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1、第二章 遗传的物质基础一一遗传物质的发现遗传物质的发现The transforming principle is DNA.The genetic material of phage T2 is DNA.二核二核酸的结构及理化特性酸的结构及理化特性以四种碱基构成的脱氧核以四种碱基构成的脱氧核苷酸或核苷酸为基本单位苷酸或核苷酸为基本单位通过通过3 3，5-5-磷酸二酯键连磷酸二酯键连接成链状结构构成其一级接成链状结构构成其一级结构结构DNADNA的一级结构中，有一些碱基可以通过加上的一级结构中，有一些碱基可以通过加上一个甲基而被修饰，称为一个甲基而被修饰，称为DNADNA的甲基化的甲基化(myth
2、ylation of DNA)(mythylation of DNA)。 1 1）原核生物（细菌）有）原核生物（细菌）有限制一修饰限制一修饰系统系统 对自身对自身DNADNA产生保护作用。产生保护作用。 抵御外源抵御外源DNADNA（噬菌体）的入侵。（噬菌体）的入侵。 2 2）真核生物中的）真核生物中的DNADNA甲基化在基因表达调控中有甲基化在基因表达调控中有重要作用重要作用Nucleic Acid StructureDNA double helixWatson and Crick , 1953.Two separate strands Antiparellel (53 direction)
3、Complementary (sequence)Base pairing: hydrogen bonding that holds two strands togetherEssential for replicating DNA and transcribing RNA Sugar-phosphate backbones (negatively charged): outside Planner bases (stack one above the other): inside三级结构：即超螺旋结构三级结构：即超螺旋结构（Supercoiling）三链、四链结构：三链三链、四链结构：三链DN
4、A、端粒、端粒RNA 结构结构: 许多许多RNA分子以一单链状态存在分子以一单链状态存在, 其通过分其通过分子内碱基的配对和相互之间的氢键结合，子内碱基的配对和相互之间的氢键结合， 形成复杂构像，形成复杂构像，而这种复杂性反映在细胞中而这种复杂性反映在细胞中RNA分子呈现不同角色的变化分子呈现不同角色的变化中。中。tRNARibozyme RNArRNA核酸的理化性质核酸的理化性质物理性质：物理性质：a.核酸具有高度的粘性，这主要是因为其有高螺旋率和相对僵核酸具有高度的粘性，这主要是因为其有高螺旋率和相对僵硬的缘故；硬的缘故；b.其浮力密度为其浮力密度为1.7 g/cm-3，可通过密度梯度离心
5、获得，可通过密度梯度离心获得DNA；c.核酸具有旋光性和热特性，核酸具有旋光性和热特性，DNA和和RNA的最大吸收波长均为的最大吸收波长均为260nm（用于定性定量检测核酸，测定核酸纯度），（用于定性定量检测核酸，测定核酸纯度），减色现象：减色现象：双链双链DNA与单链与单链DNA或或RNA以及单个核苷酸相比，表现为着色以及单个核苷酸相比，表现为着色不足，因此对紫外线吸收的程度是不足，因此对紫外线吸收的程度是dsDNA ssDNAssDNA/RNAnucleotide./RNAnucleotide.在加热的情况下在加热的情况下DNA会发生变会发生变性成单链，温度降低又可复性（回复双链结构）。性
6、成单链，温度降低又可复性（回复双链结构）。d. 超螺旋：非正常的螺旋状态，其中负超螺旋是进行复制和转超螺旋：非正常的螺旋状态，其中负超螺旋是进行复制和转录的基础，约占整个录的基础，约占整个DNA的的5%。化学性质：化学性质：在在pH4-11范围内比较稳定，过酸或过碱都会使其变性。范围内比较稳定，过酸或过碱都会使其变性。碱变性提取细菌质粒碱变性提取细菌质粒DNA即是基于此原理。即是基于此原理。（一）（一）核核酸扩增、杂交酸扩增、杂交变性，复性变性，复性PCR的依据的依据 解链温度解链温度杂交杂交southern，northern，而而western blot虽与上述杂交相似，但所依据虽与上述杂交
7、相似，但所依据原理不同原理不同C0t1/2是指什么?三、核酸扩增杂交基础及测序三、核酸扩增杂交基础及测序核酸核酸分子杂交分子杂交的基本原理的基本原理 具有互补序列两条单链核酸分子在一定条件下具有互补序列两条单链核酸分子在一定条件下 按碱基互补配对原则退火形成双链的过程。按碱基互补配对原则退火形成双链的过程。 杂交的双方是待测核酸和已知核酸序列，已知杂交的双方是待测核酸和已知核酸序列，已知 核酸序列称核酸序列称探针探针。探针带有供反应后检测的合。探针带有供反应后检测的合适标记物，并仅与特异靶分子反应。适标记物，并仅与特异靶分子反应。 杂交有杂交有固液相杂交固液相杂交和和液相液相杂交。杂交。 变性
8、变性变性变性复性复性复性复性 DNA-DNA杂交双链分子杂交双链分子DNA变性与复性变性与复性 1、DNA变性变性 （1）定义：某些理化因素导致两条定义：某些理化因素导致两条DNA链间链间的氢链断裂变为单链的过程，称的氢链断裂变为单链的过程，称DNA变性变性（2）变性的方法：变性的方法： a. 热变性：温度升高到热变性：温度升高到90100时，双链核酸时，双链核酸 分子链间的氢键完全断裂。分子链间的氢键完全断裂。 b. 酸碱变性：酸碱变性：pH值低于值低于3或高于或高于10时，双链核时，双链核 酸分子链酸分子链 间的氢键断裂。间的氢键断裂。 c. 化学试剂变性：如尿素、甲酰胺、甲醛等使化学试剂
9、变性：如尿素、甲酰胺、甲醛等使 双链核酸分子链间的氢键断裂。双链核酸分子链间的氢键断裂。(3) 变性后的理化性质变化：变性后的理化性质变化： 粘度降低粘度降低 密度增加密度增加 紫外吸收值增加紫外吸收值增加(4)DNA变性曲线变性曲线 AT区先解链区先解链 GC区后解链区后解链 阶梯式曲线阶梯式曲线(5) GC含量与含量与Tm值之间的关系值之间的关系 （G+C）%=（Tm-69.3) 2.44 Tm =(G+C)%0.41+69.32、复性复性 （1）定义：变性的单链核酸分子在一定条件下定义：变性的单链核酸分子在一定条件下按碱基互补原则重新结合为双链核酸的过程，称复按碱基互补原则重新结合为双链
10、核酸的过程，称复性或杂交。性或杂交。具有互补序列的两条单链核酸都可互补形成双链：具有互补序列的两条单链核酸都可互补形成双链：DNA/DNA、RNA/DNA、RNA/RNA、寡核苷酸、寡核苷酸/DNA和寡核苷酸和寡核苷酸/RNA。（2）复性过程复性过程A.单链分子间碰撞形成局部双链单链分子间碰撞形成局部双链B.局部双链周围的碱基如不配对时，双链重新解离局部双链周围的碱基如不配对时，双链重新解离C.局部双链周围的碱基如配对，则形成中心序列局部双链周围的碱基如配对，则形成中心序列D.形成完整的双链分子形成完整的双链分子3、核核酸变性后的复性速度取决于核酸分酸变性后的复性速度取决于核酸分子的复杂性：子
11、的复杂性： （1）核酸的复杂性是指存在于反应体系中不同顺序）核酸的复杂性是指存在于反应体系中不同顺序的总长度的总长度 （2）Cot与反应体系中核酸复杂性成正比与反应体系中核酸复杂性成正比 （3）两个）两个DNA样品浓度绝对一致时，变性后的相对样品浓度绝对一致时，变性后的相对杂交率取决于杂交率取决于DNA的相对复杂性的相对复杂性 Southern印迹杂交印迹杂交1、待测核酸样品的制备待测核酸样品的制备 （1）裂解或破碎细胞裂解或破碎细胞 （2）抽取纯化基因组抽取纯化基因组DNA （3）限制酶消化限制酶消化DNA为大小不同的为大小不同的DNA片段片段杂交举例杂交举例2、待测待测DNA样品的电泳分离
12、样品的电泳分离 （1）琼脂糖浓度：分离大片段用低浓度胶琼脂糖浓度：分离大片段用低浓度胶 分离小片段用高浓度胶分离小片段用高浓度胶 （2）凝胶电泳：凝胶具有分子筛效应，大分子凝胶电泳：凝胶具有分子筛效应，大分子 DNA泳动慢泳动慢,小分子小分子DNA泳动快，泳动快， 大小大小 相同的分子处于同一条带相同的分子处于同一条带 （3）分子量标准：经分子量标准：经Hind消化的消化的DNA，杂，杂交所用分子量标准可用核素标记交所用分子量标准可用核素标记 3、凝胶中核酸的变性（碱变凝胶中核酸的变性（碱变性性） 凝胶置于凝胶置于NaOH溶液中使溶液中使DNA变性断裂为较短的变性断裂为较短的 单链单链 DNA
13、,中性缓冲液中和凝胶中的缓冲液中性缓冲液中和凝胶中的缓冲液 4、SouthernSouthern印迹印迹根据毛细管作用的原理，使在电泳凝胶中分离的根据毛细管作用的原理，使在电泳凝胶中分离的根据毛细管作用的原理，使在电泳凝胶中分离的根据毛细管作用的原理，使在电泳凝胶中分离的DNADNA片段转移并结合在适当的滤膜上，然后通过片段转移并结合在适当的滤膜上，然后通过片段转移并结合在适当的滤膜上，然后通过片段转移并结合在适当的滤膜上，然后通过同标记的单链同标记的单链同标记的单链同标记的单链DNADNA或或或或RNARNA探针的杂交作用检测这探针的杂交作用检测这探针的杂交作用检测这探针的杂交作用检测这些被
14、转移的些被转移的些被转移的些被转移的DNADNA片段，这种实验方法叫做片段，这种实验方法叫做片段，这种实验方法叫做片段，这种实验方法叫做DNADNA印印印印迹杂交技术。由于它是由迹杂交技术。由于它是由迹杂交技术。由于它是由迹杂交技术。由于它是由E.SouthernE.Southern于于于于19751975年首年首年首年首先设计出来的，故又叫先设计出来的，故又叫先设计出来的，故又叫先设计出来的，故又叫Southern DNA Southern DNA 印迹转移印迹转移印迹转移印迹转移技术。技术。技术。技术。 （a）（b）（c）（d）（e）基因组基因组DNADNA限制片段限制片段硝酸纤维素滤膜硝
15、酸纤维素滤膜同探针同源杂同探针同源杂交的基因交的基因DNA片段片段X光底片光底片 5、Southern杂交杂交 （1）预杂交：封闭膜上能与预杂交：封闭膜上能与DNA结合的位点结合的位点 预杂交液为不含预杂交液为不含DNA探针的杂交液探针的杂交液 （2）杂交：液相中的杂交：液相中的DNA探针与膜上的待测探针与膜上的待测DNA杂交双链杂交双链DNA探针需加热变性为单链，再杂交探针需加热变性为单链，再杂交 （3）洗膜：去除游离的放射性探针或非特异结洗膜：去除游离的放射性探针或非特异结合的合的DNA 6、杂交结果检测杂交结果检测 （1）放射自显影：适用于放射性核素标放射自显影：适用于放射性核素标记的探
16、针记的探针 （2）比色或化学发光检测：适于非核素比色或化学发光检测：适于非核素标记的探针标记的探针Southern DNA Southern DNA Southern DNA Southern DNA 印迹杂交之印迹杂交之印迹杂交之印迹杂交之X X X X光显像图片光显像图片光显像图片光显像图片 水稻（水稻（水稻（水稻（Oryza sativa LOryza sativa L.) .)的叶绿体的叶绿体的叶绿体的叶绿体DNADNA分别用核酸内切限制酶分别用核酸内切限制酶分别用核酸内切限制酶分别用核酸内切限制酶BglBgl(A-C)(A-C)(A-C)(A-C)、BamHBamHBamHBamH（
17、D-FD-FD-FD-F）、）、）、）、EcoREcoREcoREcoR（G-IG-IG-IG-I）、和）、和）、和）、和HindHindHindHind（J-LJ-LJ-LJ-L）消化，加样在含有）消化，加样在含有）消化，加样在含有）消化，加样在含有EtBrEtBrEtBrEtBr染料的染料的染料的染料的1%1%1%1%的琼脂糖凝胶电泳中作电泳分离，然后同的琼脂糖凝胶电泳中作电泳分离，然后同的琼脂糖凝胶电泳中作电泳分离，然后同的琼脂糖凝胶电泳中作电泳分离，然后同32323232P P P P标记的玉米标记的玉米标记的玉米标记的玉米psbApsbApsbApsbA探针作探针作探针作探针作Sou
18、thernSouthernSouthernSouthern杂交。杂交。杂交。杂交。X X X X光底片中显现的阳性条带光底片中显现的阳性条带光底片中显现的阳性条带光底片中显现的阳性条带 ，表明含有水稻，表明含有水稻，表明含有水稻，表明含有水稻的的的的psbApsbApsbApsbA基因序列。基因序列。基因序列。基因序列。Southern杂交分析示例 A.DNA体外重组实验B.抗生素筛选转化子细胞C.培养突变株细胞D.Southern杂交实验结果显示，外源目的基因已经转入突变株细胞中1973年，由美国斯坦福大学教授Cohn和美国加州大学教授Boyer带领各自的研究组几乎同时分别完成了DNA体外重
19、组，一举打开了基因工程学大门。Northern印迹杂交印迹杂交19791979年，年，年，年，J.C.AlwineJ.C.Alwine等人发展而来，与萨瑟恩等人发展而来，与萨瑟恩等人发展而来，与萨瑟恩等人发展而来，与萨瑟恩DNADNA印迹杂交印迹杂交印迹杂交印迹杂交技术十分类似，所以叫做诺赛恩技术十分类似，所以叫做诺赛恩技术十分类似，所以叫做诺赛恩技术十分类似，所以叫做诺赛恩RNARNA印迹技术（印迹技术（印迹技术（印迹技术（Northern Northern blottingblotting）。）。）。）。 1、基本原理和基本过程与、基本原理和基本过程与Southern blot基本相同基本
20、相同 2、鉴别、鉴别RNA 3、探针可用、探针可用DNA或或RNA片段片段 4、待测样品为总、待测样品为总RNA或或mRNANorthern印迹与印迹与Southern 印迹的不同点印迹的不同点 1、变性：、变性：RNA电泳前加热变性、电泳时加变性剂保电泳前加热变性、电泳时加变性剂保 持持RNA处于变性状态，处于变性状态，DNA电泳前和电泳电泳前和电泳 中不变性中不变性 2、转膜：、转膜：RNA转膜前不需变性和中和处理转膜前不需变性和中和处理,Southern 印迹时，印迹时，DNA转膜前需进行碱变性及中和处理转膜前需进行碱变性及中和处理 3、靶核酸为、靶核酸为RNADNA芯片（基因芯片）DN
21、A芯片（DNA chip）技术，实际上就是利用核酸杂交的原理，将不同序列的DNA片段（探针）印记到小玻片或相应介质上，然后将待检测DNA（带有标记）液与之孵育，经洗脱后，检测最终能够发生结合的DNA，从而判定待检测DNA序列的技术。（二）（二） 核酸测序核酸测序 Sanger的酶学测序原理的酶学测序原理 Gilbert的化学测序法的化学测序法 自自动测序仪的发明动测序仪的发明DNADNA序列测定常用方法有如下序列测定常用方法有如下序列测定常用方法有如下序列测定常用方法有如下3 3种：种：种：种：1、末端、末端终止法止法2、化学裂解法、化学裂解法3、DNA测序自序自动化化使用特异性引物与使用特异
22、性引物与单链模板模板DNA退火，在退火，在DNA聚合聚合酶酶作用下作用下进行延伸反行延伸反应，用，用ddNTP终止，用止，用PAGE区分区分长度度仅相相差差1个核苷酸的个核苷酸的ssDNA，从而完成，从而完成测序的方法。序的方法。用化学用化学试剂在在A、G、C、T处特定的裂解特定的裂解DNA片段，片段，产生一簇生一簇各种各种长度的短度的短链，经过PAGE放射自放射自显影可影可直直读DNA顺序。序。类似末端似末端终止法，所不止法，所不同的是用同的是用荧光染料光染料标记，计算机自算机自动读出。出。优点点简便、迅速、便、迅速、应用广用广泛。泛。不需不需酶酶促反促反应，可以，可以对寡核苷酸寡核苷酸测序
23、。序。1、高、高负荷，荷，1块胶可胶可测16个个样品；品；2、机、机读不不需放射自需放射自显影；影；3、安全、安全不用同位素；不用同位素；4、简单迅迅速速8-10h。测序过程（末端终止法）：1.DNA聚合酶复制DNA链，还包括DNA模板和单核苷酸A,C,T,G，还需要修饰过的所谓的“终止核苷酸”，每一种终止核苷酸的碱基被标记上不同的颜色的荧光染料；2.在DNA复制过程中，由于加入了终止核苷酸，因此会产生不同长度的片段，而这些片段具有共同的起点，所以只有最后一个核苷酸有差异；3.通过电泳将DNA片段按大小分离开，其结果将显示为由不同颜色组成的梯度；4.由计算机解读每个色带，最后得出片段的碱基序列
24、。Leroy HoodMike HunkapillerReplicating a DNA strand in the presence of dideoxy-T An Automated sequencing gel: A Scan of one gel lane: We dont even have to read the sequence from the gel - the computer does that for us! 人神经生长因子 cDNA序列测序的基本过程测序的基本过程测序的基本过程测序的基本过程 不管是上述哪一种方法，测序基本过程如下：不管是上述哪一种方法，测序基本过程如
25、下： 1 1、制备待测、制备待测DNADNA序列模板；序列模板； 2 2、酶促或化学反应将其转变、酶促或化学反应将其转变“等差数列等差数列”（n=1n=1）；）； 3 3、PAGEPAGE； 4 4、读序。、读序。 DNADNA序列测定的应用序列测定的应用序列测定的应用序列测定的应用 分析基因组核苷酸排列序列分析基因组核苷酸排列序列 分析基因序列分析基因序列 基因定点诱变的基础基因定点诱变的基础 基因工程载体构建中基因工程载体构建中DNA序列定位和排序的基础序列定位和排序的基础 确定确定DNA序列中蛋白质的编码区序列中蛋白质的编码区Maxam-Gilbert化学裂解法化学裂解法 化学裂解化学裂
26、解化学裂解化学裂解（直读，（直读，Sanger双脱氧末端法也是直读法）法双脱氧末端法也是直读法）法是是Maxam和和Gilbert等人等人1977年创建的，用来测定年创建的，用来测定DNA序列。序列。化学法是用化学试剂在化学法是用化学试剂在A、G、C、T处特定地裂解处特定地裂解DNA片段，片段，产生一簇各种长度的短链（等差数列产生一簇各种长度的短链（等差数列 n=1），经过），经过PAGE和放和放射自显影后，可以直接读出射自显影后，可以直接读出DNA的顺序。的顺序。 某些试剂能修饰或破坏某些试剂能修饰或破坏DNA链上特定核苷酸的碱基进而使链上特定核苷酸的碱基进而使N-糖苷键断糖苷键断裂，暴露出
27、的糖环以裂，暴露出的糖环以-消除反应，在消除反应，在3和和5位上断裂磷酸二酯键。使戊糖脱位上断裂磷酸二酯键。使戊糖脱落，用于嘌呤环的试剂是硫酸二甲酯，而联氨可用于肼解嘧啶环。落，用于嘌呤环的试剂是硫酸二甲酯，而联氨可用于肼解嘧啶环。化学裂解法测序的原理化学裂解法测序的原理1 1、用放射性核素标记待测、用放射性核素标记待测DNADNA一侧末端一侧末端2 2、将标记、将标记DNADNA分为分为G G、A+GA+G、C+TC+T、C 4C 4个反应体系个反应体系3 3、用不同的化学试剂处理不同反应体系，随机断裂、用不同的化学试剂处理不同反应体系，随机断裂DNADNA片段某种碱基中的片段某种碱基中的任
28、何一个，产生一组一端为放射线标记的末端，另一端为不同大小的任何一个，产生一组一端为放射线标记的末端，另一端为不同大小的DNADNA片段的混合物片段的混合物4 4、电泳分离，放射自显影得到互相错落的梯形图谱，即可读出、电泳分离，放射自显影得到互相错落的梯形图谱，即可读出DNADNA序列序列表表表表 特异断裂特异断裂特异断裂特异断裂4 4种脱氧核苷酸的方法种脱氧核苷酸的方法种脱氧核苷酸的方法种脱氧核苷酸的方法作用的碱基作用的碱基试剂与反与反应碱基碱基释放放DNA断裂断裂强强G/弱弱A稀稀释250倍硫酸二甲倍硫酸二甲酯，在，在50mM卡可酸（卡可酸（PH8.0）10MMgCl2、0.1MEDTA20
29、060分分钟，DNAG的的N7和和A的的N3甲基化甲基化甲基化甲基化嘌嘌呤不呤不稳定，定，在中型在中型PH加加热被破被破坏坏在在0.1M碱中，碱中，9015分分钟，戊糖脱落，戊糖脱落，DNA链断裂，断裂，G断裂比断裂比A快快5倍倍A同上同上0.2NHCl、0、60分分钟，碱基被破坏，碱基被破坏同上，同上，A断裂比断裂比G快快C+T15-18M联苯胺、苯胺、2050分分钟，嘧啶环被破坏被破坏释放放0.5M哌啶处理，断裂理，断裂DNA键，C与与T有同有同样速率速率C2MNaCl，联氨氨处理方法同上，理方法同上，100分分钟，此，此时，T的的破坏被抑制，只有破坏被抑制，只有C被破坏被破坏释放放同上，
30、只在同上，只在C处断裂断裂DNA链在在在在4 4种反应体系中，化学试剂特异地断裂种反应体系中，化学试剂特异地断裂种反应体系中，化学试剂特异地断裂种反应体系中，化学试剂特异地断裂DNADNA的机制是：的机制是：的机制是：的机制是： G反应反应-硫酸二甲酯（硫酸二甲酯（DMS）使）使GN7甲基化，其后断开了甲基化，其后断开了C8-C9间的间的化学键，哌啶置换了被修饰鸟嘌呤与核糖的结合。化学键，哌啶置换了被修饰鸟嘌呤与核糖的结合。 G+A反应反应-（哌啶）甲酸使嘌呤环上氮原子质子化，削弱了嘌呤脱氧（哌啶）甲酸使嘌呤环上氮原子质子化，削弱了嘌呤脱氧核糖核苷酸和腺嘌呤脱氧核糖核苷酸的糖苷键，然后哌啶置换
31、了嘌呤。核糖核苷酸和腺嘌呤脱氧核糖核苷酸的糖苷键，然后哌啶置换了嘌呤。 T+C反应反应-肼断开了嘧啶环，产生碱基片段被哌啶置换。肼断开了嘧啶环，产生碱基片段被哌啶置换。 C反应反应-在在NaCl存在时，只有存在时，只有C才能与肼发生反应，随后，被修饰的才能与肼发生反应，随后，被修饰的胞嘧啶被哌啶置换。胞嘧啶被哌啶置换。碱基特异性修饰及裂解碱基特异性修饰及裂解碱基特异性修饰及裂解碱基特异性修饰及裂解反应体系反应体系碱基修饰试剂碱基修饰试剂碱基修饰反应碱基修饰反应主链断裂试剂主链断裂试剂断裂点断裂点G硫酸二甲酯硫酸二甲酯鸟嘌呤甲基化鸟嘌呤甲基化六氢吡啶六氢吡啶GG+A甲酸甲酸脱嘌呤作用脱嘌呤作用六
32、氢吡啶六氢吡啶G和和AC+T肼肼嘧啶开环嘧啶开环六氢吡啶六氢吡啶C和和TC肼（加盐）肼（加盐）胞嘧啶开环胞嘧啶开环六氢吡啶六氢吡啶C化学法的优点化学法的优点 化学法没有末端终止法应用广泛，但有一个明显的优化学法没有末端终止法应用广泛，但有一个明显的优点，即所测序列来自原点，即所测序列来自原DNA分子而不是酶促合成反应所分子而不是酶促合成反应所产生的拷贝，因此利用化学法可以对合成的寡核苷酸进行产生的拷贝，因此利用化学法可以对合成的寡核苷酸进行测序，可以分析诸如甲基化等测序，可以分析诸如甲基化等DNA修饰的情况，不能通修饰的情况，不能通过化学保护及修饰干扰实验来研究过化学保护及修饰干扰实验来研究D
33、NA二级结构及蛋白二级结构及蛋白质与质与DNA的相互作用。的相互作用。DNADNA自动测序与手工测序的不同点自动测序与手工测序的不同点: :1 1、标记物不同：手工测序采用放射性核素标记，而自动测序采用、标记物不同：手工测序采用放射性核素标记，而自动测序采用4 4种荧种荧光染料分别标记光染料分别标记ddNTPddNTP或标记引物或标记引物2 2、加样方式不同：手工测序，一个样品的、加样方式不同：手工测序，一个样品的4 4个测序反应物分别在不同泳个测序反应物分别在不同泳道进行，而自动测序可在一个泳道内电泳道进行，而自动测序可在一个泳道内电泳3 3、检测手段不同：手工测序采用放射自显影，从、检测手段不同：手工测序采用放射自显影，从4 4种寡聚核苷酸的梯子种寡聚核苷酸的梯子形图谱中读出形图谱中读出DNADNA序列，而自动测序则采用激光扫描器同步扫描，计算序列，而自动测序则采用激光扫描器同步扫描，计算机进行阅读和编辑机进行阅读和编辑
