食品中致病性大肠埃希氏菌及检验

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1、第三节第三节 致病性致病性大肠埃希氏菌及其检验大肠埃希氏菌及其检验食品中肠道致病杆菌的检验食品中肠道致病杆菌的检验 大肠埃希氏菌大肠埃希氏菌, ,俗称大肠杆菌俗称大肠杆菌, ,是人类是人类和动物肠道中正常菌群的主要成员和动物肠道中正常菌群的主要成员, ,每每克粪便中约含克粪便中约含10109 9个个. .大肠埃希氏菌随大肠埃希氏菌随粪便排出后粪便排出后, ,广泛分布于自然界广泛分布于自然界. .水、水、牛乳及其他食品一旦检出大肠埃希氏牛乳及其他食品一旦检出大肠埃希氏菌，即意味着这些物品直接或间接被菌，即意味着这些物品直接或间接被粪便污染。粪便污染。正常情况下，大肠埃希氏菌不致病，而且还能合正常

2、情况下，大肠埃希氏菌不致病，而且还能合正常情况下，大肠埃希氏菌不致病，而且还能合正常情况下，大肠埃希氏菌不致病，而且还能合成维生素成维生素成维生素成维生素B B B B和维生素和维生素和维生素和维生素K,K,K,K,生产大肠菌素，对机体有利。生产大肠菌素，对机体有利。生产大肠菌素，对机体有利。生产大肠菌素，对机体有利。但当机体抵抗力下降或大肠埃希氏菌侵入肠外组但当机体抵抗力下降或大肠埃希氏菌侵入肠外组但当机体抵抗力下降或大肠埃希氏菌侵入肠外组但当机体抵抗力下降或大肠埃希氏菌侵入肠外组织或器官时，可作为条件致病菌而引起肠道外感织或器官时，可作为条件致病菌而引起肠道外感织或器官时，可作为条件致病菌

3、而引起肠道外感织或器官时，可作为条件致病菌而引起肠道外感染。有些血清型可引起肠道感染。致病性大肠埃染。有些血清型可引起肠道感染。致病性大肠埃染。有些血清型可引起肠道感染。致病性大肠埃染。有些血清型可引起肠道感染。致病性大肠埃希氏菌属主要分为五大类，首先根据发病机理分希氏菌属主要分为五大类，首先根据发病机理分希氏菌属主要分为五大类，首先根据发病机理分希氏菌属主要分为五大类，首先根据发病机理分为三大类，为三大类，为三大类，为三大类，1 1 1 1、产毒素型大肠埃希氏菌、产毒素型大肠埃希氏菌、产毒素型大肠埃希氏菌、产毒素型大肠埃希氏菌(ETEC)(ETEC)(ETEC)(ETEC)，2 2 2 2、

4、侵袭型大肠埃希氏菌、侵袭型大肠埃希氏菌、侵袭型大肠埃希氏菌、侵袭型大肠埃希氏菌(EIEC)(EIEC)(EIEC)(EIEC)3 3 3 3、肠道致病性大肠埃希氏菌、肠道致病性大肠埃希氏菌、肠道致病性大肠埃希氏菌、肠道致病性大肠埃希氏菌(EPEC)(EPEC)(EPEC)(EPEC)近来又提出另外两类近来又提出另外两类近来又提出另外两类近来又提出另外两类4 4 4 4、出血性大肠埃希氏菌、出血性大肠埃希氏菌、出血性大肠埃希氏菌、出血性大肠埃希氏菌(EHEC)(EHEC)(EHEC)(EHEC) 5 5 5 5、肠粘附性大肠埃希氏菌、肠粘附性大肠埃希氏菌、肠粘附性大肠埃希氏菌、肠粘附性大肠埃希氏

5、菌(EAEC)(EAEC)(EAEC)(EAEC)致病性大肠埃希氏菌中，一般认为能致病性大肠埃希氏菌中，一般认为能产生耐热产生耐热(ST)(ST)和不耐热和不耐热(LT)(LT)肠毒素的肠毒素的两种菌株均可引起人的食物中毒。引两种菌株均可引起人的食物中毒。引起大肠埃希氏菌中毒的主要是一些动起大肠埃希氏菌中毒的主要是一些动物性食品，如乳与乳制品、肉类、水物性食品，如乳与乳制品、肉类、水产品等，牛和猪是传播这种病菌、引产品等，牛和猪是传播这种病菌、引起中毒的主要原因。起中毒的主要原因。 19961996年年7 7月在日本就发生了大肠杆菌月在日本就发生了大肠杆菌01570157型引起的食物中毒，造成

6、型引起的食物中毒，造成90179017多多人中毒，人中毒，1010人死亡，其原因与生食萝人死亡，其原因与生食萝卜苗有关，其中卜苗有关，其中9292例并发出血性肠炎例并发出血性肠炎及出血性尿毒症。及出血性尿毒症。20012001年，再江苏、年，再江苏、安徽等地爆发的肠出血性大肠杆菌安徽等地爆发的肠出血性大肠杆菌0157:H70157:H7食物中毒，造成食物中毒，造成177177人死亡，人死亡，中毒人数超过中毒人数超过2 2万人。万人。如仔猪黄、白痢、猪水肿病、牛腹泻如仔猪黄、白痢、猪水肿病、牛腹泻和败血症等均可由大肠杆菌引起。和败血症等均可由大肠杆菌引起。一、埃希氏菌属生物学特性一、埃希氏菌属生

7、物学特性形态与染色形态与染色 本属细菌为革兰氏阴性本属细菌为革兰氏阴性两端钝圆、中等大小的两端钝圆、中等大小的无芽孢杆菌，绝大多数无芽孢杆菌，绝大多数周生鞭毛，能运动，周周生鞭毛，能运动，周身还有菌毛，不产生荚身还有菌毛，不产生荚膜，某些菌株有荚膜。膜，某些菌株有荚膜。 普通大肠埃希氏菌Escherichia Coli培养特性培养特性培养特性培养特性1)1)1)1)需氧及兼性厌氧菌需氧及兼性厌氧菌需氧及兼性厌氧菌需氧及兼性厌氧菌2)2)2)2)对营养的要求不高，在普通琼脂上就生长良好，对营养的要求不高，在普通琼脂上就生长良好，对营养的要求不高，在普通琼脂上就生长良好，对营养的要求不高，在普通琼

8、脂上就生长良好，在在在在15C-4515C-4515C-4515C-45范围内均可生长，但最适生长温度为范围内均可生长，但最适生长温度为范围内均可生长，但最适生长温度为范围内均可生长，但最适生长温度为37373737，最适，最适，最适，最适pHpHpHpH为为为为7.2-7.47.2-7.47.2-7.47.2-7.4。3)3)3)3)在普通琼脂平板上培养在普通琼脂平板上培养在普通琼脂平板上培养在普通琼脂平板上培养24242424小时，可形成圆形、凸小时，可形成圆形、凸小时，可形成圆形、凸小时，可形成圆形、凸起、光滑、湿润、半透明、边缘整齐、中等大小起、光滑、湿润、半透明、边缘整齐、中等大小起

9、、光滑、湿润、半透明、边缘整齐、中等大小起、光滑、湿润、半透明、边缘整齐、中等大小的菌落其菌落与沙门氏菌比较相似，但是，大的菌落其菌落与沙门氏菌比较相似，但是，大的菌落其菌落与沙门氏菌比较相似，但是，大的菌落其菌落与沙门氏菌比较相似，但是，大肠杆菌菌落对光肠杆菌菌落对光肠杆菌菌落对光肠杆菌菌落对光(45(45(45(45角折射角折射角折射角折射) ) ) )观察可见荧光。观察可见荧光。观察可见荧光。观察可见荧光。4)4)4)4)在肉汤培养基中生长在肉汤培养基中生长在肉汤培养基中生长在肉汤培养基中生长18-2418-2418-2418-24小时变为均匀浑，而小时变为均匀浑，而小时变为均匀浑，而小

10、时变为均匀浑，而后底部出现粘性沉淀物，并伴有臭味。后底部出现粘性沉淀物，并伴有臭味。后底部出现粘性沉淀物，并伴有臭味。后底部出现粘性沉淀物，并伴有臭味。一、埃希氏菌属生物学特性5 5）在鲜血琼脂平板上生长，有些菌株可）在鲜血琼脂平板上生长，有些菌株可见见溶血环。溶血环。6 6）在远藤琼脂上长成带金属光泽的红色）在远藤琼脂上长成带金属光泽的红色菌落菌落7 7）在）在S SS S琼脂平板上多不生长，少数生琼脂平板上多不生长，少数生长的细菌，也因发酵乳糖产酸而长的细菌，也因发酵乳糖产酸而形成形成红红色色菌落；菌落；8 8）在伊红美兰琼脂上形成紫黑色具有金）在伊红美兰琼脂上形成紫黑色具有金属光泽的菌落

11、属光泽的菌落9 9）在麦康凯琼脂上培养）在麦康凯琼脂上培养2424小时后小时后孤立菌孤立菌落呈红色落呈红色埃希氏菌埃希氏菌埃希氏菌埃希氏菌在在在在S S S SS S S S琼脂平板上形成红色菌落琼脂平板上形成红色菌落琼脂平板上形成红色菌落琼脂平板上形成红色菌落在麦康基培养基上培养的大肠埃希杆菌在麦康基培养基上培养的大肠埃希杆菌在麦康基培养基上培养的大肠埃希杆菌在麦康基培养基上培养的大肠埃希杆菌 大肠埃大肠埃大肠埃大肠埃希杆菌产生粉红色乳糖发酵菌落。麦康基培养基希杆菌产生粉红色乳糖发酵菌落。麦康基培养基希杆菌产生粉红色乳糖发酵菌落。麦康基培养基希杆菌产生粉红色乳糖发酵菌落。麦康基培养基是肠道细

12、菌的选择培养基，含胆盐、乳糖和是肠道细菌的选择培养基，含胆盐、乳糖和是肠道细菌的选择培养基，含胆盐、乳糖和是肠道细菌的选择培养基，含胆盐、乳糖和pHpHpHpH指指指指示剂中性红。乳糖发酵菌落产生酸，将指示剂变示剂中性红。乳糖发酵菌落产生酸，将指示剂变示剂中性红。乳糖发酵菌落产生酸，将指示剂变示剂中性红。乳糖发酵菌落产生酸，将指示剂变红。（麦康基琼脂，红。（麦康基琼脂，红。（麦康基琼脂，红。（麦康基琼脂，18181818小时，小时，小时，小时，37373737）革兰氏阴性杆菌革兰氏阴性杆菌 革兰氏阳性杆菌革兰氏阳性杆菌大肠杆菌扫描电镜照片大肠杆菌扫描电镜照片大肠杆菌透射电镜照片大肠杆菌透射电镜

13、照片大肠杆菌革兰氏染色照片大肠杆菌革兰氏染色照片 大肠杆菌平板菌落照片大肠杆菌平板菌落照片一、埃希氏菌属生物学特性一、埃希氏菌属生物学特性生化特性生化特性1 1）可发酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇）可发酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇产酸产气，有些不典型的菌株不发酵或迟产酸产气，有些不典型的菌株不发酵或迟缓发酵乳糖；缓发酵乳糖；2 2）不同菌株对蔗糖，卫矛醇、水杨苷发酵）不同菌株对蔗糖，卫矛醇、水杨苷发酵结果不一致结果不一致; ;3 3）本菌可使赖氨酸脱鞍、不能使苯丙氨酸）本菌可使赖氨酸脱鞍、不能使苯丙氨酸脱羧。脱羧。4 4）不产生）不产生H2SH2S，不液化明胶，不分解尿素，不液化明胶，不分解

14、尿素; ;5 5）、不能在氰化钾培养基上生长，靛基质）、不能在氰化钾培养基上生长，靛基质试验阳性，试验阳性，V-PV-P试验阴性，不利用枸橼酸试验阴性，不利用枸橼酸盐。后四项生化特性是典型的大肠埃希氏盐。后四项生化特性是典型的大肠埃希氏菌，与此不一致的即为非典型大肠埃希氏菌，与此不一致的即为非典型大肠埃希氏菌菌。菌菌。 IMViC IMViC试验：如试验：如IMViCIMViC试验为试验为+ +、+ +、- -、- -，且乳糖发酵，表明被检物已有粪便污染，且乳糖发酵，表明被检物已有粪便污染，有发生肠道传染病的危险，这是卫生细菌有发生肠道传染病的危险，这是卫生细菌中常用的检测指标。（中常用的检测

15、指标。（I I：吲哚形成试验，：吲哚形成试验，M M：甲基红试验，：甲基红试验，ViVi：V-PV-P试验，试验，C C：枸橼：枸橼酸盐利用试验）酸盐利用试验）I-I-I-I-吲哚（吲哚（吲哚（吲哚（indolindolindolindol）试验）试验）试验）试验色氨酸色氨酸色氨酸色氨酸吲哚吲哚吲哚吲哚玫瑰吲哚玫瑰吲哚玫瑰吲哚玫瑰吲哚 吲哚试剂吲哚试剂吲哚试剂吲哚试剂M-M-M-M-甲基红（甲基红（甲基红（甲基红（methyl redmethyl redmethyl redmethyl red）实验）实验）实验）实验葡萄糖葡萄糖葡萄糖葡萄糖丙酮酸丙酮酸丙酮酸丙酮酸乙酰甲基甲醇乙酰甲基甲醇乙酰甲

16、基甲醇乙酰甲基甲醇 甲基红甲基红甲基红甲基红 - - - -葡萄糖葡萄糖葡萄糖葡萄糖丙酮酸丙酮酸丙酮酸丙酮酸 甲基红甲基红甲基红甲基红 + + + +V-VPV-VPV-VPV-VP（Voges-ProskauerVoges-ProskauerVoges-ProskauerVoges-Proskauer）试验）试验）试验）试验葡萄糖葡萄糖丙酮酸丙酮酸乙酰甲基甲醇乙酰甲基甲醇二乙酰二乙酰红色化合物红色化合物+ + 胍基化合物胍基化合物C-C-C-C-枸橼酸盐利用（枸橼酸盐利用（枸橼酸盐利用（枸橼酸盐利用（citrate utilizationcitrate utilizationcitrate

17、utilizationcitrate utilization）试验）试验）试验）试验利用枸橼酸盐生长利用枸橼酸盐生长 + +不能利用不能利用 - -一、埃希氏菌属生物学特性一、埃希氏菌属生物学特性抵抗力抵抗力 该菌对热的抵抗力较其他肠道杆菌强，该菌对热的抵抗力较其他肠道杆菌强，5555经经6060分钟或分钟或6060加热加热1515分钟仍有部分分钟仍有部分细菌存活。细菌存活。在自然界的水中可存活数周至数月，在温在自然界的水中可存活数周至数月，在温度较低的粪便中存活更久。对磺胺类、链度较低的粪便中存活更久。对磺胺类、链霉素、氯霉素等敏感，青霉素对它的作用霉素、氯霉素等敏感，青霉素对它的作用弱弱,

18、 , 易产生耐药菌株易产生耐药菌株. .一、埃希氏菌属生物学特性一、埃希氏菌属生物学特性 致病性：（致病性：（致病性：（致病性：（1 1 1 1）致病因素）致病因素）致病因素）致病因素侵袭力侵袭力侵袭力侵袭力: : : :大肠杆菌具有抗原和菌毛大肠杆菌具有抗原和菌毛大肠杆菌具有抗原和菌毛大肠杆菌具有抗原和菌毛, , , ,抗原有抗吞噬抗原有抗吞噬抗原有抗吞噬抗原有抗吞噬作用作用作用作用, , , ,有抵抗抗体和补体的作用有抵抗抗体和补体的作用有抵抗抗体和补体的作用有抵抗抗体和补体的作用, , , ,菌毛能帮助细菌菌毛能帮助细菌菌毛能帮助细菌菌毛能帮助细菌黏附于黏膜表面黏附于黏膜表面黏附于黏膜表

19、面黏附于黏膜表面. . . .有侵袭力的菌株可以侵犯肠道表有侵袭力的菌株可以侵犯肠道表有侵袭力的菌株可以侵犯肠道表有侵袭力的菌株可以侵犯肠道表皮层引起炎症皮层引起炎症皮层引起炎症皮层引起炎症. . . .内毒素内毒素内毒素内毒素: : : :大肠杆菌细胞壁具有内毒素的活性大肠杆菌细胞壁具有内毒素的活性大肠杆菌细胞壁具有内毒素的活性大肠杆菌细胞壁具有内毒素的活性肠毒素肠毒素肠毒素肠毒素: : : :有两种有两种有两种有两种, , , ,不耐热肠毒素不耐热肠毒素不耐热肠毒素不耐热肠毒素(LT),(LT),(LT),(LT),成分可能是蛋成分可能是蛋成分可能是蛋成分可能是蛋白质白质白质白质, , ,

20、 ,加热加热加热加热65656565经经经经30min30min30min30min即被破坏即被破坏即被破坏即被破坏. LT. LT. LT. LT与霍乱菌肠与霍乱菌肠与霍乱菌肠与霍乱菌肠毒素作用相似毒素作用相似毒素作用相似毒素作用相似, , , ,都是刺激小肠上皮细胞的腺苷环化都是刺激小肠上皮细胞的腺苷环化都是刺激小肠上皮细胞的腺苷环化都是刺激小肠上皮细胞的腺苷环化酶酶酶酶, , , ,使使使使ATPATPATPATP转变为转变为转变为转变为CAMP,CAMP,CAMP,CAMP,促进肠黏膜细胞的分泌功能促进肠黏膜细胞的分泌功能促进肠黏膜细胞的分泌功能促进肠黏膜细胞的分泌功能, , , ,使

21、肠液大量分泌使肠液大量分泌使肠液大量分泌使肠液大量分泌, , , ,引起腹泻引起腹泻引起腹泻引起腹泻; ; ; ;耐热肠毒素耐热肠毒素耐热肠毒素耐热肠毒素(ST)(ST)(ST)(ST)无免无免无免无免疫性疫性疫性疫性, , , ,耐热耐热耐热耐热,100,100,100,100经经经经10-20min10-20min10-20min10-20min不被破坏不被破坏不被破坏不被破坏, , , ,也可使肠也可使肠也可使肠也可使肠道细胞的道细胞的道细胞的道细胞的CAMPCAMPCAMPCAMP水平升高水平升高水平升高水平升高, , , ,引起腹泻引起腹泻引起腹泻引起腹泻. . . .LTLT与与S

22、TST的比较的比较特性特性特性特性不耐热肠毒素不耐热肠毒素不耐热肠毒素不耐热肠毒素耐热肠毒素耐热肠毒素耐热肠毒素耐热肠毒素分子量分子量分子量分子量较大，较大，较大，较大，73000730007300073000较小，较小，较小，较小，1500-50001500-50001500-50001500-5000耐热性耐热性耐热性耐热性不耐热不耐热不耐热不耐热耐热耐热耐热耐热免疫原性免疫原性免疫原性免疫原性有有有有无无无无B B B B亚单位受体亚单位受体亚单位受体亚单位受体 肠黏膜肠黏膜肠黏膜肠黏膜GM1GM1GM1GM1神经节苷酯神经节苷酯神经节苷酯神经节苷酯肠黏膜肠黏膜肠黏膜肠黏膜GM1GM1G

23、M1GM1神经节苷酯神经节苷酯神经节苷酯神经节苷酯致病机理致病机理致病机理致病机理活化细胞腺苷酸环化酶，活化细胞腺苷酸环化酶，活化细胞腺苷酸环化酶，活化细胞腺苷酸环化酶，细胞内细胞内细胞内细胞内cAMPcAMPcAMPcAMP含量升高，含量升高，含量升高，含量升高，分泌功能亢进，引起腹分泌功能亢进，引起腹分泌功能亢进，引起腹分泌功能亢进，引起腹泻泻泻泻活化细胞鸟苷酸环化酶，活化细胞鸟苷酸环化酶，活化细胞鸟苷酸环化酶，活化细胞鸟苷酸环化酶，细胞内细胞内细胞内细胞内cGMPcGMPcGMPcGMP含量升高，含量升高，含量升高，含量升高，分泌功能亢进，引起腹分泌功能亢进，引起腹分泌功能亢进，引起腹分

24、泌功能亢进，引起腹泻泻泻泻一、埃希氏菌属生物学特性一、埃希氏菌属生物学特性致病性：（致病性：（致病性：（致病性：（2 2 2 2）所致疾病）所致疾病）所致疾病）所致疾病肠外感染：肠外感染：肠外感染：肠外感染：泌尿系统感染最常见病原菌。还可引泌尿系统感染最常见病原菌。还可引泌尿系统感染最常见病原菌。还可引泌尿系统感染最常见病原菌。还可引起胆囊炎、肺炎、新生儿或婴儿脑膜炎。起胆囊炎、肺炎、新生儿或婴儿脑膜炎。起胆囊炎、肺炎、新生儿或婴儿脑膜炎。起胆囊炎、肺炎、新生儿或婴儿脑膜炎。腹泻：腹泻：腹泻：腹泻：产毒素大肠杆菌是婴儿及旅游者腹泻的主产毒素大肠杆菌是婴儿及旅游者腹泻的主产毒素大肠杆菌是婴儿及旅

25、游者腹泻的主产毒素大肠杆菌是婴儿及旅游者腹泻的主要原因；致病性大肠杆菌是婴儿腹泻的主要原因；要原因；致病性大肠杆菌是婴儿腹泻的主要原因；要原因；致病性大肠杆菌是婴儿腹泻的主要原因；要原因；致病性大肠杆菌是婴儿腹泻的主要原因；侵袭型大肠杆菌主要引起较大儿童和成年人腹泻。侵袭型大肠杆菌主要引起较大儿童和成年人腹泻。侵袭型大肠杆菌主要引起较大儿童和成年人腹泻。侵袭型大肠杆菌主要引起较大儿童和成年人腹泻。一、埃希氏菌属生物学特性一、埃希氏菌属生物学特性血清学特性血清学特性血清学特性血清学特性 大肠埃希氏菌的抗原构造主要由菌体抗原大肠埃希氏菌的抗原构造主要由菌体抗原大肠埃希氏菌的抗原构造主要由菌体抗原大

26、肠埃希氏菌的抗原构造主要由菌体抗原(O)(O)(O)(O)，鞭毛抗原鞭毛抗原鞭毛抗原鞭毛抗原(H)(H)(H)(H)和荚膜抗原和荚膜抗原和荚膜抗原和荚膜抗原(K)(K)(K)(K)三部分组成。三部分组成。三部分组成。三部分组成。1 1 1 1）O O O O抗原抗原抗原抗原 成分为细胞壁上的糖、类脂和蛋白质复合物，也成分为细胞壁上的糖、类脂和蛋白质复合物，也成分为细胞壁上的糖、类脂和蛋白质复合物，也成分为细胞壁上的糖、类脂和蛋白质复合物，也是细菌的内毒素，热稳定性较强，高压蒸汽处理是细菌的内毒素，热稳定性较强，高压蒸汽处理是细菌的内毒素，热稳定性较强，高压蒸汽处理是细菌的内毒素，热稳定性较强，

27、高压蒸汽处理2 2 2 2小时不被破坏。每一血清型只含有一种小时不被破坏。每一血清型只含有一种小时不被破坏。每一血清型只含有一种小时不被破坏。每一血清型只含有一种O O O O抗原，抗原，抗原，抗原，本菌已发现有本菌已发现有本菌已发现有本菌已发现有167167167167种种种种O O O O抗原，分别以阿拉伯数字表抗原，分别以阿拉伯数字表抗原，分别以阿拉伯数字表抗原，分别以阿拉伯数字表示。示。示。示。2 2 2 2）H H H H抗原抗原抗原抗原 为蛋白质；一种大肠埃希氏菌只有一种为蛋白质；一种大肠埃希氏菌只有一种为蛋白质；一种大肠埃希氏菌只有一种为蛋白质；一种大肠埃希氏菌只有一种H H H

28、 H抗原，抗原，抗原，抗原，无鞭毛则无无鞭毛则无无鞭毛则无无鞭毛则无H H H H抗原，抗原，抗原，抗原，H H H H抗原能在抗原能在抗原能在抗原能在80808080度被破坏，也能度被破坏，也能度被破坏，也能度被破坏，也能被酒精破坏。被酒精破坏。被酒精破坏。被酒精破坏。H H H H抗原共有抗原共有抗原共有抗原共有64646464种。种。种。种。3 3 3 3）K K K K抗原抗原抗原抗原是细胞外部的荚膜或菌体表面物质，又称包膜抗是细胞外部的荚膜或菌体表面物质，又称包膜抗是细胞外部的荚膜或菌体表面物质，又称包膜抗是细胞外部的荚膜或菌体表面物质，又称包膜抗原。新分离的大肠埃希氏菌原。新分离的

29、大肠埃希氏菌原。新分离的大肠埃希氏菌原。新分离的大肠埃希氏菌70707070具有具有具有具有K K K K抗原。根据抗原。根据抗原。根据抗原。根据K K K K抗原耐热的敏感性可把抗原耐热的敏感性可把抗原耐热的敏感性可把抗原耐热的敏感性可把K K K K抗原分为抗原分为抗原分为抗原分为A A A A、B B B B、L L L L三类，三类，三类，三类，共有共有共有共有103103103103种，致病性大肠埃希氏菌的抗原主要为种，致病性大肠埃希氏菌的抗原主要为种，致病性大肠埃希氏菌的抗原主要为种，致病性大肠埃希氏菌的抗原主要为B B B B抗原，少数为抗原，少数为抗原，少数为抗原，少数为L L

30、 L L抗原，抗原，抗原，抗原，B B B B抗原与抗原与抗原与抗原与L L L L抗原均可在煮沸后抗原均可在煮沸后抗原均可在煮沸后抗原均可在煮沸后被破坏，被破坏，被破坏，被破坏，A A A A抗原耐热性强，可耐受煮沸抗原耐热性强，可耐受煮沸抗原耐热性强，可耐受煮沸抗原耐热性强，可耐受煮沸1 1 1 1小时而不小时而不小时而不小时而不被破坏。，被破坏。，被破坏。，被破坏。，O O O O抗原可将大肠埃希氏菌分成若干血清群，再根据抗原可将大肠埃希氏菌分成若干血清群，再根据抗原可将大肠埃希氏菌分成若干血清群，再根据抗原可将大肠埃希氏菌分成若干血清群，再根据K K K K抗原和抗原和抗原和抗原和H

31、H H H抗原进一步分为若干个血清型或亚型，抗原进一步分为若干个血清型或亚型，抗原进一步分为若干个血清型或亚型，抗原进一步分为若干个血清型或亚型，根据大肠埃希氏菌抗原的鉴定结果，写出其抗原根据大肠埃希氏菌抗原的鉴定结果，写出其抗原根据大肠埃希氏菌抗原的鉴定结果，写出其抗原根据大肠埃希氏菌抗原的鉴定结果，写出其抗原式如式如式如式如O111O111O111O111：K58(B)H12K58(B)H12K58(B)H12K58(B)H12，一般认为，一般认为，一般认为，一般认为H H H H抗原与致病性抗原与致病性抗原与致病性抗原与致病性无关，因此，一般不需要进行无关，因此，一般不需要进行无关，因此

32、，一般不需要进行无关，因此，一般不需要进行H H H H抗原的鉴定。抗原的鉴定。抗原的鉴定。抗原的鉴定。二、致病性大肠埃希氏菌的检验二、致病性大肠埃希氏菌的检验 致病性大肠埃希氏菌的检验应按中致病性大肠埃希氏菌的检验应按中华人民共和国国家标准华人民共和国国家标准食品卫生食品卫生检验方法检验方法( (微生物学部分微生物学部分) )(GB489(GB4896-84)6-84)的有关内容进行检验。其检验程的有关内容进行检验。其检验程序如图序如图5 52 2。二、致病性大肠埃希氏菌的检验二、致病性大肠埃希氏菌的检验（一）、增菌培养（一）、增菌培养（一）、增菌培养（一）、增菌培养1 1 1 1、以无菌操

33、作的方法称取样品、以无菌操作的方法称取样品、以无菌操作的方法称取样品、以无菌操作的方法称取样品25g25g25g25g，加入，加入，加入，加入225ml225ml225ml225ml营营营营养肉汤培养基中，可用灭菌砂在研钵中磨碎或以养肉汤培养基中，可用灭菌砂在研钵中磨碎或以养肉汤培养基中，可用灭菌砂在研钵中磨碎或以养肉汤培养基中，可用灭菌砂在研钵中磨碎或以均质器打碎样品。均质器打碎样品。均质器打碎样品。均质器打碎样品。2 2 2 2、取适量接种于乳糖胆盐培养基中，测定大肠菌、取适量接种于乳糖胆盐培养基中，测定大肠菌、取适量接种于乳糖胆盐培养基中，测定大肠菌、取适量接种于乳糖胆盐培养基中，测定大

34、肠菌群群群群MPNMPNMPNMPN，其余移入，其余移入，其余移入，其余移入500ml500ml500ml500ml三角瓶中于三角瓶中于三角瓶中于三角瓶中于363636361111培养培养培养培养6 6 6 6小时。挑取一环，接种于一管小时。挑取一环，接种于一管小时。挑取一环，接种于一管小时。挑取一环，接种于一管30ml30ml30ml30ml肠道菌增菌肉肠道菌增菌肉肠道菌增菌肉肠道菌增菌肉汤中，汤中，汤中，汤中，42424242增菌培养增菌培养增菌培养增菌培养18181818小时。小时。小时。小时。二、致病性大肠埃希氏菌的检验二、致病性大肠埃希氏菌的检验（二）、分离培养（二）、分离培养（二）

35、、分离培养（二）、分离培养1 1 1 1、将乳糖胆盐发酵阳性管液与增菌液分别划线接、将乳糖胆盐发酵阳性管液与增菌液分别划线接、将乳糖胆盐发酵阳性管液与增菌液分别划线接、将乳糖胆盐发酵阳性管液与增菌液分别划线接种于麦康凯或伊红美兰琼脂平板上。种于麦康凯或伊红美兰琼脂平板上。种于麦康凯或伊红美兰琼脂平板上。种于麦康凯或伊红美兰琼脂平板上。2 2 2 2、于、于、于、于363636361111培养培养培养培养1818181824242424小时观察菌落对于污染严小时观察菌落对于污染严小时观察菌落对于污染严小时观察菌落对于污染严重的食品可直接按划线法接种，不经过增菌过程。重的食品可直接按划线法接种，不

36、经过增菌过程。重的食品可直接按划线法接种，不经过增菌过程。重的食品可直接按划线法接种，不经过增菌过程。不但要注意乳糖发酵的菌落，同时也要注意乳糖不但要注意乳糖发酵的菌落，同时也要注意乳糖不但要注意乳糖发酵的菌落，同时也要注意乳糖不但要注意乳糖发酵的菌落，同时也要注意乳糖不发酵的菌落。不发酵的菌落。不发酵的菌落。不发酵的菌落。EMBEMB平板照片及原理平板照片及原理原理：原理：原理：原理：伊红美蓝琼脂平板含伊红和美蓝染料，在伊红美蓝琼脂平板含伊红和美蓝染料，在伊红美蓝琼脂平板含伊红和美蓝染料，在伊红美蓝琼脂平板含伊红和美蓝染料，在此亦作为指示剂。此亦作为指示剂。此亦作为指示剂。此亦作为指示剂。大

37、肠菌群大肠菌群大肠菌群大肠菌群发酵乳糖造成酸性环发酵乳糖造成酸性环发酵乳糖造成酸性环发酵乳糖造成酸性环境时，故可染上酸性染料伊红，又因伊红与美兰境时，故可染上酸性染料伊红，又因伊红与美兰境时，故可染上酸性染料伊红，又因伊红与美兰境时，故可染上酸性染料伊红，又因伊红与美兰结合（该两种染料即结合成复合物）使大肠菌群结合（该两种染料即结合成复合物）使大肠菌群结合（该两种染料即结合成复合物）使大肠菌群结合（该两种染料即结合成复合物）使大肠菌群产生带核心的、有金属光泽的产生带核心的、有金属光泽的产生带核心的、有金属光泽的产生带核心的、有金属光泽的深紫色的深紫色的深紫色的深紫色的（龙胆紫（龙胆紫（龙胆紫（

38、龙胆紫的紫色）阳性菌落，从菌落表面的反射光中还可的紫色）阳性菌落，从菌落表面的反射光中还可的紫色）阳性菌落，从菌落表面的反射光中还可的紫色）阳性菌落，从菌落表面的反射光中还可看到绿色金属闪光。在伊红美兰平板上的典型菌看到绿色金属闪光。在伊红美兰平板上的典型菌看到绿色金属闪光。在伊红美兰平板上的典型菌看到绿色金属闪光。在伊红美兰平板上的典型菌落呈紫黑色，圆形，边缘整齐，表面光滑湿润，落呈紫黑色，圆形，边缘整齐，表面光滑湿润，落呈紫黑色，圆形，边缘整齐，表面光滑湿润，落呈紫黑色，圆形，边缘整齐，表面光滑湿润，常有金属光泽。有的由于被检样品影响，亦呈现常有金属光泽。有的由于被检样品影响，亦呈现常有金

39、属光泽。有的由于被检样品影响，亦呈现常有金属光泽。有的由于被检样品影响，亦呈现紫色、粉紫、中心灰紫、无黑心、湿润等，常为紫色、粉紫、中心灰紫、无黑心、湿润等，常为紫色、粉紫、中心灰紫、无黑心、湿润等，常为紫色、粉紫、中心灰紫、无黑心、湿润等，常为大肠杆菌，均应注意挑选。大肠杆菌，均应注意挑选。大肠杆菌，均应注意挑选。大肠杆菌，均应注意挑选。 大肠杆菌在伊红美蓝琼脂平板上的特征EMBEMB培养基，上为培养基，上为E.coliE.coli，大肠杆菌在麦康凯琼脂（）的特征大肠杆菌在麦康凯琼脂（）的特征 麦康凯琼脂（）或伊红美兰（）琼脂麦康凯琼脂（）或伊红美兰（）琼脂平板上，置平板上，置 培养培养小时

40、，检查有无疑小时，检查有无疑似大肠杆菌菌落。大肠杆菌在麦康凯平板上的典型菌似大肠杆菌菌落。大肠杆菌在麦康凯平板上的典型菌落呈鲜艳的桃红、粉红色落呈鲜艳的桃红、粉红色. .大肠埃希氏菌在麦康凯琼脂平板上的特征大肠埃希氏菌在麦康凯琼脂平板上的特征大肠埃希氏菌在麦康凯琼脂平板粘稠菌落的特征沙门氏菌麦康凯琼脂平板菌落沙门氏菌麦康凯琼脂平板菌落沙门氏菌麦康凯琼脂平板菌落沙门氏菌麦康凯琼脂平板菌落不发酵乳糖二、致病性大肠埃希氏菌的检验二、致病性大肠埃希氏菌的检验（三）、生化试验（三）、生化试验1 1、选取在麦康凯或伊红美兰平板上发酵乳糖或不发、选取在麦康凯或伊红美兰平板上发酵乳糖或不发酵乳糖的菌落酵乳糖的

41、菌落5 5个以上，分别接种于三糖铁个以上，分别接种于三糖铁(TSI)(TSI)或克氏双糖铁琼脂或克氏双糖铁琼脂(KI).(KI).同时将这些培养物分别接同时将这些培养物分别接种蛋白胨水、半固体、尿素琼脂、氰化钾肉汤和种蛋白胨水、半固体、尿素琼脂、氰化钾肉汤和赖氨酸脱羧酶实验培养基。经赖氨酸脱羧酶实验培养基。经3636培养培养18-2418-24小时。小时。弃去弃去H H2 2S S阳性或尿素酶阳性或阿拉伯糖阴性的培养阳性或尿素酶阳性或阿拉伯糖阴性的培养物。物。2 2、TSITSI斜面产酸或不产酸斜面产酸或不产酸, ,底层产酸底层产酸, H, H2 2S S阴性阴性, ,氰化氰化钾阴性和尿素酶阴

42、性的培养物为大肠埃希氏菌钾阴性和尿素酶阴性的培养物为大肠埃希氏菌. . TSITSI底层不产酸或底层不产酸或 H H2 2S S、氰化钾、尿素有任何一项、氰化钾、尿素有任何一项为阳性的培养物，均非大肠埃希氏菌。必要时做为阳性的培养物，均非大肠埃希氏菌。必要时做氧化酶实验或革蓝氏染色镜检。氧化酶实验或革蓝氏染色镜检。枸椽酸盐试验原理及斜面照片枸椽酸盐试验原理及斜面照片枸椽酸盐试验：枸椽酸盐试验：枸椽酸盐试验：枸椽酸盐试验：某些细菌能利用枸椽酸盐作为碳源，及磷酸某些细菌能利用枸椽酸盐作为碳源，及磷酸某些细菌能利用枸椽酸盐作为碳源，及磷酸某些细菌能利用枸椽酸盐作为碳源，及磷酸铵作为氮源，将枸椽酸盐分

43、解为二氧化碳，培养铵作为氮源，将枸椽酸盐分解为二氧化碳，培养铵作为氮源，将枸椽酸盐分解为二氧化碳，培养铵作为氮源，将枸椽酸盐分解为二氧化碳，培养基反应后成碱性，由于指示剂的作用，培养基变基反应后成碱性，由于指示剂的作用，培养基变基反应后成碱性，由于指示剂的作用，培养基变基反应后成碱性，由于指示剂的作用，培养基变为兰色。大肠杆菌阴性为兰色。大肠杆菌阴性为兰色。大肠杆菌阴性为兰色。大肠杆菌阴性, , , ,产气杆菌阳性产气杆菌阳性产气杆菌阳性产气杆菌阳性. . . .枸椽酸盐试验原理及斜面照片枸椽酸盐试验原理及斜面照片大肠杆菌：大肠杆菌：MR + /VP -MR + /VP - 注关于大肠杆菌的反

44、应的说明注关于大肠杆菌的反应的说明 大肠杆菌试验的模式反应，在大肠杆菌试验的模式反应，在一般情况下应为一般情况下应为“”或将或将“”也包括在内，共代表了绝大多数大也包括在内，共代表了绝大多数大肠杆菌（占）的实际反应结果，因肠杆菌（占）的实际反应结果，因而受到了国际上的广泛承认，并将其列为而受到了国际上的广泛承认，并将其列为大肠杆菌的常规鉴别反应公式。大肠杆菌的常规鉴别反应公式。但个别大肠杆菌的反应，也可但个别大肠杆菌的反应，也可能出现能出现“”和和“”等等等等异常现象。由于这种异常反应出现的频率异常现象。由于这种异常反应出现的频率极少，没有普遍性的代表意义，因而在分极少，没有普遍性的代表意义，

45、因而在分类鉴别和统计学上，可以忽略不计。类鉴别和统计学上，可以忽略不计。 致病性大肠埃希氏菌的检验致病性大肠埃希氏菌的检验（四）血清学试验（四）血清学试验（四）血清学试验（四）血清学试验假定试验：假定试验：假定试验：假定试验： 从平板上选菌落生长稠密处挑取培养物，用致病从平板上选菌落生长稠密处挑取培养物，用致病从平板上选菌落生长稠密处挑取培养物，用致病从平板上选菌落生长稠密处挑取培养物，用致病性大肠埃希氏菌、侵袭性大肠埃希氏菌、产肠毒性大肠埃希氏菌、侵袭性大肠埃希氏菌、产肠毒性大肠埃希氏菌、侵袭性大肠埃希氏菌、产肠毒性大肠埃希氏菌、侵袭性大肠埃希氏菌、产肠毒素大肠埃希氏菌多价素大肠埃希氏菌多价

46、素大肠埃希氏菌多价素大肠埃希氏菌多价O O O O血清和出血性大肠埃希氏血清和出血性大肠埃希氏血清和出血性大肠埃希氏血清和出血性大肠埃希氏菌菌菌菌O157O157O157O157血清做玻片凝集试验。不凝集的培养物可血清做玻片凝集试验。不凝集的培养物可血清做玻片凝集试验。不凝集的培养物可血清做玻片凝集试验。不凝集的培养物可做阴性报告。当与某一种多价做阴性报告。当与某一种多价做阴性报告。当与某一种多价做阴性报告。当与某一种多价O O O O血清凝集时血清凝集时血清凝集时血清凝集时, , , ,再与再与再与再与该多价血清所包含的单价血清做实验该多价血清所包含的单价血清做实验该多价血清所包含的单价血清

47、做实验该多价血清所包含的单价血清做实验, , , ,如与某一如与某一如与某一如与某一种单价种单价种单价种单价O O O O血清呈现强烈的凝集反应血清呈现强烈的凝集反应血清呈现强烈的凝集反应血清呈现强烈的凝集反应, , , ,即为假定实验即为假定实验即为假定实验即为假定实验阳性阳性阳性阳性. . . .不凝集的培养物可做阴性报告。不凝集的培养物可做阴性报告。不凝集的培养物可做阴性报告。不凝集的培养物可做阴性报告。致病性大肠埃希氏菌的检验致病性大肠埃希氏菌的检验（四）血清学试验（四）血清学试验（四）血清学试验（四）血清学试验 证实试验：证实试验：证实试验：证实试验： 制备制备制备制备O O O O

48、抗原悬液抗原悬液抗原悬液抗原悬液, , , ,稀释血清稀释血清稀释血清稀释血清. . . .稀释血清稀释血清稀释血清稀释血清与抗原悬液在与抗原悬液在与抗原悬液在与抗原悬液在10mm10mm10mm10mm75mm75mm75mm75mm试管内等量混合试管内等量混合试管内等量混合试管内等量混合, , , ,做试做试做试做试管凝集试验管凝集试验管凝集试验管凝集试验. . . .（五）、产肠毒素大肠埃希氏菌毒素试验（五）、产肠毒素大肠埃希氏菌毒素试验（五）、产肠毒素大肠埃希氏菌毒素试验（五）、产肠毒素大肠埃希氏菌毒素试验 1 1 1 1、动物试验、动物试验、动物试验、动物试验 将经过生化证实试验的大

49、肠埃希氏菌培养物接种将经过生化证实试验的大肠埃希氏菌培养物接种将经过生化证实试验的大肠埃希氏菌培养物接种将经过生化证实试验的大肠埃希氏菌培养物接种肉汤管，于肉汤管，于肉汤管，于肉汤管，于36+136+136+136+1培养培养培养培养24242424小时，小时，小时，小时，3000300030003000转分离心转分离心转分离心转分离心30303030分钟。取上清液用分钟。取上清液用分钟。取上清液用分钟。取上清液用G6G6G6G6滤器过滤后分作两份，一滤器过滤后分作两份，一滤器过滤后分作两份，一滤器过滤后分作两份，一份加热份加热份加热份加热6030603060306030分钟，供分钟，供分钟，

50、供分钟，供STSTSTST测定用，另一份不加热，测定用，另一份不加热，测定用，另一份不加热，测定用，另一份不加热，供供供供LTLTLTLT测定用。测定用。测定用。测定用。致病性大肠埃希氏菌的检验致病性大肠埃希氏菌的检验（五）、产肠毒素大肠埃希氏菌毒素试验（五）、产肠毒素大肠埃希氏菌毒素试验（五）、产肠毒素大肠埃希氏菌毒素试验（五）、产肠毒素大肠埃希氏菌毒素试验 1 1 1 1、动物试验、动物试验、动物试验、动物试验1 1 1 1）家免结轧回肠段试验：取体重为）家免结轧回肠段试验：取体重为）家免结轧回肠段试验：取体重为）家免结轧回肠段试验：取体重为2kg2kg2kg2kg的家兔，禁食的家兔，禁食

51、的家兔，禁食的家兔，禁食使肠内容物排空。麻醉后剖腹，取出回肠段，按使肠内容物排空。麻醉后剖腹，取出回肠段，按使肠内容物排空。麻醉后剖腹，取出回肠段，按使肠内容物排空。麻醉后剖腹，取出回肠段，按10-15cm10-15cm10-15cm10-15cm为一段，分段结扎，取一段注射肉汤为一段，分段结扎，取一段注射肉汤为一段，分段结扎，取一段注射肉汤为一段，分段结扎，取一段注射肉汤2mL2mL2mL2mL作作作作为阴性对照，另一段注射已知产毒菌肉汤培养物的为阴性对照，另一段注射已知产毒菌肉汤培养物的为阴性对照，另一段注射已知产毒菌肉汤培养物的为阴性对照，另一段注射已知产毒菌肉汤培养物的上清液上清液上清

52、液上清液2ml2ml2ml2ml作为阳性对照。其他各段分别注射待试作为阳性对照。其他各段分别注射待试作为阳性对照。其他各段分别注射待试作为阳性对照。其他各段分别注射待试菌株肉汤培养物的滤液菌株肉汤培养物的滤液菌株肉汤培养物的滤液菌株肉汤培养物的滤液2mL2mL2mL2mL。将腹壁缝合。将腹壁缝合。将腹壁缝合。将腹壁缝合。 测定测定测定测定LTLTLTLT时，于注射后时，于注射后时，于注射后时，于注射后18181818小时剖腹检查小时剖腹检查小时剖腹检查小时剖腹检查 测定测定测定测定STSTSTST时，于注射后时，于注射后时，于注射后时，于注射后6-86-86-86-8小时剖腹检查小时剖腹检查小

53、时剖腹检查小时剖腹检查 取出肠管分别抽取肠段的积液，测定其容量，并测取出肠管分别抽取肠段的积液，测定其容量，并测取出肠管分别抽取肠段的积液，测定其容量，并测取出肠管分别抽取肠段的积液，测定其容量，并测定肠段的长度。积液量定肠段的长度。积液量定肠段的长度。积液量定肠段的长度。积液量(mL)(mL)(mL)(mL)与肠段长度与肠段长度与肠段长度与肠段长度(cm)(cm)(cm)(cm)之比大之比大之比大之比大于于于于l l l l者为阳性。者为阳性。者为阳性。者为阳性。（五）、产肠毒素大肠埃希氏菌毒素试验（五）、产肠毒素大肠埃希氏菌毒素试验 1 1、动物试验、动物试验2 2）乳鼠灌胃试验：将被检菌

54、株接种于）乳鼠灌胃试验：将被检菌株接种于HondaHonda氏产毒肉汤内氏产毒肉汤内,36,36度培养度培养2424小时小时, ,离心离心, ,取上取上清夜清夜, ,注入注入1-41-4日龄乳胃内日龄乳胃内, ,禁食禁食3-43-4小时小时, ,麻麻醉醉, ,取出肠管取出肠管, ,称量肠管称量肠管( (包括积液包括积液) )质量及质量及剩余体质量剩余体质量, ,二者之比大于二者之比大于0.090.09阳性阳性,0.07-,0.07-0.090.09为可疑为可疑. .致病性大肠埃希氏菌的检验致病性大肠埃希氏菌的检验致病性大肠埃希氏菌的检验致病性大肠埃希氏菌的检验（五）、产肠毒素大肠埃希氏菌毒素试

55、验（五）、产肠毒素大肠埃希氏菌毒素试验（五）、产肠毒素大肠埃希氏菌毒素试验（五）、产肠毒素大肠埃希氏菌毒素试验2 2 2 2、双向琼脂扩散试验、双向琼脂扩散试验、双向琼脂扩散试验、双向琼脂扩散试验: : : : 将被检菌按将被检菌按将被检菌按将被检菌按5 5 5 5点环形接种于点环形接种于点环形接种于点环形接种于ElekElekElekElek氏培养基上，以同样操作共做两份，氏培养基上，以同样操作共做两份，氏培养基上，以同样操作共做两份，氏培养基上，以同样操作共做两份，363636361111培养培养培养培养48484848小时，在每株菌的菌苔上各放一小时，在每株菌的菌苔上各放一小时，在每株菌

56、的菌苔上各放一小时，在每株菌的菌苔上各放一片多粘菌素纸片，片多粘菌素纸片，片多粘菌素纸片，片多粘菌素纸片，36+136+136+136+1经经经经5 5 5 56 6 6 6时，使抗生素渗时，使抗生素渗时，使抗生素渗时，使抗生素渗入琼脂中，在五点环形菌苔各入琼脂中，在五点环形菌苔各入琼脂中，在五点环形菌苔各入琼脂中，在五点环形菌苔各5mm5mm5mm5mm处的中央，挖处的中央，挖处的中央，挖处的中央，挖一个直径一个直径一个直径一个直径4mm4mm4mm4mm的园并用一滴琼脂垫底。在一份平的园并用一滴琼脂垫底。在一份平的园并用一滴琼脂垫底。在一份平的园并用一滴琼脂垫底。在一份平板的孔内滴加板的孔

57、内滴加板的孔内滴加板的孔内滴加LTLTLTLT抗毒素抗毒素抗毒素抗毒素30ul30ul30ul30ul，另一份平板的孔内，另一份平板的孔内，另一份平板的孔内，另一份平板的孔内滴加滴加滴加滴加STSTSTST毒素毒素毒素毒素30ul30ul30ul30ul。放于。放于。放于。放于36+136+136+136+1经经经经1515151520202020小时观察小时观察小时观察小时观察结果，在菌斑和抗毒素之间出现白色沉淀带为阳结果，在菌斑和抗毒素之间出现白色沉淀带为阳结果，在菌斑和抗毒素之间出现白色沉淀带为阳结果，在菌斑和抗毒素之间出现白色沉淀带为阳性，无沉淀带者为阴性。性，无沉淀带者为阴性。性，无

58、沉淀带者为阴性。性，无沉淀带者为阴性。致病性大肠埃希氏菌的检验致病性大肠埃希氏菌的检验（六）豚鼠角膜试验（六）豚鼠角膜试验（六）豚鼠角膜试验（六）豚鼠角膜试验供测定侵袭性大肠埃希氏菌用，将经过生化证实供测定侵袭性大肠埃希氏菌用，将经过生化证实供测定侵袭性大肠埃希氏菌用，将经过生化证实供测定侵袭性大肠埃希氏菌用，将经过生化证实试验的待试菌株试验的待试菌株试验的待试菌株试验的待试菌株18-2018-2018-2018-20小时琼脂培养物，用肉汤小时琼脂培养物，用肉汤小时琼脂培养物，用肉汤小时琼脂培养物，用肉汤洗下，使成每洗下，使成每洗下，使成每洗下，使成每lmllmllmllml含菌含菌含菌含菌9

59、 9 9 9亿个菌悬液，作为接种材亿个菌悬液，作为接种材亿个菌悬液，作为接种材亿个菌悬液，作为接种材料。料。料。料。体重体重体重体重400-500g400-500g400-500g400-500g的健康豚鼠的健康豚鼠的健康豚鼠的健康豚鼠( ( ( (角膜与结膜外观正常，角膜与结膜外观正常，角膜与结膜外观正常，角膜与结膜外观正常，并经细菌培养检查并经细菌培养检查并经细菌培养检查并经细菌培养检查) ) ) )的角膜上接种待试菌悬液的角膜上接种待试菌悬液的角膜上接种待试菌悬液的角膜上接种待试菌悬液1 1 1 1滴。滴。滴。滴。48484848小时后观察结果，结膜充血浮肿、角膜混浊、小时后观察结果，结

60、膜充血浮肿、角膜混浊、小时后观察结果，结膜充血浮肿、角膜混浊、小时后观察结果，结膜充血浮肿、角膜混浊、眼内充盈泪液或浆液性分物者为阳性，自结膜囊眼内充盈泪液或浆液性分物者为阳性，自结膜囊眼内充盈泪液或浆液性分物者为阳性，自结膜囊眼内充盈泪液或浆液性分物者为阳性，自结膜囊取样分离细菌，鉴定应与原接种菌一致。取样分离细菌，鉴定应与原接种菌一致。取样分离细菌，鉴定应与原接种菌一致。取样分离细菌，鉴定应与原接种菌一致。致病性大肠埃希氏菌的检验致病性大肠埃希氏菌的检验（七）、结果报告（七）、结果报告根据以上生化试验、血清学试验、肠毒素根据以上生化试验、血清学试验、肠毒素试验和豚鼠角膜试验的结果出报告，如果试验和豚鼠角膜试验的结果出报告，如果是产毒大肠埃希氏菌时应有肠毒素试验的是产毒大肠埃希氏菌时应有肠毒素试验的结果；如果是侵袭性大肠埃希氏荫应有豚结果；如果是侵袭性大肠埃希氏荫应有豚鼠角膜试验和血清学试验的结果；如果是鼠角膜试验和血清学试验的结果；如果是肠致病性大肠埃希氏菌时应有血清学试验肠致病性大肠埃希氏菌时应有血清学试验结果。结果。