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1、番茄叶霉病拮抗细菌发酵条件的研究指导教师：马贵龙班级：植物保护2班学生：潘帅学号：010932211.前言生物农药又称生物源农药, 是指含非人工合成、具有杀虫、杀菌或抗病能力的生物活性物质或生物制剂, 包括生物杀虫剂、杀菌剂、农用抗生素、生态农药等。随着社会对生物防治越来越重视，许多生物农药已经应用于番茄叶霉病的防治中。经室内测试和田间试验，春雷霉素、多抗霉素、武夷菌素、百里香、菇卫士、银果与常用化学农药甲基托布津、代森锰锌一样，对叶霉病病原菌有较强的抑制作用，田间防治效果明显。2.材料方法试验材料 供试拮抗菌株细菌S46，由土壤中分离得到。番茄叶霉病原菌由吉林农业大学农学院植物病理研究室提供
2、。生物测定培养基（PDA） 原始培养基（LB培养基）主要供试器材 由实验室提供试验方法营养条件对发酵的影响 不同碳源对发酵液抑菌活性的影响 不同氮源对发酵液抑菌活性的影响 不同无机盐对发酵液抑菌活性的影响营养条件正交试验LB培养基和优化培养基的结果比较摇瓶条件优化其他因素如温度种龄转速对S46发酵液的影响交试验因素水平的选取水平水平A:装量装量(mL/250mL)B:发酵时间发酵时间(h)C:接种量接种量(10mm菌碟菌碟)D:初始初始pH值值1302416.524048273507237.53.结果与分析不同碳源对菌株S46产素的影响 抑菌圈直径从高到低依次为蔗糖葡萄糖玉米粉淀粉麦芽糖甘油，
3、其中以蔗糖为碳源时，菌株S46抑菌能力最强。不同氮源对S46菌株产素的影响 抑菌圈直径从高到低依次为大豆粉蛋白胨硝酸铵氯化铵硝酸钠。其中以大豆粉为氮源时抑菌能力最强不同无机盐对发酵液抑菌活性的影响 抑菌圈直径从高到低依次为磷酸氢二钾 氯化钠 氯化钾 硫酸镁 氯化钙 硫酸亚铁 硫酸锌营养条件正交设计试验 试验号2.7.9均有较好效果，其中7最好，即豆饼粉15g/L，玉米粉5g/L，蔗糖15g/L，磷酸氢二钾10g/L。原始发酵培养基配方与最优培养基配方的比较试验结果 结果表明，抑菌直径较原始发酵培养基的抑菌直径提高了28.5%。摇瓶条件优化 接种量为3个直径10mm菌碟，发酵时间72好，装瓶量3
4、0mL/250L，初始PH7.5。其他因素 结果表明S46发酵的最适宜温度为35。S46发酵的最佳接种种龄为24h。结果表明S46发酵的最佳转速为200 rpm。4.讨论在对菌株S46发酵条件优化的试验中，首先确定最优碳源为玉米粉和蔗糖的符合使用，最优氮源为大豆粉，然后通过正交试验得到各营养因子的最佳组合：豆饼粉15g/L，玉米粉5g/L，蔗糖15g/L，磷酸氢二钾10g/L。之后，通过单因子试验和正交试验得到最优发酵条件：接种量为3个直径10mm菌碟，发酵时间72好，装瓶量30mL/250L，初始PH7.5，转速200rpm，温度35。在最优发酵条件下，发酵时间设为72h时，S46菌株产素量
5、最大。本实验对番茄叶霉拮抗细菌发酵条件的研究在实验室基础上进行，只进行了粗略笼统的研究，部分实验数据只能初步进行确定，具准确的结果还有待进一步研究。 由于LB培养基是细菌培养中最常见的培养基，其营养成分组成比较简单，因此本试验优化出的培养基的营养成分组成也比较简单，若要得到效果更好的培养基可选择营养成分组成更为全面的培养基为原始培养基或增加培养基的营养成分组成进行优化。本试验采用S46菌株作为供试菌株材料。拮抗菌株的分离、纯化和筛选是本试验的基础部分，工作量较大，耗时长。5.参考文献1. 严占勇, 张定贵, 易龙. 微生物农药在烟草生产上的应用现状分析与建议 J. 植物保护, 2009, 36
6、( 4): 24- 282.孙杨.茄叶霉病拮抗细菌的筛选、鉴定及其活性物质的研究硕士论文.吉林农业大学，20123.孟昭礼，罗兰.人工模拟的植物源杀菌剂银泰防治番茄3种病害效果研究，1.中国农业科学，2002，35(7):863一866.4.朱昌雄 .我国农用抗生素的研究开发现状及展望.5.韩文华，许文奎，张英杰等.番茄叶霉病菌形态特征及生物学特性研究J.辽宁农业科学， 1997，(5):16一17.6.丁翠珍,裘季燕，等.枯草芽孢杆菌B02 产生拮抗物质培养基及发酵条件优化.中国生物防治.2008，24( 2) 159- 1637.陶树春，贾秀芬，魏周玉.银果等6种生物农药对番茄叶霉病的防治
7、效果J.广西农业科学，2005，36(6):557一558. 8.明道绪.三因素是水平的正交试验选定方法以及测量方法、极差等的计算方法. 生物统计附试验设计 中国农业出版社出版 2006年12月第3版.9.夏立秋.我国生物农药发展的机遇、问题及对策.精细与专用化学.2001.10. 徐亲民. 日本近年来新抗生素筛选研究动态 J . 国外医药抗生素分册, 1996, 17( 4): 257- 26311.王云霞.产酶溶杆菌OHn菌株摇瓶发酵条件优化和色素突变体筛选、基因克隆及特性的研究.南京农业大学硕士学位论文.12.瞿亚娟.番茄叶霉病重要流行环节的研究.吉林农业大学硕士论文.200713.顾真
8、荣, 马承铸, 韩长安. 枯草芽孢杆菌G3 防治植病盆栽试验 J . 上海农业学报, 2002, 18( 1) : 77- 80致谢本论文是在马贵龙教授的悉心指导下完成的，马贵龙教授在学习和生活上给予我很多的帮助与关怀，在此向马贵龙教授表示衷心的感谢！无论是从科研的选题、试验的研究及论文的撰写，马老师给予了我很多的指导和帮助，让我的各方面都有了一定的进步。在此，我向马老师致以最真诚的感谢和最深切的敬意。 感谢在做毕业论文期间所有给予我帮助的师兄、师姐，是你们的帮助，让我能够顺利的完成试验内容，同时感谢我的小组成员，感谢你们对我的帮助。 同时也感谢学院为我提供良好的做毕业设计的环境，同学、朋友给了我无言的帮助。以及在设计中被我引用或参考的论著的作者。 此外，向所有给予我关心、帮助的植物病理学科的老师和同学表示衷心的感谢！
