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1、 埃博拉出血热的实验室检测方案 与生物安全要求 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 中国疾病预防控制中心 （海南省 马焱） 主要内容主要内容1. 埃博拉出血热病原学埃博拉出血热病原学2. 实验室检测方案实验室检测方案 （第三版）（第三版）3. 生物安全要求生物安全要求4. 相关标本采集、包装、运输技术指南相关标本采集、包装、运输技术指南 埃博拉出血热 病原学埃博拉出血热是由埃博拉病毒（埃博拉出血热是由埃博拉病毒（ , , ）引起的一种发生于人类和非人灵长目动物（猴子、大猩猩和黑猩）引起的一种发生于人类和非人灵长目动物（猴子、大猩猩和黑猩猩等）的急性出血性传染病。猩等）的急性出血性传染病。属
2、于丝状病毒科，病毒有脂质包膜。埃博拉病毒基因组是不分节段的负链，大小为，编码个结构蛋白属于丝状病毒科，病毒有脂质包膜。埃博拉病毒基因组是不分节段的负链，大小为，编码个结构蛋白和个非结构蛋白。和个非结构蛋白。病毒呈长丝状体，可呈杆状、丝状、病毒呈长丝状体，可呈杆状、丝状、 “”“”形等多种形态。形等多种形态。毒粒长度平均，直径约。毒粒长度平均，直径约。埃博拉病毒对热有中度抵抗力埃博拉病毒对热有中度抵抗力在室温与在室温与存放个月后，感染性无明显变化存放个月后，感染性无明显变化灭活病毒需要小时灭活病毒需要小时分钟即可灭活分钟即可灭活 埃博拉病毒对紫外线、埃博拉病毒对紫外线、射线、甲醛、次氯酸、酚类等
3、消毒剂射线、甲醛、次氯酸、酚类等消毒剂和脂溶剂敏感。和脂溶剂敏感。 埃博拉出血热病原学 埃博拉病毒分型目前已发现种埃博拉病毒，不同亚型病毒基因组核苷酸构成差异较大，但同一亚型的病毒基因组相对稳定。目前已发现种埃博拉病毒，不同亚型病毒基因组核苷酸构成差异较大，但同一亚型的病毒基因组相对稳定。 扎伊尔型（）：对人致病性最强，曾引起暴发扎伊尔型（）：对人致病性最强，曾引起暴发苏丹型（）：对人致病性其次，曾引起暴发苏丹型（）：对人致病性其次，曾引起暴发本迪布焦型（）：对人致病性更次，曾引起暴发本迪布焦型（）：对人致病性更次，曾引起暴发塔伊森林型（）：对黑猩猩致病性强，对人似较弱塔伊森林型（）：对黑猩猩
4、致病性强，对人似较弱赖斯顿型（）：对人不致病赖斯顿型（）：对人不致病 埃博拉出血热实验室检测方案埃博拉出血热实验室检测方案 （第三版）（第三版） 包括留观病例、疑似病例和确诊病例一一. 检测对象检测对象 二二. 标本采集、保存和运输标本采集、保存和运输（一）标本采集（一）标本采集 用分离胶无菌真空促凝管采集静脉血，每管，标记后用分离胶无菌真空促凝管采集静脉血，每管，标记后保存，填写标本采集登记表。保存，填写标本采集登记表。 留观病例、疑似病例采集发病日后静脉血管，送具有埃博拉出血热检测资质的实验室进行留观病例、疑似病例采集发病日后静脉血管，送具有埃博拉出血热检测资质的实验室进行埃博拉病毒检测；
5、埃博拉病毒检测； 确诊病例采集恢复期血标本，送国家疾控中心病毒病所进行检测。确诊病例采集恢复期血标本，送国家疾控中心病毒病所进行检测。 （二）标本保存、运送（二）标本保存、运送 二二. . 标本采集、保存和运输标本采集、保存和运输未分离血清的全血标本应未分离血清的全血标本应保存，并尽快送具有埃博拉出血热检测资质的实验室保存，并尽快送具有埃博拉出血热检测资质的实验室分离血清、检测；血清标本长期保存应置于分离血清、检测；血清标本长期保存应置于或以下冰箱，周内保存可置或以下冰箱，周内保存可置冰箱。冰箱。标本运输应按照相关生物安全规定，采取类包装，低温冷藏运输，避免反复冻融标本运输应按照相关生物安全规
6、定，采取类包装，低温冷藏运输，避免反复冻融 埃博拉病毒核酸检测 埃博拉病毒抗原检测 、抗体检测三、检测内容三、检测内容 （一）病原学检测（一）病原学检测.核酸检测：核酸检测： 是目前早期诊断、早期发现埃博拉出血热病例的主要检测方法。为提高检测的敏感性和特异性，用实时是目前早期诊断、早期发现埃博拉出血热病例的主要检测方法。为提高检测的敏感性和特异性，用实时荧光荧光 方法针对埃博拉病毒个不同的基因进行检测，在病例筛查时，任一基因检测阳性均可判为埃博拉病毒方法针对埃博拉病毒个不同的基因进行检测，在病例筛查时，任一基因检测阳性均可判为埃博拉病毒阳性；在确诊病例出院时，需针对个基因的检测同时阴性，方可判
7、定为阴性。阳性；在确诊病例出院时，需针对个基因的检测同时阴性，方可判定为阴性。四、实验室检测方法四、实验室检测方法. 病毒抗原检测：病毒抗原检测： 用酶联免疫法检测埃博拉病毒抗原。病毒抗原检测阳性可确诊。用酶联免疫法检测埃博拉病毒抗原。病毒抗原检测阳性可确诊。 发病后天内，血标本中埃博拉病毒抗原检出率低，检测阴性不能排除埃博拉病毒感染。发病后天内，血标本中埃博拉病毒抗原检出率低，检测阴性不能排除埃博拉病毒感染。 发病后天血标本病毒抗原检出率高。发病后天血标本病毒抗原检出率高。四、实验室检测方法四、实验室检测方法（二）血清学检测（二）血清学检测. 血清特异性抗体：采用捕获法方法检测。抗体阳性可确
8、诊。血清特异性抗体：采用捕获法方法检测。抗体阳性可确诊。. 血清特异性抗体：目前采用间接法检测抗体。血清特异性抗体：目前采用间接法检测抗体。 单份血清埃博拉病毒抗体阳性提示曾经感染埃博拉病毒，双份血清埃博拉病毒抗体阳转或恢单份血清埃博拉病毒抗体阳性提示曾经感染埃博拉病毒，双份血清埃博拉病毒抗体阳转或恢复期滴度较急性期倍或者以上增高者可确诊。复期滴度较急性期倍或者以上增高者可确诊。四、实验室检测方法四、实验室检测方法（三）结果的报告、复核和反馈（三）结果的报告、复核和反馈 埃博拉病毒检测机构应将所有阳性和部分阴性血清标本送中国疾病预防控制中心病毒病所进埃博拉病毒检测机构应将所有阳性和部分阴性血清
9、标本送中国疾病预防控制中心病毒病所进行复核检测。实验室检测结果应与时反馈标本送检单位，并尽快上报上级主管部门行复核检测。实验室检测结果应与时反馈标本送检单位，并尽快上报上级主管部门 。四、实验室检测方法四、实验室检测方法五、生物安全五、生物安全按照病原微生物实验室生物安全管理条例等相关规定要求，做好生物安全工作。按照病原微生物实验室生物安全管理条例等相关规定要求，做好生物安全工作。凡涉与埃博拉病毒的分离、培养和动物实验，需在生物安全级（）实验室内进行。 涉及未经培养有感染性材料的实验活动，需在实验室内进行。 血清学检测应在实验室内进行，且标本应首先小时灭活，再进行后续实验操作。 核酸检测时,需
10、在实验室生物安全柜内将核酸提取裂解液加入标本中,充分裂解后，完成病毒提取。对装有病毒的样品管外表面进行彻底消毒后，可在实验室以外进行扩增检测。在进行感染性材料操作时，每次标本份数不宜过多，每份标本量不宜过大。实验室检测的生物安全实验室检测的生物安全生物安全防护生物安全防护 在实验室处理感染性标本时，应严格按照操作规范在实验室内进行。 实验室工作人员应穿着遮盖全身的个人防护装备，包括防渗漏防护服、或以上口罩、（防护目镜）、防护面罩、乳胶手套等，当需进行感染性标本离心、较大量标本（ ）分装处理等时应使用正压头盔。 实验人员有体表开放式伤口时不宜参加实验活动。 涉与感染性材料的离心应使用有密封盖的离
11、心桶或转头进行标本离心，应在生物安全柜内打开离心转头放入或取出装有标本的离心管。 在标本的采集、包装和实验室检测等过程中所产生的医疗废物，可能具有生物危险性，应当按照医疗废物管理条例和医疗卫生机构医疗废物管理办法等相关规定及时处理。 实验室检测埃博拉病毒相关感染性标本的实验活动发生意外时，应及时启动相关应急预案。生物安全防护生物安全防护 埃博拉出血热相关标本埃博拉出血热相关标本 采集、包装、运输技术指南采集、包装、运输技术指南埃博拉出血热相关标本采集、包装、运输技术指南埃博拉出血热相关标本采集、包装、运输技术指南一、生物安全防护一、生物安全防护、所有样本的采集或处理、所有样本的采集或处理 应遵
12、守医院感染管理规范和病原微生物实验室生物安全管理条应遵守医院感染管理规范和病原微生物实验室生物安全管理条例等相关生物安全规定，在标准预防的基础上采用飞沫和接触隔离的预防措施。例等相关生物安全规定，在标准预防的基础上采用飞沫和接触隔离的预防措施。、样本采集时，应严格按照级实验室规定做好个人防护。应穿戴医用防护服、可遮盖口鼻的医用、样本采集时，应严格按照级实验室规定做好个人防护。应穿戴医用防护服、可遮盖口鼻的医用防护口罩防护口罩()、戴双层防护手套、护目镜、防护面具、鞋套或橡胶靴等。、戴双层防护手套、护目镜、防护面具、鞋套或橡胶靴等。（一）采集时间（一）采集时间 一般发病后周内，可在患者血标本中检
13、测到病毒核酸和抗原，发病后天的标本核酸和抗原的检出率一般发病后周内，可在患者血标本中检测到病毒核酸和抗原，发病后天的标本核酸和抗原的检出率高。高。 最早可从发病后天的患者血清中检出特异性抗体，抗体可维持数月。发病后天可检出最早可从发病后天的患者血清中检出特异性抗体，抗体可维持数月。发病后天可检出 抗体，康复者抗体，康复者 抗体可维持数年。发病天以后的标本病毒特异性抗体的检出率高。抗体可维持数年。发病天以后的标本病毒特异性抗体的检出率高。 应根据不同检测目的确定采样时间，疑似患者排除埃博拉病毒感染需采集发病天以后的血标本。应根据不同检测目的确定采样时间，疑似患者排除埃博拉病毒感染需采集发病天以后
14、的血标本。二、标本采集二、标本采集（二）标本采集（二）标本采集.采血场所除了病人常规护理的材料外，应备有手套、防护服和防护面具等，同时备有洗手的设施和装采血场所除了病人常规护理的材料外，应备有手套、防护服和防护面具等，同时备有洗手的设施和装有消毒液的桶。有消毒液的桶。. 采集埃博拉出血热患者血样应由经过生物安全防护培训的人员执行，采血时应人在场。采集埃博拉出血热患者血样应由经过生物安全防护培训的人员执行，采血时应人在场。二、标本采集二、标本采集（二）标本采集（二）标本采集、采用分离胶无菌真空促凝管采集静脉血，每管，采集后用封口膜封闭管口，标记清楚后放入自封袋、采用分离胶无菌真空促凝管采集静脉血
15、，每管，采集后用封口膜封闭管口，标记清楚后放入自封袋或离心管内，并在自封袋或离心管外表面再清楚标记，或离心管内，并在自封袋或离心管外表面再清楚标记，保存，填写标本采集登记表。保存，填写标本采集登记表。 （如果要检测疟原虫，则需另采管抗凝血。）（如果要检测疟原虫，则需另采管抗凝血。）、留观病例和疑似病例应在发病天后，采集静脉血管，送指定的具有埃博拉出血热检测资质的实验室、留观病例和疑似病例应在发病天后，采集静脉血管，送指定的具有埃博拉出血热检测资质的实验室进行埃博拉病毒检测。进行埃博拉病毒检测。、确诊病例采集恢复期血标本，包括并不限于出院前标本份，每份管，采集时间间隔不少于小时，送、确诊病例采集
16、恢复期血标本，包括并不限于出院前标本份，每份管，采集时间间隔不少于小时，送国家疾控中心病毒病所进行埃博拉病毒检测，用于指导病例管理。国家疾控中心病毒病所进行埃博拉病毒检测，用于指导病例管理。二、标本采集二、标本采集 、所有疑似埃博拉病毒相关感染性标本的运输应按照病原微生物实验室生物安全管理条例和人间传染、所有疑似埃博拉病毒相关感染性标本的运输应按照病原微生物实验室生物安全管理条例和人间传染的病原微生物名录等相关规定，采取类包装，符合要求。的病原微生物名录等相关规定，采取类包装，符合要求。 按照三重包装系统包装：第一层包装为自封袋或离心管；第二层包装为防水、防漏的安全壳容器；第三按照三重包装系统
17、包装：第一层包装为自封袋或离心管；第二层包装为防水、防漏的安全壳容器；第三层为运输包装组成。层为运输包装组成。 样本应用吸水纸等包裹，固定在防漏自封袋或离心管内。然后放置在坚固、防水、防漏的第二层安全壳样本应用吸水纸等包裹，固定在防漏自封袋或离心管内。然后放置在坚固、防水、防漏的第二层安全壳容器中，用吸水纸等填充物将内有标本的自封袋或离心管固定好，然后装入第三层包装。安全壳容器和外包容器中，用吸水纸等填充物将内有标本的自封袋或离心管固定好，然后装入第三层包装。安全壳容器和外包装须与危险物品条例包装制度相符合。装须与危险物品条例包装制度相符合。三、标本包装、运输三、标本包装、运输三、标本包装、运
18、输三、标本包装、运输、写明标本的详细情况、运送者、写明标本的详细情况、运送者与与预期接收者地址，并密封在塑料袋里，用胶布分别粘在外层预期接收者地址，并密封在塑料袋里，用胶布分别粘在外层容器里面和外面并留档以便追踪，方便实验室操作人员查对标本数量。容器里面和外面并留档以便追踪，方便实验室操作人员查对标本数量。、样本运输之前，应按相关生物安全规定先和样本接收单位相关生物安全负责人联系，办理相、样本运输之前，应按相关生物安全规定先和样本接收单位相关生物安全负责人联系，办理相关手续，运送日确定后即通知接收实验室标本运送的时间和运输方式。关手续，运送日确定后即通知接收实验室标本运送的时间和运输方式。、实
19、验室检测埃博拉病毒阳性血标本，应根据病原微生物实验室生物安全管理条例等相关生物、实验室检测埃博拉病毒阳性血标本，应根据病原微生物实验室生物安全管理条例等相关生物安全规定保存，实行安全规定保存，实行“双人双锁双人双锁”管理和取样管理和取样“审批审批”制度。制度。、实验室检测埃博拉病毒阴性血标本，应在排除埃博拉病毒感染后，转入其他血清库保存或销毁。、实验室检测埃博拉病毒阴性血标本，应在排除埃博拉病毒感染后，转入其他血清库保存或销毁。、所有感染性血清销毁时，均应在在生物安全柜内待其自然融化，、所有感染性血清销毁时，均应在在生物安全柜内待其自然融化， 小时灭活后，在生物安全柜内，小时灭活后，在生物安全柜内，打开样本管，置于有效消毒剂内浸泡，然后高压灭活。打开样本管，置于有效消毒剂内浸泡，然后高压灭活。、所有销毁样本均应在相应数据库清单内标明，并记录销毁的时间和操作人，阴性样本销毁记录应、所有销毁样本均应在相应数据库清单内标明，并记录销毁的时间和操作人，阴性样本销毁记录应保存年以上，阳性样本的销毁记录应保存年以上。保存年以上，阳性样本的销毁记录应保存年以上。五、样本保存和销毁五、样本保存和销毁
