《分离以尿素为氮源的微生物》由会员分享，可在线阅读，更多相关《分离以尿素为氮源的微生物（15页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、分离以尿素为氮源的微生物实验实验2 2（一）制备培养基：（一）制备培养基：（二）制备细菌悬液（二）制备细菌悬液 制备成制备成10-4、10-5土壤稀释液土壤稀释液实验组实验组对照组对照组全营养全营养LB固体培养基固体培养基尿素固体培养基尿素固体培养基倒平板倒平板需要倒需要倒2 2个个LBLB平板，平板，6 6个尿素平板个尿素平板每个稀释度每个稀释度 1 1个个LBLB对照平板对照平板 3 3个尿素平板个尿素平板( (平行重平行重复组复组) ) LB( (对照对照) )尿素尿素123平均平均10-410-5（三）涂布分离（三）涂布分离（三）涂布分离（三）涂布分离涂布前后玻璃刮刀需要灼烧吗？涂布前
2、后玻璃刮刀需要灼烧吗？（四）恒温（四）恒温37培养培养24-48h，观察，观察LB培养基上培养基上10-4 、10-5稀释度土样涂布结果稀释度土样涂布结果尿素培养基上尿素培养基上10-4 、10-5稀释度土样涂布结果稀释度土样涂布结果流程流程 制备培养基制备培养基 灭菌灭菌 倒平板倒平板 称土样称土样梯度稀释菌液梯度稀释菌液 涂布涂布 培养培养观察观察 细菌细菌 尿素尿素 NH3 中性中性 碱性碱性 酚红颜色：酚红颜色： 黄色黄色 红色红色 细菌产生的脲酶向周围扩散，将培养基细菌产生的脲酶向周围扩散，将培养基中的尿素分解，产生的氨使培养基变碱，于中的尿素分解，产生的氨使培养基变碱，于是酚红由是
3、酚红由黄黄变变红红。随着培养时间的延长，红。随着培养时间的延长，红色区域的面积越来越大。色区域的面积越来越大。分离纯化 原理：原理：设计设计特殊的分离培养基，即特殊的分离培养基，即人为提供有利人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pHpH等）等），同时抑制或阻止其他微生物生长，同时抑制或阻止其他微生物生长。常用常用选择培养选择培养基基筛选。筛选。 通过观察微生物在选择培养基上生长状况通过观察微生物在选择培养基上生长状况或生化反应如或生化反应如透明圈、变色圈透明圈、变色圈等进行分离。等进行分离。 本课题的培养基以本课题的培养基以尿素尿素为为唯一氮
4、源唯一氮源。变色圈法：变色圈法：在平板中加入指示剂或显色剂，使在平板中加入指示剂或显色剂，使所需微生物能被快速鉴别出来。产生有机酸或所需微生物能被快速鉴别出来。产生有机酸或胺等碱性物质的微生物，通常采用胺等碱性物质的微生物，通常采用pHpH值指示剂值指示剂可检测出来。可检测出来。 在本课题提供的选择培养基的配方中，在本课题提供的选择培养基的配方中，尿素是培养基中的尿素是培养基中的惟一氮源惟一氮源，因此，原则，因此，原则上只有能够利用尿素的微生物才能够生长。上只有能够利用尿素的微生物才能够生长。 实际上，微生物的培养是一个非常复杂的实际上，微生物的培养是一个非常复杂的问题，比如有些微生物可以利用其他微生物的代问题，比如有些微生物可以利用其他微生物的代谢产物生长繁殖，因此能够在选择培养基上生长谢产物生长繁殖，因此能够在选择培养基上生长的微生物不一定都是所需要的微生物，还需要进的微生物不一定都是所需要的微生物，还需要进一步的验证。一步的验证。 能够在选择培养基上生长的微生物是否能够在选择培养基上生长的微生物是否都是所需要的微生物？都是所需要的微生物？
