人巨细胞病毒潜伏激活感染诊断的进展

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1、l临床免疫学疾病的实验室检测临床免疫学疾病的实验室检测-2-2 (clinical immunological test) (clinical immunological test) - part 2 - part 21肿瘤标志物的检测肿瘤标志物的检测l肿瘤标志物肿瘤标志物(tumor marker;TM)(tumor marker;TM)： A substance that may be found in A substance that may be found in tumor tissue or released from a tumor tumor tissue or release

2、d from a tumor into the blood or other body fluids. A into the blood or other body fluids. A high level of a tumor marker may mean high level of a tumor marker may mean that a certain type of cancer is in the that a certain type of cancer is in the body.body.( (肿瘤细胞所产生或分泌的某种蛋白质肿瘤细胞所产生或分泌的某种蛋白质, ,它们它

3、们的出现与肿瘤的存在和发展有密切关系。的出现与肿瘤的存在和发展有密切关系。) )2l肿瘤标志物的分类肿瘤标志物的分类(classify)(classify)： 1 1、肿瘤特异性抗原、肿瘤特异性抗原(TSA(TSA） 2 2、肿瘤相关性抗原、肿瘤相关性抗原(TAA(TAA） 3 3、肿瘤细胞增生、肿瘤细胞增生(proliferation(proliferation) ) 4 4、癌基因、生长因子与受体、癌基因、生长因子与受体 5 5、肿瘤抑制基因和基因产物、肿瘤抑制基因和基因产物3l1 1、肿瘤特异性抗原（、肿瘤特异性抗原（TSATSA）：）： 指指仅仅表达与肿瘤细胞表面，而不存表达与肿瘤细胞

4、表面，而不存在于正常组织细胞的新抗原。在于正常组织细胞的新抗原。 42 2、肿瘤相关性、肿瘤相关性(associable)(associable)抗原抗原: : TAA: TAA:是指非肿瘤细胞所特有，正常组是指非肿瘤细胞所特有，正常组织细胞也可表达的抗原物质，作为肿瘤织细胞也可表达的抗原物质，作为肿瘤标志物监测，是因为此类抗原在癌变细标志物监测，是因为此类抗原在癌变细胞的表达水平远超过于正常细胞，但又胞的表达水平远超过于正常细胞，但又无严格的肿瘤特异性。无严格的肿瘤特异性。5l3 3、肿瘤细胞增生标志物：、肿瘤细胞增生标志物： 是指与肿瘤细胞增是指与肿瘤细胞增(proliferation)(

5、proliferation)：的标志性物质，目前被广泛接受的有的标志性物质，目前被广泛接受的有Ki-Ki-6767和和PCNAPCNA（增生细胞核抗原）。（增生细胞核抗原）。 因为因为Ki-67Ki-67和和PCNAPCNA的免疫反应性与细的免疫反应性与细胞增生的形态特征关系密切。胞增生的形态特征关系密切。64 4、癌基因、生长因子与受体：、癌基因、生长因子与受体： 正常细胞有原癌基因，当原癌基因激正常细胞有原癌基因，当原癌基因激活后变成癌基因，可引起细胞恶性转化活后变成癌基因，可引起细胞恶性转化 癌基因的作用中又需要生长因子及其癌基因的作用中又需要生长因子及其受体的协同参与。受体的协同参与。

6、 例：例：HER-2/neuHER-2/neu基因基因 Ras Ras基因基因 表皮生长因子受体表皮生长因子受体 7l5 5、肿瘤抑制基因和基因产物、肿瘤抑制基因和基因产物： 是指抑制肿瘤发生、发展的基因是指抑制肿瘤发生、发展的基因（抑癌基因）和其基因产物。（抑癌基因）和其基因产物。 例：例：RbRb基因基因 p53 p53基因等基因等 8主要肿瘤标志物检测主要肿瘤标志物检测: 1 1、CEA 2CEA 2、AFPAFP 3 3、CA12-5 4CA12-5 4、PSAPSA 5 5、CA19-9 6CA19-9 6、NSENSE 7 7、SCC 8SCC 8、HCGHCG注：标志物的本质注：

7、标志物的本质(nature)(nature)、检测方法、检测方法(mathod)(mathod)、参考值范围、参考值范围(reference (reference value)value)、临床意义、临床意义(significance)(significance)及注及注意事项意事项(attention(attention）。）。91 1、CEACEA（carcinoembryonic antigencarcinoembryonic antigen） 癌胚抗原癌胚抗原- -于于19651965年被发现，通过由人年被发现，通过由人直肠组织提取物免疫动物获得抗血清并直肠组织提取物免疫动物获得抗血清

8、并经吸收。再将此抗血清与肿瘤经吸收。再将此抗血清与肿瘤/ /正常组织正常组织分别反应，只与肿瘤组织有反应。分别反应，只与肿瘤组织有反应。 由于此抗原也能在胚胎组织中发现，由于此抗原也能在胚胎组织中发现，故称故称“癌胚抗原癌胚抗原”。 检测方法有检测方法有ELISAELISA、RIARIA、自动免疫、自动免疫10lCEACEA在正常情况下由胎儿胃肠道上皮、在正常情况下由胎儿胃肠道上皮、胰腺和肝细胞合成，经胃肠道代谢。胰腺和肝细胞合成，经胃肠道代谢。肿瘤状态时肿瘤状态时CEACEA大量分泌并经入血和淋大量分泌并经入血和淋巴液循环导致血清中巴液循环导致血清中CEACEA上升。上升。l正常群体正常群体

9、CEACEA值：值：3ug/L;3ug/L;吸烟者吸烟者5ug/L;5ug/L;孕妇的前孕妇的前6 6个月升高个月升高, ,产后恢复产后恢复l测得值测得值60ug/L60ug/L时时, ,肿瘤肿瘤?(?(恶性恶性/ /良性良性) )11l意义及注意事项意义及注意事项: : (significance and attentions) (significance and attentions) 1 1、值升高、值升高 胃、结胃、结/ /直肠、肺癌，胰直肠、肺癌，胰 胆道与膀胱癌（待检物来源）胆道与膀胱癌（待检物来源） 2 2、注意、注意 良性肿瘤（病症）也可升高良性肿瘤（病症）也可升高 转移时升高

10、，术后恢复持续升转移时升高，术后恢复持续升 高，示预后不良不宜选为筛选高，示预后不良不宜选为筛选 （假阳（假阳/ /阴性）阴性） (false posiyive / negative) (false posiyive / negative)122 2、AFPAFP（alpha-fetoproteinalpha-fetoprotein）：）： 甲胎蛋白甲胎蛋白- -是胚胎期肝脏和卵黄囊合成是胚胎期肝脏和卵黄囊合成为胎儿循环中主要蛋白，出生后水平下为胎儿循环中主要蛋白，出生后水平下将，将，1818个月后至正常人水平。个月后至正常人水平。 肝细胞恶变又可获其功能导致血清含肝细胞恶变又可获其功能导致血

11、清含量增高量增高(rejuvenated,(rejuvenated,返祖返祖) )，目前成为，目前成为肝细胞和生殖（非精原）细胞恶性肿瘤肝细胞和生殖（非精原）细胞恶性肿瘤的标志物。的标志物。13lAFPAFP的检测方法同前外，用金标记测定的检测方法同前外，用金标记测定l正常成人：血清正常成人：血清10ug/L10ug/L；妊娠；妊娠1414周周起上升至起上升至2 23g/L3g/L后逐降，足孕后逐降，足孕70mg/L70mg/L分娩后迅速下降。分娩后迅速下降。l意义：意义： 500ug/L 500ug/L多见于原发肝癌。多见于原发肝癌。 良性肝病也可升高，但多良性肝病也可升高，但多 200ug

12、/L 200ug/L 。 多用于筛选、判断预后及调整治疗等。多用于筛选、判断预后及调整治疗等。14l3 3、CA12-5/ 5CA12-5/ 5、CA19-9 CA19-9 ： 属糖类抗原标志物，使由肿瘤细胞分属糖类抗原标志物，使由肿瘤细胞分泌释放或存于该细胞表面的抗原，又归泌释放或存于该细胞表面的抗原，又归属肿瘤相关抗原。属肿瘤相关抗原。 有有CA12-5CA12-5（卵巢癌相关）；（卵巢癌相关）；CA19-9CA19-9（胰腺、肠癌）；乳腺癌（胰腺、肠癌）；乳腺癌（ CA15-3 CA15-3）消化系统（消化系统（ CA242 CA242）及）及CA50CA50等。等。15lCA12-5C

13、A12-5：在卵巢肿瘤上皮和：在卵巢肿瘤上皮和MullerianMullerian副肾管来源的组织中表达（病理副肾管来源的组织中表达（病理/ /正常）正常） 正常人血清正常人血清35U/ml35U/ml。 CA12-5 CA12-5血中代谢快，测得值反映近期血中代谢快，测得值反映近期 CA12-5 CA12-5值升高值升高 恶性肿瘤（晚）恶性肿瘤（晚） 少数异位症、良性等少数异位症、良性等 CA12-5 CA12-5监测（动态），反映病情、预监测（动态），反映病情、预 后（手术指征）后（手术指征）16lCA19-9CA19-9：一种与胰腺、胆囊、结肠和：一种与胰腺、胆囊、结肠和胃癌等相关的肿瘤

14、标志物，本质为细胞胃癌等相关的肿瘤标志物，本质为细胞膜上的糖脂质，因制备的单克隆抗体而膜上的糖脂质，因制备的单克隆抗体而命名。正常参考值命名。正常参考值37U/ml37U/ml。l胰腺癌的阳性率胰腺癌的阳性率707092%92%，胆管癌，胆管癌66%66%胃癌胃癌252560%60%，肝癌，肝癌565660%60%，结直肠癌，结直肠癌181858%58%。伴黄疸的良性疾患也可升高，但一般不伴黄疸的良性疾患也可升高，但一般不120U/ml120U/ml，随处置而下降。，随处置而下降。174 4、PSAPSA（prostate specific antigenprostate specific a

15、ntigen）：）： 前列腺特异抗原前列腺特异抗原由前列腺分泌的单由前列腺分泌的单链糖蛋白，存在于前列腺管道上皮细胞链糖蛋白，存在于前列腺管道上皮细胞中发生前列腺癌时血清中含量升高。中发生前列腺癌时血清中含量升高。 正常男性：正常男性：4ug/L4ug/L（f-f-1ug/L 1ug/L ） 升高：前列腺癌、增生、炎症等升高：前列腺癌、增生、炎症等 应用：普查、疗程跟踪、复发监测应用：普查、疗程跟踪、复发监测186 6、NSE(neuron specific enolase)NSE(neuron specific enolase) 神经元特异性烯醇化酶神经元特异性烯醇化酶是烯醇化酶是烯醇化酶的

16、同功酶，正常存在于神经组织和的同功酶，正常存在于神经组织和RBCRBC中，正常人血清值中，正常人血清值13ug/ml13ug/ml。 升高：小细胞肺癌、神经母细胞瘤和升高：小细胞肺癌、神经母细胞瘤和其内分泌肿瘤及脑损伤。其内分泌肿瘤及脑损伤。 注意：标本禁止溶血注意：标本禁止溶血 动态监测可用于疗效、评估预动态监测可用于疗效、评估预 后等。后等。 197 7、SCCSCC（鳞状细胞癌抗原）：属糖蛋白（鳞状细胞癌抗原）：属糖蛋白是一种鳞状细胞癌标志物（宫颈癌、肺是一种鳞状细胞癌标志物（宫颈癌、肺癌、头颈部癌等）癌、头颈部癌等）, ,血清血清1.5ug/L1.5ug/L。8 8、HCGHCG（人绒

17、毛膜促性腺激素）：作为（人绒毛膜促性腺激素）：作为绒毛膜上皮细胞癌标志，异位妊娠？绒毛膜上皮细胞癌标志，异位妊娠？检测检测HCGHCG包括总包括总HCGHCG和和f-HCGf-HCG。20 肿瘤标志物的应用原则肿瘤标志物的应用原则 （ applied principle applied principle）l相关的标志物联合检测相关的标志物联合检测提高灵敏度提高灵敏度l阳性标志物的动态监测阳性标志物的动态监测提高准确性提高准确性 （union / dynamics union / dynamics ）l不宜凭单项、单次的检测结果下诊断结论不宜凭单项、单次的检测结果下诊断结论21 肿瘤标志物的联

18、合应用肿瘤标志物的联合应用 （joint applyjoint apply） 例：例：肺癌：肺癌：NESNES、CEACEA、CYFRA21-1CYFRA21-1 乳腺癌：乳腺癌：CA15-3CA15-3、CEACEA 肝癌：肝癌：AFPAFP、CEACEA、AKPAKP同功酶同功酶 胰腺癌：胰腺癌：CA19-2CA19-2、CA242CA242、CA50CA50 卵巢癌：卵巢癌：CA12-5CA12-5、CEACEA、CA19-9CA19-9 HCG HCG22 自身免疫性疾病的免疫学检验自身免疫性疾病的免疫学检验（diagnostic of autoimmune diseasediagno

19、stic of autoimmune disease） Systemic lupus erythematosus Systemic lupus erythematosus；SLESLERheumatoid arthritisRheumatoid arthritis；RARA23Hashimotos thyroiditisHashimotos thyroiditisAnkylosing spondylitisAnkylosing spondylitis24lAutoimmune diseases:Autoimmune diseases: A condition in which the body

20、 A condition in which the body recognizes its own tissues as foreign recognizes its own tissues as foreign and directs an immune response against and directs an immune response against them.them.l自身免疫病：指因自身免疫应答反应自身免疫病：指因自身免疫应答反应而导致破坏自身正常组织结构并引起而导致破坏自身正常组织结构并引起临床症状。（由：自身抗体临床症状。（由：自身抗体/自身反应自身反应性性T淋巴细胞

21、）淋巴细胞）25临床各科自身免疫性疾病举例临床各科自身免疫性疾病举例(附表附表)26 累及系统累及系统 自身免疫性疾病举例自身免疫性疾病举例(example)(example)血液系统血液系统 自身免疫性溶血性贫血、特发性血小板自身免疫性溶血性贫血、特发性血小板(blood(blood) ) 减少性紫癜、特发性白细胞减少症等减少性紫癜、特发性白细胞减少症等神经肌肉神经肌肉 多发性硬化症、重症肌无力、脱髓鞘疾多发性硬化症、重症肌无力、脱髓鞘疾(nerve/muscle)(nerve/muscle) 病等病等内分泌系统内分泌系统 原发性肾上腺皮质萎缩、慢性甲状腺原发性肾上腺皮质萎缩、慢性甲状腺(e

22、ndocrine(endocrine) )炎、胰岛素依赖性糖尿病等炎、胰岛素依赖性糖尿病等消化系统消化系统 非特异性溃疡性结肠炎、慢性活动性肝非特异性溃疡性结肠炎、慢性活动性肝(digestive(digestive) )炎、恶性贫血与萎缩性胃炎等炎、恶性贫血与萎缩性胃炎等泌尿系统泌尿系统 自身免疫性肾小球肾炎、肺自身免疫性肾小球肾炎、肺肾出血性肾出血性(uropoietic(uropoietic) )综合症等综合症等结缔组织结缔组织 类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、皮类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、皮(connective tissue)(connective tissue)肌炎、硬皮病等肌

23、炎、硬皮病等27检测检测自身抗体自身抗体(Autoantibodies)(Autoantibodies) 免疫复合物免疫复合物(immune complex)(immune complex) 其他相关因素其他相关因素（IgIg、complementcomplement lymphocytelymphocyte、cytokine,etccytokine,etc）28lAutoantibodies:Autoantibodies: Autoantibody have been defined as Autoantibody have been defined as an aberration of

24、an essentially an aberration of an essentially physiological and protective process, physiological and protective process, representing immunoglobulins reacting representing immunoglobulins reacting against self-molecules.against self-molecules.（由于机体自身免疫的发生，使得机体免疫（由于机体自身免疫的发生，使得机体免疫 系统产生了针对机体自身组织成分的

25、抗体，系统产生了针对机体自身组织成分的抗体， 称。）称。）29l自身抗体自身抗体(Autoantibodies)(Autoantibodies)：包括：包括：抗核抗体抗核抗体( (胞核内成分胞核内成分) ) (anti-nuclear antibody;ANA) (anti-nuclear antibody;ANA) 抗细胞浆抗细胞浆(cytoplasmic)(cytoplasmic)成分抗体成分抗体 抗磷脂抗磷脂(anti-phospholipid)(anti-phospholipid)抗体抗体 类风湿因子类风湿因子(rheumatoid (rheumatoid factor,RF) fac

26、tor,RF)30抗核抗体（广义）抗核抗体（广义）：抗细胞核内所有抗：抗细胞核内所有抗 原成分原成分( (核质核质 膜膜 仁仁DNADNA等等) )的自身抗体的自身抗体。31 抗体名称抗体名称 检测所用抗原检测所用抗原 临床意义临床意义抗核抗体抗核抗体( (均质型）均质型） HEp-2 HEp-2细胞抗原片细胞抗原片 高滴度主要见于高滴度主要见于SLE,SLE,低滴低滴 或大鼠肝细胞印片或大鼠肝细胞印片 度可见于度可见于RARA、慢性肝病、慢性肝病、 传单或药物诱发的狼疮者传单或药物诱发的狼疮者抗核抗体（斑点型）抗核抗体（斑点型） 混合性结缔组织病、混合性结缔组织病、SLE SLE 硬皮病、硬

27、皮病、SSSS等。等。抗核抗体（核膜型）抗核抗体（核膜型） 高滴度几乎仅见于高滴度几乎仅见于SLE SLE 抗核抗体（核仁型）抗核抗体（核仁型） 高滴度对硬皮病特异高滴度对硬皮病特异 dsDNAdsDNA抗体抗体 马疫锥虫或短膜马疫锥虫或短膜 是是SLESLE的特征性抗体的特征性抗体RNPRNP抗体抗体 ENA ENA抗原抗原 硬皮病滴度高，其它自身硬皮病滴度高，其它自身 免疫病低水平阳性，免疫病低水平阳性，RARA一一 般为阴性般为阴性SmSm抗体抗体 是是SLESLE的标志性抗体（其它的标志性抗体（其它 疾病很少阳性），但敏感疾病很少阳性），但敏感 性只有性只有3030左右左右Scl-70

28、Scl-70抗体抗体 系统性硬化症的标记抗体系统性硬化症的标记抗体SSA/RoSSA/Ro、SSB/LaSSB/La抗体抗体 干燥综合征干燥综合征J0-1J0-1抗体抗体 多发性皮肌炎和皮肌炎的多发性皮肌炎和皮肌炎的 标记抗体标记抗体32抗细胞浆成分抗体抗细胞浆成分抗体: 抗线粒体抗体抗线粒体抗体 抗肌动蛋白抗体抗肌动蛋白抗体 抗溶酶体抗体抗溶酶体抗体 抗抗Jo-1抗体等抗体等方法方法:免疫组化免疫组化意义意义:肝病的鉴别肝病的鉴别 肌炎肌炎 肺纤维化等肺纤维化等33l抗组织细胞抗体抗组织细胞抗体:1 1、抗肾小球基底膜、抗肾小球基底膜(anti-glomeular (anti-glomeul

29、ar basement membran)basement membran)抗体抗体（肺出血肾炎综合征（肺出血肾炎综合征,Good pasture,Good pasture）2 2、抗甲状腺（、抗甲状腺（anti-thyroidanti-thyroid）抗体）抗体（甲状腺炎（甲状腺炎thyroiditis,thyroiditis,甲亢甲亢Graves Graves 病）病）3 3、抗胰岛、抗胰岛(insular)(insular)细胞抗体细胞抗体（胰岛素依赖性糖尿病（胰岛素依赖性糖尿病,IDDM,IDDM）( (i insulin nsulin d dependent ependent d di

30、abetes iabetes m mellitus) ellitus) 34类风湿因子（类风湿因子（rheumatoid factorrheumatoid factor）：）： 是变性是变性IgGIgG刺激机体产生的一种自身抗刺激机体产生的一种自身抗体，主要存在于类风湿关节炎患者的血体，主要存在于类风湿关节炎患者的血清和关节液内（分清和关节液内（分IgM/GIgM/GE E型）。型）。检测：乳胶凝集测检测：乳胶凝集测IgMIgM型；速率法不分型型；速率法不分型参考值：乳胶法参考值：乳胶法1:10;1:10;速率法速率法30U/L30U/L意义意义: :类风湿病类风湿病, ,自身免疫病的辅助自身

31、免疫病的辅助35类风湿因子在病人和健康人中检出情况类风湿因子在病人和健康人中检出情况n n70%70%90%90%的的RARA患者患者RFRF呈阳性。呈阳性。但但RFRF并并不是不是RARA独有的独有的特异性特异性抗体抗体。2 2健康人群健康人群健康人群健康人群2020混合性结缔组织病混合性结缔组织病混合性结缔组织病混合性结缔组织病1010皮肌炎皮肌炎皮肌炎皮肌炎2424系统性硬皮病系统性硬皮病系统性硬皮病系统性硬皮病5050结节性多动脉炎结节性多动脉炎结节性多动脉炎结节性多动脉炎9595干燥综合征干燥综合征干燥综合征干燥综合征33335555SLESLE70709090RARA阳性率（阳性率

32、（阳性率（阳性率（%）疾病疾病疾病疾病36l循环免疫复合物（循环免疫复合物（CICCIC）测定）测定l【原理】利用浊度增强剂或促凝剂【原理】利用浊度增强剂或促凝剂- -聚乙二聚乙二醇（醇（PEGPEG）、葡聚糖等，在一定浓度时可选）、葡聚糖等，在一定浓度时可选择性析出一定分子大小的抗原抗体复合物择性析出一定分子大小的抗原抗体复合物而形成浊度，其浊度的程度与抗原抗体复而形成浊度，其浊度的程度与抗原抗体复合物的量呈正比。由于浊度的形成可导致合物的量呈正比。由于浊度的形成可导致反射、散射以及吸收入射光线，使原入射反射、散射以及吸收入射光线，使原入射光衰减。此时，通过测定透射光衰减（以光衰减。此时，通

33、过测定透射光衰减（以A A值表示）检测免疫复合物的量。值表示）检测免疫复合物的量。37循环免疫复合物检测流程循环免疫复合物检测流程(方法方法) 1 1、 测测定管定管+ +血清血清 对对照管照管+血清血清 （4.166%4.166%PEGPEG2.0ml2.0ml）（硼酸）（硼酸缓缓冲液冲液2.0ml2.0ml）2 2、混匀后、混匀后44，60min60min 3 3、室温、室温预预温温30min30min，A A450450nmnm比比浊浊。 38l【参考范围】【参考范围】l测定波长为测定波长为450nm450nm时，数值为时，数值为0.0150.0150.050.05l【临床意义】【临床意

34、义】 CIC CIC的量增高，反映血清中存在免疫复合的量增高，反映血清中存在免疫复合 物量增多。已知物量增多。已知CICCIC增多与许多疾病相关，增多与许多疾病相关，包括：自身免疫性疾病、传染性疾病、肿包括：自身免疫性疾病、传染性疾病、肿 瘤及某些超敏反应性疾病等瘤及某些超敏反应性疾病等- - 39移植免疫的实验室检测移植免疫的实验室检测l移植移植(transplantation):(transplantation):是应用自体是应用自体或异体的正常细胞、组织或器官置换或异体的正常细胞、组织或器官置换病变的或功能缺损的细胞、组织和器病变的或功能缺损的细胞、组织和器官，以维持和重建机体生理功能的

35、新官，以维持和重建机体生理功能的新型治疗方法。型治疗方法。l移植排斥反应的防与治是移植排斥反应的防与治是关键关键 ( (组织配型、供体选择、免疫抑制剂组织配型、供体选择、免疫抑制剂用和术后的免疫学监测用和术后的免疫学监测) )40l免疫排斥（免疫排斥（immune rejectionimmune rejection）：指）：指器官、组织或细胞移植后，受体发生器官、组织或细胞移植后，受体发生免疫应答，引起针对移植物的免疫损免疫应答，引起针对移植物的免疫损伤而使其丧失功能的一个过程。伤而使其丧失功能的一个过程。l表现：表现：hyperacute rejectionhyperacute reject

36、ion acute rejection acute rejection chronic rejection chronic rejection41移植的组织配型移植的组织配型(matching):(matching):l（一）选择组织相匹配的供者（一）选择组织相匹配的供者 1 1、一般情况、一般情况: :供物状态、全身情况、年龄供物状态、全身情况、年龄 2 2、ABOABO血型相容（拟输血）血型相容（拟输血） 3 3、HLAHLA相容性（受、供者相容性（受、供者HLAHLA等位基因相合等位基因相合的数目越多越好）的数目越多越好）l（二）（二）HLAHLA相容程度测试相容程度测试 1 1、血清学

37、、血清学(serological(serological) )分型分型 2 2、细胞学、细胞学(cytological(cytological) )分型分型 3 3、基因、基因(gene)(gene)分型分型42l1 1、血清学分型、血清学分型(serological typing)(serological typing)：原理原理利用各种已知的利用各种已知的HLAHLA标准血清型，标准血清型， 与检测细胞反应，添加补体后观察细与检测细胞反应，添加补体后观察细 胞反应（胞反应（CDCCDC） micro-complement dependent cytotoxiciti micro-compl

38、ement dependent cytotoxiciti 技术要点（技术要点（key pointkey point）分离淋巴细胞分离淋巴细胞, , 与标准抗血清反应，添加补体，与标准抗血清反应，添加补体， 死细胞染色死细胞染色, ,记数、判断。记数、判断。评价评价较理想，找标准抗血清（较理想，找标准抗血清（antiseraantisera of defined specificity of defined specificity）难。）难。 43l2 2、细胞学、细胞学(cytological)(cytological)分型分型采用淋巴采用淋巴细胞混合培养（细胞混合培养（MLCMLC）,(tw

39、o way)/one way),(two way)/one way)l双向双向MLC MLC 受、供体淋巴细胞混合体外培受、供体淋巴细胞混合体外培 养，彼此作用，观察细胞形态与细胞增养，彼此作用，观察细胞形态与细胞增 殖，互不影响示受、供体间殖，互不影响示受、供体间HLAHLA型相匹配型相匹配 否则否则l技术要点技术要点(key point) (key point) 分离计数彼此淋分离计数彼此淋 巴细胞，共孵育，染色计数转化细胞巴细胞，共孵育，染色计数转化细胞l评价评价(evalu) (evalu) 用于移植前的交叉配合试用于移植前的交叉配合试验，但不验，但不 能判定能判定HLA-DHLA-D

40、型型44l3 3、基因、基因(gene)(gene)分型分型l限制性片段长度多态性（限制性片段长度多态性（RFLPRFLP）分型）分型l聚合酶链反应聚合酶链反应- -序列特异性寡核苷酸探针序列特异性寡核苷酸探针 （PCR-SSOPPCR-SSOP）lPCR-PCR-序列特异性引物（序列特异性引物（PCR-SSPPCR-SSP）分型）分型lPCR-PCR-单链构象多态性（单链构象多态性（PCR-SSCPPCR-SSCP）分型）分型lPCRPCR指纹图谱技术指纹图谱技术l其他其他45（三）交叉配型（三）交叉配型(crossmatching)(crossmatching)试验试验l目的：检测受者体内

41、是否存在抗供者目的：检测受者体内是否存在抗供者的特异性抗体的特异性抗体, ,避免移植物的避免移植物的超急超急排斥排斥(HVGR)(HVGR)l技术要点：供者淋巴细胞技术要点：供者淋巴细胞+ +受者血清受者血清 + +补体补体l方法：方法：1 1、微量细胞毒试验，、微量细胞毒试验，2 2、流式、流式 细胞术细胞术. .46 排斥反应的免疫学监测排斥反应的免疫学监测(immunological monitoring of rejection)(immunological monitoring of rejection)l1 1、细胞免疫学监测、细胞免疫学监测TT淋巴细胞数量、功淋巴细胞数量、功能以

42、及亚群比例等，能以及亚群比例等，杀细胞活性（杀细胞活性（CTLCTL和和NKNK）。）。l2 2、细胞因子监测：、细胞因子监测：Th1Th1型型/ Th2/ Th2型型l Th1 Th1型包括型包括IL-2IL-2、TNF-aTNF-a、IFN-rIFN-r等等l Th2 Th2型包括型包括IL-4IL-4、IL-10IL-10等等l3 3、抗、抗HLAHLA抗体检测抗体检测l4 4、蛋白、酶类、补体检测、蛋白、酶类、补体检测47l抗抗HLAHLA抗体检测：抗体检测：l原理原理与异体排斥反应有关的体液、细胞与异体排斥反应有关的体液、细胞免疫效应主要是针对免疫效应主要是针对HLAHLA抗原的抗原

43、的 因为测得血清中因为测得血清中PRAPRA的水平更有助于移植时的水平更有助于移植时 受者对移植物的敏感程度包括群体反应性抗受者对移植物的敏感程度包括群体反应性抗 体体(PRA)(PRA)l意义：移植术前后的意义：移植术前后的PRAPRA高低与术后急性排高低与术后急性排斥反应明显有关。斥反应明显有关。48Why monitoring the concentration of druges?l l药物应用的临床特征药物应用的临床特征药物应用的临床特征药物应用的临床特征: :l l病人不同时期状况变化病人不同时期状况变化病人不同时期状况变化病人不同时期状况变化l l个体差异个体差异个体差异个体差异

44、l l身高身高身高身高l l体重体重体重体重l l年龄年龄年龄年龄l l个人吸收状况个人吸收状况个人吸收状况个人吸收状况l l怀孕怀孕怀孕怀孕l l肝，肾等代谢功能肝，肾等代谢功能肝，肾等代谢功能肝，肾等代谢功能l l其他疾病其他疾病其他疾病其他疾病49目的与手段目的与手段l通过测定血液中药物浓度通过测定血液中药物浓度,并利用药代动力并利用药代动力学的原理和公式使给药方案即时个体化学的原理和公式使给药方案即时个体化,以以提高药效效提高药效效,避免或减少毒性反应。避免或减少毒性反应。l l检测检测:fluorescence polarization immunoassay (FPIA) ;mic

45、rogranular enzyme-linked immunoassay,(MEIA)和和Enzyme-linked immunoassay(ELISA)l l检测的药物：环孢霉素（检测的药物：环孢霉素（CsA);他克莫司他克莫司(FK506);霉酚酸（霉酚酸（MPA）50 其他免疫检测其他免疫检测l感染免疫相关检测感染免疫相关检测l超敏反应性检测超敏反应性检测l皮试皮试51l超敏反应性检测超敏反应性检测l1 1、血清、血清IgEIgE测定测定 测定方法：测定方法：ELISAELISA 正常参考值：总正常参考值：总IgEIgE100IU/ml100IU/ml 意义：超敏反应性疾病的辅助指标意义

46、：超敏反应性疾病的辅助指标l 自身免疫病、肿瘤或炎症自身免疫病、肿瘤或炎症l 预测儿童是否易发超敏反应性预测儿童是否易发超敏反应性l 疾病。疾病。52l2 2、人嗜碱性粒细胞脱颗粒试验、人嗜碱性粒细胞脱颗粒试验【原理】【原理】嗜碱性粒细胞内颗粒能被碱性染料嗜碱性粒细胞内颗粒能被碱性染料着色，当加入过敏原，其与结合在细胞表面着色，当加入过敏原，其与结合在细胞表面的的IgEIgE形成桥连反应，导致该细胞脱颗粒，结形成桥连反应，导致该细胞脱颗粒，结果该细胞不被染料着色，记数着色细胞并以果该细胞不被染料着色，记数着色细胞并以其减少程度判断结果。其减少程度判断结果。 目前已渐被淘汰。目前已渐被淘汰。53

47、l3 3、皮试：、皮试：54l1 1、型变态反应型变态反应: : 皮试后皮试后15min15min产生结果（青霉素、多种产生结果（青霉素、多种 变应原如花粉、尘螨等）变应原如花粉、尘螨等）l2 2、（ArthusArthus）反应）反应: : 为为5 512h12h后产生（异种血清接种含后产生（异种血清接种含 Ag Ag，多次刺激产生，多次刺激产生AbAb） （再次注射，出现局部过敏反应）（再次注射，出现局部过敏反应）l3 3、型变态反应型变态反应: : 皮试后皮试后24 24 48h48h后产生（结核菌素试后产生（结核菌素试 验、等）。验、等）。55感染性疾病的免疫学检测感染性疾病的免疫学检

48、测l包括包括(including)(including)：1 1、病毒、病毒(viral)(viral)感染（病毒性肝炎感染（病毒性肝炎, ,ToRCHToRCH感染感染,HIV,HIV感染感染, ,其他病毒感染等）其他病毒感染等）2 2、细菌、细菌(bacterial)(bacterial)感染（伤寒、副伤感染（伤寒、副伤寒寒, ,化脓性链球菌感染化脓性链球菌感染, ,结核结核, ,军团病）军团病）3 3、真菌、真菌(fungi)(fungi)与其他微生物感染感染与其他微生物感染感染4 4、寄生虫、寄生虫(parasitic)(parasitic)感染（原虫感染（原虫, ,蠕蠕虫）虫）56病

49、毒性感染病毒性感染(viral infection)(viral infection)l病毒性肝炎（引起的病原体）病毒性肝炎（引起的病原体）1、肝炎病毒、肝炎病毒(hepatitis virus)(hepatitis virus)2 2、疱疹病毒、疱疹病毒(herps virus)(herps virus)3、虫媒病毒虫媒病毒(arthropod-borne virus)(arthropod-borne virus)4 4、出血热病毒、出血热病毒(hemorrhagic fever(hemorrhagic fever) )5 5、腺病毒、腺病毒/ /柯萨基病毒等柯萨基病毒等(adenoviru

50、s/coxsakivirus)(adenovirus/coxsakivirus)57l病毒性肝炎：病毒性肝炎：HAVHAV HBV HBV HCV HCV HDV HDV HEV HEV 其他（其他（HGV/TTVHGV/TTV） （SEN/TLMVSEN/TLMV）58 1 1、免疫学检测指标、免疫学检测指标HAV-AgHAV-Ag 抗抗HAVHAV总抗体总抗体 抗抗HAV-IgMHAV-IgM 2 2、HAVHAV的潜伏期的潜伏期(30(30天天22周周) ) 3 3、HAVHAV的传播途径的传播途径( (粪粪口口) )HAVHAV血清标志物出现的规律血清标志物出现的规律5960 乙肝主要

51、血清标志物联合检测的临床义意乙肝主要血清标志物联合检测的临床义意 61丙型肝炎病毒感染血清标志物出现过程丙型肝炎病毒感染血清标志物出现过程HCVHCV的传播途径的传播途径 HCV HCV容易变异容易变异.HCVHCV的实验室诊断的实验室诊断测病毒测病毒RNA. RNA. 测病毒相应抗体测病毒相应抗体.62lHDVHDV为缺陷病毒为缺陷病毒l与与HBVHBV同时感染（共同同时感染（共同/ /联合）的特征联合）的特征lHDVHDV的传播途径的传播途径lHDVHDV的免疫学检测指标的免疫学检测指标l （抗（抗-HDV-HDV总抗体）总抗体）l （抗（抗-HDV IgM-HDV IgM型抗体）型抗体）

52、63lHEVHEV的特性的特性lHEVHEV的传播途径的传播途径lHEVHEV不同于不同于HAVHAVlHEVHEV感染的实验室诊断感染的实验室诊断l （抗（抗-HEV IgM-HEV IgM）l （抗（抗-HEV IgG-HEV IgG）64 ToRCH ToRCH感染感染: :l“To”“To”代表弓形体代表弓形体(toxplasma,TOX)(toxplasma,TOX)，l“R”“R”代表风疹病毒代表风疹病毒(rubella virua,RV)(rubella virua,RV)，l“C”“C”代表巨细胞病毒代表巨细胞病毒 l (cytomegalovirus,CMV) (cytome

53、galovirus,CMV)，l“H”“H”代表单纯疱疹病毒代表单纯疱疹病毒l (herps simplex virus,HSV) (herps simplex virus,HSV)。 l 一组优生优育筛选常用检测对象一组优生优育筛选常用检测对象65特异性抗体检测结果的分析特异性抗体检测结果的分析l1.IgG(-);IgM(-) (1.IgG(-);IgM(-) (未感染未感染, , 需排除窗口期需排除窗口期) ) ( (以及变异等以及变异等) )l2.IgG(-);IgM(+) (2.IgG(-);IgM(+) (感染早期感染早期, , 观察抗体转观察抗体转 归，排除非特异性等归，排除非特异

54、性等) )l3.IgG(+);IgM(-) (3.IgG(+);IgM(-) (继往感染继往感染, , 免疫功能受免疫功能受 损损, , 无反应能力者等无反应能力者等) )l4.IgG(+);IgM(+) (4.IgG(+);IgM(+) (激活感染激活感染, ,再感染再感染, ,非特非特 异性异性, ,少数高免疫状态少数高免疫状态) )66l细菌性感染：细菌性感染： 检测指标检测指标 肥达反应、肥达反应、ViVi抗体抗体 抗溶血素抗溶血素“O”“O” 抗抗-PPD IgG-PPD IgG、OTOT 微量凝集抗体微量凝集抗体l苍白螺旋体感染（梅毒）：苍白螺旋体感染（梅毒）： 检测指标检测指标

55、非梅毒螺旋体血清学试验非梅毒螺旋体血清学试验 梅毒螺旋体抗原血清试验梅毒螺旋体抗原血清试验67非梅毒螺旋体血清学试验非梅毒螺旋体血清学试验l1 1、性病研究实验室试验（、性病研究实验室试验（VDRLVDRL）l2 2、不加热血清反应素试验（、不加热血清反应素试验（USRUSR）l3 3、快速血浆反应素环状卡片试验、快速血浆反应素环状卡片试验 （RPRRPR）l4 4、甲苯胺红试验（、甲苯胺红试验（TRUSTTRUST）68梅毒螺旋体抗原血清试验梅毒螺旋体抗原血清试验l1 1、梅毒螺旋体血细胞凝集验（、梅毒螺旋体血细胞凝集验（TPHATPHA）l2 2、梅毒螺旋体明胶凝集实验（、梅毒螺旋体明胶凝

56、集实验（TPPATPPA）l3 3、荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验、荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验l （FTA-ABSFTA-ABS）l4 4、梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验、梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验l （TP-ELISATP-ELISA）l5 5、梅毒螺旋体蛋白印迹试验、梅毒螺旋体蛋白印迹试验l （TP-WBATP-WBA）69临床常见的临床常见的寄生虫寄生虫(parasitical)(parasitical)感染症感染症l 疟疾疟疾(malaria)(malaria)l 原虫原虫 阿米巴阿米巴(amoebiasis)(amoebiasis)l寄生虫寄生虫- - 卡氏肺孢子虫病卡氏肺孢子虫病 (pne

57、umocystosis) (pneumocystosis)l 蠕虫蠕虫- - 血吸虫血吸虫 (schistosomisis) (schistosomisis)l 囊虫病囊虫病(cysticercosis)(cysticercosis)l 丝虫病丝虫病(filariasis)(filariasis)等等等等70寄生虫感染的免疫学检验寄生虫感染的免疫学检验l1 1、机体抗寄生虫感染调动：巨噬细胞、粒、机体抗寄生虫感染调动：巨噬细胞、粒 细胞的吞噬，杀伤；寄生虫抗原刺激产生细胞的吞噬，杀伤；寄生虫抗原刺激产生 相应抗体，抗体相应抗体，抗体- -抗原的中和、调理及促吞抗原的中和、调理及促吞 噬；致敏噬；致敏T T细胞的直接杀伤与淋巴因子的作细胞的直接杀伤与淋巴因子的作 用等。用等。l2 2、检测则围绕虫体抗原、相应抗体、循环、检测则围绕虫体抗原、相应抗体、循环 复合物以及细胞因子等展开。复合物以及细胞因子等展开。71