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1、第十二章 弯曲菌与螺杆菌弯曲菌与螺杆菌课件弯曲菌属与螺杆菌属弯曲菌属与螺杆菌属弯曲菌属与螺杆菌属是分类学上两个独立弯曲菌属与螺杆菌属是分类学上两个独立的菌属的菌属大小及形态相似，显微镜下为革兰染色阴大小及形态相似，显微镜下为革兰染色阴性菌，呈弧形或螺旋形菌，较难区别性菌，呈弧形或螺旋形菌，较难区别为了便于鉴别诊断，将这两类细菌放在同为了便于鉴别诊断，将这两类细菌放在同一章介绍一章介绍弯曲菌与螺杆菌课件第一节 弯曲菌属弯曲菌属（弯曲菌属（Campylobacter）是一类呈逗）是一类呈逗点状或点状或S形的革兰阴性菌，广泛分布于动形的革兰阴性菌，广泛分布于动物界物界其中有些可引起动物与人类的腹泻、
2、胃肠其中有些可引起动物与人类的腹泻、胃肠炎和肠道外感染等疾病炎和肠道外感染等疾病对人致病有空肠弯曲菌、大肠弯曲菌、胎对人致病有空肠弯曲菌、大肠弯曲菌、胎儿弯曲菌等，其中空肠弯曲菌是腹泻的常儿弯曲菌等，其中空肠弯曲菌是腹泻的常见病原菌见病原菌弯曲菌与螺杆菌课件一、分类弯曲菌原归属于弧菌属，弯曲菌原归属于弧菌属，1973年正式命名为年正式命名为弯曲菌属弯曲菌属Campylobacter源自希腊语意为弯曲的杆状源自希腊语意为弯曲的杆状1984年在伯杰手册中将其分为年在伯杰手册中将其分为5个种个种(亚种亚种)。近年来发现了弯曲菌的许多新种和亚种。近年来发现了弯曲菌的许多新种和亚种。弯曲菌与螺杆菌课件二
3、、临床意义二、临床意义空肠空肠/大肠弯曲菌广泛分布于温血动物。未经处理的水以及大肠弯曲菌广泛分布于温血动物。未经处理的水以及生牛乳是人类感染的主要来源。弯曲菌的传播途径主要以食生牛乳是人类感染的主要来源。弯曲菌的传播途径主要以食物和水的传播为多见，经口摄入是本菌最主要的传播方式物和水的传播为多见，经口摄入是本菌最主要的传播方式腹泻是空肠弯曲菌感染最常见的临床表现腹泻是空肠弯曲菌感染最常见的临床表现感染后可引发吉兰感染后可引发吉兰-巴雷综合症和反应性关节炎巴雷综合症和反应性关节炎胎儿弯曲菌主要引起肠外感染胎儿弯曲菌主要引起肠外感染其中胎儿亚种为主要的人类致病菌其中胎儿亚种为主要的人类致病菌可致人
4、类菌血症、心内膜炎、血栓性静脉炎、活动性关可致人类菌血症、心内膜炎、血栓性静脉炎、活动性关节炎、脑膜炎、肺部感染、胸膜炎、腹膜炎、胆囊炎等节炎、脑膜炎、肺部感染、胸膜炎、腹膜炎、胆囊炎等弯曲菌与螺杆菌课件三、生物学特性三、生物学特性革兰阴性，菌体弯曲呈逗点、弧形、革兰阴性，菌体弯曲呈逗点、弧形、S形、螺旋形形、螺旋形或典型的海鸥展翅（或典型的海鸥展翅（gull wing）形。陈旧培养物）形。陈旧培养物可呈球形或长丝状。无芽胞。可呈球形或长丝状。无芽胞。弯曲菌的运动非常活泼，呈投镖样或螺旋样前进弯曲菌的运动非常活泼，呈投镖样或螺旋样前进弯曲菌与螺杆菌课件弯曲菌Gram Stain弯曲菌与螺杆菌课
5、件三、生物学特性三、生物学特性本属细菌的抗原成分有菌体本属细菌的抗原成分有菌体(O)抗原、热不抗原、热不稳定抗原稳定抗原(HL系统系统)和鞭毛和鞭毛(H)抗原。抗原。根据根据O抗原不同，将空肠弯曲菌和大肠弯曲抗原不同，将空肠弯曲菌和大肠弯曲菌分为菌分为65个血清型。个血清型。根据根据HL系统抗原，将空肠弯曲菌、大肠弯系统抗原，将空肠弯曲菌、大肠弯曲菌和海鸥弯曲菌至少分曲菌和海鸥弯曲菌至少分160个血清型个血清型弯曲菌与螺杆菌课件三、生物学特性弯曲菌为弯曲菌为微需氧菌微需氧菌，空肠弯曲菌和其他大，空肠弯曲菌和其他大多数弯曲菌生长时需氧浓度为多数弯曲菌生长时需氧浓度为5%10%（V/V）。）。最佳
6、气体环境为含最佳气体环境为含5%氧气、氧气、10%二氧化碳及二氧化碳及85%氮气氮气细菌抵抗力不强，室温可迅速死亡。对热细菌抵抗力不强，室温可迅速死亡。对热敏感，标本在敏感，标本在4冰箱可保存冰箱可保存3周。周。弯曲菌与螺杆菌课件四、微生物检验四、微生物检验(一一)检验程序检验程序弯曲菌与螺杆菌课件（二）微生物检验（二）微生物检验标本采集标本采集 采取新鲜粪便与肛拭子、血液、采取新鲜粪便与肛拭子、血液、脑脊液等立即送检。如不能及时送检应种脑脊液等立即送检。如不能及时送检应种入入Cary-Blair运送培养基，放运送培养基，放4冰箱保存冰箱保存。血液、脑脊液标本应先进行增菌。血液、脑脊液标本应先
7、进行增菌。弯曲菌与螺杆菌课件（三）标本直接检查（三）标本直接检查直接显微镜检查直接显微镜检查粪便与肛拭子可直接镜检，查找革兰阴性粪便与肛拭子可直接镜检，查找革兰阴性呈呈弧形、弧形、S形、形、“海鸥形海鸥形”或螺旋形的小或螺旋形的小杆菌杆菌；或用暗视野或相差显微镜观察，查；或用暗视野或相差显微镜观察，查见该菌呈见该菌呈投镖式或螺旋式投镖式或螺旋式运动可初步诊断运动可初步诊断核酸检测核酸检测 PCR方法直接检测粪便标本中的弯曲菌，方法直接检测粪便标本中的弯曲菌，但目前尚未被广泛采用但目前尚未被广泛采用弯曲菌与螺杆菌课件（四）分离培养与鉴定（四）分离培养与鉴定 1. 分离培养分离培养粪便或肛拭标本直
8、接接种改良粪便或肛拭标本直接接种改良Campy-BAP选择平板选择平板血、脑脊液标本先接种于布氏肉汤增菌后转种分离培养基血、脑脊液标本先接种于布氏肉汤增菌后转种分离培养基微氧环境微氧环境培养培养空肠空肠/大肠弯曲菌最适生长温度大肠弯曲菌最适生长温度4243，24h可观察菌落，可观察菌落，如于如于37培养则需培养则需4872h胎儿弯曲菌于胎儿弯曲菌于25和和37均可生长均可生长临床标本临床标本需分别置需分别置37和和42中培养，方不致漏检中培养，方不致漏检。在同一。在同一培养基上出现灰白、湿润、扁平边缘不整的蔓延生长菌落及培养基上出现灰白、湿润、扁平边缘不整的蔓延生长菌落及半透明、圆形、凸起、有
9、光泽的小菌落等两种菌落半透明、圆形、凸起、有光泽的小菌落等两种菌落弯曲菌与螺杆菌课件2鉴定 鉴定要点：鉴定要点： 弯曲菌属鉴定要点：弯曲菌属鉴定要点：氧化酶阳性，革兰阴性，菌体弯曲氧化酶阳性，革兰阴性，菌体弯曲 或呈或呈S形，生长温度形，生长温度 (25、37、42)试验试验；奈啶酸、头孢噻吩敏感试验奈啶酸、头孢噻吩敏感试验空肠弯曲菌对奈啶酸敏感、对头孢噻吩耐药；空肠弯曲菌对奈啶酸敏感、对头孢噻吩耐药；胎儿弯曲菌对奈啶酸耐药、对头孢噻吩敏感。胎儿弯曲菌对奈啶酸耐药、对头孢噻吩敏感。但近年出现对奈啶酸耐药的空肠弯曲菌但近年出现对奈啶酸耐药的空肠弯曲菌马尿酸盐水解试验马尿酸盐水解试验凡马尿酸盐水解
10、试验阳性、凡马尿酸盐水解试验阳性、42生长、氧化酶阳性、生长、氧化酶阳性、与镜检形态相符者，即可报告空肠弯曲菌空肠亚种与镜检形态相符者，即可报告空肠弯曲菌空肠亚种 醋酸吲哚水解试验醋酸吲哚水解试验空肠弯曲菌阳性，胎儿弯曲菌阴性空肠弯曲菌阳性，胎儿弯曲菌阴性弯曲菌与螺杆菌课件（五）其他方法测定（五）其他方法测定 免疫学方法免疫学方法用特异性抗体包被的乳胶颗粒，可用于鉴定空用特异性抗体包被的乳胶颗粒，可用于鉴定空肠肠/大肠弯曲菌。也可采用酶免疫方法测定粪便大肠弯曲菌。也可采用酶免疫方法测定粪便中弯曲菌抗原进行诊断。血清中抗体测定用于中弯曲菌抗原进行诊断。血清中抗体测定用于流行病学调查流行病学调查D
11、NA探针和探针和PCR扩增扩增 DNA-DNA杂交在弯曲菌菌种的分类研究中是杂交在弯曲菌菌种的分类研究中是一种成功的参考方法。一种成功的参考方法。PCR扩增技术也正在发展中扩增技术也正在发展中弯曲菌与螺杆菌课件第二节第二节 螺杆菌属螺杆菌属螺杆菌属（螺杆菌属（Helicobacter）：细菌有）：细菌有20余种，余种， 有有9个种可从人体分离到个种可从人体分离到能引起人类疾病菌种能引起人类疾病菌种幽门螺杆菌幽门螺杆菌(H. pylori)、 H. fennelliae和和H. cinaedi。幽门螺杆菌幽门螺杆菌与萎缩性胃炎，胃、十二指肠溃疡和胃癌等疾与萎缩性胃炎，胃、十二指肠溃疡和胃癌等疾病
12、相关病相关其他螺杆菌也可感染胃粘膜，但少见。其他螺杆菌也可感染胃粘膜，但少见。弯曲菌与螺杆菌课件诺贝尔生理学和医学奖诺贝尔生理学和医学奖 1983年年Marshall和和Warren首先用微需氧技首先用微需氧技术从慢性胃炎、消化性溃疡患者的胃粘膜术从慢性胃炎、消化性溃疡患者的胃粘膜分离出弯曲状的细菌，并证明该细菌感染分离出弯曲状的细菌，并证明该细菌感染胃部会导致胃炎、胃溃疡和十二指肠溃疡，胃部会导致胃炎、胃溃疡和十二指肠溃疡，获得了获得了2005年诺贝尔生理学和医学奖年诺贝尔生理学和医学奖弯曲菌与螺杆菌课件一、分类最初因形态、分离培养方法与弯曲菌属细菌相似，又仅从胃标本中分离到，被称作胃弯曲菌
13、样细菌由于此菌在胃窦部多见，且形态、培养及某些生化特性与弯曲菌属相似，DNA G+Gmol%也在弯曲菌属范围内，故命名为幽门弯曲菌(campylobacter pylori)1989年Goodwin等根据该菌的超微结构、形态、菌体脂肪酸组成、生长特征和酶的活力、16S rRNA 序列等，提出该菌不应归于弯曲菌属，后称为幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, HP)弯曲菌与螺杆菌课件Helicobacter Gram Stain弯曲菌与螺杆菌课件二、临床意义二、临床意义HP感染非常普遍。该菌为一种高度适应或感染非常普遍。该菌为一种高度适应或只能生活于胃粘膜的细菌，菌体周围微环只能生
14、活于胃粘膜的细菌，菌体周围微环境的境的pH值为值为7.0。胃窦为其定植的最佳部位。胃窦为其定植的最佳部位HP感染与感染与慢性浅表性胃炎或萎缩性胃炎慢性浅表性胃炎或萎缩性胃炎之之间的病因关系已充分确立。间的病因关系已充分确立。流行病学资料表明流行病学资料表明胃癌发病率胃癌发病率在一些在一些HP感感染率高的人群中较高染率高的人群中较高弯曲菌与螺杆菌课件HP致病机理致病机理尚不清楚，可能与下列因素有关：尚不清楚，可能与下列因素有关：特殊的螺旋状和端鞭毛有助于特殊的螺旋状和端鞭毛有助于HP穿过胃粘膜表面粘液层穿过胃粘膜表面粘液层与胃粘膜上皮细胞接触；与胃粘膜上皮细胞接触；具有高活性胞外脲酶分解尿素，产
15、生氨中和菌体周围胃酸，具有高活性胞外脲酶分解尿素，产生氨中和菌体周围胃酸，有助于细菌定植；有助于细菌定植；细胞毒素相关蛋白（细胞毒素相关蛋白（CagA）和空胞毒素（）和空胞毒素（VacA）VacA在体外能诱导多种哺乳动物细胞胞发生空胞变性，体内导致在体外能诱导多种哺乳动物细胞胞发生空胞变性，体内导致小鼠胃粘膜上皮细胞损伤和溃疡形成。小鼠胃粘膜上皮细胞损伤和溃疡形成。CagA与致病岛的与致病岛的picB紧密相连，协同诱导胃粘膜上皮细胞产生紧密相连，协同诱导胃粘膜上皮细胞产生多种细胞因子，吸引炎症细胞释放多种酶类致胃组织损伤。多种细胞因子，吸引炎症细胞释放多种酶类致胃组织损伤。cag A基因与胃癌
16、发生密切相关。基因与胃癌发生密切相关。弯曲菌与螺杆菌课件三、生物学特性菌体细长弯曲呈螺形、S形或海鸥形。菌体一端或两端可有多根带鞘鞭毛，运动活泼。菌体长2.54.0m，宽0.51.0m。革兰染色阴性，有动力。在胃粘膜上皮细胞表面常 呈典型的螺旋状或弧形。固体培养基上生长时，除典型形态外，有时可出现 杆状或圆球状。电镜下菌体的一端可伸出26条带鞘鞭毛。鞭毛长为菌体11.5倍，粗约30nm。鞭毛在运动中起推进器作用，在定居过程中起锚住作用。弯曲菌与螺杆菌课件三、生物学特性三、生物学特性HP基因组约基因组约1.67106bp，DNA G+C百分百分含量为含量为37mol%，其全部序列已有报道，其全部
17、序列已有报道研究较多和较重要的基因有脲酶基因研究较多和较重要的基因有脲酶基因ure A、ure B、ure C，细胞毒素相关基因，细胞毒素相关基因cag A，空泡毒素基因，空泡毒素基因vac AHP菌株间具有共同抗原菌株间具有共同抗原弯曲菌与螺杆菌课件三、生物学特性三、生物学特性为为微需氧菌微需氧菌，在，在5%O2、10%CO2、85%N2的环境中生长良好。最适生长温度为的环境中生长良好。最适生长温度为37。相对湿度在。相对湿度在98%以上为宜以上为宜营养要求较高营养要求较高，一般需含血液或血清才能，一般需含血液或血清才能生长，常用的培养基有哥伦比亚血琼脂、生长，常用的培养基有哥伦比亚血琼脂、
18、心脑浸液血琼脂、布氏菌血培养基等心脑浸液血琼脂、布氏菌血培养基等弯曲菌与螺杆菌课件三、生物学特性三、生物学特性HP生长缓慢生长缓慢，需经，需经4872h才长出菌落才长出菌落圆形孤立的小菌落，无色半透明呈露滴状，直径约0.51mm，血平板上有轻度溶血。沿接种线扩散生长，融合成片，扁平，无色半透明HP生化反应不活跃，不能利用糖类生化反应不活跃，不能利用糖类；具有大量高活力的胞外脲酶，产生的脲酶相当于普通变形杆具有大量高活力的胞外脲酶，产生的脲酶相当于普通变形杆菌的菌的2070倍。倍。此外还产生氧化酶、触酶、碱性磷酸酶、此外还产生氧化酶、触酶、碱性磷酸酶、-谷氨酰转肽酶和谷氨酰转肽酶和DNA酶等酶等
19、pH降至降至3.5以下时活力明显减弱以下时活力明显减弱生理浓度的胆盐可抑制生理浓度的胆盐可抑制HP生长生长弯曲菌与螺杆菌课件四、微生物检验 （一）检验程序（一）检验程序 弯曲菌与螺杆菌课件（二）微生物检验标本采集标本采集经胃镜用活检钳于近幽门部、胃窦部或病经胃镜用活检钳于近幽门部、胃窦部或病变邻近处取材，最好采取多位点样品变邻近处取材，最好采取多位点样品应立即行床边接种或放入应立即行床边接种或放入20%葡萄糖运送葡萄糖运送液液0.5ml内，内，4中保存不超过中保存不超过5h受检者术前受检者术前应停服铋剂或抗菌药物一周应停服铋剂或抗菌药物一周弯曲菌与螺杆菌课件（三）标本直接检查 1. 直接显微镜
20、检查直接显微镜检查 涂片或悬滴观察涂片或悬滴观察将活检组织研碎，涂片或悬滴，置相差或暗视野显微镜下可将活检组织研碎，涂片或悬滴，置相差或暗视野显微镜下可见见HP形态典型、形态典型、运动活泼运动活泼直接涂片染色镜检直接涂片染色镜检将活检粘膜组织在玻片上涂抹后，经将活检粘膜组织在玻片上涂抹后，经革兰染色革兰染色或单染色后镜或单染色后镜检，如发现典型形态的检，如发现典型形态的HP即可诊断即可诊断组织切片染色镜检组织切片染色镜检组织块经福马林固定、切片经组织块经福马林固定、切片经W-S银染色、姬姆萨染色、银染色、姬姆萨染色、HE染色和荧光染色等染色后镜检染色和荧光染色等染色后镜检HP，以，以W-S银染
21、效果最好银染效果最好免疫组化免疫组化用免疫组化法可检出胃粘膜组织切片中的完整用免疫组化法可检出胃粘膜组织切片中的完整HP及破碎的菌及破碎的菌体或抗原成分体或抗原成分间接免疫荧光法（间接免疫荧光法（IIF）弯曲菌与螺杆菌课件2快速脲酶试验快速脲酶试验 Christensen尿素培养基尿素培养基将小块的将小块的活检组织块放入装有培养基的瓶内，活检组织块放入装有培养基的瓶内，如培养基由黄变为红色为阳性。如培养基由黄变为红色为阳性。提示由该菌产提示由该菌产生的高活性的脲酶已将尿素分解，结果常在几生的高活性的脲酶已将尿素分解，结果常在几分钟至分钟至24小时内得到小时内得到弯曲菌与螺杆菌课件3核酸检测核酸
22、检测 现有的方法是从克隆的现有的方法是从克隆的HP染色体染色体DNA的特的特异性片段中构建引物异性片段中构建引物从从HP脲酶脲酶A基因序列中构建引物基因序列中构建引物用用PCR扩增结合限制性内切酶多态性分析扩增结合限制性内切酶多态性分析技术鉴别技术鉴别HP可检测出不能分离培养的可检测出不能分离培养的HP弯曲菌与螺杆菌课件4粪便标本抗原检测粪便标本抗原检测 可采用可采用ELISA方法直接测定粪便标本中的抗方法直接测定粪便标本中的抗原。适用于不能进行原。适用于不能进行13C或或14C标记尿素呼吸标记尿素呼吸试验或胃镜检查的患者试验或胃镜检查的患者弯曲菌与螺杆菌课件（四）分离培养与鉴定（四）分离培养
23、与鉴定 分离培养分离培养宜用新鲜配制的选择培养基宜用新鲜配制的选择培养基。将标本的粘膜面在平板上。将标本的粘膜面在平板上反复涂擦，或将标本研碎后用研磨棒蘸取适量匀浆接种反复涂擦，或将标本研碎后用研磨棒蘸取适量匀浆接种将接种后的平板放入将接种后的平板放入微需氧和微需氧和98%以上湿度的环境培养以上湿度的环境培养鉴定鉴定主要根据菌落特征、形态和染色性；主要根据菌落特征、形态和染色性；37生长；生长；氧化酶氧化酶和触酶均阳性和触酶均阳性、脲酶强阳性脲酶强阳性；对萘啶酸耐药、头孢噻吩；对萘啶酸耐药、头孢噻吩敏感；在敏感；在1%甘油和甘油和1%胆盐中均不生长。胆盐中均不生长。弯曲菌与螺杆菌课件（五）抗体
24、检测（五）抗体检测用血清学方法检测患者体内的抗用血清学方法检测患者体内的抗HP抗体（抗体（IgG、IgM和和IgA）系最常用的无创伤性诊断）系最常用的无创伤性诊断HP感染的感染的方法方法目前已有补体结合试验、胶乳凝集试验及目前已有补体结合试验、胶乳凝集试验及ELISA等，而以等，而以ELISA应用最为广泛，现有商品化的应用最为广泛，现有商品化的ELISA、胶乳凝集试验试剂盒、胶乳凝集试验试剂盒用于检测患者血清中用于检测患者血清中HP的菌体抗体或脲酶抗体的菌体抗体或脲酶抗体弯曲菌与螺杆菌课件（六）（六）13C或或14C标记尿素呼吸试验标记尿素呼吸试验基本方法是患者禁食一夜，进食用基本方法是患者禁
25、食一夜，进食用13C或或14C标记的尿素，标记的尿素，HP产生的脲酶分解尿素产生的脲酶分解尿素释放带有同位素的释放带有同位素的CO2，因此可测定患者，因此可测定患者呼气中释放带有同位素的呼气中释放带有同位素的CO2量，如量，如CO2含量超过标准，提示有含量超过标准，提示有HP存在。存在。该方法敏感性与特异性均很好，该方法敏感性与特异性均很好，只是需要只是需要特殊的同位素测定仪。特殊的同位素测定仪。弯曲菌与螺杆菌课件小小 结结 微氧环境，微氧环境， 营养要求较高。营养要求较高。弯曲菌：动物与人类的腹泻、胃肠炎和肠道外感染弯曲菌：动物与人类的腹泻、胃肠炎和肠道外感染等疾病。等疾病。 对人致病有空肠弯曲菌、大肠弯曲菌、胎儿弯曲对人致病有空肠弯曲菌、大肠弯曲菌、胎儿弯曲菌等。菌等。幽门螺杆菌：引起胃炎的病原体，可以产生大量脲幽门螺杆菌：引起胃炎的病原体，可以产生大量脲酶。通过快速测定脲酶的活性或代谢产物可以临酶。通过快速测定脲酶的活性或代谢产物可以临床诊断床诊断弯曲菌与螺杆菌课件
