变化而无严格肿瘤特异性。如：而无严格肿瘤特异性。如：胚胎性抗原胚胎性抗原根据肿瘤发生的原因分类根据肿瘤发生的原因分类理化致癌剂理化致癌剂病毒诱导病毒诱导自发肿瘤抗原自发肿瘤抗原胚胎抗原胚胎抗原 人类少有；具有明显的个体独特性人类少有；具有明显的个体独特性 特异性高，抗原性弱，为特异性高，抗原性弱，为TSA,如如MUM-1特异性弱，同株病毒所诱发的肿瘤具有特异性弱，同株病毒所诱

13、发的肿瘤具有相同的抗原性。抗原性强。相同的抗原性。抗原性强。人类肿瘤抗原多属于此类抗原。人类肿瘤抗原多属于此类抗原。可表达可表达TSATSA，也可表达，也可表达TAATAA。胚胎组织正常成分，出生后消失。细胞胚胎组织正常成分，出生后消失。细胞恶变后大量出现，可作为诊断的一个重恶变后大量出现，可作为诊断的一个重要指标。为要指标。为TAA.TAA. 包括包括 分泌型的分泌型的 AFP AFP，和膜相关的，和膜相关的 CEA CEA按抗原的基因类型分为按抗原的基因类型分为u静止基因的表达产物静止基因的表达产物：癌细胞将该基因表达启动，被：癌细胞将该基因表达启动，被T T识别。识别。分化抗原基因的表达

14、产物分化抗原基因的表达产物： CEACEA。出生后该基因关闭。细胞癌变。出生后该基因关闭。细胞癌变后则重新开启该基因，成为免疫系统识别的靶子。后则重新开启该基因，成为免疫系统识别的靶子。癌基因的异常高表达癌基因的异常高表达：HER-2HER-2某些正常细胞有微量表达，但自身某些正常细胞有微量表达，但自身T T细胞对其耐受，癌变细胞由于异常高表达打破了这种耐受。细胞对其耐受，癌变细胞由于异常高表达打破了这种耐受。突变的抑癌基因产物突变的抑癌基因产物：如突变：如突变p53p53可造成其产物堆积，为免疫系统可造成其产物堆积，为免疫系统识别。识别。突变的癌基因表达产物突变的癌基因表达产物：正常的：正常

15、的rasras基因产物无免疫源性，癌细胞基因产物无免疫源性，癌细胞中在编码中在编码rasras第第1212或或61 61 位发生基因突变，形成具有新表位的位发生基因突变，形成具有新表位的p21rasp21ras产产物，。物，。染色体易位产生的融合基因产物染色体易位产生的融合基因产物：白血病细胞的原癌基因：白血病细胞的原癌基因c-ablc-abl 从从9 9号染色体易位到号染色体易位到2222号染色体与号染色体与bcrbcr基因连接形成基因连接形成bcr-ablbcr-abl融合基因融合基因编码编码210KD210KD融合蛋白。融合蛋白。致癌病毒性基因产物致癌病毒性基因产物：HPVHPV与宫颈癌

16、密切相关，与宫颈癌密切相关，HPV16HPV16的的E6E6、E7E7基基因能使宫颈鳞状上皮转化为癌细胞。而因能使宫颈鳞状上皮转化为癌细胞。而E6E6、E7E7的基因产物可被的基因产物可被T T细胞细胞识别。识别。其他其他 三三 抗瘤免疫效抗瘤免疫效应抗肿瘤免抗肿瘤免疫机制疫机制适应性免疫适应性免疫固有免疫固有免疫细胞免疫细胞免疫体液免疫体液免疫机体的免疫机体的免疫监视功能和一般的清除抗原的机制一致功能和一般的清除抗原的机制一致细胞免疫作用更大些胞免疫作用更大些肿瘤患者的免疫瘤患者的免疫应答不答不够有效有效抗癌抗癌药物物对机体免疫机能有机体免疫机能有损伤 三三 抗瘤免疫效抗瘤免疫效应体液免疫机

17、制体液免疫机制 ( (一一) )激活补体系统溶解肿瘤细胞激活补体系统溶解肿瘤细胞 ( (二二)ADCC)ADCC ( (三三) )抗体的调理作用抗体的调理作用 ( (四四) )抗体封闭肿瘤细胞上的某些受体抗体封闭肿瘤细胞上的某些受体 例如转铁蛋白可促进某些肿瘤细胞的生长，例如转铁蛋白可促进某些肿瘤细胞的生长， 抗体可通过封闭肿瘤细胞表面的转铁蛋白受体，抗体可通过封闭肿瘤细胞表面的转铁蛋白受体，从而抑制肿瘤细胞的生长。从而抑制肿瘤细胞的生长。 ( (五五) )抗体使肿瘤细胞的粘附特性改变或丧失。有抗体使肿瘤细胞的粘附特性改变或丧失。有助于控制肿瘤细胞的生长和转移。助于控制肿瘤细胞的生长和转移。肿

18、瘤细胞的抗原呈递肿瘤细胞的抗原呈递外源性抗原呈外源性抗原呈递 （专职（专职APCAPC提呈）提呈）专职专职APCAPC可捕捉肿瘤释放出的可溶性抗原，从肿瘤细可捕捉肿瘤释放出的可溶性抗原，从肿瘤细胞表面脱落的抗原或从肿瘤组织脱落的肿瘤细胞，胞表面脱落的抗原或从肿瘤组织脱落的肿瘤细胞，由由MHC IIMHC II类分子呈递给类分子呈递给CD4+ TCD4+ T细胞。细胞。内源性抗原呈内源性抗原呈递 （肿瘤细胞提呈）肿瘤细胞提呈） 瘤细胞自身瘤细胞自身MHC IMHC I类分子将内源性肿瘤抗原肽呈类分子将内源性肿瘤抗原肽呈递给递给CD8+ TCD8+ T细胞。细胞。肿瘤抗原基因所编码的多肽一般肿瘤抗

19、原基因所编码的多肽一般含有多个抗原表位，被含有多个抗原表位，被MHC IMHC I类分子结合并提呈给类分子结合并提呈给CTLCTL的短肽是其中极小部分。的短肽是其中极小部分。 目前已人工合成肿瘤抗原肽，且已鉴定出一批与目前已人工合成肿瘤抗原肽，且已鉴定出一批与人人MHC IMHC I类分子结合的肿瘤抗原肽。用于肿瘤的免疫类分子结合的肿瘤抗原肽。用于肿瘤的免疫治疗。治疗。细胞免疫机制细胞免疫机制n (一一)T细胞胞1 Th (1)(1)细胞直接杀伤癌细胞。细胞直接杀伤癌细胞。 （2 2）通过其释放的细胞因子如）通过其释放的细胞因子如IL2IL2、IFN-IFN-等，等，激活单核激活单核- -巨噬

20、细胞、巨噬细胞、NKNK，并增强，并增强CTLCTL的杀伤功能。的杀伤功能。2 Tc CD8CD8CTLCTL是抗肿瘤免疫的主要效应细胞。是抗肿瘤免疫的主要效应细胞。 （1 1）直接杀伤肿瘤细胞）直接杀伤肿瘤细胞（2 2） 诱导凋亡（诱导凋亡（FasFasFasLFasL）（3 3） 是通过分泌多种细胞因子是通过分泌多种细胞因子(二二)NK细胞胞 是细胞免疫中的非特异性成分，其杀伤特点是：是细胞免疫中的非特异性成分，其杀伤特点是：无需抗原致敏、发生早、杀伤作用无肿瘤特异性、无需抗原致敏、发生早、杀伤作用无肿瘤特异性、无无MHCMHC限制性。限制性。 穿孔素穿孔素 Fas/FasL Fas/Fa

21、sL ADCC ADCC 细胞因子：激活单核细胞因子：激活单核- -巨噬细胞、巨噬细胞、 诱导诱导Th0Th1/2Th0Th1/2转化。转化。(三）三）树突状突状细胞：胞： DCDC是近几年研究的热点。是诱导是近几年研究的热点。是诱导T T细胞抗肿瘤免疫细胞抗肿瘤免疫最强的最强的APCAPC 近期研究证实近期研究证实DCDC可分泌的可分泌的exosomesexosomes（外泌小体）（外泌小体）具有抗原呈递密切相关的具有抗原呈递密切相关的MHC IMHC I、IIII类分子和共刺激类分子和共刺激分子。分子。 IL-10 IL-10、IL-12IL-12、IFN-IFN-可促进可促进DCDC分泌

22、分泌exosomesexosomes。 动物实验表明：肿瘤抗原多肽致敏的骨髓动物实验表明：肿瘤抗原多肽致敏的骨髓DCDC制制备的备的exosomesexosomes可在体内诱导高水平肿瘤特异性可在体内诱导高水平肿瘤特异性CTLCTL，治愈荷瘤小鼠，它有望成为一种新型的肿瘤疫苗。治愈荷瘤小鼠，它有望成为一种新型的肿瘤疫苗。n (四四)巨噬巨噬细胞胞 1 1 1 1 释放溶酶体酶：活化的巨噬细胞与肿瘤细胞结合释放溶酶体酶：活化的巨噬细胞与肿瘤细胞结合后，通过溶酶体酶等直接杀伤肿瘤细胞，且杀伤作用后，通过溶酶体酶等直接杀伤肿瘤细胞，且杀伤作用强弱与溶酶体进入肿瘤细胞数量有关。强弱与溶酶体进入肿瘤细胞

23、数量有关。 2 2 2 2 提呈抗原。激活提呈抗原。激活提呈抗原。激活提呈抗原。激活T T T T细胞。细胞。细胞。细胞。 3 ADCC3 ADCC3 ADCC3 ADCC效应效应效应效应 4 4 4 4 分泌细胞毒性物质：活性氧、分泌细胞毒性物质：活性氧、分泌细胞毒性物质：活性氧、分泌细胞毒性物质：活性氧、NONONONO、蛋白水解酶等。、蛋白水解酶等。、蛋白水解酶等。、蛋白水解酶等。 5 5 分泌细胞因子：分泌细胞因子：TNFTNF诱导癌细胞凋亡；诱导癌细胞凋亡； IL-1IL-1IL-1IL-1、IL-IL-IL-IL- 12 12 12 12等激活等激活等激活等激活T T T T细胞细

24、胞细胞细胞（五）其他（五）其他细胞胞 中性粒细胞、肥大细胞、嗜酸性粒细胞中性粒细胞、肥大细胞、嗜酸性粒细胞 LAK LAK ：淋巴因子激活杀伤细胞：淋巴因子激活杀伤细胞 CIK CIK ：细胞因子诱导的杀伤细胞：细胞因子诱导的杀伤细胞 TIL TIL ：肿瘤浸润淋巴细胞：肿瘤浸润淋巴细胞四四 免疫逃逸免疫逃逸与肿瘤细胞有关的因素与肿瘤细胞有关的因素1 1 1 1抗原缺失和抗原调变抗原缺失和抗原调变抗原缺失和抗原调变抗原缺失和抗原调变2 2 2 2瘤细胞瘤细胞瘤细胞瘤细胞I I I I类分子表达低下类分子表达低下类分子表达低下类分子表达低下3 3 3 3瘤细胞缺协同刺激信号瘤细胞缺协同刺激信号瘤

25、细胞缺协同刺激信号瘤细胞缺协同刺激信号4 4 4 4封闭性抗体的作用封闭性抗体的作用封闭性抗体的作用封闭性抗体的作用5 5 5 5抗原覆盖抗原覆盖抗原覆盖抗原覆盖6 6 6 6肿瘤细胞产生免疫抑制物肿瘤细胞产生免疫抑制物肿瘤细胞产生免疫抑制物肿瘤细胞产生免疫抑制物 （IL-10,TGF-IL-10,TGF-IL-10,TGF-IL-10,TGF- ) ) ) )。7 7 7 7 肿瘤细胞的肿瘤细胞的肿瘤细胞的肿瘤细胞的“漏逸漏逸漏逸漏逸”8 8 肿瘤细胞抗凋亡（高表肿瘤细胞抗凋亡（高表达达bcl-2bcl-2，少或不表达，少或不表达FasFas及相关分子）及相关分子）与宿主免疫系统有关的因素与

26、宿主免疫系统有关的因素 免疫功能低下、免疫耐受状态、免疫功能低下、免疫耐受状态、宿主抗原提呈细胞的功能低下或缺陷宿主抗原提呈细胞的功能低下或缺陷等。等。四四 免疫逃逸免疫逃逸五五 免疫免疫诊断治断治疗u检测肿瘤抗原：检测肿瘤抗原：是目前最常用的肿瘤免疫诊断方法。是目前最常用的肿瘤免疫诊断方法。如如AFPAFP原发性肝癌，原发性肝癌，CEACEA直肠结肠癌，直肠结肠癌，CAl99CAl99胰腺癌。胰腺癌。u检测抗肿瘤抗体：检测抗肿瘤抗体：u单抗导向显影：单抗导向显影：放射性核素与抗肿瘤单抗结合后，放射性核素与抗肿瘤单抗结合后，从静脉注入体内或腔内注射均可将放射性核素导向从静脉注入体内或腔内注射均

27、可将放射性核素导向肿瘤的所在部位，用肿瘤的所在部位，用照相机可以显示清晰的肿瘤照相机可以显示清晰的肿瘤影像。影像。u检测其他肿瘤标记物：检测其他肿瘤标记物：细胞表面分子、基因、蛋白细胞表面分子、基因、蛋白的检测的检测 肿瘤的免疫诊断肿瘤的免疫诊断非特异性卡介苗卡介苗, ,短小棒状杆菌短小棒状杆菌, , 左旋左旋咪唑等咪唑等. .灭活的肿瘤细胞灭活的肿瘤细胞, , 纯化或基因纯化或基因重组的肿瘤抗原重组的肿瘤抗原特异性主动免疫治疗主动免疫治疗LAK LAK 细胞细胞, , 细胞因子细胞因子非特异性抗体抗体单独或与其他制剂结合单独或与其他制剂结合, , 激活激活T T淋巴细胞淋巴细胞特异性被动免疫

28、治疗被动免疫治疗 肿瘤的免疫治疗肿瘤的免疫治疗免疫治疗免疫治疗特异性主动免疫治疗特异性主动免疫治疗免疫导向治疗免疫导向治疗细胞因子治疗细胞因子治疗免疫细胞的过继治疗免疫细胞的过继治疗基因治疗基因治疗应用疫苗（由处理过的自体肿瘤、培养的肿瘤细胞应用疫苗（由处理过的自体肿瘤、培养的肿瘤细胞或异体肿瘤制成）或基因工程疫苗进行免疫接种，或异体肿瘤制成）或基因工程疫苗进行免疫接种，可激发或增强患者特异性抗瘤免疫应答，可激发或增强患者特异性抗瘤免疫应答，阻止肿瘤生长、扩散和复发，即阻止肿瘤生长、扩散和复发，即SAITSAIT。包括细胞疫苗、分子疫苗、基因工程疫苗。包括细胞疫苗、分子疫苗、基因工程疫苗。基因

29、修饰的肿瘤细胞疫苗肿瘤抗原肽或基因修饰的APC疫苗u肿瘤相关的病毒疫苗u重组病毒疫苗u癌基因产物的分子疫苗u抗独特型抗体疫苗u热休克蛋白-肽复合物肿瘤疫苗u人工合成的肿瘤多肽疫苗免疫治疗免疫治疗特异性主动免疫治疗特异性主动免疫治疗免疫导向治疗免疫导向治疗细胞因子治疗细胞因子治疗免疫细胞的过继治疗免疫细胞的过继治疗基因治疗基因治疗l抗体抗体-药物偶合物导向治疗药物偶合物导向治疗l免疫毒素导向治疗免疫毒素导向治疗l抗体抗体-核素偶联物导向治疗核素偶联物导向治疗l双功能抗体导向治疗双功能抗体导向治疗l抗体抗体-超抗原偶联物或超抗原偶联物或 其融合蛋白导向治疗其融合蛋白导向治疗l抗体导向酶解前药疗法抗

30、体导向酶解前药疗法l以血管为靶标的抗体导向治疗以血管为靶标的抗体导向治疗l放射免疫导向手术治疗放射免疫导向手术治疗单克隆抗体单克隆抗体治疗治疗免疫治疗免疫治疗特异性主动免疫治疗特异性主动免疫治疗免疫导向治疗免疫导向治疗细胞因子治疗细胞因子治疗免疫细胞的过继治疗免疫细胞的过继治疗基因治疗基因治疗u外源性细胞因子治疗u细胞因子导向疗法u细胞因子基因治疗l淋巴因子激活的杀伤细胞l肿瘤浸润淋巴细胞l细胞因子诱导的杀伤细胞l其他细胞l导入细胞因子基因的效应细胞应用正常或野生型基因纠正或置换致病应用正常或野生型基因纠正或置换致病基因或导入有治疗作用的其他基因，从基因或导入有治疗作用的其他基因，从而诱发机体

31、产生有效的抗肿瘤免疫应答；而诱发机体产生有效的抗肿瘤免疫应答；增强对肿瘤的特异性识别；抑制和阻断增强对肿瘤的特异性识别；抑制和阻断肿瘤相关基因的异常表达；增强肿瘤细肿瘤相关基因的异常表达；增强肿瘤细胞对药物敏感性等。胞对药物敏感性等。外源基因免疫分子编码基因免疫分子编码基因抗癌基因抗癌基因反义核苷酸反义核苷酸肿瘤药物相关基因肿瘤药物相关基因病毒基因病毒基因六六 肿瘤瘤标记物的物的检测 传统的蛋白的蛋白类标记物物 DNA标记物和物和RNA标记物物 肿瘤的分子标志物并非绝对特异，彼此之间也非完肿瘤的分子标志物并非绝对特异，彼此之间也非完全一致，需要联合多项指标，动态观察，且需结合全一致，需要联合多

32、项指标，动态观察，且需结合临床表现判断。临床表现判断。 肿瘤标志物血清水平不高，多用标记技术检测肿瘤标志物血清水平不高，多用标记技术检测临床常床常见肿瘤瘤标志物志物AFP有助于有助于原原发性肝癌性肝癌诊断断CEA有助于有助于直直肠癌、癌、结肠癌癌诊断断CA19-9有助于有助于胰腺癌胰腺癌诊断断CA125有助于有助于卵巢癌卵巢癌诊断断PSA有助于有助于前列腺癌前列腺癌诊断断检测的目的和意的目的和意义早期早期诊断断高危人群高危人群筛查肿瘤的瘤的辅助助诊断断疗效效观察察复复发检测预后判断后判断肿瘤瘤标记物的分物的分类1)1)肿瘤细胞分泌的标志物肿瘤细胞分泌的标志物 (1)(1)分化抗原标志物分化抗原

33、标志物( (淋巴瘤标志物等淋巴瘤标志物等) )； (2) (2)胚胎抗原标志物胚胎抗原标志物(CEA(CEA，AFPAFP等等) )： (3) (3)糖脂或精蛋白类糖脂或精蛋白类(CA-199,CA-125(CA-199,CA-125，CA-153CA-153，CA-50CA-50等等) ) (4) (4)同功酶类标志物同功酶类标志物(NSE(NSE，PAPPAP，IREIRE，PLAPPLAP等等) ) (5) (5)激素类标志物激素类标志物(HCG(HCG， ACTH ACTH， CT CT等等) ) (6) (6)肿瘤相关抗原肿瘤相关抗原(PSA(PSA，SCCSCC，CYFRA-211

34、)CYFRA-211) (7) (7)基因类标志物基因类标志物(P53(P53基因，癌基因等基因，癌基因等) ) (8) (8)其它；多胺其它；多胺(PUT)(PUT)、唾液酸、唾液酸(SA)(SA)等等2)2)宿主反应标志物宿主反应标志物 血铁蛋白、血铁蛋白、2 2m m、IL-2RIL-2R、TNFTNF、新喋呤等。新喋呤等。3)3)不进入循环体液的标志物不进入循环体液的标志物：人乳脂肪球蛋白人乳脂肪球蛋白检测的的临床床应用用1 诊断断2 指指导临床用床用药3 优化化细胞毒素治胞毒素治疗 如如 BRCA1 BRCA1 或或BRCA2 BRCA2 基因突变会增加妇女基因突变会增加妇女乳腺癌和

35、乳腺癌和卵巢癌卵巢癌患病患病风险风险, , 甚至可能还与甚至可能还与某些其它类型的肿瘤某些其它类型的肿瘤有关。筛选有关。筛选BRCA 1 BRCA 1 和和BRCA 2 BRCA 2 基因突变可以基因突变可以早期诊断乳腺癌和卵早期诊断乳腺癌和卵巢癌。巢癌。HER2HER2是一种原癌基因是一种原癌基因, , 其扩其扩增和过度表达与乳腺癌的恶增和过度表达与乳腺癌的恶性程度和侵袭性具有很大的性程度和侵袭性具有很大的相关性。相关性。HER2 HER2 的表达情况的表达情况可以作为预测肿瘤愈后的一可以作为预测肿瘤愈后的一项重要指标。项重要指标。 HER2 HER2可以指导临床治疗乳可以指导临床治疗乳癌：

36、癌：HerceptinHerceptin 问世之后问世之后, , HER2 HER2 检测成为筛选乳腺癌检测成为筛选乳腺癌患者药物治疗的常规检查。患者药物治疗的常规检查。HER2 HER2 阳性才能使用赫赛汀阳性才能使用赫赛汀治疗。治疗。二氢嘧啶脱氢酶二氢嘧啶脱氢酶(DPD)(DPD) 是是5-5-FU FU 在肝脏分解代谢的限速在肝脏分解代谢的限速酶。肿瘤细胞内高浓度的酶。肿瘤细胞内高浓度的DPD DPD 可降低可降低5-FU 5-FU 活性。活性。 抑制抑制DPD DPD 活性可明显延长活性可明显延长5-FU 5-FU 半寿期半寿期, , 减少用药剂减少用药剂量。量。 对对DPD DPD

37、进行筛选进行筛选, , 了解患了解患者的者的DPD DPD 活性状态活性状态, , 有助于有助于确定哪些患者在接受确定哪些患者在接受5-FU 5-FU 治疗时产生毒性反应的风险治疗时产生毒性反应的风险高低高低, , 从而及时采取对策。从而及时采取对策。肿瘤瘤标记物物检测技技术l肿瘤标记物的分子检测方法肿瘤标记物的分子检测方法l肿瘤标记物的基因检测手段肿瘤标记物的基因检测手段1 免疫免疫标记技技术（RIA/EIA/FIA等）等）2 流式流式细胞胞术分析分析l肿瘤标记物的分子检测方法肿瘤标记物的分子检测方法检测的是的是肿瘤瘤细胞表面的分子胞表面的分子l肿瘤标记物基因检测手段肿瘤标记物基因检测手段1

38、 基因芯片基因芯片 技技术2 肿瘤蛋白瘤蛋白质组学学诊断断 肿瘤临床分子检测的进展依赖于分子分析技肿瘤临床分子检测的进展依赖于分子分析技术的进步。人类基因组序列和高通量分子分析术的进步。人类基因组序列和高通量分子分析技术的发展技术的发展, , 使人们能够从使人们能够从DNADNA、RNA RNA 和蛋白质和蛋白质水平上对肿瘤进行全面研究。水平上对肿瘤进行全面研究。检测的是的是肿瘤基因、瘤基因、肽类、蛋白等、蛋白等1 基因芯片基因芯片 技技术 原理原理 是根据遗传学中心法则，利用基因互补配对原是根据遗传学中心法则，利用基因互补配对原则，在同一载体上同时进行多基因检测。也就是把则，在同一载体上同时

39、进行多基因检测。也就是把大量寡核苷酸分子固定于支持物上，然后与标记的大量寡核苷酸分子固定于支持物上，然后与标记的样品进行杂交，通过检测杂交信号的强弱判断样品样品进行杂交，通过检测杂交信号的强弱判断样品中靶分子的数量。中靶分子的数量。 简单的说就是高密度的斑点杂交技术。简单的说就是高密度的斑点杂交技术。 在肿瘤标记物检测中的用途在肿瘤标记物检测中的用途 能分析一个肿瘤样本中的整个基因组能分析一个肿瘤样本中的整个基因组, , 可能具有可能具有预见性价值。预见性价值。 也能精确地检测现有的分子标记物。如雌激素受也能精确地检测现有的分子标记物。如雌激素受体和体和HER2, HER2, 区分散发性乳腺癌

40、和那些与区分散发性乳腺癌和那些与BRCA BRCA 等位等位基因有关的病例。基因有关的病例。基因诊断不能代替分子诊断的原因基因诊断不能代替分子诊断的原因（1 1） 绝大多数肿瘤不具遗传性。绝大多数肿瘤不具遗传性。 在绝大多数肿瘤中尚未在绝大多数肿瘤中尚未发现肿瘤特异的基因突变。发现肿瘤特异的基因突变。（2 2） 与肿瘤相关的癌基因或抑癌基因的变异是后天获得与肿瘤相关的癌基因或抑癌基因的变异是后天获得的。的。 基因组改变常常只限于肿瘤细胞基因组改变常常只限于肿瘤细胞, , 其它组织细胞甚至其它组织细胞甚至癌旁组织细胞基因组癌旁组织细胞基因组DNA DNA 没有相应的变异。故只能取肿瘤没有相应的变

41、异。故只能取肿瘤组织细胞而不能取外周血或其它组织细胞进行基因检测。组织细胞而不能取外周血或其它组织细胞进行基因检测。（3 3）费用昂贵、操作复杂。）费用昂贵、操作复杂。肿瘤瘤标记物的一个新的研究新方向物的一个新的研究新方向 在在实体瘤患者的血清中体瘤患者的血清中检测肿瘤特异性瘤特异性DNA ，将成，将成为一种非侵入性一种非侵入性肿瘤瘤诊断新手断新手段。段。 基因改变的循环DNA作为一种候选标记物可用于早期发现肿瘤高危患者, 甚至用于大批人群筛选。2 肿瘤蛋白瘤蛋白质组学技学技术 描述蛋白质及其翻译后修饰描述蛋白质及其翻译后修饰, , 显示不同疾病显示不同疾病状态下蛋白的差异状态下蛋白的差异,

42、,研究蛋白质研究蛋白质- -蛋白质、蛋白质蛋白质、蛋白质-DNA/RNA -DNA/RNA 的相互作用。的相互作用。 蛋白质组学技术主要用于疾病相关蛋白质的蛋白质组学技术主要用于疾病相关蛋白质的分离和鉴定。分离和鉴定。 二维凝胶电泳、质谱技术和生物信息学是最二维凝胶电泳、质谱技术和生物信息学是最常见的三大技术。常见的三大技术。 肿瘤是基因性疾病肿瘤是基因性疾病, , 也可认为是一种蛋白质组也可认为是一种蛋白质组疾病。疾病。 一个细胞由正常转变为肿瘤的过程中一个细胞由正常转变为肿瘤的过程中, , 细胞内蛋白质表达谱会发生一系列显著变化。细胞内蛋白质表达谱会发生一系列显著变化。 找到相关的蛋白质标

43、记物找到相关的蛋白质标记物, , 就有希望实现肿瘤的就有希望实现肿瘤的早期诊断、早期治疗早期诊断、早期治疗, ,并开发出靶向药物。并开发出靶向药物。 肿瘤蛋白质组学是指对正常组织与疾病组织肿瘤蛋白质组学是指对正常组织与疾病组织( (从从癌前病变到肿瘤癌前病变到肿瘤) ) 之间差异表达的蛋白质的鉴定之间差异表达的蛋白质的鉴定和定量分析。和定量分析。 优势体现：优势体现：(1) (1) 有多种不同表面性质的芯片可供选择。有多种不同表面性质的芯片可供选择。(2) (2) 样品需求量少。样品需求量少。(0.5(0.5 400ml) 400ml)(3)(3)直接分析未经纯化的生物样品。如血浆、血清、直接

44、分析未经纯化的生物样品。如血浆、血清、尿液、脑脊液、痰液等尿液、脑脊液、痰液等; ; (4) (4) 灵敏度高。灵敏度高。 可以检出过去无法检出的大量低可以检出过去无法检出的大量低丰度、小分子量的蛋白质丰度、小分子量的蛋白质; ;(5) (5) 高通量。可以在数分钟内快速完成检测。高通量。可以在数分钟内快速完成检测。 正常值正常值 增高主要见于增高主要见于 也见于也见于CA 50 CA 50 20U/ml 20U/ml 广谱肿瘤标记物广谱肿瘤标记物 感染，自身免疫病感染，自身免疫病CA125 CA125 35U/ml 35U/ml 卵巢癌卵巢癌 卵巢囊肿，子宫内膜异位卵巢囊肿，子宫内膜异位CA

45、15-3 CA15-3 28U/ml 28U/ml 乳腺癌乳腺癌 其他肿瘤其他肿瘤CA19-9 CA19-9 37U/ml 37U/ml 胰腺癌胰腺癌 结结/ /直肠癌、肝癌，胃癌直肠癌、肝癌，胃癌CA242 CA242 12U/m 12U/m 胰腺癌，胆管癌胰腺癌，胆管癌 非鳞癌比鳞癌高非鳞癌比鳞癌高CA72-4 CA72-4 6U/ml 6U/ml 胃癌胃癌 结结/ /直肠癌，肝癌，肺癌卵巢癌直肠癌，肝癌，肺癌卵巢癌 部分肿瘤标记物l几种与几种与P53相关的肿瘤标记物相关的肿瘤标记物cyclinD1cyclinD1cyclinD1cyclinD1： 作为作为作为作为G1 G1 G1 G1

46、期细胞周期相关蛋白期细胞周期相关蛋白期细胞周期相关蛋白期细胞周期相关蛋白, , , , 其其其其基因和编码蛋白的异常以及基因和编码蛋白的异常以及基因和编码蛋白的异常以及基因和编码蛋白的异常以及与多种肿瘤相关基因与多种肿瘤相关基因的协同作用可促进细胞恶性转化。的协同作用可促进细胞恶性转化。SurvivinSurvivinSurvivinSurvivin：是最近发现的一种是最近发现的一种是最近发现的一种是最近发现的一种凋亡抑制蛋白凋亡抑制蛋白凋亡抑制蛋白凋亡抑制蛋白IAP IAP IAP IAP 家族成员家族成员家族成员家族成员, , , , 其其其其主要抑制主要抑制主要抑制主要抑制caspase

47、3caspase3caspase3caspase3、caspase7, caspase7, caspase7, caspase7, 阻阻阻阻断细胞的凋亡过程。断细胞的凋亡过程。断细胞的凋亡过程。断细胞的凋亡过程。体外试验表明体外试验表明体外试验表明体外试验表明, survivin, survivin, survivin, survivin可可可可在多种细胞中表达在多种细胞中表达在多种细胞中表达在多种细胞中表达, , , , 并可见于几乎所有被研究的并可见于几乎所有被研究的并可见于几乎所有被研究的并可见于几乎所有被研究的人类肿瘤组织中人类肿瘤组织中人类肿瘤组织中人类肿瘤组织中, , , , 而在

48、正常成人的未分化组织中而在正常成人的未分化组织中而在正常成人的未分化组织中而在正常成人的未分化组织中无表达。无表达。无表达。无表达。 COX-2 COX-2 COX-2 COX-2：COXCOXCOXCOX又称前列腺素环氧化酶还原酶。又称前列腺素环氧化酶还原酶。又称前列腺素环氧化酶还原酶。又称前列腺素环氧化酶还原酶。其基因其基因其基因其基因COX-2 COX-2 的过度表达可能通过其改变细胞的过度表达可能通过其改变细胞某些与增殖及凋亡有关基因的表达而促进肿瘤某些与增殖及凋亡有关基因的表达而促进肿瘤生成。生成。它调节肿瘤细胞增殖和凋亡的机制它调节肿瘤细胞增殖和凋亡的机制它调节肿瘤细胞增殖和凋亡的

49、机制它调节肿瘤细胞增殖和凋亡的机制, , , ,可能可能可能可能通过其下游的各种前列腺素及血栓素结合于相通过其下游的各种前列腺素及血栓素结合于相通过其下游的各种前列腺素及血栓素结合于相通过其下游的各种前列腺素及血栓素结合于相应受体而发挥作用。应受体而发挥作用。应受体而发挥作用。应受体而发挥作用。bcl - 2bcl - 2bcl - 2bcl - 2 是一个强有力的是一个强有力的是一个强有力的是一个强有力的凋亡抑制因子凋亡抑制因子凋亡抑制因子凋亡抑制因子, , , , 它它它它的高表达使细胞凋亡明显减少的高表达使细胞凋亡明显减少的高表达使细胞凋亡明显减少的高表达使细胞凋亡明显减少, , , ,

50、 表达下降则表表达下降则表表达下降则表表达下降则表现为凋亡细胞增多。现为凋亡细胞增多。现为凋亡细胞增多。现为凋亡细胞增多。p53p53p53p53基因基因基因基因 是迄今为止发现的与人类肿瘤相关性最高的是迄今为止发现的与人类肿瘤相关性最高的是迄今为止发现的与人类肿瘤相关性最高的是迄今为止发现的与人类肿瘤相关性最高的基因。基因。基因。基因。 有野生型和突变型两种。有野生型和突变型两种。有野生型和突变型两种。有野生型和突变型两种。 野生型野生型野生型野生型p53p53p53p53是抑癌基因，能诱导细胞凋亡和促是抑癌基因，能诱导细胞凋亡和促是抑癌基因，能诱导细胞凋亡和促是抑癌基因，能诱导细胞凋亡和促

51、进分化进分化进分化进分化; ; ; ; 突变型突变型突变型突变型p53p53p53p53是癌基因，可引起细胞恶性增殖且是癌基因，可引起细胞恶性增殖且是癌基因，可引起细胞恶性增殖且是癌基因，可引起细胞恶性增殖且具有抗凋亡作用具有抗凋亡作用具有抗凋亡作用具有抗凋亡作用, , , , 导致细胞的转化和肿瘤的发生。导致细胞的转化和肿瘤的发生。导致细胞的转化和肿瘤的发生。导致细胞的转化和肿瘤的发生。 由于体内外各种致癌因素的作用由于体内外各种致癌因素的作用由于体内外各种致癌因素的作用由于体内外各种致癌因素的作用,p53,p53,p53,p53基因发生基因发生基因发生基因发生缺失突变而导致肿瘤的发生。缺失突变而导致肿瘤的发生。缺失突变而导致肿瘤的发生。缺失突变而导致肿瘤的发生。谢谢！谢谢！