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1、总论总论 第六章 药物的含量测定药物分析学药物分析学目 录 第一节 概述1第二节 容量分析2第三节 分光光度法3第四节 色谱法4 第五节 含量测定方法验证5本章学习要求1.熟悉药物及其制剂的含量限度表示方法2.掌握容量分析滴定反应原理与含量计算方法；v熟悉常用滴定剂、相应的基准物质和指示剂3.掌握HPLC法和GC法的系统适用性试验、含量计算；v熟悉常用HPLC、GC色谱柱、检测器、条件的选择4.掌握UV法测定药物含量的原理与计算方法；v熟悉紫外-可见分光光度仪的检定方法；v了解荧光分光光度法和原子吸收分光光度法测定药物含量的原理与应用5.熟悉药物含量测定分析方法的验证实验 第一节 概述v药物的
2、含量是药物质量的主要指标v含量测定（assay）理化方法测定 v效价测定（assay of potency）生物学方法或酶学方法测定 v化学原料药的含量测定：强调测定结果的精密度 v制剂的含量测定：偏重方法的选择性药典对药物的含量限度的表示方法v原料药：以%表示（一般以干燥品或无水物计）v凡未规定上限的，药典凡例中规定，其含量上限不得超过101.0%按原料药本身形式计算其含量由于药物组成不定，需以另一种稳定形式计算含量举例v地塞米松磷酸钠 按干燥品计算，含C22H28FNaO8P应为96.0%-102.0%。v硫酸庆大霉素 按无水物计算，每1mg的效价不得少于590庆大霉素单位。v阿司匹林含C
3、9H6O4不得少于99.5% v氢氧化铝含氢氧化铝按Al2O3计算，不得少于48.0%。制剂的含量限度表示方法：按标示量计算直接用%含量规定范围以重量规定含量范围标示量=规格量=处方量例：维生素B1注射液含维生素B1 应为标示量的95.0%105.0%例：复方碘溶液 含 I 应为4.50% 5.50% 含 KI 应为9.5% 10.5%例：复方磺胺甲噁唑片磺胺甲噁唑 0.3600.440g /片 甲氧苄氨嘧啶72.088.0mg /片常用含量测定方法(2005年版ChP） 仪器法 容量法 其他法 HPLC 29.4%非水法 15.3% 生物学 8.1%VIS-UV 21%酸碱法 7.5%重量法
4、 0.8%旋光 0.5%银量法 3.4%原子吸收 0.3%碘量法 3.3%GC 0.3%EDTA法 2.9%荧光 0.1%亚硝酸钠法 2.1%其他容量法 5%一、含量计算1.原料药及以%表示的制剂v 直接滴定法 样品%=VFT/ W100%滴定度T与1ml规定（理论）浓度的标准溶液所相当的被测物的mg数.T=（M被测物 /a ） mol/L标准液（理论）a为与1摩尔被测物相当的标准液摩尔数。第二节 容量分析法浓度校正因子 F=N实实/N理理剩余滴定法样品%=（V空白空白 V样样 ) FT/ W100%方法：样品 + 标准液1（过量定量）剩余的标准液1 + 标准液2回滴定 V2样空白 + 标准液
5、1（同样量）剩余的标准液1 + 标准液2回滴定 V2空白v片剂：VFT/ W 100%v针剂： VFT/ W 100%3.以重量/片计的计算公式 VFT/ W平均片重=重量/片2.相当于标示量%的计算公式平均片重标示量标示量1片粉重注射液体积例1 异烟肼含量测定v称取异烟肼约0.25g，置100mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取25mL，加水50 mL与盐酸20 mL，加甲基橙指示液1滴，用溴酸钾滴定液(0.01667mol/L)缓缓滴定至粉红色消失。v已知：异烟肼取样0.2545g ， 消耗溴酸钾滴定液(F=1.005) 18.30mL，每1mL溴酸钾滴定液（0.01667
6、mol/L）相当于3.429mg异烟肼。样品%=V FT/ W100% 18.30 1.0053.429 0.2545/100251000 100% =99.1%=v取本品约0.1g, 精密称定（0.1022g)，置250ml碘量瓶中，加水10mL，振摇使溶解，精密加溴滴定液（0.05mol/L）25 mL，再加盐酸5 mL，立即密塞并振摇1分钟，暗处静置15分钟后，微开瓶塞，加碘化钾试液10 mL，立即密塞，摇匀，用硫代硫酸钠滴定液（0.1mol/L）滴定，至近终点时加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校正。v已知：样品消耗硫代硫酸钠滴定液（0.1mol/L）15.73
7、mL，空白试验消耗23.21 mL，每1mL溴滴定液（0.05mol/L）相当于13.01mg的司可巴比妥钠，硫代硫酸钠滴定液F=1.038。例2 司可巴比妥钠的含量测定：样品%=（V空白空白 V样样 ) FT/ W100% (23.21-15.73) 1.03813.01 0.10221000 =98.8%100%=思考题1.溴滴定液是如何配制的？在本方法中需要标定吗？在滴定反应中，加盐酸后溴滴定液起了怎样的化学反应？2.空白试验在本方法中起什么作用？3.为什么要待近终点时加入淀粉指示液？4.滴定度T=13.01mg的由来？v取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于葡萄糖酸钙1g
8、），置100ml量瓶中加水溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，加水75ml, 加氢氧化钠试液15ml，用EDTA滴定液（0.05mol/L）滴定。每1mLEDTA滴定液（0.05mol/L）相当于22.42mg的C12H22CaO14H2O。v已知：20片重12.0640g，取片粉1.2058g，消耗EDTA滴定液(0.0501 mol/L)11.22mL，规格0.5g/片例3 葡萄糖酸钙片含量测定规定取样量规定取样量/ /规格规格= =应称取片粉应称取片粉/ /平均片重平均片重可称取范围：可称取范围：应称取量应称取量 10%10%11.2222.42(0.0501/0.05
9、) 12.064/20 1.205825/100 1000 0.5 100%=100.9%13二、酸碱滴定法v滴定类型多为强酸强碱滴定弱碱弱酸药物，以盐酸、硫酸、氢氧化钠为滴定剂v溶剂根据药物的酸碱性、溶解度、稳定性等性质，选用水、中性乙醇等为溶剂 v应用以水为溶剂：枸橼酸以中性乙醇为溶剂：芳酸类、磺酰胺类药物v指示剂、滴定剂酚酞，氢氧化钠滴定液三、非水溶液滴定法v本法主要用于测定有机碱及其氢卤酸盐、磷酸盐、硫酸盐或有机酸盐，以及有机酸碱金属盐类药物的含量，也用于测定某些有机弱酸的含量v药典收载了两种方法：第一法为测定有机弱碱及其盐类第二法为测定有机弱酸及其盐类 常用非水溶剂种类 溶剂种类溶剂
10、种类最常用溶剂最常用溶剂特性特性v酸性溶剂酸性溶剂v冰醋酸冰醋酸，醋酐，醋酐，甲酸甲酸v可增强有机弱碱的相对可增强有机弱碱的相对碱度碱度v碱性溶剂碱性溶剂v乙二胺、乙醇乙二胺、乙醇胺、胺、二甲基甲酰二甲基甲酰胺胺v可增强有机弱酸的相对可增强有机弱酸的相对酸度酸度v两性溶剂两性溶剂v甲醇、乙醇甲醇、乙醇v兼有酸碱两性，用作不兼有酸碱两性，用作不太弱的酸碱物质的介质太弱的酸碱物质的介质v惰性溶剂惰性溶剂v苯，三氯甲烷，苯，三氯甲烷，二氧六环二氧六环v无酸碱性，常与上述溶无酸碱性，常与上述溶剂混合使用，增加滴定突剂混合使用，增加滴定突跃和试样的溶解性跃和试样的溶解性第一法（非水碱量法）v精密称取供试
11、品适量约消耗高氯酸滴定液（0.1mol/L）8mL，加冰醋酸1030mL使溶解，加各药品项下规定的指示液12滴，用高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定。终点颜色应以电位滴定时的突跃点为准，并将滴定的结果用空白试验校正 v影响因素：温度、水分、溶剂的选择、指示终点方法以及被测物酸根等温度影响v滴定与标定时的温度差别：超过10，则应重新标定若未超过10，根据公式校正冰醋酸的膨胀系数t1为滴定时温度t0为标定时温度N0为t0时高氯酸滴定液的浓度N1为t1时高氯酸滴定液的浓度水分影响v反应体系中不应有水，因为水既是质子的受体，又是质子的供体，可与弱酸弱碱发生竞争，影响终点判断 溶剂选择v对于不同碱性的
12、杂环类药物只有选择合适的溶剂和指示终点方法才能获得满意的滴定结果 杂环类药物 Kb10-8 10-1010-1010-1210-12合适的溶剂 冰醋酸冰醋酸-醋酐醋酐冰醋酸中加入不同量甲酸也能增大突跃范围 常用指示剂（结晶紫）v结晶紫为多元弱碱，在不同pH中显示不同的颜色变化，滴定不同强度的碱性药物时终点颜色不同v滴定碱性较强的药物时，终点以蓝色或蓝绿色为主v滴定碱性较弱的药物时，一般以绿色为终点v滴定更弱的碱性药物时，终点颜色为黄色v在确定指示剂的终点颜色变化时应以电位法为对照 黄 黄绿 绿 蓝绿蓝 蓝紫 紫pH 低-高碱式色酸式色各种酸根的影响 l冰醋酸溶液中各酸根的酸性强弱如下： 高氯酸
13、 氢溴酸硫酸盐酸 硫酸氢根硝酸 磷酸、有机酸采取措施：HX加 HgAc2 HgX2 H2SO4生物碱的硫酸盐通常为2分子生物碱与1分 子硫酸成盐,可直接滴定至HSO-4 （注意摩尔比）HNO3 可氧化指示剂，改用电位法磷酸、有机酸无需处理，直接滴定应用v胺类药物：盐酸利多卡因，重酒石酸去甲肾上腺素，盐酸克仑特罗、硫酸沙丁胺醇等v含氮杂环类药物：氢溴酸东莨菪碱、硫酸奎宁、硝酸毛果芸香碱、马来酸氯苯那敏等；v维生素类药物：维生素B1第二法 （酸量法）v滴定液甲醇钠、甲醇锂、氢氧化四丁基胺v溶剂二甲基甲酰胺 v注意滴定过程中应防止溶剂和碱滴定液吸收大气中的二氧化碳和水蒸气，以及滴定液中溶剂的挥发v应
14、用异维A酸、苄氟噻嗪、环吡酮等 银量法银量法 碘量法和溴量法碘量法和溴量法 亚硝酸钠法亚硝酸钠法 络合滴定法络合滴定法直接滴定、剩余滴定、置换滴定直接滴定、剩余滴定、置换滴定费休氏水分测定法（费休氏水分测定法（Karl Fischer Titration） v本法为非水氧化还原滴定反应，采用的滴定液称费休氏试液，由碘、二氧化硫、吡啶和无水甲醇组成。利用碘氧化二氧化硫时需要一定的水分参加反应v反应可逆，用吡啶吸收生成的HI和SO3，形成氢碘酸吡啶和硫酸酐吡啶。但硫酸酐吡啶不稳定，无水甲醇可使其转变成稳定的甲基硫酸氢吡啶 方法与计 算v测定方法：精密称取供试品适量（约消耗费休氏试液15ml），除另
15、有规定外，溶剂为无水甲醇，用水分测定仪直接测定。或将供试品置干燥的具塞玻瓶中，加溶剂25ml，在不断振摇（或搅拌）下用费休氏试液滴定至溶液由浅黄色变为红棕色，或用永停滴定法指示终点，另作空白试验，按下式计算：供试品中水分(%)=（VaVb）FW 100%本法专属性强，准确度高，适用于受热易被破坏的药物的水分测定，如抗生素类药物的水分测定26注意事项：（1）每1ml新配的费休氏试液约相当于5mg的水，由于试液不稳定，逐渐变质，因此费休氏试液需在临用前1h内标定。一般F值应在4.0mg/ml以上，当F值降低到3.0mg/ml以下时，滴定终点不敏锐，不宜再用。（2）本法测定结果的精确度取决于多种因素
16、，如试剂成分的相对浓度、溶解样品的溶剂性质、操作技术、空气湿度等，尤其是测定系统中的水分。因此必须严格规范操作，所用仪器必须干燥，并能避免空气中水分的侵入，操作宜在干燥处进行，并注意避光，整个操作应迅速，不应在阴雨天或空气湿度太大时进行测定。第三节 光谱分析1紫外分光光度法（一）仪器校正与检定 1.波长校正：用汞灯中的较强谱线或仪器中氚灯的486.02nm、656.10nm谱线进行校正2.吸收度的准确度检定：测定重铬酸钾的硫酸溶液在规定波长处的吸收系数进行检定 3.杂散光的检查：用碘化钠，亚硝酸钠溶液测定规定波长处的透光率（二）对溶剂的要求 以空气为空白（空白光路中不置任何物质）测定溶剂的吸光
17、度（使用波长附近应符合规定）（三）测定法1.测定波长核对 （规定波长 2 nm内），并以吸光度最大波长为测定波长2.吸收度读数范围（0.30.7） 3.同批溶剂为空白试验（校正比色皿和空白溶剂的吸收）4.测定方法吸收系数法对照品比较法计算分光光度法比色法1.百分吸收系数法A= E1%cmCLC（%） = A / E1%cm 样品% =F = 稀释倍数和浓度换算因子，W = 取样量A FE1%cm WE值的大小反映了药物对某一波长光的吸收能力，也反映了测定反应的灵敏度。采用E法测定含量时，一般取三位有效数字表示，E值小于100的一般不宜采用0.390 10100393 0.0105= 含量%10
18、0例1 己酸孕酮称取己酸孕酮0.0105g, 加无水乙醇溶解后,置10ml容量瓶中,稀释至刻度,摇匀。吸取1.00ml, 置100ml容量瓶中, 加无水乙醇稀释至刻度, 置1cm吸收池内进行测定, 根据下列已知条件, 求出按干燥品计算的己酸孕酮百分含量。A=0.390, E1%1cm=393100%吸收系数（E1%cm）测定方法 v精密称取被测物对照品适量（双份），加溶剂制成一定浓度的溶液，使吸光度在0.60.8之间v精密吸取适量，用同批溶剂将溶液稀释一倍v在规定波长分别测定高低浓度的溶液，v计算吸收系数（E）值，v要求：在五种不同型号的紫外仪上测定同一台仪器测定二份间结果的偏差应不超过1.0
19、%各台仪器测得的E值，RSD应不超过1.5%取平均值为该药物的吸收系数（注明测定时温度）2.对照品比较法A样/A对 = C样/C对样品%= A样/A对 C对F/ W100%F=稀释倍数，W=取样量双波长法，差示法，荧光法，均可应用此公式，以A，荧光强度代替吸收度A例2 盐酸吗啡片与注射液v本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于盐酸吗啡10mg)置100ml量瓶中，加水溶解至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液15ml，置50ml量瓶中，加0.2mol/L氢氧化钠25ml，用水稀释至刻度，摇匀，UV法测定。另取吗啡对照品适量，精密称定，用0.2mol/L氢氧化钠稀释至每ml中约含20ug
20、的溶液，同法测定。计算，结果乘以1.317，即得C17H19NO3HCl3H2O的含量.(规格5mg)A样C对50 100 1.317 片重 A对15 取样1000 5100%1.317=M3H2O/M=375.85/285.34方法的特点与影响因素v特点：简便、快速、灵敏（10-410-7 g/ml）、有一定专属性和准确度（相对误差2%左右），应用范围广（制剂含量、溶出度、含量均匀度测定），仪器价廉易普及v影响因素：溶剂、溶液pH值 普鲁卡因 去氧肾上腺素 （三）计算分光光度法v双波长分光光度法（复方磺胺类药物的测定）v三点校正法（维生素A的）v解线性方程组法等v使用时应注意，当在吸收曲线的
21、陡然上升或下降的部位测定吸光度时，波长的微小变化可对测定结果造成显著影响 （四）比色法v在药物分析中应用的比色法：v酸性染料比色法（含氮碱性药物如：硫酸阿托品片、氢溴酸东莨菪碱片的测定）v四氮唑比色法、异烟肼比色法和Kober反应法（甾体激素类药物）v蛋白质的双缩脲反应（硫酸软骨素的测定）v总黄酮、总生物碱的测定（中药制剂）二、荧光分光光度法（Fluorescence Spectrophotometry） v荧光法测定的是物质分子的发射光谱。在一定条件下，物质的浓度与其荧光（也称发射光）强度成正比关系，可用于定量分析 v测定方法 对照品对照法 Cx= RxRxbRrRrbCr 荧光分析中，药物
22、的浓度与相应的荧光读数之间的荧光分析中，药物的浓度与相应的荧光读数之间的线性范围较窄，故线性范围较窄，故(Rx(RxRxb)/(RrRxb)/(RrRrb)Rrb)应在应在0.50.52 2，如超出此范围，应调节溶液浓度后再测定，如超出此范围，应调节溶液浓度后再测定 荧光分析法的特点 v灵敏（检测限可达10-1010-12g/ml）v专属（ex和em）v适于低浓度溶液分析。浓度过大，荧光会发生“自熄灭”现象，导致荧光强度与溶液浓度不成正比 v干扰因素多，如溶剂种类与纯度、溶液pH、温度，共存物质、溶液中的悬浮物、玻璃仪器的洁净度等，因此必须做空白试验v常用基准溶液校正仪器，如：硫酸奎宁的稀硫酸
23、溶液（蓝色荧光）荧光素钠水溶液（黄绿色荧光）罗丹明B水溶液（红色荧光） 三、原子吸收分光光度法（Atomic Absorption Spectrophotometry，AAS） v原理由待测元素作为阴极的空心阴极灯发出的特征谱线，通过供试品经原子化产生的原子蒸气时，被蒸气中待测元素的基态原子所吸收，测定该特征谱线辐射光强度减弱的程度，求出供试品中待测元素的含量v遵循一般分光光度法的吸收定律。用于呈原子状态的金属元素和部分非金属元素的测定v含量测定方法采用标准曲线法和标准加入法标准曲线法v制备含待测元素的对照品溶液至少3份，浓度依次递增，并分别加入各品种项下制备供试品溶液的相应试剂，同时以相应试
24、剂制备空白对照液v依次测定空白对照液和各浓度对照品溶液的吸光度，记录读数（3次），绘制标准曲线v制备供试品溶液，测定吸光度，取3次读数的平均值，从标准曲线上查得相应的浓度，计算元素的含量 标准加入法v取同体积按规定制备的供试品溶液4份，分别置4个同体积的量瓶中v除1号量瓶外，其他量瓶分别精密加入不同浓度的待测元素对照品溶液,分别用去离子水稀释至刻度v制成从零开始递增的一系列溶液供试液取用量中待测元素的含量AAS法的局限性v主要是工作曲线的线性范围较窄，一般为1个数量级；每测一种元素需要更换1个灯，对于多种元素同时测定时非常不便 42 第四节 色谱分析一、HPLC法v根据固定相与流动相的极性大小
25、，分为：NP-HPLC以吸附机理为主RP-HPLC以分配机理为主vRP-HPLC法适合于中等极性或非极性的弱酸、弱碱和中性化合物的分离分析v绝大部分药物均可用RP-HPLC法进行分析 色谱柱与流动相1.RP-HPLC色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶（ODS或C18、C8柱、氨基柱、氰基柱等流动相：甲醇-水（或缓冲盐）、乙腈-水（或缓冲盐）、四氢呋喃-水（或缓冲盐）（过滤脱气）l洗脱力强弱依次为四氢呋喃乙腈甲醇水 v化学键合固定相适用pH28的流动相；C18 链在水相环境中不易保持伸展状态，故流动相中有机溶剂的比例应不低于5%，否则C18链的随机卷曲将导致组分保留值的变化，造成色谱系统不稳定 用过缓
26、冲盐或酸碱流动相后，色谱用过缓冲盐或酸碱流动相后，色谱柱必须用低浓度甲醇液冲洗，以除柱必须用低浓度甲醇液冲洗，以除去酸碱盐，然后再用甲醇冲洗去酸碱盐，然后再用甲醇冲洗色谱条件选择v调节流动相中有机溶剂比例可调整被测物的保留时间，近似规则：v流动相中有机溶剂降低10%，溶质的容量因子约增加3倍v40%甲醇的强度33%乙腈23%四氢呋喃v也可用三种、四种混合溶剂作为流动相 例如 2.NP-HPLCvNP-HPLC硅胶柱v流动相溶剂有：正己烷-异丙醇；正己烷-乙醇；正己烷-二氯甲烷等洗脱力强弱依次为乙醇异丙醇二氯甲烷正己烷v正反相色谱相互转换时，须用过渡溶剂依次冲洗v如由反相正相时，依次用甲醇异丙醇
27、正己烷冲洗v而由正相反相时，则以反方向进行冲洗 检测器v选择性检测器紫外、二极管阵列（DAD）、荧光、电化学响应值与待测液浓度有关，还与化合物结构有关v通用型检测器示差折光、蒸发光散射检测器对所有的化合物均有响应v更专属、更灵敏的检测器质谱v不同检测器对流动相的要求不同，如紫外检测器应考虑有机溶剂的截止使用波长蒸发光散射检测器和质谱检测器不允许使用含不挥发盐组分的流动相v柱效v分离度v拖尾因子v重复性 取对照溶液，连续进样5次，测得峰面积相对标准差RSD应小于2.0%(T=0.951.05)系统适用性试验系统的精密度：每次开机后，首先要做的日常工作，不能作为分析方法学研究中的精密度试验 色谱参
28、数测量为满足系统适用性试验要求，可以改变一些条件，如色谱柱内径、长度、牌号、载体粒度、流动相流速、组成比例、柱温等，但不能改变固定相种类， 流动相组成和检测器类型测定方法与应用v定量方法内标法和外标法vHPLC法是药物制剂、多组分样品分析的首选方法，是各国药典收载的方法中应用最广的方法v在原料药的含量测定中，HPLC法主要用于多组分抗生素或生化药品，或因所含杂质的干扰测定，而常规方法又难以分离或分离手段繁杂的化学品种。如：庆大霉素的组分测定，-内酰胺类、大环内酯类、四环素类等抗生素的含量测定甾体激素类药物的含量测定 例 醋酸氢化可的松的含量测定v取对照品适量，精密称定，加甲醇定量稀释成每1mL
29、中约含0.35mg的溶液。精密量取该溶液和内标溶液（0.30mg/mL炔诺酮甲醇溶液）各5mL，置25mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，取10L注入液相色谱仪。另取本品适量，同法测定，按内标法计算含量。v已知：对照品取样36.2mg，样品取样35.5mg，测得对照液中醋酸氢化可的松和内标的峰面积分别为5467824和6125843，样品液中两者的峰面积分别为5221345和6122845，求本品含量？ 5221345/61228455467824/612584336.2mg35.5mg 100%=97.4%二、GC法 v色谱柱分为填充柱和毛细管柱 柱极性固定相非极性100%二甲基聚硅氧烷弱极
30、性5%-苯基-95%甲基聚硅氧烷5%-二苯基-95%二甲基聚硅氧烷中极性35%二苯基-65%甲基聚硅氧烷50%二苯基-50%二甲基聚硅氧烷6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷14%氰丙基苯基-86%二甲基聚硅氧烷极性PEG-20MCarbowax 20M载气v有氮气、氦气和氢气v由高纯度气体发生器或高压钢瓶提供，经过适当减压、除湿和纯化后进入进样器和色谱柱v根据供试品性质和检测器种类选择载气，最常用的载气为氮气v载气流速：填充柱一般流速为3060ml/min毛细管柱一般流速为13ml/min检测器 检测器种类FID检测器氮磷检测器火焰光度检测器电子捕获检测器质谱检测器热导检测器特点对碳氢化合物
31、有良好响应，适合大多数药物对含氮、磷元素的化合物有很高的灵敏度对含磷、硫元素的化合物灵敏度高适合于含卤素的化合物给出某个成分的结构信息，用于结构确证可用于水分等测定进样方式与进样量 1.溶液直接进样v手动进样时应注意操作的一致性，以达到良好的精密度要求v填充柱进样量不超过数微升v毛细管柱进样不超过1微升，分流进样2.顶空进样体积一般为1毫升 手动自动系统适用性试验与测定方法 v系统适用性试验同HPLC项下的规定v为达到系统适用性试验要求，可改变色谱柱内径、长度、载体牌号、粒度、固定液涂布浓度、载气流速、柱温、进样量、检测器的灵敏度等。但不得改变检测器种类、固定液品种及特殊指定的色谱柱材料v一般色谱图约于30分钟内记录完毕v内标法、外标法和标准溶液加入法v应用例如：维生素E及其制剂的含量测定 第五节 药物含量测定方法验证 1.专属性（空白、可能的杂质、辅料、破坏试验、粗品），提供相应图谱2.线性与范围（至少5个浓度系列标准液）3.精密度（重复性、中间精密度和重现性），用高中低浓度9次测定结果评价4.准确度（回收试验、加样回收试验），高中低浓度9次测定结果评价5.耐用性（不同牌号柱、流动相组成比例、流速、pH、温度、测定液稳定性等）回收试验vR=C测/C标100%vR= (C总-C底)/C标100% v举例：地非三唑注射液的HPLC含量测定方法学研究 v 谢谢!
