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1、植物生理学实验植物生理学实验PPTPPT课件课件目目录录1.1.前言前言前言前言 实验室守则实验室守则实验室守则实验室守则 实验课程安排实验课程安排实验课程安排实验课程安排 实验课程考核实验课程考核实验课程考核实验课程考核2.2.植物生理学常用实验技术概述植物生理学常用实验技术概述植物生理学常用实验技术概述植物生理学常用实验技术概述3.3.植物生理学基础实验植物生理学基础实验植物生理学基础实验植物生理学基础实验 K K+、CaCa2+2+对细胞质壁分离的影响对细胞质壁分离的影响对细胞质壁分离的影响对细胞质壁分离的影响 小液流法测定植物组织水势小液流法测定植物组织水势小液流法测定植物组织水势小液
2、流法测定植物组织水势 植物上流强度及其成分分析植物上流强度及其成分分析植物上流强度及其成分分析植物上流强度及其成分分析 植物组织可溶性糖含量测定植物组织可溶性糖含量测定植物组织可溶性糖含量测定植物组织可溶性糖含量测定 小篮子法测定萌发种子呼吸强度小篮子法测定萌发种子呼吸强度小篮子法测定萌发种子呼吸强度小篮子法测定萌发种子呼吸强度 种子生活率的快速测定种子生活率的快速测定种子生活率的快速测定种子生活率的快速测定目录目录4.综合与设计性实验综合与设计性实验实验课题的选择与设计实验课题的选择与设计实验课题的选择与设计实验课题的选择与设计 课题的来源课题的来源课题的来源课题的来源 课题选择的原则课题选
3、择的原则课题选择的原则课题选择的原则 课题的设计课题的设计课题的设计课题的设计备选综合与设计实验题目备选综合与设计实验题目备选综合与设计实验题目备选综合与设计实验题目 植物生长调节剂（植物生长调节剂（植物生长调节剂（植物生长调节剂（NAANAA或或或或pp333pp333或烯效唑）对小麦幼苗或烯效唑）对小麦幼苗或烯效唑）对小麦幼苗或烯效唑）对小麦幼苗生长的影响生长的影响生长的影响生长的影响 盐胁迫对小麦幼苗生长的影响盐胁迫对小麦幼苗生长的影响盐胁迫对小麦幼苗生长的影响盐胁迫对小麦幼苗生长的影响 矿质元素（氮或钾或铁）对玉米幼苗生长的影响矿质元素（氮或钾或铁）对玉米幼苗生长的影响矿质元素（氮或钾
4、或铁）对玉米幼苗生长的影响矿质元素（氮或钾或铁）对玉米幼苗生长的影响目 录分析测试项目分析测试项目分析测试项目分析测试项目 实验材料的培育与处理实验材料的培育与处理实验材料的培育与处理实验材料的培育与处理 形态指标的观察记载与测量形态指标的观察记载与测量形态指标的观察记载与测量形态指标的观察记载与测量 生理指标的测定生理指标的测定生理指标的测定生理指标的测定5.5.实验论文的撰写实验论文的撰写实验论文的撰写实验论文的撰写 四川农业大学实验室守则四川农业大学实验室守则四川农业大学实验室守则四川农业大学实验室守则一、实验前要认真预习，明确实验目的要求，了解实验步骤一、实验前要认真预习，明确实验目的
5、要求，了解实验步骤一、实验前要认真预习，明确实验目的要求，了解实验步骤一、实验前要认真预习，明确实验目的要求，了解实验步骤和实验方法。和实验方法。和实验方法。和实验方法。二、学生必须按教学计划规定的时间到实验室上实验课，不二、学生必须按教学计划规定的时间到实验室上实验课，不二、学生必须按教学计划规定的时间到实验室上实验课，不二、学生必须按教学计划规定的时间到实验室上实验课，不得无故迟到、早退。得无故迟到、早退。得无故迟到、早退。得无故迟到、早退。三、进入实验室必须遵守实验室的一切规章制度，注意保持三、进入实验室必须遵守实验室的一切规章制度，注意保持三、进入实验室必须遵守实验室的一切规章制度，注
6、意保持三、进入实验室必须遵守实验室的一切规章制度，注意保持室内安静，不得嬉闹、喧哗和影响他人实验。室内安静，不得嬉闹、喧哗和影响他人实验。室内安静，不得嬉闹、喧哗和影响他人实验。室内安静，不得嬉闹、喧哗和影响他人实验。四、爱护仪器设备和实验材料，严格遵守操作规程，实验过四、爱护仪器设备和实验材料，严格遵守操作规程，实验过四、爱护仪器设备和实验材料，严格遵守操作规程，实验过四、爱护仪器设备和实验材料，严格遵守操作规程，实验过程中仪器设备发生故障，要立即停止实验，并报告指导教程中仪器设备发生故障，要立即停止实验，并报告指导教程中仪器设备发生故障，要立即停止实验，并报告指导教程中仪器设备发生故障，要
7、立即停止实验，并报告指导教师，进行妥善处理。师，进行妥善处理。师，进行妥善处理。师，进行妥善处理。四川农业大学实验室守则四川农业大学实验室守则五、使用易燃、易爆、化学危险物的要确保安全，用后余量五、使用易燃、易爆、化学危险物的要确保安全，用后余量五、使用易燃、易爆、化学危险物的要确保安全，用后余量五、使用易燃、易爆、化学危险物的要确保安全，用后余量及时交回，不得乱丢乱放，更不准私自带出实验室。及时交回，不得乱丢乱放，更不准私自带出实验室。及时交回，不得乱丢乱放，更不准私自带出实验室。及时交回，不得乱丢乱放，更不准私自带出实验室。六、实验时要认真观察，实事求是记录数据和结果，严禁随六、实验时要认
8、真观察，实事求是记录数据和结果，严禁随六、实验时要认真观察，实事求是记录数据和结果，严禁随六、实验时要认真观察，实事求是记录数据和结果，严禁随意拼凑，弄虚作假，并按指导教师规定的时间和要求，完意拼凑，弄虚作假，并按指导教师规定的时间和要求，完意拼凑，弄虚作假，并按指导教师规定的时间和要求，完意拼凑，弄虚作假，并按指导教师规定的时间和要求，完成实验报告。成实验报告。成实验报告。成实验报告。七、实验结束时要及时关掉电源、水源，做好仪器设备和用七、实验结束时要及时关掉电源、水源，做好仪器设备和用七、实验结束时要及时关掉电源、水源，做好仪器设备和用七、实验结束时要及时关掉电源、水源，做好仪器设备和用具
9、的整理复原工作，经指导教师同意方能离开。具的整理复原工作，经指导教师同意方能离开。具的整理复原工作，经指导教师同意方能离开。具的整理复原工作，经指导教师同意方能离开。实验课程安排实验课程安排 实验总学时实验总学时实验总学时实验总学时36363636学时，其中实验概述学时，其中实验概述学时，其中实验概述学时，其中实验概述2 2 2 2学时，基础实验学时，基础实验学时，基础实验学时，基础实验17171717学时，综合与设计实验学时，综合与设计实验学时，综合与设计实验学时，综合与设计实验16161616学时，论文撰写辅导学时，论文撰写辅导学时，论文撰写辅导学时，论文撰写辅导1 1 1 1学时。学时。
10、学时。学时。 基础实验基础实验基础实验基础实验2 2 2 2人一组，每次实验要求写出实验报告人一组，每次实验要求写出实验报告人一组，每次实验要求写出实验报告人一组，每次实验要求写出实验报告 综合与设计实验综合与设计实验综合与设计实验综合与设计实验8 8 8 8人一组，每人一组，每人一组，每人一组，每2 2 2 2人做一种处理，确定人做一种处理，确定人做一种处理，确定人做一种处理，确定1 1 1 1名组长组织实施。每人必须用完整的一套数据写出研究名组长组织实施。每人必须用完整的一套数据写出研究名组长组织实施。每人必须用完整的一套数据写出研究名组长组织实施。每人必须用完整的一套数据写出研究论文。论
11、文。论文。论文。 实验组内人员既分工合作，又密切配合，认真完成实验组内人员既分工合作，又密切配合，认真完成实验组内人员既分工合作，又密切配合，认真完成实验组内人员既分工合作，又密切配合，认真完成实验的每一个环节。实验的每一个环节。实验的每一个环节。实验的每一个环节。 每次实验完后，经老师检查，认定实验结果后，经每次实验完后，经老师检查，认定实验结果后，经每次实验完后，经老师检查，认定实验结果后，经每次实验完后，经老师检查，认定实验结果后，经签字方能离开实验室。签字方能离开实验室。签字方能离开实验室。签字方能离开实验室。 科代表负责与老师接洽、维持课堂秩序、按时依学科代表负责与老师接洽、维持课堂
12、秩序、按时依学科代表负责与老师接洽、维持课堂秩序、按时依学科代表负责与老师接洽、维持课堂秩序、按时依学号次序提交报告、安排清洁实验室。号次序提交报告、安排清洁实验室。号次序提交报告、安排清洁实验室。号次序提交报告、安排清洁实验室。实验课程考核实验课程考核n n实验报告成绩实验报告成绩实验报告成绩实验报告成绩30303030分，包括课堂纪律、考勤、操作技分，包括课堂纪律、考勤、操作技分，包括课堂纪律、考勤、操作技分，包括课堂纪律、考勤、操作技能、报告质量。能、报告质量。能、报告质量。能、报告质量。n n综合与设计实验论文综合与设计实验论文综合与设计实验论文综合与设计实验论文30303030分，包
13、括课堂情况、内容真分，包括课堂情况、内容真分，包括课堂情况、内容真分，包括课堂情况、内容真实、结果结论正确、格式符合要求、独立完成报告实、结果结论正确、格式符合要求、独立完成报告实、结果结论正确、格式符合要求、独立完成报告实、结果结论正确、格式符合要求、独立完成报告等。等。等。等。n n笔试成绩笔试成绩笔试成绩笔试成绩40404040分，一般为闭卷考试，内容涉及本课程分，一般为闭卷考试，内容涉及本课程分，一般为闭卷考试，内容涉及本课程分，一般为闭卷考试，内容涉及本课程所有内容，重点是实验操作中的细节和基本原理。所有内容，重点是实验操作中的细节和基本原理。所有内容，重点是实验操作中的细节和基本原
14、理。所有内容，重点是实验操作中的细节和基本原理。n n2 2 2 2次以上（含次以上（含次以上（含次以上（含2 2 2 2次）缺席不得参加笔试考核，实验不次）缺席不得参加笔试考核，实验不次）缺席不得参加笔试考核，实验不次）缺席不得参加笔试考核，实验不通过。通过。通过。通过。植物生理学常用实验技术概述植物生理学常用实验技术概述第一节第一节第一节第一节 植物生理学实验材料的选择植物生理学实验材料的选择植物生理学实验材料的选择植物生理学实验材料的选择一、实验材料选择的重要性和种类一、实验材料选择的重要性和种类一、实验材料选择的重要性和种类一、实验材料选择的重要性和种类1.1.1.1.不同的植物生理实
15、验材料经测定会得出不同的结果。不同的植物生理实验材料经测定会得出不同的结果。不同的植物生理实验材料经测定会得出不同的结果。不同的植物生理实验材料经测定会得出不同的结果。2.2.2.2.种类种类种类种类: : : :新鲜材料新鲜材料新鲜材料新鲜材料和和和和干材料干材料干材料干材料二、实验材料的选择二、实验材料的选择二、实验材料的选择二、实验材料的选择1.1.1.1.取样过程：取样过程：取样过程：取样过程：原始样品的采取原始样品的采取原始样品的采取原始样品的采取（随机取样法和（随机取样法和（随机取样法和（随机取样法和 “ “ “ “五点五点五点五点” ” ” ” 取样取样取样取样法），到法），到法
16、），到法），到平均样品的采取平均样品的采取平均样品的采取平均样品的采取（混合取样法和比例取样法）。（混合取样法和比例取样法）。（混合取样法和比例取样法）。（混合取样法和比例取样法）。2.2.2.2.取样的原则取样的原则取样的原则取样的原则 不在靠边位置取样。不在靠边位置取样。不在靠边位置取样。不在靠边位置取样。 注意取样的生理状态和在植株上的相对位置保持一致。注意取样的生理状态和在植株上的相对位置保持一致。注意取样的生理状态和在植株上的相对位置保持一致。注意取样的生理状态和在植株上的相对位置保持一致。 多汁瓜果、蔬菜、幼嫩器官容易失水，现取现称或即刻冷藏。多汁瓜果、蔬菜、幼嫩器官容易失水，现取
17、现称或即刻冷藏。多汁瓜果、蔬菜、幼嫩器官容易失水，现取现称或即刻冷藏。多汁瓜果、蔬菜、幼嫩器官容易失水，现取现称或即刻冷藏。三、样品的前处理三、样品的前处理三、样品的前处理三、样品的前处理1.1.1.1.用湿纱布擦拭干净材料，忌用水冲洗。用湿纱布擦拭干净材料，忌用水冲洗。用湿纱布擦拭干净材料，忌用水冲洗。用湿纱布擦拭干净材料，忌用水冲洗。2.2.2.2.解剖材料应立即固定解剖材料应立即固定解剖材料应立即固定解剖材料应立即固定3.3.3.3.测定生理活性物质的材料应低温保存。测定生理活性物质的材料应低温保存。测定生理活性物质的材料应低温保存。测定生理活性物质的材料应低温保存。4.4.4.4.干样
18、品制备时应经杀青、烘干后，磨成粉末过干样品制备时应经杀青、烘干后，磨成粉末过干样品制备时应经杀青、烘干后，磨成粉末过干样品制备时应经杀青、烘干后，磨成粉末过80808080 100100100100目筛，目筛，目筛，目筛，保存在干燥其中。保存在干燥其中。保存在干燥其中。保存在干燥其中。第二节第二节第二节第二节 常用仪器及生化分析技术在植物生理学中的应用常用仪器及生化分析技术在植物生理学中的应用常用仪器及生化分析技术在植物生理学中的应用常用仪器及生化分析技术在植物生理学中的应用一、植物生理学中的常用仪器及化学分析技术一、植物生理学中的常用仪器及化学分析技术一、植物生理学中的常用仪器及化学分析技术
19、一、植物生理学中的常用仪器及化学分析技术1.1.1.1.反应器反应器反应器反应器: : : :主要有试管、点滴反应板、烧瓶、烧杯等，主要有试管、点滴反应板、烧瓶、烧杯等，主要有试管、点滴反应板、烧瓶、烧杯等，主要有试管、点滴反应板、烧瓶、烧杯等，2.2.2.2.试剂瓶试剂瓶试剂瓶试剂瓶: : : :按其颜色分为无色透明玻璃瓶和棕色瓶，通常棕色按其颜色分为无色透明玻璃瓶和棕色瓶，通常棕色按其颜色分为无色透明玻璃瓶和棕色瓶，通常棕色按其颜色分为无色透明玻璃瓶和棕色瓶，通常棕色瓶用于保存见光易分解的试剂。瓶用于保存见光易分解的试剂。瓶用于保存见光易分解的试剂。瓶用于保存见光易分解的试剂。 另外玻璃磨
20、口瓶应忌盛强碱试剂，而橡胶塞的试剂瓶不另外玻璃磨口瓶应忌盛强碱试剂，而橡胶塞的试剂瓶不另外玻璃磨口瓶应忌盛强碱试剂，而橡胶塞的试剂瓶不另外玻璃磨口瓶应忌盛强碱试剂，而橡胶塞的试剂瓶不能用于盛装强酸性试剂。能用于盛装强酸性试剂。能用于盛装强酸性试剂。能用于盛装强酸性试剂。（图一）（图一）（图一）（图一）3.3.3.3.测量仪器：测量仪器：测量仪器：测量仪器：天平天平天平天平、卷尺、直尺、游标卡尺、显微测微尺、卷尺、直尺、游标卡尺、显微测微尺、卷尺、直尺、游标卡尺、显微测微尺、卷尺、直尺、游标卡尺、显微测微尺、 计数器等。计数器等。计数器等。计数器等。 测量液体体积的器具可分为量入式和量出式两类。
21、量入测量液体体积的器具可分为量入式和量出式两类。量入测量液体体积的器具可分为量入式和量出式两类。量入测量液体体积的器具可分为量入式和量出式两类。量入一、植物生理学中的常用仪器及化学分析技术一、植物生理学中的常用仪器及化学分析技术一、植物生理学中的常用仪器及化学分析技术一、植物生理学中的常用仪器及化学分析技术 式量具有容量瓶；量出式量具移液管、量筒、酸碱滴定管式量具有容量瓶；量出式量具移液管、量筒、酸碱滴定管式量具有容量瓶；量出式量具移液管、量筒、酸碱滴定管式量具有容量瓶；量出式量具移液管、量筒、酸碱滴定管等。移液管中又分为等。移液管中又分为等。移液管中又分为等。移液管中又分为A A A A级和
22、级和级和级和B B B B级，级，级，级，A A A A级比级比级比级比B B B B级精度高。其尖端级精度高。其尖端级精度高。其尖端级精度高。其尖端残留的液体不能吹出，除非标有残留的液体不能吹出，除非标有残留的液体不能吹出，除非标有残留的液体不能吹出，除非标有“吹吹吹吹”字样。字样。字样。字样。4.4.4.4.温度恒定设备温度恒定设备温度恒定设备温度恒定设备 水浴锅、干燥箱、温箱和生长箱等，它们可以把温度水浴锅、干燥箱、温箱和生长箱等，它们可以把温度水浴锅、干燥箱、温箱和生长箱等，它们可以把温度水浴锅、干燥箱、温箱和生长箱等，它们可以把温度恒定在所设置的水平。植物材料的干燥过程通常是在恒定在
23、所设置的水平。植物材料的干燥过程通常是在恒定在所设置的水平。植物材料的干燥过程通常是在恒定在所设置的水平。植物材料的干燥过程通常是在105105105105左右杀青左右杀青左右杀青左右杀青0.5-10.5-10.5-10.5-1小时左右，然后小时左右，然后小时左右，然后小时左右，然后7080708070807080烘干至恒重。烘干至恒重。烘干至恒重。烘干至恒重。5.5.5.5.物质分离设备物质分离设备物质分离设备物质分离设备 漏斗、分液漏斗和漏斗、分液漏斗和漏斗、分液漏斗和漏斗、分液漏斗和离心机离心机离心机离心机等。离心机可用于分离固体等。离心机可用于分离固体等。离心机可用于分离固体等。离心机
24、可用于分离固体和液体混合物，还常用于分离叶绿体、原生质体和离析的和液体混合物，还常用于分离叶绿体、原生质体和离析的和液体混合物，还常用于分离叶绿体、原生质体和离析的和液体混合物，还常用于分离叶绿体、原生质体和离析的细胞，是植物生理实验室必备的仪器之一。配制浓度梯度细胞，是植物生理实验室必备的仪器之一。配制浓度梯度细胞，是植物生理实验室必备的仪器之一。配制浓度梯度细胞，是植物生理实验室必备的仪器之一。配制浓度梯度液，用超速离心机，可测定生物大分子相对分子量。液，用超速离心机，可测定生物大分子相对分子量。液，用超速离心机，可测定生物大分子相对分子量。液，用超速离心机，可测定生物大分子相对分子量。6
25、.6.6.6.酸度计和酸度计和酸度计和酸度计和pHpHpHpH试纸试纸试纸试纸 在植物生理测试中和植物组织培养以及无土栽培等应在植物生理测试中和植物组织培养以及无土栽培等应在植物生理测试中和植物组织培养以及无土栽培等应在植物生理测试中和植物组织培养以及无土栽培等应用领域中，常需用酸度计或用领域中，常需用酸度计或用领域中，常需用酸度计或用领域中，常需用酸度计或pHpHpHpH试纸测试反应系统的试纸测试反应系统的试纸测试反应系统的试纸测试反应系统的pHpHpHpH，或，或，或，或监测植物（组织）生长环境中的监测植物（组织）生长环境中的监测植物（组织）生长环境中的监测植物（组织）生长环境中的pHpH
26、pHpH值变化。值变化。值变化。值变化。pHpHpHpH试纸测定结试纸测定结试纸测定结试纸测定结果不如果不如果不如果不如pHpHpHpH计（酸度计）准确，若要准确测定计（酸度计）准确，若要准确测定计（酸度计）准确，若要准确测定计（酸度计）准确，若要准确测定pHpHpHpH值大小时，值大小时，值大小时，值大小时，应选择应选择应选择应选择pHpHpHpH计。计。计。计。二、植物显微技术二、植物显微技术二、植物显微技术二、植物显微技术制片技术制片技术制片技术制片技术 观察法、切片法、非切片法观察法、切片法、非切片法观察法、切片法、非切片法观察法、切片法、非切片法植物组织化学技术植物组织化学技术植物组
27、织化学技术植物组织化学技术 常应用被检物质的特征反应或特殊性质来进行制片观察。常应用被检物质的特征反应或特殊性质来进行制片观察。常应用被检物质的特征反应或特殊性质来进行制片观察。常应用被检物质的特征反应或特殊性质来进行制片观察。显微镜技术显微镜技术显微镜技术显微镜技术（图）（图）（图）（图） （1 1 1 1）普通型；）普通型；）普通型；）普通型；指一般的光学显微镜，如生物显微镜、便携式显微镜、指一般的光学显微镜，如生物显微镜、便携式显微镜、指一般的光学显微镜，如生物显微镜、便携式显微镜、指一般的光学显微镜，如生物显微镜、便携式显微镜、倒置式显微镜、解剖镜等，用于对植物非切片材料或解剖结构的一
28、般倒置式显微镜、解剖镜等，用于对植物非切片材料或解剖结构的一般倒置式显微镜、解剖镜等，用于对植物非切片材料或解剖结构的一般倒置式显微镜、解剖镜等，用于对植物非切片材料或解剖结构的一般观察。观察。观察。观察。 （2 2 2 2）特种型；）特种型；）特种型；）特种型；是利用不同的光学原理设计而成的显微镜，主要用于是利用不同的光学原理设计而成的显微镜，主要用于是利用不同的光学原理设计而成的显微镜，主要用于是利用不同的光学原理设计而成的显微镜，主要用于某种特殊的观察和研究。如暗场、荧光、紫外、相差、偏光、干涉等某种特殊的观察和研究。如暗场、荧光、紫外、相差、偏光、干涉等某种特殊的观察和研究。如暗场、荧
29、光、紫外、相差、偏光、干涉等某种特殊的观察和研究。如暗场、荧光、紫外、相差、偏光、干涉等显微镜，在组织化学中会经常用到。显微镜，在组织化学中会经常用到。显微镜，在组织化学中会经常用到。显微镜，在组织化学中会经常用到。 （3 3 3 3）高级型：）高级型：）高级型：）高级型：指大型的多用途、附件齐全的高级显微镜，如万用研指大型的多用途、附件齐全的高级显微镜，如万用研指大型的多用途、附件齐全的高级显微镜，如万用研指大型的多用途、附件齐全的高级显微镜，如万用研究用生物显微镜、电子显微镜等。究用生物显微镜、电子显微镜等。究用生物显微镜、电子显微镜等。究用生物显微镜、电子显微镜等。显微摄影技术显微摄影技
30、术显微摄影技术显微摄影技术显微摄影技术显微摄影技术显微摄影技术显微摄影技术 它主要包括拍摄和洗印放大两项技术。它主要包括拍摄和洗印放大两项技术。它主要包括拍摄和洗印放大两项技术。它主要包括拍摄和洗印放大两项技术。三、生化分析技术三、生化分析技术三、生化分析技术三、生化分析技术 1.1.1.1.层析技术层析技术层析技术层析技术 2.2.2.2.光谱分析技术光谱分析技术光谱分析技术光谱分析技术: : : :仪器主要有：可见光分光光度计、紫外仪器主要有：可见光分光光度计、紫外仪器主要有：可见光分光光度计、紫外仪器主要有：可见光分光光度计、紫外可见光分光光可见光分光光可见光分光光可见光分光光度计、红外
31、光谱仪和荧光分光光度计等度计、红外光谱仪和荧光分光光度计等度计、红外光谱仪和荧光分光光度计等度计、红外光谱仪和荧光分光光度计等. . . .3.3.3.3.电泳分析技术电泳分析技术电泳分析技术电泳分析技术 ：电泳是指带电粒子在电场中向与自身所带电荷相反的电泳是指带电粒子在电场中向与自身所带电荷相反的电泳是指带电粒子在电场中向与自身所带电荷相反的电泳是指带电粒子在电场中向与自身所带电荷相反的电极移动的现象。应用如下：电极移动的现象。应用如下：电极移动的现象。应用如下：电极移动的现象。应用如下： 利用电泳技术分离纯化生物大分子物质利用电泳技术分离纯化生物大分子物质利用电泳技术分离纯化生物大分子物质
32、利用电泳技术分离纯化生物大分子物质； 同工酶电泳酶谱分析，鉴定植物亲缘关系，鉴定种子纯度；同工酶电泳酶谱分析，鉴定植物亲缘关系，鉴定种子纯度；同工酶电泳酶谱分析，鉴定植物亲缘关系，鉴定种子纯度；同工酶电泳酶谱分析，鉴定植物亲缘关系，鉴定种子纯度； 测定未知物的分子量；测定未知物的分子量；测定未知物的分子量；测定未知物的分子量； 将电泳技术与薄层扫描技术结合，可测知未知生物分子的含量；将电泳技术与薄层扫描技术结合，可测知未知生物分子的含量；将电泳技术与薄层扫描技术结合，可测知未知生物分子的含量；将电泳技术与薄层扫描技术结合，可测知未知生物分子的含量； 把核酸酶解和电泳相结合可以测定简单的核苷酸序
33、列；把核酸酶解和电泳相结合可以测定简单的核苷酸序列；把核酸酶解和电泳相结合可以测定简单的核苷酸序列；把核酸酶解和电泳相结合可以测定简单的核苷酸序列； 电泳技术与限制性内切酶结合应用，通过电泳技术与限制性内切酶结合应用，通过电泳技术与限制性内切酶结合应用，通过电泳技术与限制性内切酶结合应用，通过DNADNA序列扩增、分子探针的运用序列扩增、分子探针的运用序列扩增、分子探针的运用序列扩增、分子探针的运用和分子杂交，测定植物遗传的多样性和构建基因的物理图谱；和分子杂交，测定植物遗传的多样性和构建基因的物理图谱；和分子杂交，测定植物遗传的多样性和构建基因的物理图谱；和分子杂交，测定植物遗传的多样性和构
34、建基因的物理图谱； 与免疫技术相结合，鉴定植物及侵染植物的病原物的抗原与抗体，从而达到与免疫技术相结合，鉴定植物及侵染植物的病原物的抗原与抗体，从而达到与免疫技术相结合，鉴定植物及侵染植物的病原物的抗原与抗体，从而达到与免疫技术相结合，鉴定植物及侵染植物的病原物的抗原与抗体，从而达到检测植物是否感病的目的。检测植物是否感病的目的。检测植物是否感病的目的。检测植物是否感病的目的。 四、气体分析技术四、气体分析技术四、气体分析技术四、气体分析技术1.1.1.1.红外线红外线红外线红外线CO2CO2CO2CO2分析仪：分析仪：分析仪：分析仪：红外线红外线红外线红外线CO2CO2CO2CO2分析技术除
35、应用于光合强度测定，分析技术除应用于光合强度测定，分析技术除应用于光合强度测定，分析技术除应用于光合强度测定，还可以用于呼吸强度的测定。还可以用于呼吸强度的测定。还可以用于呼吸强度的测定。还可以用于呼吸强度的测定。 2.2.2.2.氧电极：氧电极：氧电极：氧电极：测定光合放氧量或呼吸吸氧的量。测定光合放氧量或呼吸吸氧的量。测定光合放氧量或呼吸吸氧的量。测定光合放氧量或呼吸吸氧的量。 3.Warburg3.Warburg3.Warburg3.Warburg 呼吸仪：呼吸仪：测定呼吸强度和呼吸商，测定光合作用引起的测定呼吸强度和呼吸商，测定光合作用引起的测定呼吸强度和呼吸商，测定光合作用引起的测定
36、呼吸强度和呼吸商，测定光合作用引起的气体体积变化。气体体积变化。气体体积变化。气体体积变化。 4.4.4.4.光合测定系统光合测定系统光合测定系统光合测定系统其它测定技术其它测定技术其它测定技术其它测定技术1.1.1.1.同位素示踪技术：同位素示踪技术：同位素示踪技术：同位素示踪技术：应用于研究植物矿质营养、光合作用、有机物合成应用于研究植物矿质营养、光合作用、有机物合成应用于研究植物矿质营养、光合作用、有机物合成应用于研究植物矿质营养、光合作用、有机物合成与运输分配、植物激素等。与运输分配、植物激素等。与运输分配、植物激素等。与运输分配、植物激素等。 2.2.2.2.免疫学技术：免疫学技术：
37、免疫学技术：免疫学技术：利用抗原与抗体的特异反应，进行微量物质的检测与细利用抗原与抗体的特异反应，进行微量物质的检测与细利用抗原与抗体的特异反应，进行微量物质的检测与细利用抗原与抗体的特异反应，进行微量物质的检测与细胞中的定位。胞中的定位。胞中的定位。胞中的定位。3.3.3.3.水势仪、蒸腾仪、电导仪等特殊仪器分析技术水势仪、蒸腾仪、电导仪等特殊仪器分析技术水势仪、蒸腾仪、电导仪等特殊仪器分析技术水势仪、蒸腾仪、电导仪等特殊仪器分析技术4.4.4.4.模式植物研究技术：模式植物研究技术：模式植物研究技术：模式植物研究技术：拟南芥在基因功能和表达研究中的应用。拟南芥在基因功能和表达研究中的应用。
38、拟南芥在基因功能和表达研究中的应用。拟南芥在基因功能和表达研究中的应用。5.5.5.5.植物组织培养技术：植物组织培养技术：植物组织培养技术：植物组织培养技术：器官培养、组织培养、细胞培养、原生质体培养器官培养、组织培养、细胞培养、原生质体培养器官培养、组织培养、细胞培养、原生质体培养器官培养、组织培养、细胞培养、原生质体培养等。在植物脱毒快繁、种子资源保存与利用、植物改良、生物技术等等。在植物脱毒快繁、种子资源保存与利用、植物改良、生物技术等等。在植物脱毒快繁、种子资源保存与利用、植物改良、生物技术等等。在植物脱毒快繁、种子资源保存与利用、植物改良、生物技术等方面有重要应用。方面有重要应用。
39、方面有重要应用。方面有重要应用。（图）（图）（图）（图）6.6.6.6.溶液培养技术：溶液培养技术：溶液培养技术：溶液培养技术：分为水培、气培和基质培养。分为水培、气培和基质培养。分为水培、气培和基质培养。分为水培、气培和基质培养。（图）（图）（图）（图）第二节第二节第二节第二节 植物生理基础实验植物生理基础实验植物生理基础实验植物生理基础实验实验一实验一实验一实验一 K K K K+ + + +、CaCaCaCa2+2+2+2+对细胞质壁分离的影响对细胞质壁分离的影响对细胞质壁分离的影响对细胞质壁分离的影响目的：目的：目的：目的：通过质壁分离现象，可以判断细胞死活；获取原生质体；测定细通过质
40、壁分离现象，可以判断细胞死活；获取原生质体；测定细通过质壁分离现象，可以判断细胞死活；获取原生质体；测定细通过质壁分离现象，可以判断细胞死活；获取原生质体；测定细胞渗透势；了解原生质性质等。胞渗透势；了解原生质性质等。胞渗透势；了解原生质性质等。胞渗透势；了解原生质性质等。 学会植物临时制片技术。学会植物临时制片技术。学会植物临时制片技术。学会植物临时制片技术。 掌握显微镜使用技术。掌握显微镜使用技术。掌握显微镜使用技术。掌握显微镜使用技术。原理：原理：原理：原理：当细胞水势高于外界溶液时，液泡因水分外渗而收缩，原生质层当细胞水势高于外界溶液时，液泡因水分外渗而收缩，原生质层当细胞水势高于外界
41、溶液时，液泡因水分外渗而收缩，原生质层当细胞水势高于外界溶液时，液泡因水分外渗而收缩，原生质层随液泡一起收缩而发生质壁分离。生活细胞可以在高水势溶液中发生随液泡一起收缩而发生质壁分离。生活细胞可以在高水势溶液中发生随液泡一起收缩而发生质壁分离。生活细胞可以在高水势溶液中发生随液泡一起收缩而发生质壁分离。生活细胞可以在高水势溶液中发生质壁分离复原。实验中常采用有颜色的植物细胞（液泡含色素）或对质壁分离复原。实验中常采用有颜色的植物细胞（液泡含色素）或对质壁分离复原。实验中常采用有颜色的植物细胞（液泡含色素）或对质壁分离复原。实验中常采用有颜色的植物细胞（液泡含色素）或对液泡染色处理后进行观察。液
42、泡染色处理后进行观察。液泡染色处理后进行观察。液泡染色处理后进行观察。 Ca Ca2+2+能降低原生质水合度，使原生质粘性增大，不易脱离细胞壁，能降低原生质水合度，使原生质粘性增大，不易脱离细胞壁，能降低原生质水合度，使原生质粘性增大，不易脱离细胞壁，能降低原生质水合度，使原生质粘性增大，不易脱离细胞壁，使细胞发生使细胞发生使细胞发生使细胞发生凹形质壁分离凹形质壁分离凹形质壁分离凹形质壁分离。 K K+增加原生质水合度，使原生质粘性减小，容易脱离细胞壁，使增加原生质水合度，使原生质粘性减小，容易脱离细胞壁，使增加原生质水合度，使原生质粘性减小，容易脱离细胞壁，使增加原生质水合度，使原生质粘性减
43、小，容易脱离细胞壁，使细胞发生细胞发生细胞发生细胞发生凸形质壁分离凸形质壁分离凸形质壁分离凸形质壁分离，若作用时间较长，若作用时间较长，若作用时间较长，若作用时间较长，K K+进入原生质层，会导致进入原生质层，会导致进入原生质层，会导致进入原生质层，会导致原生质吸水膨胀，增加原生质层的厚度，形成原生质吸水膨胀，增加原生质层的厚度，形成原生质吸水膨胀，增加原生质层的厚度，形成原生质吸水膨胀，增加原生质层的厚度，形成帽状质壁分离帽状质壁分离帽状质壁分离帽状质壁分离。材料、设备及试剂材料、设备及试剂材料、设备及试剂材料、设备及试剂 1. 1. 1. 1.材料材料材料材料 洋葱鳞茎。洋葱鳞茎。洋葱鳞茎
44、。洋葱鳞茎。 2. 2. 2. 2.设备设备设备设备 显微镜、培养皿、载玻片、盖玻片、酒精灯、尖头镊子、显微镜、培养皿、载玻片、盖玻片、酒精灯、尖头镊子、显微镜、培养皿、载玻片、盖玻片、酒精灯、尖头镊子、显微镜、培养皿、载玻片、盖玻片、酒精灯、尖头镊子、刀片、吸水纸等。刀片、吸水纸等。刀片、吸水纸等。刀片、吸水纸等。 3. 3. 3. 3.试剂试剂试剂试剂 1mol/LKNO 1mol/LKNO 1mol/LKNO 1mol/LKNO3 3 3 3，1mol/LCaCl1mol/LCaCl1mol/LCaCl1mol/LCaCl2 2 2 2操作方法操作方法操作方法操作方法用镊子撕取洋葱磷片外
45、表皮用镊子撕取洋葱磷片外表皮用镊子撕取洋葱磷片外表皮用镊子撕取洋葱磷片外表皮放在滴有放在滴有放在滴有放在滴有2 2滴水的载玻片上滴水的载玻片上滴水的载玻片上滴水的载玻片上 观察细胞各部分，绘图观察细胞各部分，绘图观察细胞各部分，绘图观察细胞各部分，绘图 盖玻片的一边滴一滴盖玻片的一边滴一滴盖玻片的一边滴一滴盖玻片的一边滴一滴1mol/L KNO31mol/L KNO3液液液液 在对边用滤纸吸水，将在对边用滤纸吸水，将在对边用滤纸吸水，将在对边用滤纸吸水，将KNO3KNO3引向盖玻片下的材料引向盖玻片下的材料引向盖玻片下的材料引向盖玻片下的材料 观察凸形质壁分离，观察凸形质壁分离，观察凸形质壁分
46、离，观察凸形质壁分离，30min30min后观察帽状质壁分离，绘图后观察帽状质壁分离，绘图后观察帽状质壁分离，绘图后观察帽状质壁分离，绘图 1mol/L CaCl1mol/L CaCl2 2引起的凹形质壁分离操作类似。引起的凹形质壁分离操作类似。引起的凹形质壁分离操作类似。引起的凹形质壁分离操作类似。实验结果实验结果实验结果实验结果 绘出不同形式质壁分离图（凸形、凹形、帽状），并解释产生这绘出不同形式质壁分离图（凸形、凹形、帽状），并解释产生这绘出不同形式质壁分离图（凸形、凹形、帽状），并解释产生这绘出不同形式质壁分离图（凸形、凹形、帽状），并解释产生这些现象的原因。些现象的原因。些现象的原因
47、。些现象的原因。注意事项：注意事项：注意事项：注意事项： 1. 1. 1. 1.撕取的洋葱表皮要足够薄（撕取的洋葱表皮要足够薄（撕取的洋葱表皮要足够薄（撕取的洋葱表皮要足够薄（12121212层细胞），由厚向薄撕。层细胞），由厚向薄撕。层细胞），由厚向薄撕。层细胞），由厚向薄撕。 2. 2. 2. 2.观察片中不能有气泡。观察片中不能有气泡。观察片中不能有气泡。观察片中不能有气泡。 3. 3. 3. 3.注意显微镜的正确使用方法。注意显微镜的正确使用方法。注意显微镜的正确使用方法。注意显微镜的正确使用方法。小叶流法测定植物组织水势小叶流法测定植物组织水势小叶流法测定植物组织水势小叶流法测定植物
48、组织水势目的目的 测定植物组织水势，可以了解植物的水分状况，为科学研究和农测定植物组织水势，可以了解植物的水分状况，为科学研究和农测定植物组织水势，可以了解植物的水分状况，为科学研究和农测定植物组织水势，可以了解植物的水分状况，为科学研究和农业合理灌溉提供依据；掌握水势测定相关方法。业合理灌溉提供依据；掌握水势测定相关方法。业合理灌溉提供依据；掌握水势测定相关方法。业合理灌溉提供依据；掌握水势测定相关方法。原理原理原理原理 用梯度浓度的溶液浸泡待测植物组织，取一小滴矜用梯度浓度的溶液浸泡待测植物组织，取一小滴矜用梯度浓度的溶液浸泡待测植物组织，取一小滴矜用梯度浓度的溶液浸泡待测植物组织，取一小
49、滴矜甲烯蓝甲烯蓝甲烯蓝甲烯蓝染色的染色的染色的染色的组织外液放回原相同浓度的溶液中，根据小液流的升、降情况找到与组织外液放回原相同浓度的溶液中，根据小液流的升、降情况找到与组织外液放回原相同浓度的溶液中，根据小液流的升、降情况找到与组织外液放回原相同浓度的溶液中，根据小液流的升、降情况找到与组织发生渗透平衡的溶液浓度（组织发生渗透平衡的溶液浓度（组织发生渗透平衡的溶液浓度（组织发生渗透平衡的溶液浓度（组织组织组织组织=外液）。外液）。外液）。外液）。 根据溶液浓度可根据溶液浓度可根据溶液浓度可根据溶液浓度可计算出溶液的水势，即为植物组织的水势。计算出溶液的水势，即为植物组织的水势。计算出溶液的
50、水势，即为植物组织的水势。计算出溶液的水势，即为植物组织的水势。材料、设备及试剂材料、设备及试剂材料、设备及试剂材料、设备及试剂 1.1.1.1.材料材料材料材料 女桢叶片。女桢叶片。女桢叶片。女桢叶片。 2. 2. 2. 2.设备设备设备设备 试管架、带塞试管、有盖小药瓶、毛细吸管、移液管、温试管架、带塞试管、有盖小药瓶、毛细吸管、移液管、温试管架、带塞试管、有盖小药瓶、毛细吸管、移液管、温试管架、带塞试管、有盖小药瓶、毛细吸管、移液管、温度计、单面刀片、叶模等。度计、单面刀片、叶模等。度计、单面刀片、叶模等。度计、单面刀片、叶模等。n n 3. 3. 3. 3.试剂试剂试剂试剂 1mol/
51、L 1mol/L 1mol/L 1mol/L标准浓度蔗糖溶液、标准浓度蔗糖溶液、标准浓度蔗糖溶液、标准浓度蔗糖溶液、0.10.1、0.20.2、0.30.3、0.40.4、0.50.5、0.60.6（mol/Lmol/L）的蔗糖）的蔗糖）的蔗糖）的蔗糖甲烯蓝染色液（含甲烯蓝）。甲烯蓝染色液（含甲烯蓝）。甲烯蓝染色液（含甲烯蓝）。甲烯蓝染色液（含甲烯蓝）。操作方法操作方法操作方法操作方法 标准梯度浓度蔗糖溶液配制标准梯度浓度蔗糖溶液配制 洗净烘干具塞试管编号洗净烘干具塞试管编号洗净烘干具塞试管编号洗净烘干具塞试管编号1 1 1 12 2 2 23 3 3 34 4 4 45 5 5 56 6 6
52、 6吸吸吸吸2ml2ml2ml2ml到对到对到对到对应编号的小应编号的小应编号的小应编号的小药瓶中药瓶中药瓶中药瓶中标准梯度浓度蔗糖溶液浓度标准梯度浓度蔗糖溶液浓度标准梯度浓度蔗糖溶液浓度标准梯度浓度蔗糖溶液浓度0.050.050.050.050.10.10.10.10.20.20.20.20.30.30.30.30.40.40.40.40.50.50.50.50.5mol/L0.5mol/L0.5mol/L0.5mol/L标准浓度蔗糖溶液标准浓度蔗糖溶液标准浓度蔗糖溶液标准浓度蔗糖溶液1 1 1 12 2 2 24 4 4 46 6 6 68 8 8 810101010H H H H2 2
53、2 2O O O O9 9 9 98 8 8 86 6 6 64 4 4 42 2 2 20 0 0 0材料处理材料处理 洗净擦干叶片洗净擦干叶片10片片用叶模和刀片在对称用叶模和刀片在对称部位各切下部位各切下10个叶条个叶条将将20个叶条，分切成个叶条，分切成6等分，得等分，得60个小叶块个小叶块混匀后每小药瓶中放混匀后每小药瓶中放10个小叶块个小叶块放置放置30min，个数分钟，个数分钟摇荡摇荡1次次加入对应浓度的甲烯蓝加入对应浓度的甲烯蓝加入对应浓度的甲烯蓝加入对应浓度的甲烯蓝染色液染色液染色液染色液1 1滴滴滴滴用洗净烘干的毛细吸管吸取有色糖液少许，轻轻插入相同编号用洗净烘干的毛细吸管
54、吸取有色糖液少许，轻轻插入相同编号的试管的溶液中部，轻轻挤出有色糖液一小滴，再轻轻抽出毛的试管的溶液中部，轻轻挤出有色糖液一小滴，再轻轻抽出毛细管，注意不要搅动溶液，观察蓝色液滴的移动方向和快慢，细管，注意不要搅动溶液，观察蓝色液滴的移动方向和快慢，做好记录。做好记录。测测 定定 w=-iRTC w=-iRTC w w：植物组织水势（：植物组织水势（PaPa） R R：气体常数：气体常数 R=0.083105(Pa/molK) R=0.083105(Pa/molK) T T：绝对温度单位：绝对温度单位K K，即，即273+t273+t，t t为实验温度（为实验温度（） i i：解离系数，蔗糖为
55、：解离系数，蔗糖为1 1 C C：等渗溶液浓度，单位为：等渗溶液浓度，单位为mol/Lmol/L结果计算结果计算结果分析结果分析结果分析结果分析 判断被测女桢叶片是怎样的水分状况？并说明原因。判断被测女桢叶片是怎样的水分状况？并说明原因。判断被测女桢叶片是怎样的水分状况？并说明原因。判断被测女桢叶片是怎样的水分状况？并说明原因。注意事项注意事项注意事项注意事项 1.1.1.1.试管和小药瓶已清洗烘干，不用再清洗。试管和小药瓶已清洗烘干，不用再清洗。试管和小药瓶已清洗烘干，不用再清洗。试管和小药瓶已清洗烘干，不用再清洗。 2. 2. 2. 2.配制溶液时取量准确，并充分摇匀。配制溶液时取量准确，
56、并充分摇匀。配制溶液时取量准确，并充分摇匀。配制溶液时取量准确，并充分摇匀。 3. 3. 3. 3.保证组织与外液水分交换充分。保证组织与外液水分交换充分。保证组织与外液水分交换充分。保证组织与外液水分交换充分。 4. 4. 4. 4.添加甲烯蓝或其染色液不宜过多。添加甲烯蓝或其染色液不宜过多。添加甲烯蓝或其染色液不宜过多。添加甲烯蓝或其染色液不宜过多。 5. 5. 5. 5.毛细滴管操作的动作要轻。毛细滴管操作的动作要轻。毛细滴管操作的动作要轻。毛细滴管操作的动作要轻。思考题思考题思考题思考题 1. 1. 1. 1.用小液流法测定的是植物组织的水势而不是渗透势，为什么？你能用小液流法测定的是
57、植物组织的水势而不是渗透势，为什么？你能用小液流法测定的是植物组织的水势而不是渗透势，为什么？你能用小液流法测定的是植物组织的水势而不是渗透势，为什么？你能否设计一个实验测定植物细胞的渗透势？否设计一个实验测定植物细胞的渗透势？否设计一个实验测定植物细胞的渗透势？否设计一个实验测定植物细胞的渗透势？实验三实验三实验三实验三 伤流液的收集及其成分的快速测定伤流液的收集及其成分的快速测定伤流液的收集及其成分的快速测定伤流液的收集及其成分的快速测定一一一一 实验目的实验目的实验目的实验目的 伤流是植物根系主动吸水的证明，不同植物或同一植物在伤流是植物根系主动吸水的证明，不同植物或同一植物在伤流是植物
58、根系主动吸水的证明，不同植物或同一植物在伤流是植物根系主动吸水的证明，不同植物或同一植物在不同季节中的伤流强度均不同。伤流强度反映根系生理活动强不同季节中的伤流强度均不同。伤流强度反映根系生理活动强不同季节中的伤流强度均不同。伤流强度反映根系生理活动强不同季节中的伤流强度均不同。伤流强度反映根系生理活动强弱和根系有效吸收面积大小。伤流液中除含有大量水分外，还弱和根系有效吸收面积大小。伤流液中除含有大量水分外，还弱和根系有效吸收面积大小。伤流液中除含有大量水分外，还弱和根系有效吸收面积大小。伤流液中除含有大量水分外，还含有各种无机盐及根部合成的有机物包括植物激素。掌握伤流含有各种无机盐及根部合成
59、的有机物包括植物激素。掌握伤流含有各种无机盐及根部合成的有机物包括植物激素。掌握伤流含有各种无机盐及根部合成的有机物包括植物激素。掌握伤流量的测定和伤流成分快速分析的原理与技术，可及时了解根系量的测定和伤流成分快速分析的原理与技术，可及时了解根系量的测定和伤流成分快速分析的原理与技术，可及时了解根系量的测定和伤流成分快速分析的原理与技术，可及时了解根系活力和根系营养状况。活力和根系营养状况。活力和根系营养状况。活力和根系营养状况。 二二二二 实验原理实验原理实验原理实验原理1 1 硝态氮的测定硝态氮的测定硝态氮的测定硝态氮的测定 硝态氮（硝态氮（硝态氮（硝态氮（NONO3 3）与硝酸试粉作用，
60、生成粉红色的偶氮化合）与硝酸试粉作用，生成粉红色的偶氮化合）与硝酸试粉作用，生成粉红色的偶氮化合）与硝酸试粉作用，生成粉红色的偶氮化合物，其颜色的深浅与硝态氮的浓度成正相关。将样品所显颜色物，其颜色的深浅与硝态氮的浓度成正相关。将样品所显颜色物，其颜色的深浅与硝态氮的浓度成正相关。将样品所显颜色物，其颜色的深浅与硝态氮的浓度成正相关。将样品所显颜色与标准色阶进行目测比较，可快速求得硝态氮的浓度。与标准色阶进行目测比较，可快速求得硝态氮的浓度。与标准色阶进行目测比较，可快速求得硝态氮的浓度。与标准色阶进行目测比较，可快速求得硝态氮的浓度。 NONO3 3ZnZn2+2+H+H+ + NO NO2
61、 2+ Zn+ Zn2+2+H+H2 2O O2 无机磷的测定无机磷的测定 在适宜的酸性条件下，磷酸能与钼酸铵作用形成磷钼在适宜的酸性条件下，磷酸能与钼酸铵作用形成磷钼在适宜的酸性条件下，磷酸能与钼酸铵作用形成磷钼在适宜的酸性条件下，磷酸能与钼酸铵作用形成磷钼酸铵，并被抗坏血酸或氯化亚锡等还原剂还原，生成蓝色的酸铵，并被抗坏血酸或氯化亚锡等还原剂还原，生成蓝色的酸铵，并被抗坏血酸或氯化亚锡等还原剂还原，生成蓝色的酸铵，并被抗坏血酸或氯化亚锡等还原剂还原，生成蓝色的磷钼蓝，并在磷钼蓝，并在磷钼蓝，并在磷钼蓝，并在650nm650nm处有最大吸收峰，其颜色深浅与含磷量处有最大吸收峰，其颜色深浅与含
62、磷量处有最大吸收峰，其颜色深浅与含磷量处有最大吸收峰，其颜色深浅与含磷量成正比，可直接比色。成正比，可直接比色。成正比，可直接比色。成正比，可直接比色。 HH3 3POPO4 4+(NH+(NH4 4) )2 2MoOMoO4 4+H+H2 2SOSO4 4 (NH(NH4 4) )3 3POPO4 412MoO12MoO3 32H2H2 2O+(NHO+(NH4 4) )2 2SOSO4 4+HH2 2OO抗坏血酸抗坏血酸抗坏血酸抗坏血酸(NH(NH4 4) )3 3POPO4 412MoO32H2O(NH12MoO32H2O(NH4 4) )3 3POPO4 4 MoMo2 2OO552H
63、2H2 2OO 或氯化亚锡或氯化亚锡或氯化亚锡或氯化亚锡 10MnO10MnO3 3 （磷钼酸铵）（磷钼酸铵）（磷钼酸铵）（磷钼酸铵） （磷钼蓝，兰色）（磷钼蓝，兰色）（磷钼蓝，兰色）（磷钼蓝，兰色）3 3 氨基酸的快速鉴定氨基酸的快速鉴定氨基酸的快速鉴定氨基酸的快速鉴定 氨基酸与茚三酮乙醇溶液可发生显色反应，生成紫红氨基酸与茚三酮乙醇溶液可发生显色反应，生成紫红氨基酸与茚三酮乙醇溶液可发生显色反应，生成紫红氨基酸与茚三酮乙醇溶液可发生显色反应，生成紫红色的化合物，颜色深浅与氨基酸含量成正比。色的化合物，颜色深浅与氨基酸含量成正比。色的化合物，颜色深浅与氨基酸含量成正比。色的化合物，颜色深浅与
64、氨基酸含量成正比。三三三三 材料、设备及试剂材料、设备及试剂材料、设备及试剂材料、设备及试剂11材料材料材料材料 节骨木伤流液节骨木伤流液节骨木伤流液节骨木伤流液22设备设备设备设备 伤流管（用充填脱脂棉的塑料膜小管）、棉线、刀片、比色盘、伤流管（用充填脱脂棉的塑料膜小管）、棉线、刀片、比色盘、伤流管（用充填脱脂棉的塑料膜小管）、棉线、刀片、比色盘、伤流管（用充填脱脂棉的塑料膜小管）、棉线、刀片、比色盘、 耳勺、乳头吸管、耳勺、乳头吸管、耳勺、乳头吸管、耳勺、乳头吸管、小烧杯、玻棒、试管、小烧杯、玻棒、试管、小烧杯、玻棒、试管、小烧杯、玻棒、试管、72007200型分光光度计、天平、恒温水浴锅
65、、电炉。型分光光度计、天平、恒温水浴锅、电炉。型分光光度计、天平、恒温水浴锅、电炉。型分光光度计、天平、恒温水浴锅、电炉。33试剂试剂试剂试剂 （1 1）硝酸试粉）硝酸试粉）硝酸试粉）硝酸试粉 称取硫酸钡称取硫酸钡称取硫酸钡称取硫酸钡1010克分成数份，分别用克分成数份，分别用克分成数份，分别用克分成数份，分别用1 1克硫酸钡与克硫酸钡与克硫酸钡与克硫酸钡与0.20.2克锌粉，克锌粉，克锌粉，克锌粉，0.40.4克对氨基苯磺酸，克对氨基苯磺酸，克对氨基苯磺酸，克对氨基苯磺酸，0.20.2克克克克a-a-萘胺混合，置研钵中研细，混匀，再加入萘胺混合，置研钵中研细，混匀，再加入萘胺混合，置研钵中研
66、细，混匀，再加入萘胺混合，置研钵中研细，混匀，再加入3.753.75克柠克柠克柠克柠檬酸一起研磨，混匀，贮于棕色瓶中，防潮、避光檬酸一起研磨，混匀，贮于棕色瓶中，防潮、避光檬酸一起研磨，混匀，贮于棕色瓶中，防潮、避光檬酸一起研磨，混匀，贮于棕色瓶中，防潮、避光（2 2）50%50%醋酸醋酸醋酸醋酸（3 3）定磷试剂）定磷试剂）定磷试剂）定磷试剂 蒸馏水、蒸馏水、蒸馏水、蒸馏水、3mol/L3mol/L硫酸、硫酸、硫酸、硫酸、2.5%2.5%钼酸铵、钼酸铵、钼酸铵、钼酸铵、10%10%抗坏血酸按抗坏血酸按抗坏血酸按抗坏血酸按2 2：1 1：1 1：1 1（体积比），混合，贮于棕色瓶内。若变为棕黄
67、色即不能使用。（体积比），混合，贮于棕色瓶内。若变为棕黄色即不能使用。（体积比），混合，贮于棕色瓶内。若变为棕黄色即不能使用。（体积比），混合，贮于棕色瓶内。若变为棕黄色即不能使用。（4 4）磷标准液（）磷标准液（）磷标准液（）磷标准液（10mg/L10mg/L）（5 5）氮标准液）氮标准液）氮标准液）氮标准液(50mg/L)(50mg/L)四四操作方法操作方法1 1 伤流液的收集伤流液的收集伤流液的收集伤流液的收集2 2 容量法和重量法容量法和重量法容量法和重量法容量法和重量法3 3 硝态氮的测定（目测比色法）硝态氮的测定（目测比色法）硝态氮的测定（目测比色法）硝态氮的测定（目测比色法） 硝
68、态氮系列标准浓度及伤流液反应体系硝态氮系列标准浓度及伤流液反应体系硝态氮系列标准浓度及伤流液反应体系硝态氮系列标准浓度及伤流液反应体系 项项项项目目目目 孔孔孔孔 号号号号1 12 23 34 45 56 6各管各管各管各管NONO3 3浓度浓度浓度浓度（mg/Lmg/L）1010 2020 3030 4040 5050 X X（未知）（未知）（未知）（未知）蒸馏水（滴）蒸馏水（滴）蒸馏水（滴）蒸馏水（滴）4 43 32 21 10 00 050mg/L50mg/L硝态氮液（滴）硝态氮液（滴）硝态氮液（滴）硝态氮液（滴）1 12 23 34 45 55 5（伤流）（伤流）（伤流）（伤流）505
69、0醋酸（滴）醋酸（滴）醋酸（滴）醋酸（滴）1 11 11 11 11 11 1硝酸试粉（勺）硝酸试粉（勺）硝酸试粉（勺）硝酸试粉（勺）1 11 11 11 11 11 13 3 无机磷的测定（磷钼蓝比色法）无机磷的测定（磷钼蓝比色法）无机磷的测定（磷钼蓝比色法）无机磷的测定（磷钼蓝比色法）磷钼蓝比色法测磷反应体系磷钼蓝比色法测磷反应体系磷钼蓝比色法测磷反应体系磷钼蓝比色法测磷反应体系 将各管充分摇匀，将各管充分摇匀，将各管充分摇匀，将各管充分摇匀，4545水浴中保温水浴中保温水浴中保温水浴中保温25min25min，以空白作对照在，以空白作对照在，以空白作对照在，以空白作对照在650nm650
70、nm下测定光密度值。以下测定光密度值。以下测定光密度值。以下测定光密度值。以1616号管磷含量为横坐标，光密度值为号管磷含量为横坐标，光密度值为号管磷含量为横坐标，光密度值为号管磷含量为横坐标，光密度值为纵坐标绘制标准曲线。纵坐标绘制标准曲线。纵坐标绘制标准曲线。纵坐标绘制标准曲线。 据据据据6 6号管的光密度值，在标准曲线上查出测定液含磷量（号管的光密度值，在标准曲线上查出测定液含磷量（号管的光密度值，在标准曲线上查出测定液含磷量（号管的光密度值，在标准曲线上查出测定液含磷量（ugug）。）。）。）。项项项项目目目目管号管号管号管号0 01 12 23 34 45 56 6各管含磷量（各管含
71、磷量（各管含磷量（各管含磷量（gg）0 02 24 46 68 81010X(X(未知未知未知未知) )10mg/L10mg/L磷标准液（磷标准液（磷标准液（磷标准液（mLmL）0 00.20.20.40.40.60.60.80.81.01.0样品样品样品样品0.20.2蒸馏水（蒸馏水（蒸馏水（蒸馏水（mLmL）3.03.02.82.82.62.62.42.42.22.22.02.02.82.8定磷试剂（定磷试剂（定磷试剂（定磷试剂（mLmL）3.03.03.03.03.03.03.03.03.03.03.03.03.03.0n n4 4 氨基酸的快速鉴定氨基酸的快速鉴定氨基酸的快速鉴定氨基酸
72、的快速鉴定 按上表加入各试剂，放入沸水浴按上表加入各试剂，放入沸水浴按上表加入各试剂，放入沸水浴按上表加入各试剂，放入沸水浴5min5min，观察两管在，观察两管在，观察两管在，观察两管在加热前后颜色的变化。判断伤流液中有无氨基酸的存在。加热前后颜色的变化。判断伤流液中有无氨基酸的存在。加热前后颜色的变化。判断伤流液中有无氨基酸的存在。加热前后颜色的变化。判断伤流液中有无氨基酸的存在。项项项项 目目目目管号管号管号管号1 12 2蒸馏水（滴）蒸馏水（滴）蒸馏水（滴）蒸馏水（滴）10100 0伤流液（滴）伤流液（滴）伤流液（滴）伤流液（滴）0 010103 3茚三酮（滴）茚三酮（滴）茚三酮（滴）
73、茚三酮（滴）5 55 5五五五五 结果计算结果计算结果计算结果计算11硝态氮的测定硝态氮的测定硝态氮的测定硝态氮的测定根据颜色判断出该伤流液的硝态氮浓度。根据颜色判断出该伤流液的硝态氮浓度。根据颜色判断出该伤流液的硝态氮浓度。根据颜色判断出该伤流液的硝态氮浓度。22无机磷的测定无机磷的测定无机磷的测定无机磷的测定伤流液无机磷浓度（伤流液无机磷浓度（伤流液无机磷浓度（伤流液无机磷浓度（ gg/mL/mL）= =测定液磷含量（测定液磷含量（测定液磷含量（测定液磷含量（ gg ）/ /伤流液用伤流液用伤流液用伤流液用量（量（量（量（mLmL）33氨基酸的快速鉴定氨基酸的快速鉴定氨基酸的快速鉴定氨基酸
74、的快速鉴定如果如果如果如果2 2号管呈现蓝紫色，则证明伤流液有氨基酸存在。号管呈现蓝紫色，则证明伤流液有氨基酸存在。号管呈现蓝紫色，则证明伤流液有氨基酸存在。号管呈现蓝紫色，则证明伤流液有氨基酸存在。 实验注意事项实验注意事项实验注意事项实验注意事项：11分光光度计的正确使用分光光度计的正确使用分光光度计的正确使用分光光度计的正确使用22溶液必须冷却后再进行测定其吸光度值溶液必须冷却后再进行测定其吸光度值溶液必须冷却后再进行测定其吸光度值溶液必须冷却后再进行测定其吸光度值33玻棒搅拌溶液时应从低浓度向高浓度进行玻棒搅拌溶液时应从低浓度向高浓度进行玻棒搅拌溶液时应从低浓度向高浓度进行玻棒搅拌溶液
75、时应从低浓度向高浓度进行44做标准曲线的溶液必须充分混匀做标准曲线的溶液必须充分混匀做标准曲线的溶液必须充分混匀做标准曲线的溶液必须充分混匀思考题思考题思考题思考题：11硝态氮测定时加入醋酸的作用是什么？硝态氮测定时加入醋酸的作用是什么？硝态氮测定时加入醋酸的作用是什么？硝态氮测定时加入醋酸的作用是什么？22以上测定无机磷的分光光度法，可否修改成快速测定方法以上测定无机磷的分光光度法，可否修改成快速测定方法以上测定无机磷的分光光度法，可否修改成快速测定方法以上测定无机磷的分光光度法，可否修改成快速测定方法？如何修改？如何修改？如何修改？如何修改？ 植物组织中可溶性糖含量的测植物组织中可溶性糖含
76、量的测定定 （蒽酮比色法）（蒽酮比色法）可溶性糖是植物体内重要的有机物之一，与以下可溶性糖是植物体内重要的有机物之一，与以下过程密切相关：过程密切相关：（1）植物体内有机物的转化，如：蔗糖转化成淀粉）植物体内有机物的转化，如：蔗糖转化成淀粉贮藏在贮藏在植物体内；植物体内；（2）种子的形成、果实品质形成，可衡量果实品质好）种子的形成、果实品质形成，可衡量果实品质好坏；坏；（3）植物的抗性，如土壤干旱时，植物体内积累可）植物的抗性，如土壤干旱时，植物体内积累可溶性糖，降低细胞的水势，利于细胞从外界吸水。溶性糖，降低细胞的水势，利于细胞从外界吸水。一、目的意义一、目的意义二、实验原理二、实验原理可溶
77、性糖（包括还原糖和非还原糖）能与蒽酮可溶性糖（包括还原糖和非还原糖）能与蒽酮试剂反应，生成蓝绿色的糠醛衍生物，该产物在试剂反应，生成蓝绿色的糠醛衍生物，该产物在620nm处有最大吸收峰。糠醛生成量（颜色深浅）处有最大吸收峰。糠醛生成量（颜色深浅）与可溶性糖总含量成正比，故可用分光光度计测与可溶性糖总含量成正比，故可用分光光度计测其吸光度，从而测知糖含量。其吸光度，从而测知糖含量。此法反应灵敏，适此法反应灵敏，适用于含糖量不高的样品。用于含糖量不高的样品。H2SO4糠醛糠醛脱水脱水（1）（2）糠醛糠醛+蒽酮蒽酮蓝绿色的缩合物蓝绿色的缩合物可溶性糖可溶性糖三、材料、设备及试剂三、材料、设备及试剂1
78、、材料、材料：小麦全株干粉（或各种植物小麦全株干粉（或各种植物的根、茎、叶、种子）的根、茎、叶、种子）2、设备、设备：分光光度计、天平、水浴锅、电炉、移液管、分光光度计、天平、水浴锅、电炉、移液管、试管、离心机、容量瓶。试管、离心机、容量瓶。3、试剂、试剂：（1）100mg.L1蔗糖标准液蔗糖标准液（2）蒽酮）蒽酮浓硫酸试剂浓硫酸试剂四、操作方法四、操作方法1.标准曲线的制作标准曲线的制作取取洗洗净净烘烘干干的的试试管管6支支编编号号05号号，按按下下表表加加入各试剂。入各试剂。管管号号0 123456糖含量糖含量( g)0 1020304050待测待测蔗糖母液蔗糖母液0 0.20 0.400
79、.600.801.00样品样品0.5蒸馏水蒸馏水2.001.80 1.601.401.201.001.5蒽酮浓硫蒽酮浓硫酸试剂（酸试剂（ml）5555555吸光度（吸光度（A620） 加入浓硫酸时要沿着试管壁缓缓加入，边加边摇，加入浓硫酸时要沿着试管壁缓缓加入，边加边摇，待试管冷却后，以空白作参比，于待试管冷却后，以空白作参比，于620nm620nm波长下，测其吸波长下，测其吸光度，在光度，在ExcelExcel中以吸光度为纵坐标，糖含量为横坐标，中以吸光度为纵坐标，糖含量为横坐标，绘出标准曲线，并得相关的回归方程绘出标准曲线，并得相关的回归方程y=Axy=Ax。2 2、样品提取、样品提取大试
80、管干粉100mg沸水浴20min2030ml蒸馏水过滤入100ml容量瓶，定容3 3、样品测定、样品测定取一试管，按上表中管取一试管，按上表中管6加入各项目，以空白作参比加入各项目，以空白作参比测定样品的吸光度，带入由标准曲线得的方程中，可测定样品的吸光度，带入由标准曲线得的方程中，可得糖含量。得糖含量。五、结果计算五、结果计算可用性糖含量=mxVV1W103100mx：标准曲线得的糖含量（：标准曲线得的糖含量（g）V：样品总体积（样品总体积（ml）V1：测定时取用体积（：测定时取用体积（ml）W：样品重（：样品重（mg）103：样品单位：样品单位gmg换算换算注意事项：注意事项：（1 1）加
81、入蒽酮）加入蒽酮浓硫酸试剂时，要边加边摇，浓硫酸试剂时，要边加边摇，加入后还要猛摇试管数次，直到试管内的颜色加入后还要猛摇试管数次，直到试管内的颜色均一为止。均一为止。（2 2）移蒽酮）移蒽酮浓硫酸的移液管放到固定位置，浓硫酸的移液管放到固定位置，注意移液时不要将其滴到桌面上或他人身上，注意移液时不要将其滴到桌面上或他人身上，如滴到桌面上，迅速用湿毛巾擦干净；如滴到如滴到桌面上，迅速用湿毛巾擦干净；如滴到他人身上，先用湿毛巾擦拭，再用大量流水冲他人身上，先用湿毛巾擦拭，再用大量流水冲洗。洗。（3 3）比色时，一定要将比色杯表面的液体用擦）比色时，一定要将比色杯表面的液体用擦境纸擦干净，以免对仪
82、器造成腐蚀。境纸擦干净，以免对仪器造成腐蚀。思考题：思考题：1、你还知道其它测定植物组织中可溶性糖含量、你还知道其它测定植物组织中可溶性糖含量的方法吗？在何时采用何种方法更适宜？的方法吗？在何时采用何种方法更适宜？2、用蒽酮法测定糖的操作中，应注意什么？、用蒽酮法测定糖的操作中，应注意什么？实验实验5 5 种子生活力的快速测定种子生活力的快速测定 目的意义 种子的生活力指的是种子发芽的潜力种子的生活力指的是种子发芽的潜力，是鉴，是鉴定种子质量、研究种子生理、种子贮藏生理的定种子质量、研究种子生理、种子贮藏生理的重要指标。种子检验中有一项重要的指标是种重要指标。种子检验中有一项重要的指标是种子的
83、发芽率，用直接发芽的方法测定发芽率所子的发芽率，用直接发芽的方法测定发芽率所需时间较长，尤其是遇到休眠的种子时，所需需时间较长，尤其是遇到休眠的种子时，所需时间更长，可用快速测定法在较短的时间内获时间更长，可用快速测定法在较短的时间内获得结果。快速测定法测定的指标主要是种子的得结果。快速测定法测定的指标主要是种子的生活力，所依据的原则是种子的生活力与发芽生活力，所依据的原则是种子的生活力与发芽率是呈正相关的，种子的生活力高，发芽率也率是呈正相关的，种子的生活力高，发芽率也高。高。我们今天要使用的方法是我们今天要使用的方法是TTCTTC法和红墨水染色法法和红墨水染色法氯化三苯基四氮唑氯化三苯基四
84、氮唑(TTC)(TTC)法法TTC又名又名“红四氮唑红四氮唑”，是标准的氧化，是标准的氧化还原色素，溶于水后呈无色的溶液。当还原色素，溶于水后呈无色的溶液。当TTC与种胚、幼根、花粉等组织或器官的与种胚、幼根、花粉等组织或器官的活细胞活细胞接触时，被还原型脱氢辅酶（接触时，被还原型脱氢辅酶（NADH2或或NADPH2）还原，）还原， 由无色的由无色的TTCTTC变成红色的变成红色的TTFTTF（三苯甲腙）使（三苯甲腙）使种胚染成种胚染成红色红色；无生活力无生活力的种子没有的种子没有呼吸代谢活动，不能还原呼吸代谢活动，不能还原TTCTTC，所以，所以胚部不着色胚部不着色。 红墨水染色法红墨水染色
85、法 植物植物活细胞活细胞的原生质膜具有的原生质膜具有选择透选择透性，性，某些某些染料分子染料分子（如红墨水）（如红墨水）不能透不能透过过，因而，因而不不能将能将种胚染色种胚染色。而。而死死的种胚，的种胚，其细胞膜结构破坏，其细胞膜结构破坏，选择透性丧失选择透性丧失。因。因而，而，染料分子染料分子便能透过膜便能透过膜进入进入细胞内，细胞内，将将种胚染色种胚染色。根据种胚的染色情况就可。根据种胚的染色情况就可鉴定种子的生活力。鉴定种子的生活力。25粒种子粒种子浸泡的玉米种子浸泡的玉米种子（已掺入死种子）（已掺入死种子）沿胚的中心线纵切为两半沿胚的中心线纵切为两半 各置一小烧杯中各置一小烧杯中加入加
86、入0.4TTC溶液，溶液，37恒温箱恒温箱30min。加入加入5红墨水，红墨水，5min后，后，倒掉红墨水，自来水冲洗。倒掉红墨水，自来水冲洗。记录种胚着色情况记录种胚着色情况综合与设计性实验：综合与设计性实验：盐胁迫对小麦幼苗生长的影响盐胁迫对小麦幼苗生长的影响一、实验课题的选择与设计一、实验课题的选择与设计1.1.课题的来源课题的来源课题的来源课题的来源 生产实践中需要解决的问题生产实践中需要解决的问题生产实践中需要解决的问题生产实践中需要解决的问题 阅读文献拓展前人的研究或开辟新的研究领域阅读文献拓展前人的研究或开辟新的研究领域阅读文献拓展前人的研究或开辟新的研究领域阅读文献拓展前人的研
87、究或开辟新的研究领域2.2.课题选择的原则课题选择的原则课题选择的原则课题选择的原则 理论联系实际：理论联系实际：理论联系实际：理论联系实际：注意实验课题的理论价值和实践价值。注意实验课题的理论价值和实践价值。注意实验课题的理论价值和实践价值。注意实验课题的理论价值和实践价值。 注重选题的创新性：注重选题的创新性：注重选题的创新性：注重选题的创新性：包括观点、题目、材料、方法创新；包括观点、题目、材料、方法创新；包括观点、题目、材料、方法创新；包括观点、题目、材料、方法创新；以新材料论证旧问题；用新方法或从新角度研究已有课题；以新材料论证旧问题；用新方法或从新角度研究已有课题；以新材料论证旧问
88、题；用新方法或从新角度研究已有课题；以新材料论证旧问题；用新方法或从新角度研究已有课题；对已有的材料、方法、观点的质疑对已有的材料、方法、观点的质疑对已有的材料、方法、观点的质疑对已有的材料、方法、观点的质疑 难易适中：难易适中：难易适中：难易适中：要考虑到难度、经费、时间、设备条件等要考虑到难度、经费、时间、设备条件等要考虑到难度、经费、时间、设备条件等要考虑到难度、经费、时间、设备条件等综合与设计性实验：综合与设计性实验：盐胁迫对小麦幼苗生长的影响盐胁迫对小麦幼苗生长的影响3.3.课题的设计课题的设计课题的设计课题的设计 设计要求科学合理、操作性强；符合唯一差异性原理；要设计要求科学合理、
89、操作性强；符合唯一差异性原理；要设计要求科学合理、操作性强；符合唯一差异性原理；要设计要求科学合理、操作性强；符合唯一差异性原理；要有适当的对照；研究分析指标与研究内容和目的联系紧密；有适当的对照；研究分析指标与研究内容和目的联系紧密；有适当的对照；研究分析指标与研究内容和目的联系紧密；有适当的对照；研究分析指标与研究内容和目的联系紧密；采用正确的试验设计方法，并设有重复；工作量、经费、时采用正确的试验设计方法，并设有重复；工作量、经费、时采用正确的试验设计方法，并设有重复；工作量、经费、时采用正确的试验设计方法，并设有重复；工作量、经费、时间的预算安排。间的预算安排。间的预算安排。间的预算安
90、排。二、盐胁迫对小麦幼苗生长的影响的设计与安排二、盐胁迫对小麦幼苗生长的影响的设计与安排二、盐胁迫对小麦幼苗生长的影响的设计与安排二、盐胁迫对小麦幼苗生长的影响的设计与安排1.1.本实验为单因素试验，实验因素为本实验为单因素试验，实验因素为本实验为单因素试验，实验因素为本实验为单因素试验，实验因素为NaClNaCl盐胁迫溶液，盐胁迫溶液，盐胁迫溶液，盐胁迫溶液，设加有设加有设加有设加有100mmol/L100mmol/L、150mmol/L150mmol/L、200mmol/L 200mmol/L NaClNaCl的完全溶液三种处理浓度，用完全溶液作对照。的完全溶液三种处理浓度，用完全溶液作对
91、照。的完全溶液三种处理浓度，用完全溶液作对照。的完全溶液三种处理浓度，用完全溶液作对照。2.2.选取适量均匀饱满的小麦种子，用选取适量均匀饱满的小麦种子，用选取适量均匀饱满的小麦种子，用选取适量均匀饱满的小麦种子，用0.1%0.1%升汞消毒升汞消毒升汞消毒升汞消毒1010分钟，清水多次冲洗，分钟，清水多次冲洗，分钟，清水多次冲洗，分钟，清水多次冲洗，2525生长箱中催芽培养生长箱中催芽培养生长箱中催芽培养生长箱中催芽培养3535天。天。天。天。3.3.按下表培制好完全溶液，然后分装倒按下表培制好完全溶液，然后分装倒按下表培制好完全溶液，然后分装倒按下表培制好完全溶液，然后分装倒3 3个培养塑料
92、杯中，个培养塑料杯中，个培养塑料杯中，个培养塑料杯中，在尼龙网上种植在尼龙网上种植在尼龙网上种植在尼龙网上种植3030粒萌发种子，让根浸入溶液中，放粒萌发种子，让根浸入溶液中，放粒萌发种子，让根浸入溶液中，放粒萌发种子，让根浸入溶液中，放生长室培养一周后，其间注意别干水；更换上述盐胁生长室培养一周后，其间注意别干水；更换上述盐胁生长室培养一周后，其间注意别干水；更换上述盐胁生长室培养一周后，其间注意别干水；更换上述盐胁迫处理溶液，生长室中培养一周后，进行分析测试。迫处理溶液，生长室中培养一周后，进行分析测试。迫处理溶液，生长室中培养一周后，进行分析测试。迫处理溶液，生长室中培养一周后，进行分析
93、测试。盐盐类类用用用用 量（量（量（量（g/Lg/L）盐盐盐盐 类类类类用用用用 量（量（量（量（g/Lg/L）Ca(NOCa(NO3 3) )2 2 4 4HH2 2OO236236微量元素微量元素微量元素微量元素KHKH2 2POPO4 42727 H H3 3BOBO3 3 2.682.68KKNONO3 3102102 MnCl MnCl2 24H4H2 2O O 1.811.81MgSOMgSO4 4 7H7H2 2OO9898CuSOCuSO4 45H5H2 2O O 0.080.08EDTA-FeEDTA-FeEDTA-FeEDTA-Fe7.457.45ZnSOZnSO4 47H
94、7H2 2O O 0.220.22FeSOFeSO4 47H7H2 2OO5.575.57HH2 2MoOMoO4 44H4H2 2O O 0.090.09Hoagland营养液储备液配方营养液储备液配方Ca(NOCa(NO3 3) )2 2 4 4HH2 2OOKKNONO3 3MgSOMgSO4 4 7H7H2 2OOKHKH2 2POPO4 4EDTA-FeEDTA-Fe微量元素微量元素微量元素微量元素5ml5ml5ml5ml5ml5ml5ml5ml5ml5ml1ml1ml完全营养液配制表（每完全营养液配制表（每1000ml加入储备液量）加入储备液量）4.4.分析测试项目分析测试项目分析
95、测试项目分析测试项目 形态指标的观察记载与测量形态指标的观察记载与测量形态指标的观察记载与测量形态指标的观察记载与测量 观察记载植株长相、长势、吐水、叶片颜色、根系颜色；观察记载植株长相、长势、吐水、叶片颜色、根系颜色；观察记载植株长相、长势、吐水、叶片颜色、根系颜色；观察记载植株长相、长势、吐水、叶片颜色、根系颜色； 取取取取2020株株株株测定苗高、测定苗高、测定苗高、测定苗高、3 3条条条条主根长度、幼苗干重、根系干重主根长度、幼苗干重、根系干重主根长度、幼苗干重、根系干重主根长度、幼苗干重、根系干重（105105杀青杀青杀青杀青10151015分钟，分钟，分钟，分钟，70807080烘
96、干至衡重，称量），计烘干至衡重，称量），计烘干至衡重，称量），计烘干至衡重，称量），计算根冠比和生长速率。算根冠比和生长速率。算根冠比和生长速率。算根冠比和生长速率。生理指标测定项目生理指标测定项目生理指标测定项目生理指标测定项目 根系活力测定（根系活力测定（根系活力测定（根系活力测定（TTCTTC法）：取法）：取法）：取法）：取1010株的根尖（株的根尖（株的根尖（株的根尖（0.5cm0.5cm）测定。）测定。）测定。）测定。 过氧化物酶活性测定（愈创木酚法）过氧化物酶活性测定（愈创木酚法）过氧化物酶活性测定（愈创木酚法）过氧化物酶活性测定（愈创木酚法）: :称取称取称取称取1g1g叶片提取
97、过氧化叶片提取过氧化叶片提取过氧化叶片提取过氧化物酶测定。物酶测定。物酶测定。物酶测定。 叶绿素含量测定：称取叶绿素含量测定：称取叶绿素含量测定：称取叶绿素含量测定：称取0.5g0.5g叶片研磨提取，用分光光度计测定。叶片研磨提取，用分光光度计测定。叶片研磨提取，用分光光度计测定。叶片研磨提取，用分光光度计测定。 电导率测定：称电导率测定：称电导率测定：称电导率测定：称0.5g0.5g剪成剪成剪成剪成0.5cm0.5cm的小叶块叶片蒸馏水浸泡的小叶块叶片蒸馏水浸泡的小叶块叶片蒸馏水浸泡的小叶块叶片蒸馏水浸泡30min30min钟后测定。钟后测定。钟后测定。钟后测定。植物根系活力的测定植物根系活
98、力的测定植物根系活力的测定植物根系活力的测定-TTCTTC法法法法实验目的实验目的实验目的实验目的 根系活力是衡量根系活动能力强弱的重要指标，可以衡量根系根系活力是衡量根系活动能力强弱的重要指标，可以衡量根系根系活力是衡量根系活动能力强弱的重要指标，可以衡量根系根系活力是衡量根系活动能力强弱的重要指标，可以衡量根系吸收水分或矿质元素的能力大小，甚至可以反映地上部分的营养状吸收水分或矿质元素的能力大小，甚至可以反映地上部分的营养状吸收水分或矿质元素的能力大小，甚至可以反映地上部分的营养状吸收水分或矿质元素的能力大小，甚至可以反映地上部分的营养状况以及产量水平。况以及产量水平。况以及产量水平。况以
99、及产量水平。实验原理实验原理实验原理实验原理氯化三苯基四氮唑氯化三苯基四氮唑氯化三苯基四氮唑氯化三苯基四氮唑(TCC)(TCC)是标准的氧化还原电位为是标准的氧化还原电位为是标准的氧化还原电位为是标准的氧化还原电位为8080毫伏的氧化毫伏的氧化毫伏的氧化毫伏的氧化还原色素还原色素还原色素还原色素, ,溶于水中成为无色溶于水中成为无色溶于水中成为无色溶于水中成为无色, ,但还原后生成不溶于水而呈红色的三苯但还原后生成不溶于水而呈红色的三苯但还原后生成不溶于水而呈红色的三苯但还原后生成不溶于水而呈红色的三苯甲月撍。反应如下：甲月撍。反应如下：甲月撍。反应如下：甲月撍。反应如下：生活的根系具有一定的
100、还原力，并可以被琥珀酸、延胡索酸、苹生活的根系具有一定的还原力，并可以被琥珀酸、延胡索酸、苹生活的根系具有一定的还原力，并可以被琥珀酸、延胡索酸、苹生活的根系具有一定的还原力，并可以被琥珀酸、延胡索酸、苹果酸等得到加强。可以通过测定根系还原果酸等得到加强。可以通过测定根系还原果酸等得到加强。可以通过测定根系还原果酸等得到加强。可以通过测定根系还原TTCTTC的多少，反映根系活的多少，反映根系活的多少，反映根系活的多少，反映根系活力的大小。力的大小。力的大小。力的大小。材料、设备及试剂材料、设备及试剂材料、设备及试剂材料、设备及试剂11材料材料材料材料 小麦幼苗植物根系小麦幼苗植物根系小麦幼苗植
101、物根系小麦幼苗植物根系22设备设备设备设备 72007200型分光光度计、分析天平、培养箱、离心机、刻度试管（型分光光度计、分析天平、培养箱、离心机、刻度试管（型分光光度计、分析天平、培养箱、离心机、刻度试管（型分光光度计、分析天平、培养箱、离心机、刻度试管（ 15mL15mL）、烧杯（）、烧杯（）、烧杯（）、烧杯（500mL500mL）、镊子、刀片。）、镊子、刀片。）、镊子、刀片。）、镊子、刀片。33试剂试剂试剂试剂 （1 1）乙酸乙酯（分析纯）乙酸乙酯（分析纯）乙酸乙酯（分析纯）乙酸乙酯（分析纯）（2 2）次硫酸钠（）次硫酸钠（）次硫酸钠（）次硫酸钠（NaNa2 2S S2 2OO4 4）
102、粉末）粉末）粉末）粉末（3 3）1mg/mLTTC1mg/mLTTC：准确称取：准确称取：准确称取：准确称取TTC1.0g,TTC1.0g,溶于少量水中溶于少量水中溶于少量水中溶于少量水中, ,定溶到定溶到定溶到定溶到1000mL,1000mL,用用用用时稀释至需要的浓度时稀释至需要的浓度时稀释至需要的浓度时稀释至需要的浓度. .（4 4）0.1mol/L0.1mol/L磷酸缓冲液磷酸缓冲液磷酸缓冲液磷酸缓冲液(pH=7.5)(pH=7.5)（5 5）1mol/L1mol/L硫酸：用量筒取比重为硫酸：用量筒取比重为硫酸：用量筒取比重为硫酸：用量筒取比重为1.841.84的浓硫酸的浓硫酸的浓硫酸
103、的浓硫酸55ml55ml，边搅拌边加入，边搅拌边加入，边搅拌边加入，边搅拌边加入盛又盛又盛又盛又500ml500ml蒸馏水的烧杯中，冷却后稀释至蒸馏水的烧杯中，冷却后稀释至蒸馏水的烧杯中，冷却后稀释至蒸馏水的烧杯中，冷却后稀释至1000ml1000ml。操作方法操作方法操作方法操作方法1.1.标准曲线的制作标准曲线的制作标准曲线的制作标准曲线的制作 （1 1）取）取）取）取1mg/mL1mg/mL的的的的T T C 2mLT T C 2mL于于于于100mL100mL容量瓶中，加入容量瓶中，加入容量瓶中，加入容量瓶中，加入2 2勺（黄豆大小）保险粉摇匀，加入乙酸乙酯勺（黄豆大小）保险粉摇匀，加
104、入乙酸乙酯勺（黄豆大小）保险粉摇匀，加入乙酸乙酯勺（黄豆大小）保险粉摇匀，加入乙酸乙酯40mL40mL左右剧左右剧左右剧左右剧烈震荡至保险粉充分溶解，用乙酸乙酯定容至刻度，即成烈震荡至保险粉充分溶解，用乙酸乙酯定容至刻度，即成烈震荡至保险粉充分溶解，用乙酸乙酯定容至刻度，即成烈震荡至保险粉充分溶解，用乙酸乙酯定容至刻度，即成TTFTTF标准液（标准液（标准液（标准液（20 g /mL 20 g /mL ）。）。）。）。 （2 2）按下表制作）按下表制作）按下表制作）按下表制作 T T F T T F标准曲线标准曲线标准曲线标准曲线 （3 3）以空白作参比，在分光光度计上测定）以空白作参比，在分
105、光光度计上测定）以空白作参比，在分光光度计上测定）以空白作参比，在分光光度计上测定485n m485n m下的吸下的吸下的吸下的吸光度，绘制标准曲线。光度，绘制标准曲线。光度，绘制标准曲线。光度，绘制标准曲线。项项项项 目目目目管管管管 号号号号0 01 12 23 34 45 56 67 7T T FT T F标准液（标准液（mLmL）0 01 12 23 34 45 56 67 7乙酸乙酯（乙酸乙酯（mLmL）10109 98 87 76 65 54 43 32. 2.样品的提取及测定样品的提取及测定样品的提取及测定样品的提取及测定 （1 1）样品提取）样品提取）样品提取）样品提取取洗净吸
106、干水分的根尖取洗净吸干水分的根尖取洗净吸干水分的根尖取洗净吸干水分的根尖0 00.5cm0.5cm切断切断切断切断5050条，放入小玻瓶（盛有磷酸条，放入小玻瓶（盛有磷酸条，放入小玻瓶（盛有磷酸条，放入小玻瓶（盛有磷酸缓冲液和缓冲液和缓冲液和缓冲液和0.40.4TTCTTC各各各各2mL2mL），），），），3737保温保温保温保温1h1h，加入，加入，加入，加入2mL1mol/L2mL1mol/L硫酸中硫酸中硫酸中硫酸中止反应。止反应。止反应。止反应。（2 2）根系活力测定）根系活力测定）根系活力测定）根系活力测定把根取出擦干，加入乙酸乙酯把根取出擦干，加入乙酸乙酯把根取出擦干，加入乙酸乙酯
107、把根取出擦干，加入乙酸乙酯3mL3mL迅速研磨呈匀浆状，再加迅速研磨呈匀浆状，再加迅速研磨呈匀浆状，再加迅速研磨呈匀浆状，再加7 7毫升毫升毫升毫升的乙酸乙酯研磨均匀，转入离心管的乙酸乙酯研磨均匀，转入离心管的乙酸乙酯研磨均匀，转入离心管的乙酸乙酯研磨均匀，转入离心管3000g3000g离心离心离心离心5min,5min,在在在在485nm485nm测定上清测定上清测定上清测定上清液的吸光度，并从标准曲线上查出其液的吸光度，并从标准曲线上查出其液的吸光度，并从标准曲线上查出其液的吸光度，并从标准曲线上查出其TTFTTF的浓度。的浓度。的浓度。的浓度。结果计算结果计算结果计算结果计算根系活力（根
108、系活力（根系活力（根系活力（gTTFgTTF 根数根数根数根数11 h h1 1）CC V/V/根数根数根数根数t tC C：由标准曲线查得的浓度（：由标准曲线查得的浓度（：由标准曲线查得的浓度（：由标准曲线查得的浓度（g/mLg/mL）V:V:提取液体积（提取液体积（提取液体积（提取液体积（mLmL）t t：反应时间（：反应时间（：反应时间（：反应时间（h h）实验注意事项：实验注意事项：实验注意事项：实验注意事项：1 1保险粉的量要过量。保险粉的量要过量。保险粉的量要过量。保险粉的量要过量。2 2乙酸乙酯容易挥发，研磨时要求操作迅速。乙酸乙酯容易挥发，研磨时要求操作迅速。乙酸乙酯容易挥发，
109、研磨时要求操作迅速。乙酸乙酯容易挥发，研磨时要求操作迅速。3TTF3TTF暴露空气中易被还原，标准曲线要求现配现用。暴露空气中易被还原，标准曲线要求现配现用。暴露空气中易被还原，标准曲线要求现配现用。暴露空气中易被还原，标准曲线要求现配现用。4 4硫酸不能在保温前加。硫酸不能在保温前加。硫酸不能在保温前加。硫酸不能在保温前加。思考题：思考题：思考题：思考题：1TTC1TTC法测定根系活力中加入次硫酸钠的作用是什么？法测定根系活力中加入次硫酸钠的作用是什么？法测定根系活力中加入次硫酸钠的作用是什么？法测定根系活力中加入次硫酸钠的作用是什么？22制作制作制作制作TTFTTF标准溶液时为什么先加标准
110、溶液时为什么先加标准溶液时为什么先加标准溶液时为什么先加TTCTTC和保险粉，后加乙和保险粉，后加乙和保险粉，后加乙和保险粉，后加乙酸乙酯？酸乙酯？酸乙酯？酸乙酯？33硫酸是如何中止反应的？硫酸是如何中止反应的？硫酸是如何中止反应的？硫酸是如何中止反应的？实验实验7过氧化物酶活性的测定过氧化物酶活性的测定（愈创木酚法）（愈创木酚法）v过氧化物酶广泛存在于植物中，过氧化物酶广泛存在于植物中，老化组老化组织织中该中该酶酶的的活性活性较幼嫩组织中的较幼嫩组织中的高高，故该，故该酶可作为组织老化的一种生理指标。该酶与酶可作为组织老化的一种生理指标。该酶与呼吸、光合等有关，是植物体内重要的呼吸呼吸、光合
111、等有关，是植物体内重要的呼吸酶类，其酶类，其活性高低活性高低与与酚类物质代谢酚类物质代谢、植物抗植物抗性性密切相关，其同功酶在遗传育种中的重要密切相关，其同功酶在遗传育种中的重要作用已受到重视。作用已受到重视。1. 1. 原理原理v 在在过过氧氧化化物物酶酶(peroxidase)(peroxidase)催催化化下下，H H2 2O O2 2将将愈愈创创木木酚酚氧氧化化成成茶茶褐褐色色产产物物。此此产产物物在在470nm470nm处处有有最最大大光光吸吸收收峰峰，故故可可通通过过测测470 470 nmnm下的吸光度变化测定过氧化物酶的活性。下的吸光度变化测定过氧化物酶的活性。2.小麦叶片v设
112、备：设备：72007200型分光光度计，离心机、秒表（或手型分光光度计，离心机、秒表（或手 表），天平。表），天平。v试剂：试剂：愈创木酚、愈创木酚、30%30%过氧化氢、过氧化氢、20mmol/L 20mmol/L KH KH2 2POPO4 4、100mmol/L100mmol/L磷酸缓冲液（磷酸缓冲液（pH6.0pH6.0）。）。 反应混合液：取反应混合液：取100mmol/L100mmol/L磷酸缓冲液（磷酸缓冲液（pH6.0pH6.0） 50ml 50ml于烧杯中，加入愈创木酚于烧杯中，加入愈创木酚28l28l， 于磁力搅拌器上加热搅拌，直至愈创木于磁力搅拌器上加热搅拌，直至愈创木
113、酚完全溶解，待溶液冷却后，加入酚完全溶解，待溶液冷却后，加入30%30% 过氧化氢过氧化氢19l19l，混合均匀，保存于冰，混合均匀，保存于冰 箱中。箱中。4、操作方法v（1）酶液制备）酶液制备0.1g0.1g小麦叶片小麦叶片20mmol/L KH20mmol/L KH2 2POPO4 4溶液溶液5ml5ml研钵中研磨成匀浆研钵中研磨成匀浆3000r.min3000r.min1 1下离心下离心10min10min上清液转入上清液转入25ml25ml容量瓶，定容容量瓶，定容（2 2）比色测定）比色测定0.5ml0.5ml酶液酶液3ml3ml KHKH2 2POPO4 40.5ml0.5ml酶液酶
114、液3ml3ml 反应混合液反应混合液（2 2）比色测定）比色测定每隔每隔1min1min读数读数1 1次，共读次，共读5 5次数。次数。5、结果计算v（1 1）以时间为横座标，光密度为纵座标作图，）以时间为横座标，光密度为纵座标作图，曲线并非一直都为直线，由于其他酶的作用，曲线并非一直都为直线，由于其他酶的作用，一定时间后颜色可能消褪向曲线下行。转折一定时间后颜色可能消褪向曲线下行。转折出现的早晚取决于温度。出现的早晚取决于温度。在曲线的前期部分在曲线的前期部分找到一段近似直线的部分，和直线起点的时找到一段近似直线的部分，和直线起点的时间间t1t1、光密度、光密度A1A1和直线终点的时间和直线
115、终点的时间t2t2、光密、光密度度A2A2。（2 2）计算）计算 以每分钟以每分钟A A470470变化变化0.010.01为为1 1个个过氧化物酶活力单位（过氧化物酶活力单位（），计算其过氧），计算其过氧化物酶的活力及比活力。化物酶的活力及比活力。 式中，t2-t1为时间变化；A2-A1为时间t1至t2时吸光度的变化；W为材料鲜重（干重或mg蛋白等）；D为稀释倍数，即提取的酶液总量为反应系统内酶液的倍数。本实验酶液总量为25ml，如取0.5ml酶液，D=50。v（1）称完材料后，将材料冲洗一下，洗掉表面的褐）称完材料后，将材料冲洗一下，洗掉表面的褐色，防止其颜色对吸光度的影响。色，防止其颜色
116、对吸光度的影响。v（2）离心机的使用过程中需注意：离心管要对称放，）离心机的使用过程中需注意：离心管要对称放，放之前先调平衡；离心机里的套管不能随便拿出，放之前先调平衡；离心机里的套管不能随便拿出，因为对称位置上的是已经调好平衡的；转速要一级因为对称位置上的是已经调好平衡的；转速要一级一级往上加到一级往上加到3000r/min。v（3）定容酶液和调平衡时要用什么？（提取液磷酸）定容酶液和调平衡时要用什么？（提取液磷酸二氢钾）二氢钾）v1、测定过氧化物酶的活性除比色法外，你还、测定过氧化物酶的活性除比色法外，你还知道什么其他方法？知道什么其他方法？v2、除愈创木酚外，还有什么化合物作为过氧、除愈
117、创木酚外，还有什么化合物作为过氧化物酶的底物？化物酶的底物？v3、计算酶比活力时，材料重量可用鲜重、计算酶比活力时，材料重量可用鲜重（g）或干重（）或干重（g）及也可用蛋白重（）及也可用蛋白重（mg）三种）三种单位来表示，哪种表示较好？为什么？单位来表示，哪种表示较好？为什么？实验原理实验原理v叶绿素易溶于有机溶剂，不溶于水，所以可以叶绿素易溶于有机溶剂，不溶于水，所以可以用乙醇或丙酮等有机溶剂来提取它。根据叶绿体色用乙醇或丙酮等有机溶剂来提取它。根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长（选择红光区的吸收峰，以减少类胡萝一特
118、定波长（选择红光区的吸收峰，以减少类胡萝卜素对其的影响）下测定其消光度，即可用公式计卜素对其的影响）下测定其消光度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。算出提取液中各色素的含量。分别测定在分别测定在663nm、645nm的吸光值，然的吸光值，然后根据后根据Lambert-Beer定律，计算出提取液中定律，计算出提取液中叶绿素叶绿素a和叶绿素和叶绿素b的浓度。的浓度。Ca=9.784A663-0.990A645Cb=21.426A645-4.65A663Ct=Ca+Cb=5.134A663+20.436A645 Ca：叶绿素a的浓度； Cb：叶绿素b的浓度； Ct：叶绿素a+b的浓度实验材料实
119、验材料v不同盐浓度处理的小麦叶片。实验步骤实验步骤1、叶绿素的提取（研磨法）、叶绿素的提取（研磨法）称取叶片称取叶片0.1g，按下列所示步骤操作：，按下列所示步骤操作：最后将提取液过滤到最后将提取液过滤到最后将提取液过滤到最后将提取液过滤到25ml25ml25ml25ml容容容容量瓶中，定容。量瓶中，定容。量瓶中，定容。量瓶中，定容。注：研钵中先加入少许注：研钵中先加入少许80乙醇，、石英砂、乙醇，、石英砂、CaCO32、比色测定、比色测定v以以80乙醇做空白对照，分别在乙醇做空白对照，分别在663nm、645nm波长下测其吸光度，然后带入公式计算出色波长下测其吸光度，然后带入公式计算出色素的
120、浓度后，再按下式计算组织中各色素的含量素的浓度后，再按下式计算组织中各色素的含量(用用每克鲜重或干重所含毫克数表示每克鲜重或干重所含毫克数表示)：v叶绿素含量色素的浓度（叶绿素含量色素的浓度（C)提取液体积提取液体积稀释倍稀释倍数数/样品鲜重样品鲜重v注：如一开始提取液的吸光度大于注：如一开始提取液的吸光度大于1，应将其稀释后再测；，应将其稀释后再测；如吸光度小于如吸光度小于1，则不用稀释，稀释倍数为，则不用稀释，稀释倍数为1。【注意事项】v1为了避免叶绿素的光分解，操作时应在弱光下进行，为了避免叶绿素的光分解，操作时应在弱光下进行，研磨时间应尽量短些。研磨时间应尽量短些。v2叶绿体色素提取液
121、不能浑浊。可在叶绿体色素提取液不能浑浊。可在710nm或或750nm波长下测量消光度，其值应小于当波长为叶绿素波长下测量消光度，其值应小于当波长为叶绿素A吸收吸收峰时消光度值的峰时消光度值的5，否则应重新过滤。，否则应重新过滤。v3用分光光度计法测定叶绿素含量，对分光光度计的用分光光度计法测定叶绿素含量，对分光光度计的波长精确度要求较高。如果波长与原吸收峰波长相差波长精确度要求较高。如果波长与原吸收峰波长相差1nm，则叶绿素，则叶绿素A的测定误差为的测定误差为2，叶绿素，叶绿素B为为19，使用前必须对分光光度计的波长进行校正。校正方法除使用前必须对分光光度计的波长进行校正。校正方法除按仪器说明
122、书外，还应以纯的叶绿素按仪器说明书外，还应以纯的叶绿素A和和B来校正。来校正。v4、在使用低档型号分光光度计在使用低档型号分光光度计(如：如：72、125、721型等型等)测定叶绿素测定叶绿素A、B含量时，因仪器的狭缝较含量时，因仪器的狭缝较宽，分光性能差，单色光的纯度低宽，分光性能差，单色光的纯度低(57nM)，与，与高中档仪器如岛津高中档仪器如岛津UV120、UV240等测定结果等测定结果相比，叶绿素相比，叶绿素A的测定值偏低，叶绿素的测定值偏低，叶绿素B值偏高，值偏高，AB比值严重偏小。因此，使用时必须用高档分光比值严重偏小。因此，使用时必须用高档分光光度计对低档的分光光度计进行校正光度
123、计对低档的分光光度计进行校正思考题v1叶绿素叶绿素A、B在蓝光区也有吸收峰，能否在蓝光区也有吸收峰，能否用这一吸收峰波长进行叶绿素用这一吸收峰波长进行叶绿素A、B的定量分的定量分析，为什么？析，为什么？ v2为什么提取叶绿素时干材料一定要用为什么提取叶绿素时干材料一定要用80的丙酮，而新鲜的材料可以用无水丙酮提的丙酮，而新鲜的材料可以用无水丙酮提取。取。 电导率的测定电导率的测定目的和原理：目的和原理：目的和原理：目的和原理：电导率是指溶液电阻的倒数，表示的是溶液的电导率是指溶液电阻的倒数，表示的是溶液的电导率是指溶液电阻的倒数，表示的是溶液的电导率是指溶液电阻的倒数，表示的是溶液的导电性能，
124、可表示水的纯净度。在植物生理中用于检测物导电性能，可表示水的纯净度。在植物生理中用于检测物导电性能，可表示水的纯净度。在植物生理中用于检测物导电性能，可表示水的纯净度。在植物生理中用于检测物质透过质膜的多少，可以反映膜受伤害的程度。质透过质膜的多少，可以反映膜受伤害的程度。质透过质膜的多少，可以反映膜受伤害的程度。质透过质膜的多少，可以反映膜受伤害的程度。 了解盐分胁迫对小麦幼苗细胞质膜伤害的情况，掌握了解盐分胁迫对小麦幼苗细胞质膜伤害的情况，掌握了解盐分胁迫对小麦幼苗细胞质膜伤害的情况，掌握了解盐分胁迫对小麦幼苗细胞质膜伤害的情况，掌握电导率的使用方法。电导率的使用方法。电导率的使用方法。电
125、导率的使用方法。材料、设备及试剂材料、设备及试剂材料、设备及试剂材料、设备及试剂 11材料材料材料材料 小麦幼苗叶片小麦幼苗叶片小麦幼苗叶片小麦幼苗叶片22设备设备设备设备 电导仪、冰箱、恒温箱、真空抽气装置（或注射器）、电导仪、冰箱、恒温箱、真空抽气装置（或注射器）、电导仪、冰箱、恒温箱、真空抽气装置（或注射器）、电导仪、冰箱、恒温箱、真空抽气装置（或注射器）、小烧杯、量筒、刀片、打孔器、无离子水（或蒸馏水）。小烧杯、量筒、刀片、打孔器、无离子水（或蒸馏水）。小烧杯、量筒、刀片、打孔器、无离子水（或蒸馏水）。小烧杯、量筒、刀片、打孔器、无离子水（或蒸馏水）。 三、操作方法三、操作方法三、操作
126、方法三、操作方法1.1.材料处理材料处理材料处理材料处理（1 1）选取植物叶片，用湿纱布擦去尘土，用刀片切取等）选取植物叶片，用湿纱布擦去尘土，用刀片切取等）选取植物叶片，用湿纱布擦去尘土，用刀片切取等）选取植物叶片，用湿纱布擦去尘土，用刀片切取等0.5cm0.5cm长的叶块长的叶块长的叶块长的叶块0.50.5克。克。克。克。（2 2）将材料放入注射器中，堵住其下端开孔，加）将材料放入注射器中，堵住其下端开孔，加）将材料放入注射器中，堵住其下端开孔，加）将材料放入注射器中，堵住其下端开孔，加20ml20ml无离子无离子无离子无离子水，反复抽气，直到叶片完全浸入水中，然后转入洁净烧杯水，反复抽气
127、，直到叶片完全浸入水中，然后转入洁净烧杯水，反复抽气，直到叶片完全浸入水中，然后转入洁净烧杯水，反复抽气，直到叶片完全浸入水中，然后转入洁净烧杯中，浸提中，浸提中，浸提中，浸提30min30min后测定电导率后测定电导率后测定电导率后测定电导率3.3.电导率测定电导率测定电导率测定电导率测定 用无离子水进行电导仪校正后，将电极放入烧用无离子水进行电导仪校正后，将电极放入烧用无离子水进行电导仪校正后，将电极放入烧用无离子水进行电导仪校正后，将电极放入烧杯中，分别测定组织浸提掖和蒸馏水的电导率。杯中，分别测定组织浸提掖和蒸馏水的电导率。杯中，分别测定组织浸提掖和蒸馏水的电导率。杯中，分别测定组织浸
128、提掖和蒸馏水的电导率。4.4.电导率的使用方法电导率的使用方法电导率的使用方法电导率的使用方法四、结果计算四、结果计算四、结果计算四、结果计算G G小麦幼苗电导率小麦幼苗电导率小麦幼苗电导率小麦幼苗电导率=（G G组织浸提掖组织浸提掖组织浸提掖组织浸提掖- G- G蒸馏水蒸馏水蒸馏水蒸馏水）/W/W电电 导导 仪仪 的的 使使 用用 方方 法法1.打开电源开关，让本机预热打开电源开关，让本机预热10分钟后，安上电极进行仪器的校正。分钟后，安上电极进行仪器的校正。2.仪器在校正之前，先将开关调到校正挡。后将温度补偿调节到仪器在校正之前，先将开关调到校正挡。后将温度补偿调节到250C。3.电极常数
129、值的校正。在电导仪显示屏上，通过电极常数旋钮，将电极电极常数值的校正。在电导仪显示屏上，通过电极常数旋钮，将电极常数值调节到与电极相符合的值。常数值调节到与电极相符合的值。4.量程的选取：仪表上有量程的选取：仪表上有20ms、2ms、200us、20us四个量程。这四个量程。这四个数值表示测量的范围。四个数值表示测量的范围。20ms表示表示019.99ms、2ms表示表示01.99ms、200us表示表示0199.99us、20us表示表示019.99us。因。因此此,在测量末知溶液时，选择量程应是从高向低转换，这样避免仪器仪在测量末知溶液时，选择量程应是从高向低转换，这样避免仪器仪表损坏。表
130、损坏。 ms与与us的关系是的关系是1000倍，所以，最后结果单位统一为倍，所以，最后结果单位统一为us/cm。5.以上所有步骤调节完成后，将电极放入浸泡液中进行测量，将校正开以上所有步骤调节完成后，将电极放入浸泡液中进行测量，将校正开关调至测量挡，测量出浸泡液的电导值。完后，取出电极冲洗，用吸水关调至测量挡，测量出浸泡液的电导值。完后，取出电极冲洗，用吸水纸吸干表面水分，再测下一个溶液。以此类推，整过操作过程完成。纸吸干表面水分，再测下一个溶液。以此类推，整过操作过程完成。玻璃器皿天平、烘箱、生长箱离心机显微镜荧光显微镜荧光显微镜显微成像系统显微成像系统解解剖剖显显微微镜镜普通显微镜普通显微镜植物组织培养植物组织培养植物组织培养植物组织培养超净工作台超净工作台无土栽培技术无土栽培技术无土栽培技术无土栽培技术结束！结束！
