《临床生物化学讲义完整版》由会员分享，可在线阅读，更多相关《临床生物化学讲义完整版（171页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义内容简介1.临床生物化学常用的检测方法2.肝胆疾病的生物化学检测3.肾脏疾病的生物化学检测4.血清脂类及脂蛋白生物化学检测山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义内容简介5.糖及其代谢物的生物化学检测6.心脏疾病的生物化学检测7.无机离子的生物化学检测8.化学比色法常见的几种类型山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义临床生物化学常用的检测方法|化学比色法|免疫比浊法|离子选择性电极电位法|电泳法山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义化学比色法l基本原理：根据比尔定律，特定波长的光通过溶液时，溶液的吸光度与溶液的浓度成正比。待测物经过一定的化学反应生成的产物，对特定波
2、长的光具有吸收峰，从而对物质进行定量检测。这是最常用的一种方法。l举例：总蛋白，白蛋白的测定山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义免疫比浊法l基本原理：抗原抗体在特殊缓冲液中快速形成抗原抗体复合物，使反应液出现浊度。当反应液中保持抗体过剩时，形成的复合物随抗原量增加而增加，浊度亦增加。如检测散射光强度则为散射比浊，如检测透过光则为透射比浊。我们所用为透射比浊l举例：前白蛋白，载脂蛋白等蛋白的测定山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义离子选择性电极电位法l基本原理：根据能斯特方程，离子选择性电极法通过检测电极表面电位的改变，比较测定电极与参比电极表面电位变化的差值大小来计算样本中离子的含量。l举例：
3、钾、钠、氯的测定山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义电泳法l基本原理：在直流电场中，带电粒子具有向带相反电极移动的现象。血清中的蛋白质为双性离子，在碱性环境中带负电荷，在电场中向正极移动。不同蛋白具有不同大小、分子量和电荷，带电荷多，分子量小则泳动快，反之则慢，从而将不同蛋白分离。l举例:血清蛋白电泳山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义思考题l简述临床生物化学常用的几种检测方法，并各举一例。山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义肝胆疾病的生物化学检测山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义1.肝脏的生理功能肝脏的生理功能1.代谢功能：三大物质（糖、蛋白质和脂类）的代谢功能：三大物质（糖、蛋白质和脂类
4、）的同化、储存和异化；核酸代谢、维生素的活化同化、储存和异化；核酸代谢、维生素的活化和储藏；激素的灭活及排泄；胆红素、胆酸的和储藏；激素的灭活及排泄；胆红素、胆酸的生成；铁、铜等金属的代谢生成；铁、铜等金属的代谢2.排泄功能：对胆红素和某些染料的排泄排泄功能：对胆红素和某些染料的排泄3.解毒功能：生物转化功能（同化、异化）解毒功能：生物转化功能（同化、异化）4.物质合成功能：凝血和纤溶因子、纤溶抑制因物质合成功能：凝血和纤溶因子、纤溶抑制因子的生成及对活性凝血因子的灭活清除子的生成及对活性凝血因子的灭活清除山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义2.肝功能实验的内容肝功能实验的内容蛋白质代谢功能检
5、查蛋白质代谢功能检查胆红素代谢检查胆红素代谢检查胆汁酸代谢检查胆汁酸代谢检查摄取、排泄功能检查摄取、排泄功能检查血清肝酶谱的检查血清肝酶谱的检查山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义蛋白质代谢功能检查蛋白质代谢功能检查肝脏是蛋白质代谢的主要的器官，许多蛋白质如白蛋肝脏是蛋白质代谢的主要的器官，许多蛋白质如白蛋白、糖蛋白、凝血因子、纤溶因子及各种转运蛋白等白、糖蛋白、凝血因子、纤溶因子及各种转运蛋白等都由肝细胞合成，当肝细胞受损时，合成上述蛋白的都由肝细胞合成，当肝细胞受损时，合成上述蛋白的功能降低，蛋白质的合成量就减少功能降低，蛋白质的合成量就减少 球蛋白虽然不是肝细胞合成，但当肝实质细胞受损，
6、球蛋白虽然不是肝细胞合成，但当肝实质细胞受损，间质细胞增生时，球蛋白的生成增加间质细胞增生时，球蛋白的生成增加因此，在肝脏疾病时，可表现出血液中蛋白质质和量因此，在肝脏疾病时，可表现出血液中蛋白质质和量的改变的改变其主要表现为白蛋白减少，纤维蛋白原减少，球蛋白其主要表现为白蛋白减少，纤维蛋白原减少，球蛋白的增多等的增多等因此，测定血清中蛋白质含量和分析其组分的变化，因此，测定血清中蛋白质含量和分析其组分的变化，可以了解肝脏蛋白质代谢的功能可以了解肝脏蛋白质代谢的功能山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义1.总蛋白、白蛋白的检测总蛋白、白蛋白的检测l总蛋白：双缩脲法总蛋白：双缩脲法l蛋白质是由许多
7、氨基酸通过肽键相互结蛋白质是由许多氨基酸通过肽键相互结合而成的，二价铜离子在碱性溶液中与合而成的，二价铜离子在碱性溶液中与蛋白中的肽发生反应形成紫红色络合物，蛋白中的肽发生反应形成紫红色络合物，在在540nm有吸收峰，并与蛋白含量有吸收峰，并与蛋白含量 成正成正比。比。l蛋白蛋白+ Cu2+ Cu 蛋白络合物（紫红色）蛋白络合物（紫红色）山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义白蛋白的检测白蛋白的检测l溴甲酚绿终点法l血清中白蛋白与溴甲酚绿在pH4.2环境中结合生成绿色复合物，溶液由黄色变为绿色，在630nm有吸收峰，其颜色深浅与白蛋白浓度成正比，从而测出白蛋白含量。l白蛋白+BCG白蛋白溴甲酚绿
8、复合物山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义与溴甲酚紫法的比较l溴甲酚绿法操作简单、快速，即可手工操作，也能自动化分析，是目前国内最常用方法。l溴甲酚绿法除与白蛋白结合外，还与部分球蛋白结合，对血清白蛋白特异性较溴甲酚紫法差l溴甲酚紫法测定白蛋白具有高特异性山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义临床意义临床意义血清总蛋白与白蛋白升高血清总蛋白与白蛋白升高急性失水、肾上腺皮质功能亢进急性失水、肾上腺皮质功能亢进血清总蛋白与白蛋白降低血清总蛋白与白蛋白降低肝细胞损害合成减少：肝炎、肝硬化、肝癌肝细胞损害合成减少：肝炎、肝硬化、肝癌总蛋白总蛋白60g/L,白蛋白白蛋白25 g/L，低蛋白血，低蛋白血症症
9、营养不良：摄入不足营养不良：摄入不足丢失过多：肾病、烧伤、大出血丢失过多：肾病、烧伤、大出血消耗增加：结核、甲亢、恶性肿瘤消耗增加：结核、甲亢、恶性肿瘤山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义血清总蛋白与白蛋白升高血清总蛋白与白蛋白升高 TP80g/L（高蛋白血症）（高蛋白血症）G35g/L（高球蛋白血症）（高球蛋白血症）慢性肝病、慢性肝病、M蛋白血症、自身免疫性疾病、慢性炎蛋白血症、自身免疫性疾病、慢性炎症和感染如结核、麻风、慢性血吸虫病症和感染如结核、麻风、慢性血吸虫病血清血清TP降低降低生理性减少（生理性减少（e.g.3y）、免疫功能抑制、先天性低）、免疫功能抑制、先天性低TPA/G倒置倒置
10、肝功能损伤、肝功能损伤、M蛋白血症。如慢性肝炎、肝硬化、蛋白血症。如慢性肝炎、肝硬化、肝癌、多发性骨髓瘤肝癌、多发性骨髓瘤山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义血清前白蛋白测定血清前白蛋白测定l免疫比浊法l标本中PAB与特异性抗体反应形成不溶性复合物，可在340nm测定该复合物的浊度，与同样处理的标准品比较，得出标本中PAB的含量。山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义临床意义临床意义l降低：营养不良、慢性感染、肿瘤、肝降低：营养不良、慢性感染、肿瘤、肝炎、肝硬化、肝癌，对早期肝炎、急性炎、肝硬化、肝癌，对早期肝炎、急性重肝具有特殊诊断价值重肝具有特殊诊断价值l升高：升高：Hodgkin病病山东省
11、千佛山医院检验科生化室系列讲义胆红素代谢检查胆红素代谢检查胆红素主要是在网状内皮系统中，由衰老胆红素主要是在网状内皮系统中，由衰老RBCRBC的血红蛋白分解后形成的血红蛋白分解后形成生成后在血液中与白蛋白聚合，此时尚未与其生成后在血液中与白蛋白聚合，此时尚未与其它化合物结合，称为非结合胆红素（间接胆红它化合物结合，称为非结合胆红素（间接胆红素或游离胆红素）素或游离胆红素）非结合胆红素被转运到肝脏，经肝细胞摄取后，非结合胆红素被转运到肝脏，经肝细胞摄取后，通过肝脏的生物转化作用，与葡萄糖醛酸结合通过肝脏的生物转化作用，与葡萄糖醛酸结合后后 称为结合胆红素（直接胆红素）称为结合胆红素（直接胆红素）
12、山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义胆红素代谢检查胆红素代谢检查结合胆红素由胆道排入肠腔，被细菌还原成尿结合胆红素由胆道排入肠腔，被细菌还原成尿胆原胆原尿胆原一部分被肠粘膜吸收进入体内被肝细胞尿胆原一部分被肠粘膜吸收进入体内被肝细胞摄取，其中大部分又转变成胆红素随胆汁排入摄取，其中大部分又转变成胆红素随胆汁排入肠腔，形成肠腔，形成“肝肠循环肝肠循环”残留肠腔的尿胆原氧化后，以粪胆素排出残留肠腔的尿胆原氧化后，以粪胆素排出因此，当胆红素生成过多或肝细胞的摄取、结因此，当胆红素生成过多或肝细胞的摄取、结合、转运、排泄等过程发生障碍，可导致血中合、转运、排泄等过程发生障碍，可导致血中胆红素增高，形成
13、黄疸。胆红素增高，形成黄疸。山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义总胆红素(T-BIL) l重氮盐法l总胆红素在强酸环境中，加入溶解剂，与重氮试剂反应，产生偶氮胆红素l胆红素+2P-苯磺基重氮1，5-萘二磺酸盐2-偶氮胆红素l生成的偶氮胆红素，在波长545nm处有一吸收峰，吸光度的变化与总胆红素含量成正比。山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义直接胆红素(D-BIL) l重氮盐法l结合胆红素可直接与重氮试剂反应，产生偶氮胆红素l直接胆红素+2P-苯磺基重氮1，5-萘二磺酸盐偶氮胆红素l生成的偶氮胆红素，引起波长545nm处吸光度的上升，吸光度的变化与直接胆红素含量成正比。山东省千佛山医院检验科生化
14、室系列讲义临床意义 l增高见于肝脏疾病，如原发性胆汁性肝硬化、急性黄疸性肝炎、慢性活动性肝炎、病毒性肝炎、阻塞性黄疸、肝硬化等。肝外疾病如溶血性黄疸、新生儿黄疸、胆石症、胰头癌、输血错误等总胆红素也增高。山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义胆汁酸测定胆汁酸测定l酶循环法l胆汁酸被3-羟基类固醇脱氢酶及Thio-NAD特异性地氧化，生成3-酮类固醇及Thio-NADH，3-酮类固醇在3-羟基类固醇脱氢酶及NADH存在下，生成胆汁酸和NAD，循环往复从而放大微量的胆汁酸量，测定生成的Thio-NADH的吸光度与标准比较，得出胆汁酸含量。山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义临床意义临床意义血清总胆汁
15、酸升高血清总胆汁酸升高肝损害：肝炎、肝硬化、肝癌肝损害：肝炎、肝硬化、肝癌胆道阻塞：胆管梗阻胆道阻塞：胆管梗阻门脉分流门脉分流山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义血清酶学检查血清酶学检查肝脏是酶含量最丰富的器官，肝细胞损肝脏是酶含量最丰富的器官，肝细胞损伤时，许多酶如伤时，许多酶如ALT、AST、GGT、ALP释放入血，导致血浆酶水平升高释放入血，导致血浆酶水平升高1.肝脏疾病时酶活力改变的机制肝脏疾病时酶活力改变的机制酶合成异常酶合成异常肝细胞释放增加肝细胞释放增加 2.分类分类山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义血清酶学检查血清酶学检查反映肝细胞病变和坏死的酶反映肝细胞病变和坏死的酶反映肝
16、、胆淤滞的酶反映肝、胆淤滞的酶反映肝纤维化的酶反映肝纤维化的酶反映肝细胞合成功能的酶反映肝细胞合成功能的酶山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义肝细胞病变和坏死的酶肝细胞病变和坏死的酶l谷氨酸氨基转移酶（谷丙转氨酶，谷氨酸氨基转移酶（谷丙转氨酶，ALT）l连续监测法连续监测法 lALT催化催化L-丙氨酸的氨基转移，生成丙丙氨酸的氨基转移，生成丙酮酸。丙酮酸与酮酸。丙酮酸与NADH在在LDH的催化下的催化下反应生成乳酸和反应生成乳酸和NAD+。NADH在在340nm处有特异吸收峰，其被氧化的速率与血处有特异吸收峰，其被氧化的速率与血清中清中ALT的活性成正比，在的活性成正比，在340nm处测处测定
17、定NADH下降速率，即可测出下降速率，即可测出ALT活性。活性。山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义天门冬氨酸氨基转移酶（谷草转天门冬氨酸氨基转移酶（谷草转氨酶，氨酶，AST）l连续监测法lAST催化L-天冬氨酸的氨基转移与MDH催化的反应偶联，使NADH氧化生成NAD+。NADH在340nm处有特异吸收峰，其被氧化的速率与血清中AST的活性成正比，在340nm处测定NADH下降速率，即可测出AST活性。山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义与赖氏法的比较l连续监测法多用于自动化生化分析仪，准确性好、精确性好l赖氏法多用于手工操作，实验条件要求不高，便于基层医疗单位开展，但重复性差，准确性差。山
18、东省千佛山医院检验科生化室系列讲义临床意义临床意义急性病毒肝炎急性病毒肝炎ALT：500-1000U/L ASTALT多见多见 一些药物或毒物所致升高：氯丙嗪、异烟肼、一些药物或毒物所致升高：氯丙嗪、异烟肼、奎宁和酒精、铅、汞、四氯化碳、有机磷中毒奎宁和酒精、铅、汞、四氯化碳、有机磷中毒山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义肝细胞合成酶肝细胞合成酶l胆碱酯酶（胆碱酯酶（AChE)l实验方法：实验方法：l临床意义：肝脏合成临床意义：肝脏合成AChE,肝实质细胞肝实质细胞损害时，损害时， AChE活力降低活力降低山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义胆道梗阻的酶胆道梗阻的酶l碱性磷酸酶（碱性磷酸酶（A
19、LP）的测定）的测定l连续监测法连续监测法 l无无色色的的对对-硝硝基基苯苯磷磷酸酸二二钠钠在在ALP作作用用下下，生生成成在在405nm处处有有特特异异吸吸收收峰峰的的淡淡黄黄色色对对-硝硝基基苯苯酚酚，通通过过测测定定在在405nm处处吸吸光光度的变化速率计算度的变化速率计算ALP活性。活性。山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义临床意义临床意义血清中的碱性磷酸酶主要来自肝脏和骨骼血清中的碱性磷酸酶主要来自肝脏和骨骼肝胆系统疾病：阻塞性黄疸、急、慢性黄疸肝胆系统疾病：阻塞性黄疸、急、慢性黄疸肝肝 炎、肿瘤引起的胆汁淤积，可增高炎、肿瘤引起的胆汁淤积，可增高520倍倍黄疸的鉴别诊断：肝外胆道阻
20、塞黄疸的鉴别诊断：肝外胆道阻塞+患者常升患者常升高高骨骼疾病：纤维性骨炎、佝偻病、骨软化病、骨骼疾病：纤维性骨炎、佝偻病、骨软化病、骨转移癌、骨折愈合期骨转移癌、骨折愈合期生理性升高：生长期的儿童和青少年生理性升高：生长期的儿童和青少年 山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义-谷氨酰转肽酶（谷氨酰转肽酶（GGT）的检测）的检测l原理：原理：GGT分布在胆管或胆道系统分布在胆管或胆道系统l连续监测法连续监测法 lr-谷谷氨氨酰酰-3-羧羧基基-对对硝硝基基苯苯胺胺和和双双甘甘肽肽在在 -GT作作用用下下，生生成成对对硝硝基基苯苯胺胺及及r-谷谷氨氨酰酰双双甘甘肽肽，所所释释放放出出的的对对硝硝基基
21、苯苯胺胺与与 -GT活活性性成成正正比比，通通过过在在405nm处处测测定定对对硝基苯胺的变化，可求出硝基苯胺的变化，可求出 -GT活力。活力。山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义临床意义临床意义l胆道阻塞性疾病，升高明显，可达胆道阻塞性疾病，升高明显，可达530倍倍l急、慢性病毒性肝炎、肝硬化急、慢性病毒性肝炎、肝硬化l酒精性肝炎酒精性肝炎l其他：脂肪肝、胰腺炎、前列腺肿瘤其他：脂肪肝、胰腺炎、前列腺肿瘤山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义其它酶类l l酶类肿瘤标志物检测酶类肿瘤标志物检测 -L-岩藻糖苷酶（岩藻糖苷酶（AFU）与原发性肝癌诊）与原发性肝癌诊断标志（断标志（81.2%），），
22、 AFP联合检测可提高肝联合检测可提高肝癌检出率癌检出率l l肝纤维化的酶学检查肝纤维化的酶学检查单氨氧化酶单氨氧化酶山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义思考题思考题1.肝损害蛋白检查的意义。2.血清酶学在肝胆疾病检查的意义。名词解释1.结合胆红素2.非结合胆红素山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义填空题1.正常成人血清总蛋白正常参考值为 ，白蛋白正常参考为 ，球蛋白正常参考为 ，A/G正常参考为 。2.临床上多用 法测定总蛋白， 法测定白蛋白。当血清总蛋白 g/L或球蛋白 g/L时，称为高蛋白血症或高球蛋白血症。3.血清蛋白电泳结果中，按泳动速度从正极起分为 、 、 、 、 。4.当胆红素生
23、成过多或肝细胞的摄取、结合、转运、排泄等过程发生障碍，可导致血中胆红素增高，从而发生 。 山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义肾脏疾病的生物化学检测山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义肾脏功能l排泄水分、代谢产物、废物，保留有用物质l调节水分和渗透压l调节电解质及酸碱平衡l制造某些重要的生理活性物质山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义肾小球功能检查l肾小球滤过率（GFR）是反映肾小球滤过功能的客观指标，用单位时间内两肾生成的超滤液量即原尿的生成量来表示l肾清除率是指双肾于单位时间（min）内，能将多少毫升血浆所含的某物质全部清除，结果以ml/min或L/24h表示山东省千佛山医院检验科生化室系
24、列讲义肾清除率山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义肾清除率可分别测定肾小球滤过率、肾血流量、肾肾清除率可分别测定肾小球滤过率、肾血流量、肾小管对各种物质的重吸收和分泌作用小管对各种物质的重吸收和分泌作用1.全部由肾小球滤出，肾小管不吸收、不分泌，如菊粉，可作为肾小球滤过率测定的理想物质，能完全反映肾小球滤过率2.由肾小球滤出，肾小管也排泌，如尿素、肌酐等，反映肾小球滤过率不如菊粉准确3.全部由肾小球滤出，又被肾小管全部吸收，如葡萄糖，可作为肾小管最大吸收率的测定4.除肾小球滤过外，大部分通过肾小管分泌排出，如对氨马尿酸等，可作为肾血流量的测定山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义1.内生肌酐清除
25、率l肌酐为肌肉中磷酸肌酸的代谢产物，是反映肾小球的滤过功能的较好指标l原理原理血浆肌酐种类：内源性和外源性血浆肌酐种类：内源性和外源性血浆肌酐的代谢：大部分从肾小球滤过，不被肾小血浆肌酐的代谢：大部分从肾小球滤过，不被肾小管重吸收，且肾小管的排泌量很少管重吸收，且肾小管的排泌量很少条件：在严格控制饮食和肌肉活动相对稳定的情况条件：在严格控制饮食和肌肉活动相对稳定的情况下，血浆肌酐的生成量和在尿中的排出量较恒定，下，血浆肌酐的生成量和在尿中的排出量较恒定，其含量的变化主要受内源性肌酐的影响其含量的变化主要受内源性肌酐的影响内生肌酐清除率（内生肌酐清除率（Ccr）：指肾单位时间内，清除）：指肾单位
26、时间内，清除多少毫升血浆中的内生肌酐多少毫升血浆中的内生肌酐山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义临床意义l判断肾小球损害的敏感指标，可较早判断肾小球损害l对肾功能的初步估价，可作为观察肾移植成功与否的客观指标，移植成功，该指标逐步回升，发生排斥，则下降l对临床治疗的指导意义l药物使用的参考l慢性肾炎临床分型的参考山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义2.血尿素氮和血肌酐的测定原理血尿素氮（BUN）和血肌酐（Scr）主要经肾小球滤过而随尿液排出，在肾实质受损时，肾小球滤过率降低，导致BUN和Scr在血中的浓度增加参考值BUN3.27.1mmol/LScr男性53106mol/L女性4497mol/
27、L山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义尿素(UREA)的测定l临床实验室常采用脲酶速率法、离子选择电极法等l脲酶速率法l脲酶催化尿素水解产生NH3和CO2。在谷氨酸脱氢酶催化下，NH3与-酮戊二酸和NADH反应生成NAD+。NADH在340nm处有特异性吸收峰，通过测定NADH下降速率与同样处理的标准比较，得出尿素含量。山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义肌酐(CREA) 的测定l氧化酶比色法l肌肝+H2O肌酸l肌酸+H2O肌酐酶肌氨酸+尿素l肌氨酸+H2O+O2氨基乙酸+H2O2+甲醛lH2O2+笨酚+4-氨基安替比林醌亚胺（红色）4H2Ol醌亚胺在500nm处有最大吸收峰，其吸光度值与CR
28、EA含量成正比。山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义与碱性苦味酸法比较l氧化酶比色法可消除假肌酐的影响山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义临床意义l各种严重肾脏疾病引起肾功能不全时可增高；l上消化道出血、严重感染和饮食中蛋白质过多，也可导致BUN暂时升高；l由于血肌酐受其他影响较小，能反映患者肾功能情况，Cr明显升高，提示预后差山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义3.血尿酸（UA）的测定原理UA是体内嘌呤代谢终产物，小部分经肝分解破坏，大部分经肾小球滤过，在近端肾小管中98-100%被重吸收，故正常情况下UA的清除率较低山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义酶比色法尿酸酶催化UA氧化生成尿囊素和
29、H2O2，过氧化氢在过氧化物酶的存在下与笨酚、4-氨基安替比林氧化缩和成红色醌式染料，此染料在500nm处有最大吸收峰，其吸光度值与UA含量成正比。临床意义血液尿酸增高常见于肾脏疾病、痛风、子痫、白血病与肿瘤J及其他疾病如慢性铅中毒引起的肾损害、长期禁食等山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义4. 2-微球蛋白原理2-M在体内主要由淋巴细胞产生的一种小分子蛋白，正常人血中2-M浓度很低，可自由通过肾小球，然后在近端肾小管几乎被全部重吸收山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义l免疫比浊法2-MG与特异性抗体反应形成不溶性复合物，可在340nm测定该复合物的浊度，与同样处理的标准品比较，得出血清中2-
30、MG的含量。山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义临床意义l尿液2-M升高是反映近端小管受损的非常灵敏和特异的指标l肾小球滤过功能下降时，血2-M水平升高山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义胱氨酸蛋白酶抑制剂c的检测lCystatinC有核细胞合成，有稳定的生成率，既使在急性炎症反应期生成亦不受影响，经肾小球自由滤过，在肾近曲小管几乎被完全重吸收并降解，无肾小管分泌，因此其血浓度取决于肾小球虑过率，是反映肾小球虑过率的灵敏标志物l测定方法：免疫透射比浊法l临床意义：CystatinC几乎不受肾前因素的影响，也没有肾外的排泄途径，是判断肾小球滤过功能的早期诊断指标之一山东省千佛山医院检验科生化室系
31、列讲义尿液酶的测定尿液中含有数十种酶l血清酶进入尿液：当肾小球滤过增加而肾小管重吸收功能紊乱，血清酶进入尿液，活性增强l细胞酶释放入尿液：肾小球病变、肾小管细胞破坏，间质炎症等使细胞破坏，细胞酶释放入尿液使溶酶体酶增加l泌尿生殖系统肿瘤、炎症、红细胞、细菌等也可使尿酶增加常见的测定酶lN-乙酰-氨基葡萄糖（NAG）、LDH、-谷氨酰转移酶、溶菌酶山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义思考题填空题1. 是反映肾小球滤过功能的客观指标，它用 来表示。3.血尿酸是体内 终产物，小部分经肝分解破坏，大分部经 滤过，在 中98-100%被重吸收，故正常情况下尿酸的清除率较低。4.正常人血2-微球蛋白的参考
32、值是 。 山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义单选题1.尿酶法测定血清中尿素时，加脲酶后尿素水解首先产生（）A.氨和谷氨酸B.谷氨酸及CO2C.CO2及氨D.谷氨酸及CO2E.硫酸铵2.尿液中不受饮食和尿量影响，排出量最为恒定的是（）A.肌酸B.肌酐C.尿素D.尿酸E.以上均不是3.临床上血中尿酸高的疾病应除外（）A.痛风B.肾功能损害C.白血病D.恶性肿瘤E.肝硬化山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义血清脂类及脂蛋白生物化学检测山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义概述l血浆脂类包括游离胆固醇（FC）、胆固醇酯(CE)、磷脂（PL）、甘油三酯（TG）、糖脂和游离脂肪酸（FFA）等l血浆中最多的
33、脂质为胆固醇、PL和TG，游离胆固醇和胆固醇酯称为总胆固醇l血浆脂类以脂蛋白复合体的形式存在l血浆脂蛋白分类：CM、VLDL、IDL、LDL、HDL和Lp(a)山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义l磷脂磷脂l游离脂肪酸（游离脂肪酸（FFA）FFA与与Alb结合结合其它均包含在脂蛋白中其它均包含在脂蛋白中l胆固醇l甘油三酯山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义超速离心法与电泳法分离血浆脂蛋白超速离心法与电泳法分离血浆脂蛋白山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义1.血清胆固醇测定CHl酶比色法（Trinder反应）l胆固醇酯在胆固醇酯酶的作用下分解生成胆固醇，胆固醇醇在胆固醇氧化酶及过氧化物酶作用下最
34、终生成红色醌类化合物，红色醌类化合物颜色深浅与胆固醇的浓度成正比。(波长500nm）山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义临床意义 l胆固醇的监测用于评估罹患动脉硬化的风险以及对脂类/脂蛋白的代谢紊乱进行诊断和监测治疗。l增高见于糖尿病昏迷患者，还常见于原发性高胆固醇血症、动脉粥样硬化、肾病综合征、总胆管阻塞、粘液性水肿、肥大性骨关节炎、老年性白内障、牛皮癣等。l降低见于恶性贫血、溶血性贫血、甲状腺功能亢进、感染、营养不良、肝硬化、急性肝坏死等。山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义2.甘油三脂TGl磷酸甘油氧化酶法（Trinder反应）l甘油三脂在脂肪酶、甘油激酶等酶的作用下，生成3-磷酸甘油，
35、再经磷酸甘油氧化酶（GPO）氧化生成磷酸二羟丙酮和过氧化氢，过氧化氢与4-氨基安替比林在过氧化物酶作用下生成红色醌类化合物。其显色程度与TG成正比。（波长500nm）山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义临床意义 l血中的甘油三酯以乳糜微粒和前-脂蛋白中含量最高，它与动脉粥样硬化的形成密切相关，甘油三酯的升高与冠心病的发生也有很大关系。l增高：脂肪肝、阻塞性黄疸、动脉粥样硬化、高脂血症等l降低：严重肝衰、甲状腺功能减退等山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义3.高密度脂蛋白胆固醇（HDL）l一般通过HDL-C亚型含量间接反映HDL水平l化学修饰酶法l胆固醇酯酶(CHER)和胆固醇氧化酶(CHOD)
36、经化学修饰后，对LDL、VLDL、乳糜微粒中的胆固醇反应性降低，仅对高密度脂蛋白中的胆固醇起作用。山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义临床意义lHDL-胆固醇参与体内胆固醇酯逆转运，起到抗动脉粥样硬化作用，所以是冠心病的保护因子。HDL-胆固醇水平与AS性心、脑血管疾病发病率成负相关。HDL-C:CHOL能更好的预测心、脑动脉粥样硬化的危险性。l肝损害和肾病综合征时，HDL-C降低山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义4.低密度脂蛋白胆固醇（LDL）lLDL是血清中携带胆固醇的主要颗粒lLDL向组织及细胞内运送胆固醇，直接促使动脉粥样硬化l选择性溶解法l试剂中添加仅使LDL溶解的表面活性剂，LD
37、L之外的脂蛋白（HDL、VLDL、乳糜微粒）由于受表面活性剂和糖化合物的阻碍而不能参与反应，在反应液中以脂蛋白形式残存。山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义临床意义lLDL水平升高与冠心病的发生呈正相关山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义5.载脂蛋白A1lApo-A1是HDL的主要载脂蛋白成分（90%）lApo-A1有清除组织内脂质和抗粥样动脉样硬化作用临床意义lApo-A1血清水平与冠心病发病率负相关山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义6.载脂蛋白BlApo-B是LDL的主要载脂蛋白（98%）l是动脉粥样硬化的风险指标临床意义lApo-B水平与动脉粥样硬化和冠心病正相关l胆汁淤积也可使血清A
38、po-B升高山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义载脂蛋白的测定方法l免疫透射比浊法l血清中载脂蛋白的与试剂中相应单克隆抗体相结合，形成抗原抗体复合物，产生混浊，其浊度的高低与血清中APOA-1成正比。山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义7.脂蛋白a(Lpa)l免疫透射比浊法l人血清中Lp(a)与试剂中相应的特异性单克隆抗体在适当的介质中，形成抗原-抗体复合物，产生一定的浊度，浊度的高低在足量抗体存在时与抗原的含量成正比。l临床意义：Lp(a)动脉粥样硬化的独立危险因素。山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义游离脂肪酸FFAl酶比色法l游离脂肪酸在乙酰辅酶A合成酶(ACS)和乙酰辅酶A氧化酶(AC
39、O)的作用下，.生成过氧化氢（H2O2）。生成的过氧化氢（H2O2）在过氧化酶和显色剂的作用下产生美兰，美兰在一定光波长具有吸收峰，吸光度的大小与游离脂肪酸的浓度成正相关。山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义临床意义l游离脂肪酸的代谢受脂肪代谢、糖代谢和内分泌的影响，与胰岛素抵抗有关。l其含量升高表示患有糖尿病、甲状腺机能抗进症、肢端肥大症和重症肝功能障碍等疾病。l含量降低表示患有甲状腺机能低下、下垂体功能不全和阿狄森氏病（Addison）等疾病。山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义思考题l甘油三脂和胆固醇的测定方法是什么l那种胆固醇与心血管疾病正相关？哪种负相关？山东省千佛山医院检验科生化室
40、系列讲义临床生物化学讲义（二）山东省千佛山医院 检验科 张丽zhanglisdhospital山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义内容简介1.临床生物化学常用的检测方法2.肝胆疾病的生物化学检测3.肾脏疾病的生物化学检测4.血清脂类及脂蛋白生物化学检测山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义内容简介5.糖及其代谢物的生物化学检测6.心脏疾病的生物化学检测7.无机离子的生物化学检测8.化学比色法常见的几种类型山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义糖及其代谢物的生物化学检测|血糖及血糖浓度的调节|糖尿病|糖及其代谢物的生物化学检测|糖尿病自身抗体的检测山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义血糖及血糖浓度的
41、调节血糖主要是指血中的葡萄糖，正常人血糖浓度相对恒定在3.896.11mmol/L范围内。通过体内相关激素对血糖的调节，使血糖的来源与去路保持动态平衡。山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义血糖及血糖浓度的调节血糖的来源：碳水化合物的消化和单糖的吸收糖原的分解糖异生血糖的代谢去路有氧氧化产生能量（ATP），是血糖去路的主要途径合成糖原转换成甘油三酯、蛋白质或氨基酸等其它非糖物质当血糖浓度高于肾糖阈时，从尿中排出山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义糖尿病定义：糖尿病是由于与胰岛素分泌绝对或相对不足和(或)胰岛素抵抗而引起的代谢性疾病，其特征是高血糖症l糖尿病的分型1型糖尿病：由于胰岛B细胞破坏引起
42、的胰岛素分泌绝对不足，具有酮症酸中毒倾向2型糖尿病；由于患者胰岛B细胞对胰岛素不敏感，即胰岛素抵抗特殊类型的糖尿病妊娠期糖尿病山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义糖尿病的诊断出现糖尿病症状，随机血糖（RPG）11.1mmol/L空腹血糖（FPG）7.0mmol/L，空腹指最少8h内无热量食物的食入口服葡萄糖耐受试验（OGTT），血浆葡萄糖（2hPG）11.1mmol/L这三种方法可单独用来诊断糖尿病，任何一种出现阳性必须用三种中任意一种复查才能正式确诊山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义糖尿病的诊断l若OGTT-2h血糖7.8mmol/L(140mg/dl)但11.1mmoi/L(200mg/
43、dl)，FPG7.0mmol/L(140mg/dl)可以诊断为糖耐量低减(IGT).l若FPG6.1mmol/L(110mg/dl)8.0%为比HbAlc增高l临床意义：l可为较长时间段的血糖提供回顾性评价，不受短期血糖浓度的影响，主要用于评估血糖控制情况山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义糖尿病自身抗体的检测l谷氨酸脱羧酶抗体谷氨酸脱竣酶抗体(glutamicacid，decarboxylaseantibodlesGAD一Ab)是胰岛细胞自身免疫反应的特异性标志。正常成人GAD一Ab为阴性(酶免法)。在糖尿病发病前期和发病时的阳性率一般都很高为60%一80%最高可达96%而在2型DM中仅为3
44、.2%。GAD一Ab测定对迟发性成人自身免疫性糖尿病(LADA)的鉴别诊断具有决定性意义，其灵敏度为76%特异性为88%优于胰岛细胞抗体山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义糖尿病自身抗体的检测l胰岛细胞抗体胰岛细胞抗体(lsletCellautoantibodiesICAS)主要为具有补体结合活性的lgG类抗体。正常成人ICAs为阴性(酶免法)。ICAS在新诊断为1型DM病人中阳性率为70%一90%.发病1一2年内阳性率达85%，1型糖尿病儿童阳性率可达94%。随着病情迁延阳性率逐渐下降。2型DM阳性率仅为5%一10%。有研究表明ICAs阳性者中有61%在5年内可发展成为1型糖尿病。其与GAD
45、一AB相比在发病前期其阳性率较低故对1型DM发病的预测价值不如GAD一Ab山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义糖尿病自身抗体的检测l胰岛素抗体胰岛素抗体insulinautoantibodies，IAA可阻止胰岛素发挥生物学活性，是产生胰岛素抵抗的重要原因。正常成人IAAs为阴性(酶免法)。IAAs阳性通常见于接受异源性胰岛素治疗的病人，在新诊断为1型DM病人中IAA也可出现在发病前，但其对1型DM发病的预测价值不如GAD一Ab和ICAs。IAA多见于5岁以下儿童病人，且常呈高滴度。山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义思考题一、A型题：1.胰岛素由何种细胞分泌（）A.胰岛细胞B.胰岛细胞C.胰
46、腺细胞D.胰岛细胞和细胞E.皆不是2.胰岛素的化学本质是（）A.蛋白质B.类固醇C.氨基酸衍生物D.脂肪酸衍生物E.核苷酸3.胰岛素在体内的生物半寿期为（）A.510秒钟B.510分钟C.510小时D.510天E.510月山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义思考题5.有关1型糖尿病的叙述错误的是（）lA.胰岛细胞的破坏B.胰岛素绝对不足C.常见于青少年lD.常检出自身抗体E.胰岛素抵抗l6.有关2型糖尿病的叙述错误的是（）lA.胰岛细胞的功能减退B.胰岛素相对不足C.常见于肥胖的中老年成人lD.常检出自身抗体E.胰岛素抵抗l7.有关果糖胺的叙述错误的是（）lA.主要是测定糖化清蛋白B.所有糖化
47、血清蛋白都是果糖胺lC.反映过去23周的平均血糖水平D.可替代糖化血红蛋白山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义思考题lE.是糖尿病近期控制水平的监测指标l8.当血糖超过肾糖阈值时,可出现（）lA.生理性血糖升高B.病理性血糖升高C.生理性血糖降低lD.病理性血糖降低E.尿糖l9.测定血糖的标本最常采用的抗凝剂和防腐剂组合是（）lA.碘乙酸钠-EDTA.Na2B.叠氮钠-肝素锂C.氟化钠-草酸钾lD.氟化钠-肝素钠E.冰醋酸-肝素l10.随机血糖的参考值范围为（）lA.2.87.8mmol/LB.3.896.11mmol/LC.4.55.9mmol/LlD.7.011.1mmol/LE.11.1
48、mmol/L山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义思考题l二、B型题：lA.己糖激酶法lB.葡萄糖氧化酶法lC.Follin-Wu法lD.邻甲苯胺法lE.同位素稀释质谱分析法l1.血糖测定的常规方法是（）l2.血糖测定的参考方法是（）lA.尿硝酸盐lB.血浆白蛋白山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义思考题lC.尿酮体lD.全血乳酸lE.胰岛素抗体l3.怀疑糖尿病酮症酸中毒时需检测（）l4.1型糖尿病常伴有哪一指标阳性（）l5.怀疑糖尿病乳酸酸中毒时需检测（）l三、X型题：l1.影响糖代谢的激素有（）lA.胰岛素B.胰高血糖素C.肾上腺素D.生长激素山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义思考题lE.
49、皮质醇F.甲状腺激素G.生长抑素l2.升高血糖的激素有（）lA.胰岛素B.胰高血糖素C.肾上腺素D.生长激素lE.皮质醇F.甲状腺激素G.生长抑素l3.胰高血糖素的生理作用有（）山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义思考题lA.促进肝糖原分解B.促进糖异生C.促进脂肪动员lD.促进肝脏生成酮体E.抑制胰岛素释放l4.最新的按病因将糖尿病分为以下几类（）lA.型糖尿病B.型糖尿病C.1型糖尿病D.2型糖尿病lE.特殊类型的糖尿病F.妊娠期糖尿病G.糖耐量异常山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义思考题l5.有关糖化血红蛋白的叙述正确的是（）lA.包括HbA1和HbA0lB.糖化血红蛋白的形成是不可逆
50、的lC.反映过去68周的平均血糖水平lD.用胰岛素治疗的糖尿病人，应将糖化血红蛋白作为常规检测指标lE.是最长期的糖尿病控制指标l6.胰岛素对糖代谢调节的主要作用有（）lA.促进肌肉、脂肪细胞摄取葡萄糖lB.促进糖原合成，减少糖原分解lC.促进糖氧化分解，加速糖的利用D促进糖转变为脂肪，减少脂肪分解lE.抑制糖异生作用l7.具有促进糖异生作用的激素有（）lA.胰岛素B.胰高血糖素C.肾上腺素D.糖皮质激素E.生长激素山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义思考题l四、名词解释：糖尿病l五、问答题：1.简述2001年颁布的糖尿病诊断标准。2.简述在糖尿病的临床诊断上检测C肽比胰岛素好的理论依据？山东
51、省千佛山医院检验科生化室系列讲义心脏疾病的生物化学检测|概述：在我国，冠状动脉硬化性心脏病，简称冠心病和脑血管病是城市人口的前三位死因，是严重威胁人类健康的重要疾病，其病理组织学基础都为动脉硬化。检验医学在预防动脉硬化的存在、严重程度及判断心肌损伤方面都能为临床提供重要而有用的信息，使心血管病学重要组成部分。山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义心脏疾病的生物化学检测l组成：与生物化学有关的冠心病危险因素急性心肌损伤的生物化学标志物山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义与生化有关的冠心病危险因素l血脂：血脂危险水平临床首选TC，HDL-C和TG作为冠心病辅助诊断指标l炎症：超敏C反应蛋白（hsCR
52、P）被看作冠心病的独立危险因素。在心梗发生3h，中风后12h可测到升高的CRPl凝血因子：冠脉内血栓形成是冠心病发展加剧的主要因素之一，主要危险因素有：纤维蛋白原（FB）、凝血因子和血浆纤溶酶原激活抑制剂（PAI-1）山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义急性心肌损伤的生物化学标志物l近几年，一致认为肌红蛋白和CK-MB亚型是急性心肌梗死早期标志物，肌钙蛋白是心肌损伤的确诊标志物。具体包括心肌酶学心肌肌钙蛋白（包括cTnT和cTnI）肌红蛋白Mb山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义心肌酶学的检测l谷草转氨酶(AST/GOT)l乳酸脱氢酶(LDH)l乳酸脱氢酶同工酶I（LDH-1）l-羟丁酸脱氢酶
53、（-HBDH）l肌酸激酶（CK）l肌酸激酶同工酶（CK-MB）山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义谷草转氨酶(AST/GOT)的测定l试验方法：速率法lAST作用于底物天冬氨酸和-酮戊二酸生成谷氨酸和草酰已酸，后者与还原型辅酶I（NADH2）在苹果酸脱氢酶的作用下生成苹果酸和氧化型辅酶I（NAD+）,监测340nm波长下NADN2吸光度的下降速率，计算AST的活性。山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义谷草转氨酶(AST/GOT)的测定l临床意义：lAST广泛存在于人体多种组织器官中，以心肌和肝脏含量最高，血清中AST升高主要见于心脏和肝脏疾病。在急性心肌梗死时，8-12小时开始生高，48-60
54、小时达峰值，最高可达正常的10倍以上，4-5天恢复正常。l在急、慢性肝炎及大面积肝细胞受损时，AST和ALT均可升高，主要是ALT升高，当两种酶都升高，且AST大于ALT时，表示肝脏损伤严重。山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义谷草转氨酶(AST/GOT)的测定l肌损伤、皮肌炎、进行性肌营养不良、大面肾或肺梗塞、急性胰腺炎、溶血性贫血、烧伤均可以使AST升高。l注意事项：l溶血干扰AST测定，可引起不同程度的升高，因此标本严禁溶血。l抗凝剂对酶的活性有抑制作用，尤其是草酸盐和EDTA类的抗凝剂。山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义乳酸脱氢酶(LDH)的测定l试验方法：速率法l试验原理：lLDH
55、作用于底物乳酸和NAD+生成丙酮酸和NADH2，监测340nm波长下NADH2吸光度的上升速率，计算LDH的活性。山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义乳酸脱氢酶(LDH)的测定l临床意义：lLDH广泛存在于人体多种组织器官，急性心肌梗死发病12-24小时开始升高，48-72小时达峰值，一般为正常的5-6倍，最高可达10倍以上，可持续10天左右。l心衰和心包炎伴肝淤血、严重休克和重度贫血和未治疗的贫血、白血病（特别是M5型）l时可中度升高。山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义乳酸脱氢酶(LDH)的测定l皮肌炎等肌肉损伤性疾病时也可以升高。l中毒性黄疸和传染性单核细胞增多症可显著升高。l50%LD
56、H升高的病例与恶性肿瘤有关，尤其是腹腔和肺部肿瘤，因此测定这些部位的流出液的LDH活性更有意义。l1/3的肾病患者血清LDH也可以升高。山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义乳酸脱氢酶(LDH)的测定l注意事项：l红细胞内含有大量LDH，因此标本严禁溶血。l抗凝剂对酶的活性有抑制作用，尤其是草酸盐和EDTA类的抗凝剂山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义乳酸脱氢酶同工酶I（LDH-1）l乳酸脱氢酶是由M亚单位和H亚单位组成的四聚体，根据不同亚单位含的比例不同构成5种同工酶，心脏、肾脏和红细胞所含的同工酶比例相近，以LD1和LD2为主l试验方法：化学抑制法l试验原理：l用硫氰酸胍选择性的抑制带M亚基
57、的乳酸脱氢酶同工酶（LDH2-5）活性，以速率法测定LDH活性即为LDH1的活性。山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义乳酸脱氢酶同工酶I（LDH-1）l临床意义：心肌组织主要含有LDH1,心肌损伤时LDH1从心肌细胞溢出而使血清中此酶活性升高，有时LDH1的升高会早于总LDH。l其他组织也含LDH其他同工酶，因此总LDH升高,而LDH1不升高，可以排除心肌损伤性疾病。l同LDH相比，更具有器官的特异性，可以较好的反映和心肌损伤，并与其他组织器官损伤鉴别。l注意事项：同LDH测定。山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义-羟丁酸脱氢酶（-HBDH） l试验原理：l以-酮丁酸取代丙酮酸与NADH2为底
58、物在LDH1的作用下生成-羟丁酸和NAD+，监测340nm波长下NADH2吸光度下降的速率，计算LDH1的活性即为-HBDH活性。l临床意义：同LDH1测定。l注意事项：同LDH1测定。山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义肌酸激酶（CK）l试验方法：速率法l试验原理：lCK作用于底物磷酸肌酸和ADP生成肌酸和ATP，后者与葡萄糖在己糖激酶（HK）的作用下生成葡萄糖-6-磷酸（G-6-P）和ADP，G-6-P氧化型辅酶II在葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G-6-PDH）作用下生成6-磷酸葡萄糖和还原型辅酶II（NADPH2），监测340nm波长下NADPH2吸光度的上升速率，肌酸CK活性。山东省千佛山
59、医院检验科生化室系列讲义肌酸激酶（CK）l临床意义：l急性心肌梗死时升高，一般在发生梗死后4-6小时开始升高，24小时达峰值，且升高的幅度比AST和LDH大，3-4天恢复正常。l重体力劳动、肌肉损伤、皮肌炎、系统性红斑狼疮、假性肥大性肌营养障碍、心肌炎、脑血管疾病、甲状腺功能低下、长期肌肉注射都会引起此酶升高。l儿童较成人轻度升高，一般出生后24小时迅速升高，可达正常成人的2-5倍，14-20天开始下降，6岁后逐渐降至成人水平。l4甲状腺功能亢进的病人可降低。山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义肌酸激酶同工酶（CK-MB） lCK是由M和B两种亚基组成的二聚体，共有三种同工酶，CK-MB在心肌
60、中所占的比例最高l试验方法：免疫抑制法l试验原理：l以CK-M亚基作抗原免疫动物制备的CK-M抗体加入CK试剂I中，与待测样本中的CK-M亚基发生抗原抗体反应而使其失去活性，再加入CK试剂II启动CK反应，测得的CK活性为CK-B亚基的活性。由于正常人血清中CK-BB活性几乎为零，因此将CK-B活性结果乘以2即为CK-MB活性。山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义肌酸激酶同工酶（CK-MB）l临床意义：肌酸激酶同工酶（CK-MB）lCK-MB主要存在于心肌细胞，因此在急性心肌梗死时升高明显。急性心肌梗死发病4小时开始升高，24小时达峰值，48小时可降至正常水平，比CK总活性更特异，CK-MB活
61、性大于CK总活性5%即有诊断意义。山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义肌酸激酶同工酶（CK-MB）l巨CK和线粒体同工酶（CK-Mt）干扰CK-MB测定，可使该方法测定的CK-MB假性升高，有时甚至会出现大于总活性。其主要原因是：巨CK是由于IgG与CK结合后使得酶的构型发生改变，CK-M抗体无法与CK-M亚基结合；CK-Mt是由两种相同亚基组成的二聚体，氨基酸组成和氨基末端的氨基酸与CK-M亚基不同，因此CK-M亚基也无法与之发生免疫反应，而不能抑制其活性，测定结果再乘以2，就会出现CK-MB假性升高，甚至高于总活性的情况。一般CK-MB活性大于总活性的30%就应该考虑上述原因。山东省千佛山
62、医院检验科生化室系列讲义思考题l一、A型选择题l1下列危险因素中，哪种指标可更准确地预报冠心病发生（）lA.TCB.TGC.HDL-CD.TCHDL-Cl2.有关CRP的描述下列哪项不正确()lA.是炎性淋巴因子刺激肝脏和上皮细胞合成,感染、创伤、手术可导致升高。lB.CRP的升高反映了动脉硬化存在低度的炎症过程和粥样斑块的脱落。lC.在AMI发生后6h在血中才能测得升高的hsCRP。lE.AMI患者中hsCRP和TC/HDL-C联合分析，可大大提高预测冠心病的准确性。山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义思考题l3.动脉血栓形成的主要危险因素中，下列哪项指标除外（）lA血浆纤维蛋白原B.血浆凝
63、血活酶转变加速素lC.凝血因子D.血浆纤溶酶原激活抑制剂l4.下列哪项不是冠心病的确定危险因素()lA.纤维蛋白原增高B.C-反应蛋白增高lC.HDL增高D.凝血因子异常l5.下列哪项指标通常被作为心肌损伤确诊标志物()lA.CKB.CK-MBC.LD1D.CTnl6.下列哪项不属于传统心肌酶谱检测指标()山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义思考题lA.CK-MBB.LD1C.CKD.CTnl二、X型选择题l1.目前作为冠心病辅助诊断的首选指标是()lA.LP(a)B.TCC.HDL-CD.TGl2.动脉血栓形成的主要危险因素是()lA.血浆纤维蛋白原B.凝血因子lC.血浆纤溶酶原激活抑制剂D
64、.饮酒l3.众多冠心病危险因素中,最有价值的可及早预防和治疗的指标是()lA.吸烟B.高血脂C.C反应蛋白D.凝血因子异常山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义思考题l4.目前国内外一致认为可作为急性心肌梗死早期诊断标志物的是()lA.ASTB.肌红蛋白C.CK-MB亚型D.LDl5.传统心肌酶谱包含下列哪种指标()lA.LD1B.CKC.MbD.CK-MBl6.目前作为心肌损伤确诊标志物的是（）lA.CTnB.CKC.MbD.LD1l四、问答题l.简述心肌酶谱及其特性。l简述巨CK现象及其原因山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义无机离子的生物化学检测|体液中的电解质概述|何谓微量元素|无机离子
65、的生物化学检测山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义体液中的电解质概述l体液中存在的离子称为电解质，具有维持体液渗透压的作用，保持体内液体的正常分布。阳离子有钠（Na+）、钾（K+）、钙（2+）和镁（2+），阴离子主要有氯（Cl-）、碳酸氢根（HCO3-）、磷酸根、硫酸根及有机阴离子。山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义体液中的电解质概述l体液电解质分布及平衡l细胞外液的主要阳离子和阴离子为Na+和Cl-，而K+却主要分布在细胞内液，这种分布主要依赖于细胞膜上的钠钾泵的主动转运功能。钠钾泵将Na+从细胞内泵出到细胞外，同时将细胞外的钾收回到细胞内。因此，钠钾泵在维持细胞内外电解质浓度的平衡起着重
66、要的作用。山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义体液中的电解质概述l阴离子间隙是指细胞外液中所测的阳离子总数和阴离子总数之差，计算为：AG=（Na+K+）（Cl-+HCO3-）。l渗透压指支配生物膜两侧水穿过膜，使其达到一定平衡的压力mOsm/kg（水）=1.86（Na+）mmol/L+葡萄糖mmol/L+尿素mmol/L+9山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义体液中的电解质概述l电解质排斥效应l指的是血浆中固体物质部分（血脂和蛋白质）约占总体血浆的7%，而水相只占93%，电解质都在水相中存在。因固体物质改变，引起水相改变，使电解质结果不真实。山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义何谓微量元素l微
67、量元素是指占人体总重量1/10000以下，每人每日需要量在100mg以下的元素。人体常见的必需微量元素有铁、铜、锌、锰等山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义无机离子的生物化学检测l血清钾的测定l血清钠的测定l血清氯的测定l血清二氧化碳的测定l血清钙的测定l血清磷的测定l血清铁的测定l血清镁的测定山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义血清钾的测定l实验名称：血清钾（K+）l实验方法：离子选择电极间接法l实验原理：利用电极表面电位的改变，比较测定电极与参比电极表面电位变化的差值来计算样本中K+的浓度。l注意事项：溶血或延迟分离血清可使血清钾浓度升高，应及时分离血清，置于有塞试管内冰箱保存。山东省千佛
68、山医院检验科生化室系列讲义血清钾的测定l临床意义：1.增高排钾减少。如急、慢性肾功能衰竭、盐皮质激素缺乏、少尿症、尿路阻塞、排泄困难等。释放过多。如严重急性容血，呼吸性和尿毒症性酸中毒，组织分解亢进（创伤，手术感染或瘤组织大量坏死等）。肾上腺皮质功能减退。山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义血清钾的测定补钾过多。如大剂量应用青霉素盐，长期应用潴钾利尿剂以及输入过多久存的库血等。血清钾大于7mmol/L可引起严重的肌肉、心肌甚至呼吸肌抑制、如心跳缓慢、心电图异常、心室纤颤或心停搏等；神经肌肉效应为震颤，感觉异常、软弱、甚至迟缓性麻痹等。、山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义血清钾的测定降低摄入不
69、足。如长期禁食、厌食或少食而未补钾。丢失过多。胃肠道失钾是严重致死性低钾血症的重要原因。肾丢失+可由于原发的肾小管疾病或肾外性疾病。增加肾丢失+的因素有：尿流速增快。释入远曲小管的+增多或难以重吸收的阴离子增多。碱血症。高醛固酮血症。钾负荷增多等。钾向细胞内转移也可引起低钾血症，如碱中毒、钡中毒、周期性麻痹和服多量胰岛素与葡萄糖。低血钾影响神经、肌肉兴奋性，表现为室上性心动过速、心传导阻滞、室性期外收缩和室性心动过速，便秘、腹胀、肌无力等。如果血+低于/可有明显肌肉坏死。山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义血清钠的测定l实验名称：血清钠（+）l实验方法：离子选择电极间接法l实验原理：利用电极表
70、面电位的改变，比较测定电极与参比电极表面电位变化的差值来计算样本中+的浓度。山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义血清钠的测定临床意义：增高：肾上腺皮质功能亢进、垂体前叶肿瘤、脑外伤、脑血管意外等。过度补钠，且伴有肾功能不全。原发性醛固酮增多症。高渗性脱水主要见于水排出过多而无相应的钠丢失，如水样泻、尿崩症、大汗和换气过度等。糖尿病人也可由于尿排出过多而造成高钠血症。山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义血清钠的测定.降低：肾外因素：可由于呕吐、腹泻、肠瘘、胃肠吸收、大量出汗、烧伤、出血等引起。由于伴有不同比例的水丢失，在钠丢失大于水丢失时才出现低钠血症。肾性因素：如渗透性利尿、服用利尿剂或肾上腺
71、功能低下及肾生成减少所生成减少所致的醛固酮形成过少以及急、慢性肾功能衰竭或失血性肾病。由于钠丢失过多，使体内钠减少，若水丢失小于钠丢失则出现低钠血症。山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义血清钠的测定低钠血症还可见于总体钠不缺乏，但因抗利尿激素分泌过多或分解灭活缓慢，使肾小管重吸收水分增多，出现稀释性低钠血症。临床上还有高张性低钠血症，即细胞外液（）中有高浓度的蛋白质，葡萄糖或脂质，使渗透压增高，因此，细胞内水分向细胞外转移可使钠被稀释而表现为低钠血真症，此型无细胞水肿表现，反而有神经细胞脱水的症状。山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义血清氯的测定l实验名称：血清氯（-）l实验方法：离子选择电极
72、间接法l实验原理：利用电极表面电位的改变，比较测定电极与参比电极表面电位变化的差值来计算样本中Cl-的浓度。山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义临床意义：.增高：急性或慢性肾小球肾炎所致的肾功能不全或尿道输尿管梗阻及心功能不全时，肾脏排泄氯化物减少，使血清氯化物浓度增高。氯化钠摄入过量，如静脉输入过量氯化物等。过度换气所致的呼吸性碱中毒，如癔病或某些药物刺激呼吸中枢等。脱水症，失液大于失盐，氯离子相对浓度增高。血清氯的测定山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义.降低：严重呕吐、腹泻或造瘘时，丢失大量含氯的胃肠液、胰液、胆汁等。慢性肾上腺皮质功能和肾功能不全，因排尿过多而丢失大量氯化物。长期应用某
73、些利尿剂如氯噻嗪类，以及大量出汗均可丢失过多的氯离子。长期饥饿或无盐饮食使氯摄入不足。严重糖尿病，因排尿过多，同时有酸中毒也可造成低氯血症。低钠血症常伴有低氯血症，如无呕吐或其他过多丢失氯的原因时，血清氯化物浓度降低多为水的稀释所致。血清氯的测定山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义血清二氧化碳的测定l实验方法：酶法l实验原理：HCO3-与磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶PEP反应产生草酰乙酸和磷酸盐草酰乙酸在苹果酸脱氢酶催化下，氧化NADH成NAD+，NADH的消耗引起在340nm附近的吸光度的降低，这种变化率与标本中的HCO3-的浓度成正比山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义l临床意义：增高：l代谢性
74、碱中毒，如幽门梗阻引起的呕吐而致胃酸大量丧失、肾上腺皮质功能亢进及肾上腺素使用过多、缺钾及服用碱性药物过多等。l呼吸性酸中毒，如呼吸道阻塞、重症肺气肿、肺实质、肺纤维化、支气管扩张、气胸、肺气肿、肺性脑病等。减低：l代谢性酸中毒，如糖尿病酮症、尿毒症、休克、严重腹泻、重度脱水、慢性肾上腺皮质功能减退等。l呼吸性碱中毒，如呼吸中枢兴奋、呼吸增快、换气过度等。血清二氧化碳的测定山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义血清钙的测定l实验方法：邻甲酚肽络合酮（CPC）比色法l实验原理：CPC是一种金属复合染料，它与+在碱性溶液中形成紫红色鳌合物，检测570nm处的吸光度值，与标准物比较计算标本中+的浓度。
75、山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义l临床意义：.增高：甲状旁腺功能亢进，因甲状旁腺素能使骨盐溶解，释放血液，并促进肾小管对钙的重吸收。骨肿瘤，如多发性骨髓瘤或骨转移癌等。急性骨萎缩、骨折、肢体麻痹等。大量应用维生素治疗。血液内二氧化碳张力增加的疾病，如肺气肿、慢性肺功能不全等。肾上腺皮质功能减退。血清钙的测定山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义.减低：甲状旁腺功能减退。维生素缺乏症。婴儿手搐搦症及骨质软化症。钙或维生素摄取量不足或吸收不良，如长期低钙饮食、腹泻、阻塞性黄疸、急性坏死性胰腺炎或妊娠后期等。肾脏疾病，如慢性肾炎、尿毒炎、尿毒症等。代谢性碱中毒。恶性肿瘤、严重肝病及各种原因所致的大
76、量蛋白尿等，导致血清白蛋白减少而血清钙降低。血清钙的测定山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义血清磷的测定l实验方法：磷钼酸紫外法l实验原理：血清中无机磷与钼酸铵反应生成磷钼酸蓝色复合物，此复合物在340nm有吸收峰，其吸光度与无机磷含量成正比。无机磷钼蓝磷钼酸山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义血清磷的测定l临床意义：1.增高：l甲状旁腺功能减退、多发性骨髓瘤、骨折愈合期、阿狄森（Addison）病、肾功能不全并发酸中毒、急性肝坏死、粒细胞性白血病等。2.降低：l甲状旁腺功能亢进、佝偻病活动期、骨质软化症、糖尿病等。山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义血清铁的测定l实验方法：比色法l实验原理：
77、利用还原剂将Fe3+基纳还原为Fe2+，二价铁离子可与显色剂反应生成红色络合物，检测560nm处的吸光度，与同样处理的标准溶液比较，得出Fe2+含量。山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义血清铁的测定l临床意义增高：常见于溶血性疾病、再生障碍性贫血、原幼细胞性贫血、铝中毒、维生素B6缺乏时造血功能减退、急性病毒性肝炎、坏死性肝炎，何杰金病晚期、血色素沉着症、含铁血黄素沉着症、习惯性输血等。降低：常见于缺铁性贫血、感染性贫血、失血（尤其是肠道或泌尿道出血）、妊娠后期、婴儿生长期、急慢性感染、尿毒症、恶病质、先天性无运铁蛋白血症、用促肾上腺皮质激素（ACTH）或肾上腺皮质激素治疗等。山东省千佛山医院
78、检验科生化室系列讲义血清镁的测定l实验方法：比色法l实验原理：镁离子与钼蓝在碱性环境中形成紫色复合物，在502nm处检测其吸光度与同样处理的标准比较，得出镁离子的浓度山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义血清镁的测定l临床意义1.增高：凡影响肾小球滤过率的疾病均可使血清镁滞留而升高，如急性肾小球肾炎及肾功能不全等。甲状腺功能减低或甲状旁腺功能减低、阿狄森病及未经治疗的糖尿病昏迷等。山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义血清镁的测定2.降低：镁摄入量不足，如长期禁食、腹泻、吸收不良综合征、手术后肠瘘管、呕吐等。尿排镁过多，如应用利尿剂或肾炎多尿期等。甲状腺或甲状旁腺功能亢进、糖尿病酮中毒、醛固酮增多
79、症或长期使用激素治疗等。山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义化学比色法常见的几种类型n指示物为辅酶1（NADH）n指示物为辅酶2（NADPH）n生成红色醌类化合物，即Trinder反应n指示物为对硝基苯酚山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义化学比色法常见的几种类型l指示物为辅酶1（NADH）l如如ALT、AST的测定的测定 主波长主波长340nml连续监测法连续监测法ALT催化催化L-丙氨酸的氨基转移，生丙氨酸的氨基转移，生成丙酮酸。丙酮酸与成丙酮酸。丙酮酸与NADH在在LDH的催化下反的催化下反应生成乳酸和应生成乳酸和NAD+。NADH在在340nm处有特异处有特异吸收峰，其被氧化的速率与血
80、清中吸收峰，其被氧化的速率与血清中ALT的活性的活性成正比，在成正比，在340nm处测定处测定NADH下降速率，即下降速率，即可测出可测出ALT活性活性山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义化学比色法常见的几种类型l指示物为辅酶2（NADPH）如速率法测CK主波长340nmCK作用于底物磷酸肌酸和ADP生成肌酸和ATP，后者与葡萄糖在己糖激酶（HK）的作用下生成葡萄糖-6-磷酸（G-6-P）和ADP，G-6-P和氧化型辅酶II在葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G-6-PDH）作用下生成6-磷酸葡萄糖和还原型辅酶II（NADPH2），监测340nm波长下NADPH2吸光度的上升速率，测CK活性。山东省千佛
81、山医院检验科生化室系列讲义化学比色法常见的几种类型生成红色醌类化合物，即Trinder反应l如葡萄糖的测定：葡萄糖氧化酶法：主波长500nml在葡萄糖氧化酶的作用下，葡萄糖氧化生成过氧化氢和葡萄糖酸。过氧化氢在过氧化物酶的存在下与笨酚、4-氨基安替比林氧化缩和成红色醌式染料，此染料在500nm处有最大吸收峰，其吸光度值与葡萄糖含量成正比。l葡萄糖O2+H2O葡萄糖酸H2O2lH2O2+苯酚+4-氨基安替比林醌亚胺（红色）4H2O其它如TG、CH的测定山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义化学比色法常见的几种类型l指示物为对硝基苯酚如ALP测定；连续监测法连续监测法 主波长主波长405nm无无色色的的对对-硝硝基基苯苯磷磷酸酸二二钠钠在在ALP作作用用下下，生生成成在在405nm处处有有特特异异吸吸收收峰峰的的淡淡黄黄色色对对-硝硝基基苯苯酚酚，通通过过测测定定在在405nm处处吸吸光光度度的的变变化化速率计算速率计算ALP活性活性。
