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1、影响酶活性的因素实验实验三三组组影响酶活性的因素设计性实验一、实验目的 通过对唾液淀粉酶活性的观察，验证温度、pH、激活剂、抑制剂等对酶活性的影响。（以唾液淀粉酶为例）影响酶活性的因素设计性实验二、实验原理唾液淀粉酶可以分解淀粉唾液淀粉酶可以分解淀粉影响酶活性的因素设计性实验二、实验原理淀粉淀粉( (与碘呈与碘呈蓝色蓝色) )紫色糊精紫色糊精( (与碘呈与碘呈紫色紫色) )红色糊精红色糊精( (与碘呈与碘呈红棕色红棕色) )无色糊精无色糊精( (与碘与碘不呈色不呈色) )麦芽糖麦芽糖麦芽糖麦芽糖麦芽糖麦芽糖麦芽糖麦芽糖影响酶活性的因素设计性实验 在不同的温度、pH、及添加激活剂和抑制剂的条件下
2、，将唾液淀粉酶加入到淀粉溶液中，作用一定时间以后，取出反应液，加入碘指示剂，比较各种条件下，反应液与碘反应后颜色的差异，由此说明淀粉酶活性的变化。二、实验原理影响酶活性的因素设计性实验班氏试剂：即本尼迪特试剂（Benedict），是斐林溶液的改良试剂，与醛或醛（酮）糖反应也生成Cu2O砖红色沉淀。它是由硫酸铜、柠檬酸钠和无水碳酸钠配置成的蓝色溶液。柠檬酸钠和碳酸钠均为强碱弱酸盐，在水中它们均可水解产生OH-，与柠檬酸钠-碳酸钠溶液和CuSO4溶液混合时，Cu2+和OH-结合，生成Cu（OH）2，Cu（OH）2与葡萄糖中的醛基反应生成红黄色沉淀。优点：可以存放备用，避免斐林溶液必须现配现用的缺点
3、。二、实验原理影响酶活性的因素设计性实验三、实验试剂及器材1.试剂碘液 蒸馏水班氏试剂 0.1%NaCl 1%淀粉溶液0.1%CuSO4溶液pH5.0、pH6.8、pH8.0磷酸盐缓冲液2. 2.器材电炉 制冰机白瓷板 恒温水浴锅试管、滴管影响酶活性的因素设计性实验四、实验流程1.唾液淀粉酶的制备取干净的水杯，盛上蒸馏水。用蒸馏水漱口。口含约20ml蒸馏水，1-2分钟后，吐入一干净烧杯中，棉花过滤。影响酶活性的因素设计性实验 酶的特异性试剂（滴试剂（滴） 管管 号号 1 2 31%淀粉淀粉 1%蔗糖蔗糖 pH6.8缓冲液缓冲液稀释唾液稀释唾液煮沸的唾液煮沸的唾液10-105-10-10-5-1
4、0105-各管混匀后，置各管混匀后，置37 水浴中保温水浴中保温10min班氏试剂班氏试剂 2020203. 将上述各管放沸水浴中煮沸将上述各管放沸水浴中煮沸35 min，观察记录结果，观察记录结果1. 制备稀释唾液。制备稀释唾液。2. 取取3支试管，编号，按下表操作支试管，编号，按下表操作影响酶活性的因素设计性实验1. 制备稀释唾液。制备稀释唾液。2. 取取4支试管，编号，按下表操作支试管，编号，按下表操作管管号号1%淀粉淀粉pH6.8缓缓冲液冲液混匀后混匀后, 预温预温10min蒸馏水蒸馏水稀释稀释唾液唾液保温保温130滴滴10滴滴室温室温10滴滴- 37230滴滴10滴滴 37-10滴滴
5、 37330滴滴10滴滴冰水冰水-10滴滴冰水冰水430滴滴10滴滴 100 -10滴滴 1003. 以以2号管为标准管号管为标准管每隔每隔2min做碘反应。到做碘反应。到接近浅红接近浅红时，取出时，取出各管，分别做碘反应各管，分别做碘反应,观察结果。观察结果。4. 将将4只试管均放入只试管均放入37水浴中，水浴中，5-10min取出各管，分别各取取出各管，分别各取1滴做碘反应，观察结果。滴做碘反应，观察结果。 温度对酶活性影响影响酶活性的因素设计性实验 pH对酶活性影响试剂（滴）试剂（滴）管管 号号123451%淀粉淀粉3030303030磷酸盐缓冲液磷酸盐缓冲液1010101010pH6.
6、85.06.886.81.制备稀释唾液。制备稀释唾液。2. 取取5支试管，编号，按下表操作支试管，编号，按下表操作3. 以以5号管为标准管，加号管为标准管，加10滴稀释唾液放滴稀释唾液放37水浴中，测定水浴中，测定淀粉水解所需时间。淀粉水解所需时间。4. 1号管号管加加10滴滴蒸馏水，蒸馏水，24号管号管加加10滴滴稀释唾液稀释唾液，以，以1min间隔，间隔，取样，做碘反应。取样，做碘反应。5. 观察各管颜色，确定其最适观察各管颜色，确定其最适pH。影响酶活性的因素设计性实验 激活剂和抑制剂对酶活性影响1.制备稀释唾液。制备稀释唾液。2. 取取3支试管，编号，按下表操作支试管，编号，按下表操作
7、管管号号1%淀淀粉粉pH6.8缓缓冲液冲液0.1%NaCl0.1%CuSO4蒸馏水蒸馏水稀释稀释唾液唾液110滴滴5滴滴-5滴滴5滴滴210滴滴5滴滴5滴滴-5滴滴310滴滴5滴滴-5滴滴-5滴滴3.将将3只试管均放入只试管均放入37水浴中，以水浴中，以1号管为标准管号管为标准管每隔每隔2min做做碘反应。到碘反应。到接近浅红接近浅红时，取出各管，分别做碘反应时，取出各管，分别做碘反应,观察结观察结果果。影响酶活性的因素设计性实验 操作操作注意事项注意事项：1. 唾液稀释（方法）唾液稀释（方法）2. 要求器材干净，避免杂质干扰。要求器材干净，避免杂质干扰。3. 取样体积尽可能准确。取样体积尽可能准确。4. 准确计时和依次加液，各管反应时间应严格控准确计时和依次加液，各管反应时间应严格控制一致制一致。影响酶活性的因素设计性实验五、实验结果根据实验结果，说明各种因素对唾液淀粉酶活性的影响情况。影响酶活性的因素设计性实验影响酶活性的因素设计性实验影响酶活性的因素设计性实验
