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1、还原叶酸载体基因多态性与儿还原叶酸载体基因多态性与儿还原叶酸载体基因多态性与儿还原叶酸载体基因多态性与儿童童童童ALLALLALLALL易感性的关系研究易感性的关系研究易感性的关系研究易感性的关系研究杨丽华杨丽华 余晶余晶 王斌王斌南方医科大学珠江医院南方医科大学珠江医院 儿科中心儿科中心研研 究究 背背 景景 急性淋巴细胞白血病急性淋巴细胞白血病（acute lymphoblastic leukemia，ALL）为最常见的儿童恶性肿瘤，约占为最常见的儿童恶性肿瘤，约占25-30%25-30% 病毒病毒感染感染基基 因因环环 境境病因病因？ 现普遍认为，现普遍认为，ALLALL的发生为的发生为
2、基因基因- -环境环境相互作用所致相互作用所致理化理化因素因素遗传遗传素质素质暴露于相同危险环境因素的儿童暴露于相同危险环境因素的儿童, ,其其ALLALL发病的差发病的差异是由遗传易感性异是由遗传易感性（susceptibility）来决定的来决定的危险环境危险环境 CancerCancer-free基基因因多多态态性性Susceptibility:Metabolism,DNA damage & repairRFC5-MeTHF图图 1. 叶酸代谢途径叶酸代谢途径Dhillon et al.Mutat Res 2009; 665: 1-6叶酸代谢相关叶酸代谢相关基因的多态性基因的多态性 影响
3、细胞的叶酸代谢影响细胞的叶酸代谢 干扰正常干扰正常DNADNA合成和甲基化合成和甲基化 ALL？（Reduced folate carrier, RFC）还原叶酸载体基因还原叶酸载体基因RFC1RFC1位于位于21q22.2-q22.3,21q22.2-q22.3,编码编码一个含一个含591591个氨基酸的完整的膜蛋白个氨基酸的完整的膜蛋白, ,包含包含1212个跨个跨膜区膜区( (transmembrane domain，TMD) ) 还还 原原 叶叶 酸酸 载载 体体分生结构分生结构第第2 2外外显显子子第第8080位位核核苷苷酸酸具具有有高高频频率率的的A A GG多态可引起第多态可引起
4、第2727位密码子位密码子HisHisArgArg多态性多态性与正常人群的血浆与正常人群的血浆叶酸叶酸和和同型半胱氨酸同型半胱氨酸水平有关水平有关可能影响儿童可能影响儿童ALLALL的的遗传易感性、疗效、预后遗传易感性、疗效、预后等等特性特性研研 究究 目目 的的了解在健康儿童和了解在健康儿童和ALLALL白血病儿童中白血病儿童中RFC1 80RFC1 80位点基因型分布特征位点基因型分布特征 探讨探讨RFC1 A80GRFC1 A80G多态性与儿童多态性与儿童ALLALL易感易感性之间的关系性之间的关系研研 究究 对对 象象 ALLALL组组 4545例，例，2008.10-2010.220
5、08.10-2010.2儿科和血儿科和血液内科住院的初治液内科住院的初治ALLALL儿童。男儿童。男2828例，女例，女1717例，年龄例，年龄1-161-16岁，中位年龄岁，中位年龄5.535.53岁。岁。 对照组对照组 7070例，同期门诊体检健康儿童。例，同期门诊体检健康儿童。男男4545名，女名，女2525名，年龄名，年龄1-141-14岁，中位年龄岁，中位年龄5.315.31岁。岁。两组均为华南地区出生汉族儿童两组均为华南地区出生汉族儿童 研研 究究 方方 法法1.1.采集外周静脉血，抽提基因组采集外周静脉血，抽提基因组DNADNA2.PCR2.PCR扩增扩增3.DNA3.DNA片段
6、大小检测及回收纯化片段大小检测及回收纯化4.DNA4.DNA测序测序5.5.统计学处理统计学处理结结 果果500bp400bp300bp200bp150bp100bp50bp140bp M 1 2 3 4 5 6 7 图图2 2 RFC1 RFC1基因第基因第2 2外显子含外显子含8080片段片段PCRPCR产物产物2%2%琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳M M：Marker 1-7Marker 1-7：分别为：分别为ALLALL标本标本1-71-7 A BC图图2 2 RFC1 RFC1基因第基因第2 2外显子含外显子含8080片段的测序图片段的测序图A.A.野生型野生型(His(His2727
7、His) His) ：CACCACB.B.杂合子突变型杂合子突变型(His(His2727Arg)Arg)：CNC (NCNC (N代表代表A/GA/G杂合杂合) ) C.C.纯合子突变型纯合子突变型(Arg(Arg2727 Arg) Arg)：CGCCGC组别组别GGGAAA2P观察值观察值 期望值期望值 观察值观察值 期望值期望值观察值观察值期望值期望值ALL组组76.42021.21817.40.1340.71对照组对照组1820.64034.71214.61.6031.21表表1 RFC1 801 RFC1 80基因型分布及基因型分布及Hardy-WeinbergHardy-Weinb
8、erg平衡检验平衡检验拟合优度拟合优度2 2检验结果：检验结果：两组人群均符合两组人群均符合H-WH-W遗传平衡遗传平衡(df=2(df=2，P P0.05)0.05)，说明这两个研究人群来自大的群体，不存在明显的自然选择、说明这两个研究人群来自大的群体，不存在明显的自然选择、迁移等因素对遗传平衡的影响迁移等因素对遗传平衡的影响组别组别 例数例数基因型频率基因型频率GGGGAGAGAAAAALLALL组组45457 7（15.615.6）2020（44.444.4）1818（40.040.0）* *对照组对照组70701818（25.725.7）4040（57.157.1）1212（17.11
9、7.1）*ALL*ALL组与对照组相比，组与对照组相比，2 2=7.633=7.633，P P=0.02=0.02表表2 2 两组两组RFC1RFC1基因基因8080位点基因型频率分布位点基因型频率分布表表3 3 两组两组RFCRFC基因基因8080位点位点G G、A A等位基因频率分布等位基因频率分布组别组别例数例数等位基因频率等位基因频率 G GA AALLALL组组45453434（37.837.8） 56(62.2) 56(62.2)* *对照组对照组70707676（54.354.3）64(45.7)64(45.7)*ALL*ALL组与对照组相比，组与对照组相比，2 2=5.983=
10、5.983，P P=0.01=0.01两组两组RFC180RFC180各种基因型频率的分布差异具有统计学意义各种基因型频率的分布差异具有统计学意义两组两组RFC180RFC180等位基因等位基因A A频率差异具有统计学意义频率差异具有统计学意义 基因型基因型ALLALL组（组（% %）对照组（对照组（% %）OROR值（值（95%95%CICI）OROR值值* *（95%95%CICI）GGGG7 7（15.615.6）1818（25.725.7）1.001.001.001.00GAGA2020（44.444.4）4040（57.157.1）1.291.29（0.46-3.580.46-3.5
11、8）1.231.23（0.44-3.460.44-3.46）AAAA1818（40.040.0）1212（17.117.1）3.863.86（1.24-12.041.24-12.04）4.154.15（1.29-13.381.29-13.38）AG+AAAG+AA38 (84.4)38 (84.4)52 (74.3)52 (74.3)1.881.88（0.71-4.950.71-4.95）1.871.87（0.71-4.930.71-4.93）表表4 RFC1 804 RFC1 80多态性与儿童多态性与儿童ALLALL易感性的易感性的logisticlogistic回归分析回归分析* * OR
12、OR* *（95%95%CICI）经过年龄和性别校正）经过年龄和性别校正在调整了年龄、性别因素后，在调整了年龄、性别因素后，携带携带RFC180AARFC180AA基因型的儿童较基因型的儿童较80GG80GG携带者携带者患患ALLALL的风险增加的风险增加4.154.15倍倍讨讨 论（论（1 1）华南地区汉族健康儿童的RFC1 80A等位基因频率为45.7% 中国南方人群中国南方人群 47.9% 美国健康儿童美国健康儿童62% 英国健康儿童英国健康儿童59%Relton CL, et al2004裴丽君裴丽君2004de Jonge R, et al2009RFC1 A80GRFC1 A80G
13、多态性频率特征在不同种族或地域的人群间有不同差异多态性频率特征在不同种族或地域的人群间有不同差异 讨讨 论（论（2 2） RFC1 80AARFC1 80AA可显著性增加儿童可显著性增加儿童ALLALL的患病风险的患病风险 一方面，位于一方面，位于TMD1TMD1内的组氨酸碱性相对较弱，可改内的组氨酸碱性相对较弱，可改变变RFCRFC转运功能，引起叶酸摄取率转运功能，引起叶酸摄取率 以及甲硫氨酸循以及甲硫氨酸循环中的环中的Hcy Hcy ，致使该循环转甲基能力，致使该循环转甲基能力 （Whetstine et al, 2001Whetstine et al, 2001）另一方面，另一方面，含含
14、RFC1 80ARFC1 80A等位基因的个体的淋巴细胞等位基因的个体的淋巴细胞微核率较其它基因型者明显微核率较其它基因型者明显 ，严重影响了染色体的，严重影响了染色体的稳定性稳定性 (Dhillon et al, 2009 )(Dhillon et al, 2009 )结结 论论RFC1 A80GRFC1 A80G多态性频率特征在不同种族或多态性频率特征在不同种族或地域人群间存在差异地域人群间存在差异；RFC1 A80GRFC1 A80G多态性与中国汉族儿童多态性与中国汉族儿童ALLALL易感易感性有关，其中性有关，其中RFC1 80ARFC1 80A等位基因可增加患等位基因可增加患病风险。
15、病风险。 xZgI0rTaC&lN5wYgH+qSaB%lM4wXfG-qR9B$kM3vWeG)pR8A$jL2uWdF)oQ8z!iK2tVdE(oP7y#iJ1tUcE*nO6yZhJ0sUbD&mO5xZgI0rTaC&lN5wYgH+qSaB%lM4wXfG-qR9B$kM3vWeG)pR8A$jL2uWdF)oQ8z!jK2tVdE(oP7z#iJ1tUcE*nP6yZhJ0K2tVdE(oP7z#iJ1tUcE*nP6yZhJ0sUbD*mO5xZgI0rTbC&lN5wYgH+rSaB%lM4wXfH-qR9B$kM3vXeG)pR8A$jL3uWeF)oQ8z!jK2uVdE
16、(oP7z#iK1tUcE*nP6y#hJ0sUbD*mO6xZgI0rTbC&mN5wYgH+rSaC%lM4wXfH-qS9B$kM3vXeG-pR8A$jL3uWeF)oQ8z!jK2uVdoQ8z!iK2tVdE(oP7y#iJ1tUcE*nO6yZhJ0sUbD&mO5xZgI0rTaC&lN5wYgH+rSaB%lM4wXfH-qR9B$kM3vXeG)pR8A$jL3uWdF)oQ8z!jK2tVdE(oP7z#iJ1tUcE*nP6yZhJ0sUbD*mO5xZgI0rTbC&lN5wYgH+rSaB%lM4wXfH-qR9B$kM3vXeG)pR8A$jL3uWdXfH-qS
17、9B$kM3vXeG-pR8A$jL3uWeF)oQ8z!jK2uVdE(oP7z#iK1tUcE*nP6y#hJ0sUbD*mO6xZgI0rTbC&mN5wYgH+rSaC%lM4wXfH-qS9B$kM3vXeG-pR8A$jL3uWeF)oQ8z!jK2uVdE(oP7z#iK1tUcE*nP6y#hJ0sUbD*mO6xZgI0rTbC&mN5wYgH+rSaC%lM4wX+rSaB%lM4wXfH-qR9B$kM3vXeG)pR8A$jL3uWdF)oQ8z!jK2tVdE(oP7z#iJ1tUcE*nP6yZhJ0sUbD*mO5xZgI0rTbC&lN5wYgH+rSaB%lM
18、4wXfH-qR9B$kM3vXeG)pR8A$jL3uWdF)oQ8z!jK2tVdE(oP7z#iJ1tUcE*nP6yZhJ0sUbD*mO5xZgI0rTbC&E*nP6y#hJ0sUbD*mO6xZgI0rTbC&mN5wYgH+rSaC%lM4wXfH-qS9B$kM3vXeG-pR8A$jL3uWeF)oQ8z!jK2uVdE(oP7z#iK1tUcE*nP6y#hJ0sUbD*mO6xZhI0rTbC&mN5xYgH+rSaC%lN4wXfH-qS9B%4wXfH-qR9B$kM3vXeG)pR8A$jL3uWdF)oQ8z!jK2tVdE(oP7z#iJ1tUcE*nP6yZ
19、hJ0sUbD*mO5xZgI0rTbC&lN5wYgH+rSaB%lM4wXfH-qR9B$kM3vXeG)pR8A$jL3uWdF)oQ8z!jK2uVdE(oP7z#iK1tUcE*nP6y#hJ0sUbDO6yZhJ0sUbD&mO5xZgI0rTaC&lN5wYgH+qSaB%lM4wXfG-qR9B$kM3vWeG)pR8A$jL2uWdF)oQ8z!iK2tVdE(oP7y#iJ1tUcE*nO6yZhJ0sUbD&mO5xZgI0rTaC&lN5wYgH+qSaB%lM4wXfH-qR9B$kM3vXeG)pR8A$jL3uWdF)oQ8z!jKkM3vXeG)pR8A$jL3
20、uWdF)oQ8z!jK2tVdE(oP7z#iJ1tUcE*nP6yZhJ0sUbD*mO5xZgI0rTbC&lN5wYgH+rSaC%lM4wXfH-qS9B$kM3vXeG-pR8A$jL3uWeF)oQ8z!jK2uVdE(oP7z#iK1tUcE*nP6y#hJ0sUbD*mO6xZgI0rTbC&5xZgI0rTaC&lN5wYgH+qSaB%lM4wXfG-qR9B$kM3vWeG)pR8A$jL2uWdF)oQ8z!iK2tVdE(oP7y#iJ1tUcE*nP6yZhJ0sUbD*mO5xZgI0rTbC&lN5wYgH+rSaB%lM4wXfH-qR9B$kM3vXeG)
21、pR8A$jL3uWdF)oQqR9B$kM3vXeG)pR8A$jL3uWdF)oQ8z!jK2tVdE(oP7z#iK1tUcE*nP6y#hJ0sUbD*mO6xZgI0rTbC&mN5wYgH+rSaC%lM4wXfH-qS9B$kM3vXeG-pR8A$jL3uWeF)oQ8z!jK2uV)oQ8z!iK2tVdE(oP7y#iJ1tUcE*nO6yZhJ0sUbD&mO5xZgI0rTaC&lN5wYgH+qSaB%lM4wXfG-qR9B$kM3vWeG)pR8A$jL3uWdF)oQ8z!jK2tVdE(oP7z#iJ1tUcE*nP6yZhJ0sUbD*mO5xZgI0rTt
22、UcE*nP6yZhJ0sUbD*mO5xZgI0rTbC&lN5wYgH+rSaB%lM4wXfH-qR9B$kM3vXeG-pR8A$jL3uWedF(oQ7z#iK1tVcE(nP6y#hJ1sUcD*mO6xZhI0sTbC&mN5xYg#hJ1sUcD*mO6xZhI0sTbC&mN5xYgI+rSaC%lN4wYfH-qS9B%kM4vXeG-pR9A$kL3vWeF)pQ8A!jL2uVdF(oQ7z!iK1tVcE(nP7y#hJ1sUcD*nO6xZhI0sTbD&mN5xYgI+rTaC%lN4wYfH+qS9B%kM4vXfG-pR9A$kL3vG-pR9A$jL3uWe
23、F)pQ8z!jK2uVdF(oP7z#iK1tVcE*nP6y#hJ1sUbD*mO6xZhI0rTbC&mN5xYgI+rSaC%lN4wYfH-qS9B%kM4vXeG-rTbC&mN5wYgH+rSaC%lMYgH+rSaB%lM4wXfH-qR9B$kM3vXeG)pR8A$jL3uWdF)oQ8z!jK2tVdE(oP7z#iJ1tUcE*nP6yZhJ0sUbD*mO5xZgI0rTbC&lN5wYgH+rSaB%lM4wXfH-qR9B$kM3vXeG)pR8A$jL3uWdF)oQ8z!jK2tVvXeG-pR8A$jL3uWeF)oQ8z!jK2uVdE(oP7z#iK1t
24、UcE*nP6y#hJ0sUbD*mO6xZgI0rTbC&mN5wYgH+rSaC%lM4wXfH-qS9B$kM3vXeG-pR8A$jL3uWeF)oQ8z!jK2uVdE(oP7z#iK1tUcE*nP6yJ1tUcE*nP6yZhJ0sUbD*mO5xZgI0rTbC&lN5wYgH+rSaB%lM4wXfH-sUbD&mO5xZgI0rTaC&lN5wYgH+qSaB%lM4wXfG-qR9B$kM3vWeG)pR8A$jL2uWdF)oQ8z!iK2tVdE(oP7y#2tVcE(nP7y#iJ1sUcD*nO6yZhI0sTbD&mO5xYgI+rTaC&lN5wYfH+qSa
25、B%lM4vXfG-qR9B$kL3vWeG)pR8A!jL2uWdF)oQ7z!iK2tVdE(nP7y#iJ1tUcD*nO6yZhJ0sTbD&m(nP7y#iJ1tUcD*nO6yZhJ0sTbD&mO5xZgI0rTaC&lN5wYgH+qSaB%lM4wXfG-qR9B$kM3vWeG)pR8A$jL2uWdF)oQ8z!iK2tVdE(oP7y#iJ1tUcE*nO6kL3vWeF)pQ8A!jL2uVdF(oQ7z!iK1tVcE(nP7y#hJ1sUcD*nO6xZhI0sTbD&mN5xYgI+rTaC%lN4wYfH+qS9B%kM4vXfG-pR9A$kLlN4wYfH
26、+qSaB%kM4vXfG-qR9A$kL3vWeG)pQ8A!jL2uWdF(oQ7z!iK2tVcE(nP7y#iJ1sUcD*nO6yZhI0sTbD&mO5xYgI+rTaC&lN4wYfH+qSaB%kM4vXfG-qR9A$kL3vWeG)pQ8AL3vWeF)pQ8A!jL2uVdF(oQ7z!iK1tVcE(nP7y#hJ1sUcD*nO6xZhI0sTbD&mN5x#iK1tVcE(nP6y#hJ1sUcD*mO6xZhI0sTbC&mN5xYgI+rSaC%lN4wYfH-qS9B%kM4vXeG-pR9AM3vXeG-pR8A$jL3uWeF)oQ8z!jK2uVdE(o
27、P7z#iK1tUcE*nP6y#hJ0sUbD*mO6xZgI0rTbC&mN5xYgH+rSaC%lN4wXfH-qS9B%kM3vXeG-pR9A$jL3uWeF)pQ8z!jK2uVdF(o-pR9A$jL3uWeF)pQ8z!jK2uVdF(oP7z#iK1tVcE*nP6y#hJ1sUbD*mO6xZhI0sTbC&mN5xYgK1tUcE*nP6y#hJ0sUbD*mO6xZgI0rTbC&mN5wYgHTbC&lN5wYgH+rSaB%lM4wXfH-qR9B$kM3vXeG)pR8A$jL3uWdF)oQ8z!jK2tVdE(oP7z#iJ1tUcE*nP6yZhJ0sUbD
28、*mO5xZgI0rTbC&lN5wYgH+rSaB%lM4wXfH-qR9B$kwXfG-qR9B$kM3vWeG)pR8A$jL2uWdF)oQ8z!iK2tVdE(oP7y#iJ1tUcE*nO6yZhJ0sUbD&mO5xZgI0rTaC&lN5wYgH1tUcD*nO6yZhJ0sTbD&mO5xZgI+rTaC&D*nO6yZhJ0sTbD&mO5xZgI+rTaC&lN5wYfH+qSaB%lM4vXfG-qR9B$kM3vWeG)pR8A$jL2uWdF)oQ8z!iK2tVdE(oP7y#iJ1tUcE*nO6yZhJ0sUbD&mO5xZgI0rTaCO5xYgI+rTaC
29、&lN4wYfH+qSaB%kM4vXfG-qR9A$kL3vWeG)pQ8A!jL2uWdF(oQ7z!iK2tVcE(nP7y#iJ1sUcD*nQ8A!jL2uVdF(oQ7z!iK1tVcE(nP7y#hJ1sUcD*ny#hJ1sUcD*mO6xZhI0sTbC&mN5xYgI+rSaC%lN4wYfH-qS9B%kM4vXeG-pR9A$kL3uWeF)pQ8A!jK2uVdF(oQ7z#iK1tVcE(nP6y#hJ1sUcD*mOoQ7z!iK1tVcE(nP7y#hJ1sUcD*nO6xZhI0sTbD&mN5xYgI+rTaC%lN4wYfH+qS9B%kM4vXfG-pR
30、9A$kL3xYgI+rSaC%lN4wYfH-qS9B%kM4vXeG-pR9A$kL3uWeFR8A$jL3uWeF)oQ8z!jK2uVdE(oP7z#iK1tUcE*nP6y#hJ0sUbD*mO6xZgI0rTbC&mN5wYgH+rSaC%lM4wXfH-qS9B$kM3vXeG-pR9A$jL3uWeF)pQ8z!jK2uVdXeG-pR9A$jL3uWeF)pQ8z!jK2uVdF(oP7z#iK1tVcE*nP6y#hJ1sUbDy#iJ1tUcE*nO6yZhJ0sUbD&mO5xZgI0rTaUcE*nP6yZhJ0sUbD*mO5xZgI0rTbC&lN5wYgH+rSaB%lM4wXfH-qR9B$kM3vXeG)pR8A$jL3uWdF)oQ8z!jK2tVdE(oP7z#iJ1tUcE*nP6yZhJ0sUbD*mO5xJ0sTbD&mO5xZgI+rTaC&lN5wYfH+qSaB%lM4vXfG-qR9B$kL3vWeG)pR8C&lN4wYfH+qSaB%kM4vXfG-qR9A$kL3vWeG)pQ8A!jL2uWdF(oQqR9B$kL3vWeG)pR8A
