维生素类药物的分析

《维生素类药物的分析》由会员分享，可在线阅读，更多相关《维生素类药物的分析（188页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。

1、第九章第九章第九章第九章第九章第九章维生素类药物的维生素类药物的分析分析第一第一节节概述概述维维生素：生素：是是维维持人体正常代持人体正常代谢谢机能所机能所必需的必需的微量微量营营养物养物资资。VitA、D2、D3、E、K1等等脂溶性脂溶性水溶性水溶性VitB族族(B1、B2、B6、B12)VitC、叶酸、烟酸、烟、叶酸、烟酸、烟酰酰胺胺VitMVitPPl人体需要的重要人体需要的重要维维生素有生素有6种种:维维生素生素A、维维生素生素B1、维维生素生素B2、烟酸、烟酸、维维生素生素C、维维生素生素D，其他，其他维维生素的需要量生素的需要量则较则较少。少。l除除维维生素生素D外，人体不能合成外

2、，人体不能合成维维生素。生素。公元前公元前3500年年-古埃及人古埃及人发现发现能防治夜盲症的物能防治夜盲症的物质质，也就是后来，也就是后来的的维维A。1600年年-医生鼓励以多吃医生鼓励以多吃动动物肝物肝脏脏来治夜盲症。来治夜盲症。1747年年-苏苏格格兰兰医生林德医生林德发现柠发现柠檬能治坏血病，也就是后来的檬能治坏血病，也就是后来的维维C。1831年年-胡胡萝萝卜素被卜素被发现发现。1905年年-甲状腺甲状腺肿肿大被碘治愈。大被碘治愈。1911年年-波波兰兰化学家丰克化学家丰克为维为维生素命名。生素命名。1915年年-科学家科学家认为认为糙皮病是由于缺乏某种糙皮病是由于缺乏某种维维生素而

3、造成的生素而造成的1916年年-维维生素生素B被分离出来。被分离出来。1917年年-英国医生英国医生发现鱼发现鱼肝油可治愈佝肝油可治愈佝偻偻病，随后断定病，随后断定这这种病是种病是缺乏缺乏维维D引起的。引起的。维生素发展史1920年年-发现发现人体可将胡人体可将胡萝萝卜卜转转化化为维为维生素生素A。1922年年-维维E被被发现发现。1928年年-科学家科学家发现维发现维B至少有两种至少有两种类类型。型。1933年年-维维E首次用于治首次用于治疗疗。1948年年-大大剂剂量量维维C用于治用于治疗疗炎症。炎症。1949年年-维维B3与与维维C用于治用于治疗疗精神分裂症。精神分裂症。1954年年-自

4、由基与人体老化的关系被揭开。自由基与人体老化的关系被揭开。1957年年-Q10多多酶酶被被发现发现。1969年年-体内超体内超级级抗氧化抗氧化酶酶被被发现发现。1970年年-维维C被用于治被用于治疗疗感冒。感冒。1993年年-哈佛大学哈佛大学发发表表维维生素生素E与心与心脏脏病关系的研究病关系的研究结结果。果。返 回维生素与人的关系l(1)维维生素生素A对对人体的生人体的生长长、视觉视觉和生殖和生殖功能都很重要，功能都很重要，对对神神经经系系统统和内分泌有和内分泌有调节调节作用，同作用，同时对时对上皮上皮组织组织的生的生长长、增、增生和分化有重要生和分化有重要调节调节作用，可改善角化作用，可改

5、善角化过过度。可用于治度。可用于治疗维疗维生素生素A缺乏病、毛缺乏病、毛发红发红糠疹、毛糠疹、毛发发苔苔癣癣、鱼鳞鱼鳞病病、小儿、小儿银银屑病、屑病、鳞鳞状毛囊角化病、状毛囊角化病、进进行性行性对对称性称性红红斑角化症、色素性扁平苔斑角化症、色素性扁平苔癣癣、聚合性、聚合性痤痤疮疮等。等。l(2)维维生素生素D与与钙钙、磷代、磷代谢谢及植物神及植物神经经系系统统、内分泌及血管系内分泌及血管系统统有密切关系，具有皮有密切关系，具有皮质类质类固醇激素固醇激素样样作用。可用于治作用。可用于治疗疗异位性异位性皮炎皮炎、红红斑狼斑狼疮疮、斑、斑秃秃、聚合性痤、聚合性痤疮疮、泛、泛发发性性脓脓疱疱性性银银

6、屑病等屑病等l(3)维维生素生素E可用于治可用于治疗冻疮疗冻疮、多形、多形红红斑、斑、结结节节性性红红斑、斑、单纯单纯性性紫癜紫癜、色素性紫癜性、色素性紫癜性皮肤皮肤病病、肢端紫、肢端紫绀绀症、痛症、痛经经以及治以及治疗疗抑郁症。抑郁症。l(4)维维生素生素K促促进进肝肝脏脏合成凝血合成凝血酶酶原及血原及血浆浆因因子，与皮子，与皮质类质类固醇激素有固醇激素有协协同作用。可用于同作用。可用于治治疗疗紫癜、慢性紫癜、慢性荨荨麻疹麻疹、淋巴瘤伴皮肤瘙痒、淋巴瘤伴皮肤瘙痒病等。病等。(5)维维生素生素B1可用于治可用于治疗疗湿疹湿疹、皮炎、皮炎、脓脓皮皮病、念珠菌病、光感性皮肤病、病、念珠菌病、光感性

7、皮肤病、带带状状疱疹疱疹后后遗遗神神经经痛、多痛、多发发性神性神经经炎等。炎等。l(6)维维生素生素B2可用于治可用于治疗疗脂溢性皮炎、脂溢脂溢性皮炎、脂溢性性脱脱发发、寻寻常痤常痤疮疮、酒渣鼻、酒渣鼻、寻寻常常须疮须疮、口周湿疹、日光性皮炎等。口周湿疹、日光性皮炎等。(7)维维生素生素B6可用于治可用于治疗疗脂溢性皮炎、脂脂溢性皮炎、脂溢性脱溢性脱发发、寻寻常痤常痤疮疮、酒渣鼻、湿疹、渗、酒渣鼻、湿疹、渗出性出性银银屑病、神屑病、神经经性皮炎、妊娠痒疹、斑性皮炎、妊娠痒疹、斑秃秃、唇炎等。、唇炎等。l(8)维维生素生素B12是体内多种代是体内多种代谢过谢过程中必程中必需的需的辅辅酶酶，参与核

8、蛋白的合成，甲基的，参与核蛋白的合成，甲基的转转换换以及脂肪和糖的代以及脂肪和糖的代谢谢，可用于治，可用于治疗疗慢性慢性荨荨麻疹、接触性皮炎、早期麻疹、接触性皮炎、早期银银屑病、屑病、扁平扁平疣疣、水痘、水痘、带带状疱疹、扁平苔状疱疹、扁平苔癣癣、脂溢性、脂溢性皮炎、光感性皮肤病等。皮炎、光感性皮肤病等。(9)维维生素生素C主要用于抗炎和抗衰老，可主要用于抗炎和抗衰老，可用于治用于治疗疗紫癜性皮肤病、湿疹、紫癜性皮肤病、湿疹、荨荨麻疹、麻疹、黄褐斑黄褐斑、黑、黑变变病、特病、特发发性斑状色素沉着、性斑状色素沉着、早期早期银银屑病、砷屑病、砷剂剂皮炎等。皮炎等。-H维生素维生素A醇醇-COCH3

9、维生素维生素A醋酸酯醋酸酯-COC15H31维生素维生素A棕榈酸酯棕榈酸酯R:第二第二节节维维生素生素A为为一个具有共一个具有共轭轭多多烯侧链烯侧链的的环环己己烯烯（一）（一）结结构与性构与性质质一、一、v具有具有UV吸收吸收v存在多种立体异构化合物存在多种立体异构化合物维维生素生素A325.5100%新新维维生素生素Aa32875%新新维维生素生素Ab320.524%新新维维生素生素Ac310.515%异异维维生素生素Aa32321%异异维维生素生素Ab32424%相相对对生物效价生物效价VitA2VitA3v易易发发生脱生脱氢氢、脱水、聚合反、脱水、聚合反应应鲸鲸醇醇v或有金属离子存在或有

10、金属离子存在时时氧化氧化共共轭轭多多烯侧链烯侧链易被氧化易被氧化（二）（二）环环氧化物氧化物VitA醛醛VitA酸酸（三）（三）与三与三氯氯化化锑发锑发生呈色反生呈色反应应CHCl3溶解性溶解性（四）（四）不溶于水不溶于水易溶于有机溶易溶于有机溶剂剂和植物油等和植物油等三三氯氯化化锑锑反反应应（一）（一）条件条件无水无醇无水无醇CHCl3鉴别鉴别二、二、蓝蓝色色紫紫红红（BP（1998）max为为326nm一个吸收峰一个吸收峰UV法法（二）（二）max为为350390nm三个吸收峰三个吸收峰去水去水VitA（VitA3）VitAUSP显显色色剂剂磷磷钼钼酸酸规规定斑点定斑点颜颜色和色和Rf值值

11、BP杂质对杂质对照品法照品法显显色色剂剂三三氯氯化化锑锑TLC法法（三）（三）立体异构体立体异构体氧化氧化产产物及光照物及光照产产物物合成中合成中间间体体去去氢维氢维生素生素A（VitA2）去水去水维维生素生素A（VitA3）UV法法（一）（一）含量含量测测定定三、三、三点校正法三点校正法1.条件：条件：（1）杂质杂质的吸收在的吸收在310340nm波波长长范范围围内呈一条直内呈一条直线线，且随波，且随波长长的增大吸收度减小；的增大吸收度减小；（2）物）物质对质对光的吸收具有加和性。光的吸收具有加和性。2.波波长长的的选择选择：（1） 1VitA的的 max（328nm）（2） 2 3分分别别

12、在在 1的两的两侧侧各各选选一点一点测测定定对对象象VitA醋酸醋酸酯酯第一法第一法等波等波长长差法差法第二法第二法等吸收度法等吸收度法(皂化法皂化法)测测定定对对象象VitA醇醇3.测测定法定法（1）基本步）基本步骤骤:v第一步第一步A选择选择选择选择依据：依据：所所选选A值值中中杂质杂质的干的干扰扰已基本消除已基本消除注意：注意：C为为混合混合样样品的品的浓浓度度第二步第二步求求第三步第三步求效价求效价换换算因数由算因数由纯纯品品计计算而得：算而得：第四步：求第四步：求标标示量示量方法：方法：（2）第一法第一法维维生素生素A醋酸醋酸酯酯判断判断是否在是否在326329nm之之间间在在326

13、329nm之之间间改用第二法改用第二法是是否否求算求算并与并与规规定定值值比比较较规定值规定值差值差值判断差判断差值值是否超是否超过规过规定定值值的的有一个以上有一个以上超超过过无超无超过过计计算算A328（校正）（校正）用用A328计计算算03%15%3%第二法第二法第二法第二法VitAD胶丸中胶丸中VitA的含量测定的含量测定精密称取本品精密称取本品(规规格格10000VitAIU/丸丸)装量差异装量差异项项下（平均装量下（平均装量0.08262g/丸）丸）的内容物的内容物0.2399g至至250ml量瓶中，用量瓶中，用环环己己烷烷稀稀释释至刻度，至刻度，摇摇匀；精密量取匀；精密量取2.0

14、ml，置另一，置另一20ml量瓶中，用量瓶中，用环环己己烷烷稀稀释释至至刻度，刻度，摇摇匀。以匀。以环环己己烷为烷为空白，空白，测测定最定最大吸收波大吸收波长为长为328nm，并在下列波，并在下列波长处长处测测得吸收度得吸收度为为A300：0.354A316：0.561A328：0.628A340：0.523A360：0.216A300/A328：0.555A316/A328：0.907A328/A328：1.000A340/A328：0.811A360/A328：0.299求本品中求本品中维维生素生素A的含量？的含量？A300/A328：0.564A316/A328：0.893A328/A3

15、28：1.000A340/A328：0.833A360/A328：0.3440.5550.9071.0000.8110.299+0.010.010+0.02+0.04=适用于适用于维维生素生素A醇醇（等吸收度法）（等吸收度法）第一法无法消除第一法无法消除杂质杂质干干扰时扰时用此法用此法皂化法、皂化法、6/7A法法（3）第二法）第二法水溶性水溶性脂溶性脂溶性判断判断 max是否在是否在323327nm之之间间取未皂化取未皂化样样品品采用色采用色谱谱法法纯纯化后再化后再测测定定计计算算是是否否判断判断A300/A325是否大于是否大于0.73是是否否取未皂化取未皂化样样品品采用色采用色谱谱法法纯纯

16、化后再化后再测测定定计计算算A325(校正校正)03%3%三三氯氯化化锑锑比色法比色法（二）（二）优优点点简简便便快速快速max 618nm620nm标标准曲准曲线线法法缺点缺点呈色不呈色不稳稳定定（510s内）内）水分干水分干扰扰与与标标准曲准曲线线温差温差1专专属性差属性差三三氯氯化化锑锑有腐有腐蚀蚀性性氨基氨基嘧啶环嘧啶环CH2噻唑环噻唑环(季季铵铵碱碱)第二第二节节维维生素生素B1HClCl-l维生素B12为水溶性维生素，过量可直接通过尿液排出体外；注射过量的维生素B12可出现哮喘、荨麻疹、湿疹、面部浮肿、寒颤等过敏反应，也可能相发神经兴奋、心前区痛和心悸。（一）（一）溶解性溶解性1、

17、易溶于水、易溶于水2、水溶液呈酸性、水溶液呈酸性（二）（二）UV共共轭轭双双键键max=246nm结结构与性构与性质质一、一、嘧啶环嘧啶环伯氨伯氨噻唑环噻唑环季季铵铵1、可与酸成、可与酸成盐盐2、与生物碱、与生物碱3、含量、含量测测定定非水碱量法非水碱量法（三）（三）硫色素反硫色素反应应（四）（四）碱性碱性ChP鉴别试验鉴别试验二、二、（一）（一）硫色素反硫色素反应应硫色素硫色素2HVitB1H+H+H+H+（二）（二） 沉淀反沉淀反应应S元素反元素反应应Cl-反反应应（三）（三） 其他反其他反应应三、三、 含量含量测测定定喹喹那那啶红啶红亚亚甲甲蓝蓝（紫（紫红红天天蓝蓝）（一）（一）非水溶液

18、滴定法非水溶液滴定法UV法法（二）（二）片片剂剂、注射、注射剂剂=421（每片）相当于（每片）相当于标标示量的示量的%=A=ECL规规格格g/片片g/100mlgChP（每（每ml）相当于）相当于标标示量的示量的%=规规格格g/mlml准确度高准确度高灵敏度低灵敏度低操作繁操作繁琐琐设备简单设备简单（三）（三） 硅硅钨钨酸重量法酸重量法重量法特点重量法特点1、原理原理2、2337.273479.22取本品取本品约约50mg，精密称定，加水，精密称定，加水50ml溶解后，加溶解后，加盐盐酸酸2ml，煮沸，立即，煮沸，立即滴加硅滴加硅钨钨酸酸试试液液4ml，继续继续煮沸煮沸2分分钟钟，用用80恒重

19、的垂熔玻璃坩恒重的垂熔玻璃坩埚滤过埚滤过，沉，沉淀先用煮沸的淀先用煮沸的盐盐酸溶液酸溶液（120）20ml分次洗分次洗涤涤，再用水，再用水10ml洗洗涤涤1次，最后用丙次，最后用丙酮酮洗洗涤涤2次，次，每次每次5ml，在，在80干燥至恒重，精密称干燥至恒重，精密称定，所得重量与定，所得重量与0.1939相乘，即得相乘，即得测测定方法定方法3、例例精密称取本品精密称取本品0.0519g，加水，加水50ml溶解，加溶解，加盐盐酸酸2ml煮沸，立即滴加煮沸，立即滴加硅硅钨钨酸酸试试液液4ml，继续继续煮沸煮沸2分分钟钟，用，用80恒重的垂熔玻璃坩恒重的垂熔玻璃坩埚滤过埚滤过，沉淀，沉淀先用煮沸的先用

20、煮沸的盐盐酸溶液（酸溶液（120）20ml分次洗分次洗涤涤，再用水，再用水10ml洗洗涤涤1次，后次，后用丙用丙酮酮洗洗涤涤2次，每次次，每次5ml。在。在80干干燥至恒重，称得沉淀重量燥至恒重，称得沉淀重量为为0.2557g。求本品的含量按干燥品求本品的含量按干燥品计计算算为为多少？多少？(本品干燥失重本品干燥失重项项下下测测定定结结果果为为3.73%)A.取取样样量量50mg提高灵敏度提高灵敏度B.80保持保持4个个H2OC.HCl增大沉淀增大沉淀颗颗粒粒D.硅硅钨钨酸酸：VitB1=8：1使沉淀完全使沉淀完全E.硅硅钨钨酸酸边搅边搅拌拌边缓边缓慢加入慢加入增大沉淀增大沉淀颗颗粒粒实验实验

21、条件条件4、NaOH（四）（四） 硫色素硫色素荧荧光法光法原理原理1、激激发发波波长长365nm发发射波射波长长435nm方法与方法与计计算算2、+NaOH+铁氰铁氰化化钾钾+异丁醇异丁醇+NaOH+异丁醇异丁醇+NaOH+铁氰铁氰化化钾钾+异丁醇异丁醇+NaOH+异丁醇异丁醇SdAb对对照液照液供供试试液液特点特点3、（1）灵敏度高，）灵敏度高，线线性范性范围宽围宽（2）代）代谢产谢产物不干物不干扰扰，适用于，适用于体液分析体液分析第三第三节节维维生素生素CL抗坏血酸抗坏血酸（1）大剂量使用维生素C，可在体内部分转变为草酸，显著增加尿中草酸盐或尿酸盐的排泄而形成肾结石。（2）大剂量维生素C可

22、导致部分妇女不孕。孕妇服用过量维生素C可能会影响胎儿的发育，易引起流产和死胎。（3）研究表明，处于生长时期的小儿长期服用过量维生素C容易患骨骼疾病。（4）长期大量服用维生素C后，一旦突然停药，仍可出现坏血病症状。（5）长期大量使用维生素C可使血栓发生率明显增加，同时也可影响血小板的结构和功能。（6）维生素C还会破坏食物中的维生素B12，而致维生素B12缺乏。1、易溶于水、易溶于水2、水溶液呈酸性、水溶液呈酸性结结构与性构与性质质一、一、（一）（一）溶解性溶解性二二烯烯醇醇结结构构二二酮酮基基结结构构二二烯烯醇醇结结构构（二）（二） 强强还还原性原性有活性有活性有活性有活性无活性无活性糖糖类类的

23、的显显色反色反应应50结结构与糖构与糖类类相似相似（三）（三）具糖的性具糖的性质质C3OH的的pKa=4.17C2OH的的pKa=11.57酸性酸性（四）（四）一元酸一元酸L(+)抗坏血酸抗坏血酸活性最活性最强强手性手性C（C4、C5）（五）（五） 光学活性光学活性*与碱反与碱反应应（六）（六） 水解反水解反应应（七）（七） UV特征特征与氧化与氧化剂剂的反的反应应（一）（一）鉴别试验鉴别试验二、二、1、与、与AgNO3反反应应2、与、与2，6-二二氯氯靛酚反靛酚反应应(ChP2000)氧化型氧化型玫瑰玫瑰红红色色还还原型原型蓝蓝色色OH(ChP2000)（玫瑰色）玫瑰色）（无色）（无色）3、

24、与碱性酒石酸、与碱性酒石酸铜铜反反应应USP4、与、与KMnO4反反应应糖糖类类的反的反应应（二）（二）或或盐盐酸酸50吡咯吡咯USP（蓝蓝色）色）(糠糠醛醛)（戊糖）（戊糖）50(吡咯吡咯)UV（三）（三）BP0.01mol/LHCl三、三、杂质检查杂质检查1.溶液的澄清度与溶液的澄清度与颜颜色：有色色：有色杂质杂质分光光度法分光光度法2.铁铁、铜铜离子：原子吸收分光光度法离子：原子吸收分光光度法指示指示剂剂淀粉指示液淀粉指示液原理原理1、碘量法碘量法（一）（一）含量含量测测定定四、四、H+取本品取本品约约0.2g，精密称定，加新，精密称定，加新沸沸过过的冷水的冷水100ml与稀醋酸与稀醋酸

25、10ml使溶使溶解，加淀粉指示液解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴，立即用碘滴定液（定液（0.1mol/L）滴定，至溶液）滴定，至溶液显蓝显蓝色，在色，在30秒内不褪。每秒内不褪。每1ml碘滴定液碘滴定液(0.1mol/L)相当于相当于8.806mg的的C6H8O6方法方法2、（1）酸性）酸性环环境境d.HCl（2）新沸冷新沸冷H2O减慢减慢VitC被被O2氧化速度氧化速度讨论讨论4、（3）立即滴定）立即滴定赶走水中赶走水中O2减少减少O2的干的干扰扰（4）附加）附加剂剂干干扰扰的排除的排除片片剂剂滑石粉滑石粉过滤过滤注射注射剂剂抗氧抗氧剂剂丙丙酮酮甲甲醛醛Na2SO3NaHSO3Na2S2O

26、3Na2S2O5CHHOOaS3a S O+H2N H ON2252HO NH COS3a2，6-二二氯氯靛酚靛酚钠钠滴定法法滴定法法（二）（二）USPJP原理原理1、自身指示自身指示终终点法点法方法方法2、（2）快速滴定）快速滴定2min内内（1）酸性）酸性环环境境HPO3-HAc稳稳定定VitC防止其他防止其他还还原性物原性物质质干干扰扰（3）剩余比色）剩余比色测测定定（定量（定量过过量）量）（测测剩余染料）剩余染料）讨论讨论3、（4）缺点）缺点需需经经常常标标定定贮贮存存一周一周不不稳稳定定干干扰扰多多氧化力氧化力较较强强HPLC法法（三）（三）1、HPLC的的优优点点灵敏度高灵敏度高选

27、择选择性高性高分离分析同步分离分析同步微量分析微量分析干干扰扰少少快速快速2、HPLC法分离法分离VitC常用方法及常用方法及测测定定对对象象对对象象制制剂剂、生物、生物样样品、果汁品、果汁方法方法离子交离子交换换色色谱谱法法离子离子对对色色谱谱法法分配色分配色谱谱法（正、反相）法（正、反相）血、尿、血、尿、组织组织、细细胞等胞等苯并二氢吡喃醇苯并二氢吡喃醇第三第三节节维维生素生素El维生素E防治心脑血管疾病、防癌抗癌和抗衰老。l适量服用维生素E有抗癌作用，但如果摄入过量的维生素E反而有诱发癌症的可能性。l服用维生素E不宜超过每日3次，每次100毫克。名名称称R1R2相对活性相对活性-生育酚生

28、育酚-生育酚生育酚-生育酚生育酚-生育酚生育酚CH3CH3HHCH3HCH3H1.00.50.20.1*生物效价生物效价右旋体右旋体：消旋体消旋体=1.4：10（天然品）（天然品）（合成品）（合成品）dl生育酚醋酸生育酚醋酸酯酯结结构与性构与性质质一、一、苯苯环环+二二氢氢吡喃吡喃环环+饱饱和和烃链烃链1、易溶于有机溶、易溶于有机溶剂剂，不溶于水，不溶于水2、UV3、酯键酯键易水解易水解7515（一）（一）硝酸反硝酸反应应橙橙红红色色鉴别鉴别二、二、（橙（橙红红色）色）生育生育红红生育酚生育酚HNO3强氧化剂强氧化剂取本品取本品约约30mg，加无水，加无水乙醇乙醇10ml溶解后，加硝酸溶解后，

29、加硝酸2ml，摇摇匀，在匀，在75加加热热15分分钟钟，溶液溶液应显应显橙橙红红色。色。三三氯氯化化铁铁联联吡吡啶啶反反应应O（二）（二）生育酚生育酚对对-生育生育醌醌O弱氧化弱氧化剂剂红红色色=41.045.5max=284nmmin=254nm0.01%无水乙醇中无水乙醇中UV法法（三）（三）维生素维生素EUV图图薄薄层层板板硅胶硅胶G展开展开剂剂环环己己烷烷-乙乙醚醚（4：1）显显色色剂剂硫酸（硫酸（1055）VitE Rf=0.7TLC法法（四）（四）游离生育酚游离生育酚硫酸硫酸铈铈滴定液（滴定液（0.01mol/L）二苯胺（亮黄二苯胺（亮黄灰紫）灰紫）利用游离生育酚的利用游离生育酚的

30、还还原性，原性，将硫酸将硫酸铈还铈还原成硫酸原成硫酸亚铈亚铈检查检查三、三、原理原理（一）（一）试剂试剂（二）（二）（M生育酚生育酚=430.8）例例取本品取本品0.10g，加无水乙醇，加无水乙醇5ml溶解后，加二苯胺溶解后，加二苯胺试试液液1滴，滴，用硫酸用硫酸铈铈液（液（0.01mol/L）滴定，）滴定，消耗硫酸消耗硫酸铈铈液（液（0.01mol/L）不）不得得过过1.0ml。2.15限量限量（三）（三）药药典典规规定定消耗硫酸消耗硫酸铈铈液（液（0.01mol/L）1.0ml设设：应应消耗硫酸消耗硫酸铈铈液液Vml0.011.0实际浓实际浓度度V若硫酸若硫酸铈铈液液浓浓度不是度不是0.0

31、1000mol/L，应应重新重新计计算硫酸算硫酸铈铈的消耗量的消耗量例例Ce(SO4)2=0.01020mol/L四、四、 含量含量测测定定GC法法（一）（一）GC特点特点1、选择选择性好性好灵敏度高灵敏度高速度快速度快分离效能好分离效能好挥发挥发性低、不性低、不稳稳定、极性定、极性强强衍生化易受衍生化易受样样品蒸气品蒸气压压限限制制载载气气N2固定液固定液硅硅酮酮（OV-17）担体担体硅藻土或高分子多孔小球硅藻土或高分子多孔小球柱温柱温265检测检测器器氢氢火焰离子化火焰离子化检测检测器器(FID)内内标标正三十二正三十二烷烷n500R2VitE测测定的色定的色谱谱条件条件2、内内标标法加校

32、正因子法加校正因子内内标标法法供供试试液（液（样样品品+内内标标）内内标标物物对对照液（照液（对对照照+内内标标）是是样样品中不存在的物品中不存在的物质质与被与被测组测组分峰靠近分峰靠近能与各能与各组组分完全分离分完全分离与被与被测组测组分的量接近分的量接近校正因子：校正因子：实际实际工作中的工作中的计计算方法算方法例例 内内标标液液取正三十二取正三十二烷烷加正己加正己烷烷溶解溶解并稀并稀释释成成1.0mg/ml溶液溶液对对照液照液精密称取精密称取VitE对对照品照品0.2011g置棕色具塞置棕色具塞锥锥形瓶中，精密加入内形瓶中，精密加入内标标液液10ml，密塞，振，密塞，振摇摇使溶解，取使溶

33、解，取13ul注入注入GC仪仪，测测定，定，计计算算供供试试液液精密称取供精密称取供试试品品0.1998g置棕置棕色具塞色具塞锥锥形瓶中，精密加入内形瓶中，精密加入内标标液液10ml，密塞，振，密塞，振摇摇使溶解，取使溶解，取13ul注入注入GC仪仪，测测定，定，计计算算对对照液照液供供试试液液0.3730.368本品含本品含C31H52O3应为应为96.0102.0%BPGC内内标标正三十二正三十二烷烷R1.4USPGC内内标标十六酸十六醇十六酸十六醇酯酯R1.0JPHPLC外外标标dl生育酚生育酚R1.4利用生育酚的易氧化性利用生育酚的易氧化性还还原型原型氧化型氧化型二苯胺（亮黄二苯胺（亮

34、黄灰紫）灰紫）原理原理1、铈铈量法量法（二）（二）指示指示剂剂2、防止防止Ce(SO4)2的水解的水解减慢生育酚被减慢生育酚被O2氧化速度氧化速度C、酸性条件酸性条件Ce(SO4)2易溶于水易溶于水生育酚易溶于醇生育酚易溶于醇B、溶、溶剂剂分子量分子量较较大，反大，反应应慢慢易被易被O2氧化氧化A、反、反应应速度速度H2SO4讨论讨论3、含量含量计计算算4、MVitE=472样样品品dl生育酚生育酚固定相固定相十八十八烷烷基硅基硅烷键烷键合硅胶合硅胶流流动动相相甲醇甲醇-水（水（49：1）检测检测波波长长292nmR2.6RSD0.8%JP-RP-HPLC法（外法（外标标法）法）（三）（三）测

35、测定定对对象象血清中血清中VitA和和VitE固定相固定相十八十八烷烷基硅基硅烷键烷键合硅胶合硅胶流流动动相相甲醇甲醇-水（水（96：4）检测检测波波长长8前前330nm8后后292nmRP-HPLC法（外法（外标标法）法）（四）（四）第五节维生素D维生素D2骨化醇一、结构与性质维生素D3胆骨化醇维维生素生素D人每日需要量很少，如每日人每日需要量很少，如每日摄摄入量入量过过多，或多，或连续连续数次数次摄摄入入(口服或肌注口服或肌注)大大剂剂量，量，可出可出现过现过量甚至中毒症状，量甚至中毒症状，严严重者可危及生命。重者可危及生命。婴婴儿使用儿使用维维生素生素D过过多，可致多，可致发发育育迟缓迟

36、缓，面容，面容变变形，甚至形，甚至肾肾衰死亡，日衰死亡，日剂剂量超量超过过1.25毫克毫克(50000国国际单际单位位)可能使正常人或儿童可能使正常人或儿童发发生血生血钙钙增高症，引起全身性血管增高症，引起全身性血管钙钙化、化、肾钙质肾钙质沉淀沉淀及及软组织钙软组织钙化而致高血化而致高血压压，严严重者最重者最终终可死于可死于肾肾功能衰竭功能衰竭.开环的甾体：具有甾类化合物的显色反应，可用于鉴别。手性碳原子：具有旋光性，可用于鉴别。多烯：可进行紫外检测。性性质质：1、脂溶性、脂溶性2、不、不稳稳定性定性3、旋光性、旋光性4、显显色反色反应应5、紫外吸收特性、紫外吸收特性二、鉴别试验1.显色反应醋

37、酐-硫酸反应D2黄红紫绿D3黄红紫、蓝绿绿三氯化锑反应橙红色渐变粉红三氯化铁反应橙黄色二氯丙醇和乙酰氯反应绿色2.比旋度鉴别维生素D2维生素D3溶剂 浓度比旋度值无水乙醇无水乙醇40mg/ml5mg/ml+102.5+107.5 +105+112注意事项：应于容器开启30分钟内取样，在溶液配制后30分钟内测定。3.区别反应：以96%乙醇为溶剂，加乙醇和85%硫酸，D2显红色，在570nm处有最大吸收，D3显黄色，在495nm处有最大吸收。4.其他方法：TLC、HPLC、制备衍生物测熔点三、杂质检查维生素D2中麦角甾醇的检查：加洋地黄皂苷溶液，混合，放置18h不得发生浑浊或沉淀。前维生素D的光照

38、产物四、含量测定方法中国药典（2000年版）采用正相高效液相色谱法(NP-HPLC）测定维生素D的含量，定量方法为内标法，内标物为邻苯二甲酸二甲酯。根据样品的具体情况按以下三个方法进行分析。第一法：用于无维生素A醇及其它杂质干扰的情况，步骤如下：1系统适用性试验：测定重复性和分离度。固定相：硅胶流动相：正己烷-正戊醇（997：3）2测定校正因子： 3含量测定： 2,6-二叔丁基对甲酚加热第二法：用于有杂质的干扰的情况，步骤如下：1皂化处理：皂化、乙醚提取、洗涤提取液、蒸除乙醚、制备供试液A。2净化：供试液A经液相色谱分离，准确收集含有维生素D及前维生素D混合物的全部流出液，制备成供试液B。固定

39、相：ODS流动相：甲醇-乙腈-水（50：50：2）3含量测定：取供试液B按第一法测定。第三法：用于经第二法处理后仍有杂质的干扰的情况。步骤如下：1制备供试液：取供试液A，净化，水浴加热，正已烷溶解，得供试液C。制备对照液：对照品储备液（异辛烷溶解）：稀释、加热。2含量测定：在第一法的色谱条件下，交替精密进样对照液和供试液，按外标法定量。返 回Discussion1、采用的是正相高效液相色谱法2、测定过程中应避免VitD的氧化3、皂化应剧烈振摇，水浴温度40，提取溶剂大多采用己烷或戊烷以消除苯的毒性4、若供试品中没有VitA醇及其它杂质干扰时，可以直接进样分析5、注意色谱系统适用性样品VitD、

40、前VitD的制备方法例例多种多种维维生素片中生素片中VitA、VitB1、VitB2、VitB6、烟、烟酰酰胺、胺、VitC、VitE的含量的含量测测定定色色谱谱柱柱ODS流流动动相相A、水、水-甲醇（甲醇（4：1）B、甲醇、甲醇（梯度洗脱）（梯度洗脱）抗氧抗氧剂剂二二巯巯基丙基丙烷烷磺酸磺酸钠钠水溶性水溶性维维生素生素离子离子对对色色谱谱法（樟法（樟脑脑磺酸）磺酸）内内标标法法+校正因子校正因子内内标标物物苯酚苯酚脂溶性脂溶性维维生素生素外外标标法法108在三在三氯氯醋酸或醋酸或盐盐酸存在下，酸存在下，经经水解、脱水解、脱羧羧、失水后，加入吡、失水后，加入吡咯即咯即产产生生蓝蓝色色产产物的物

41、的药药物物应应是是A.氯氯氮卓氮卓B.维维生素生素AC.普普鲁鲁卡因卡因D.盐盐酸酸吗吗啡啡E.维维生素生素C99：88中国中国药药典（典（2000年版）采用年版）采用以下何法以下何法测测定定维维生素生素E含量含量A.酸碱滴定法酸碱滴定法B.氧化氧化还还原法原法C.紫外分光光度法紫外分光光度法D.气相色气相色谱谱法法E.非水滴定法非水滴定法98：79中国中国药药典（典（2000年版）采用年版）采用气相色气相色谱谱法法测测定定维维生素生素E含含量，内量，内标标物物质为质为A.正二十二正二十二烷烷B.正二十六正二十六烷烷C.正三十正三十烷烷D.正三十二正三十二烷烷E.正三十六正三十六烷烷99：77

42、.下列下列药药物的碱性溶液，加入物的碱性溶液，加入铁氰铁氰化化钾钾后，再加正丁醇，后，再加正丁醇，显蓝显蓝色色荧荧光的是光的是A.维维生素生素AB.维维生素生素B1C.维维生素生素CD.维维生素生素DE.维维生素生素E97：77既具有酸性又具有既具有酸性又具有还还原性的原性的药药物是物是A.维维生素生素AB.咖啡因咖啡因C.苯巴比妥苯巴比妥D.氯氯丙丙嗪嗪E.维维生素生素C99m：132.维维生素生素C的的鉴别鉴别反反应应，常采，常采用的用的试剂试剂有有A.碱性酒石酸碱性酒石酸铜铜B.硝酸硝酸银银C.碘化碘化铋钾铋钾D.乙乙酰酰丙丙酮酮E.三三氯氯醋酸和吡咯醋酸和吡咯99m：84.测测定定维维

43、生素生素C注射液的含量注射液的含量时时，在操作，在操作过过程中要加入程中要加入丙丙酮酮，这这是是为为了了A.保持保持维维生素生素C的的稳稳定定B.增加增加维维生素生素C的溶解度的溶解度C.使反使反应应完全完全D.加快反加快反应应速度速度E.消除注射液中抗氧消除注射液中抗氧剂剂的干的干扰扰98：85.能能发发生硫色素特征反生硫色素特征反应应的的药药物物是是A.维维生素生素AB.维维生素生素B1C.维维生素生素CD.维维生素生素EE.烟酸烟酸97：81使用碘量法使用碘量法测测定定维维生素生素C的的含量含量,已知已知维维生素生素C的分子量的分子量为为176.13，每，每1ml碘滴定液碘滴定液(0.1

44、mol/L)相当于相当于维维生素生素C的量的量为为A.17.61mgB.8.806mgC.176.1mgD.88.06mgE.1.761mg97：121125（99：121125）可可发发生以下反生以下反应应或或现现象的象的药药物物为为A.维维生素生素B1B.维维生素生素CC.两者均能两者均能D.两者均不两者均不能能121.与碘化汞与碘化汞钾钾生成黄色沉淀生成黄色沉淀122.麦芽酚反麦芽酚反应应123.在乙在乙醚醚中不溶中不溶124.与与2,6-二二氯氯靛酚反靛酚反应应使使颜颜色消失色消失125.硫色素反硫色素反应应ADCBA115维维生素生素A的的鉴别试验为鉴别试验为A.三三氯氯化化铁铁反反

45、应应B.硫酸硫酸锑锑反反应应C.2,6-二二氯氯靛酚反靛酚反应应D.三三氯氯化化锑锑反反应应E.间间二硝基苯的碱性乙醇液反二硝基苯的碱性乙醇液反应应77中国中国药药典（典（2000年版）年版）规规定定维维生生素素A的的测测定采用紫外分光光度法定采用紫外分光光度法（三点校正法），此法又分（三点校正法），此法又分为为A等波等波长长差法差法B等吸收度法等吸收度法C6/7A法法D差示分光法差示分光法E双波双波长长法法78维维生素生素E的的鉴别试验鉴别试验有有A硫色素反硫色素反应应B硝酸氧化呈色反硝酸氧化呈色反应应C硫酸硫酸-乙醇呈色反乙醇呈色反应应D碱性水解后加三碱性水解后加三氯氯化化铁铁乙醇乙醇液与

46、液与2,2-联联吡吡啶啶乙醇液呈色反乙醇液呈色反应应EMarquis反反应应80.下面哪些描述适用于下面哪些描述适用于维维生素生素AA.分子具有分子具有长长二二烯烯醇醇侧链侧链，易被氧化，易被氧化B.具有具有较长较长的全反式共的全反式共轭轭多多烯结烯结构构C.含含酯键酯键，经经水解后水解后产产生苯并二生苯并二氢氢吡吡喃衍生物，易被氧化喃衍生物，易被氧化D.与三与三氯氯化化锑锑的无醇的无醇氯氯仿液中呈不仿液中呈不稳稳定定兰兰色，很快色，很快转变为转变为紫紫红红色色E.样样品用无水乙醇溶解后，加硝酸加品用无水乙醇溶解后，加硝酸加热热后，呈橙后，呈橙红红色色维维生素生素A与与反反应应即即显显蓝蓝色，

47、色，渐变渐变成紫成紫红红色；反色；反应应需在需在条件下条件下进进行。行。（）维维生素生素A分子中由于具有共分子中由于具有共轭轭多多烯侧链烯侧链，因而其性，因而其性质质很很稳稳定，定，不易被氧化不易被氧化变质变质。三三氯氯化化锑锑无水无水维维生生素素E在在酸酸性性或或碱碱性性溶溶液液中中加加热热可可水水解解生生成成游游离离，当当有有氧氧或或其其他他氧氧化化剂剂存存在在时时，则则进进一一步步被被氧氧化化成成醌醌型型化化合合物物，尤尤其其在在碱碱性性下下更更易易发发生。生。生育酚生育酚维维生素生素B1的的噻唑环噻唑环在在介介质质中可开中可开环环，再与，再与嘧啶环嘧啶环上氨基上氨基缩缩合合环环合，然后

48、合，然后经经等氧化等氧化剂剂氧氧化生成具有化生成具有荧荧光的光的，加，加荧荧光消失，加光消失，加荧荧光又光又显显出；此反出；此反应应称称为为反反应应。碱性碱性铁氰铁氰化化钾钾硫色素硫色素酸酸碱碱硫色素硫色素维维生素生素C是是元弱酸，具有元弱酸，具有强强性，易被氧化性，易被氧化剂剂氧化，常用氧化，常用作其它制作其它制剂剂的的剂剂。一一还还原原抗氧抗氧维维生素生素E中游离生育酚的中游离生育酚的检查时检查时规规 定定 消消 耗耗 硫硫 酸酸 铈铈 滴滴 定定 液液（0.01mol/L）不得不得过过1.0ml，现现硫酸硫酸铈铈滴定液的滴定液的实实际浓际浓度度为为0.01053mol/L，应应不得超不得

49、超过过多少多少ml？A.0.95B.0.97C.0.99D.0.92E.1.05中国中国药药典典维维生素生素C的含量的含量测测定定取本品取本品约约0.2g，精密称定，加，精密称定，加新新沸沸过过的冷水的冷水100ml与与稀醋酸稀醋酸10ml使溶使溶解，加淀粉指示液解，加淀粉指示液1ml，立即立即用碘滴用碘滴定液定液(0.1mol/L)滴定，至溶液滴定，至溶液显蓝显蓝色，色，在在30秒内不褪。每秒内不褪。每1ml碘滴定液碘滴定液(0.1mol/L)相当于相当于8.806mg的的C6H8O6。已知：取已知：取样样量量为为0.2084g，消耗碘滴，消耗碘滴定液（定液（0.09981mol/L）22.

50、75ml。要求：（要求：（1）解）解释释划划线线部分部分（2）计计算本品的含量是否符合算本品的含量是否符合规规定定（规规定本品含定本品含C6H8O6应应不低于不低于99.0%）VitB1片片UV法含量法含量测测定定取本品取本品20片，片，精密称定，研精密称定，研细细，精密称取适量（，精密称取适量（约约相相当于当于VitB125mg），置），置100ml量瓶中，加量瓶中，加盐盐酸溶液酸溶液(91000)约约70ml，振，振摇摇15分分钟钟，加加盐盐酸溶液酸溶液(91000)稀稀释释至刻度。用干至刻度。用干燥燥滤纸滤过滤纸滤过，精密量取，精密量取续滤续滤液液5.0ml，置，置另一另一100ml量瓶中，再加量瓶中，再加盐盐酸溶液酸溶液(91000)稀稀释释至刻度，至刻度，摇摇匀，在匀，在246nm处测处测定吸收度，按定吸收度，按C12H17ClN4OSHCl的的吸收系数（吸收系数（）为为421计计算，即得。算，即得。已知已知20片重片重=1.4070gA246=0.461取取样样量量=0.1551g规规格格=10mg/片片求求本品含量是否符合本品含量是否符合药药典典规规定？定？（应应相当于相当于标标示量的示量的90.0110.0%)