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1、猪瘟活疫苗（传代细胞源）猪瘟活疫苗（传代细胞源）成品检验成品检验1n n内容：共有九个质量项内容：共有九个质量项n n分别是：物理性状检验、无菌检验、支原分别是：物理性状检验、无菌检验、支原体检验、鉴别检验、外源病毒检验、安全体检验、鉴别检验、外源病毒检验、安全检验、效力检验、剩余水分测定和真空度检验、效力检验、剩余水分测定和真空度测定测定。 21 物理性状检验物理性状检验本品为淡黄色海绵状疏松团块，易与瓶本品为淡黄色海绵状疏松团块，易与瓶壁脱离，加稀释液后迅速溶解。壁脱离，加稀释液后迅速溶解。32 无菌检验无菌检验 1按现行按现行中国兽药典中国兽药典附录进行检验，应无附录进行检验，应无菌生长
2、。菌生长。2用用T.G培养基培养基50ml，接种疫苗（先做，接种疫苗（先做10倍稀倍稀释）释）1ml，置，置37培养，培养，3日后吸取培养物，日后吸取培养物，分别接种分别接种T.G小管和小管和G.A斜面各斜面各2支，每支支，每支0.2ml，1支置支置37，1支置支置25，另取，另取0.2ml，接种一支，接种一支G.P小管，置小管，置25，均培，均培养养7日，应无菌生长。日，应无菌生长。42无菌检验无菌检验- 抽样抽样 1应随机取样并注意代表性。 2 按每批或每个亚批进行，每批按瓶数的百分之一抽样，但不应少于5瓶，最多不超过10瓶，每瓶分别进行检验。53 支原体检验支原体检验 n n按现行按现行
3、中国兽药典中国兽药典附录进行检验，应附录进行检验，应无支原体生长。无支原体生长。n n检测猪瘟活疫苗（传代细胞源）用支原体检测猪瘟活疫苗（传代细胞源）用支原体培养基（见培养基（见中国兽药典中国兽药典附录附录24、25页）。页）。3.1样品处理：每批制品取样样品处理：每批制品取样5瓶，加液体培瓶，加液体培养基或生理盐水复原成混悬液后混合。养基或生理盐水复原成混悬液后混合。3.2接种与观察：每个样品需同时用以下两接种与观察：每个样品需同时用以下两种方法检测。种方法检测。63 支原体检验支原体检验3.2.1液体培养基培养液体培养基培养将疫苗混合物将疫苗混合物5.0ml接种装接种装有有20ml液体培养
4、基的小瓶，摇匀后，再从小瓶液体培养基的小瓶，摇匀后，再从小瓶中取中取0.4ml移植到含有移植到含有1.8ml培养基的培养基的2支小管支小管（1.0cm10cm），每支各接种），每支各接种0.2ml，将小瓶与，将小瓶与小管置小管置37培养，分别于接种后培养，分别于接种后5日、日、10日、日、15日从小瓶中取日从小瓶中取0.2ml培养物移植到小管液体培养培养物移植到小管液体培养基内，每日观察培养物有无颜色变黄或变红，如基内，每日观察培养物有无颜色变黄或变红，如果无变化，则在最后一次移植小管培养、观察果无变化，则在最后一次移植小管培养、观察14日后停止观察。日后停止观察。73 支原体检验支原体检验3
5、.2.1在观察期内，如果发现小瓶或任何一支在观察期内，如果发现小瓶或任何一支小管培养物颜色出现明显变化，在原小管培养物颜色出现明显变化，在原 pH值值变化达变化达0.5时，应立即将小瓶中的培养物移时，应立即将小瓶中的培养物移植于小管液体培养基和固体培养基，观察植于小管液体培养基和固体培养基，观察在液体培养基中是否出现恒定的在液体培养基中是否出现恒定的pH变化，变化，及固体上有无典型的及固体上有无典型的“煎蛋煎蛋”状支原体菌状支原体菌落。落。 83 支原体检验支原体检验3.2.2琼脂固体平板培养琼脂固体平板培养在每次液体培养物移植在每次液体培养物移植小管培养的同时，取培养物小管培养的同时，取培养
6、物0.10.2ml接种于琼接种于琼脂平板，置含脂平板，置含5%10%CO2、潮湿的环境、潮湿的环境、37下培养。在液体培养基颜色出现变化，在下培养。在液体培养基颜色出现变化，在原原pH值变化达值变化达0.5时，也同时接种琼脂平板。时，也同时接种琼脂平板。每每35日，在低倍显微镜下，观察检查各琼脂平日，在低倍显微镜下，观察检查各琼脂平板有无支原体菌落出现，经板有无支原体菌落出现，经14日观察，仍无菌日观察，仍无菌落者时，停止观察。落者时，停止观察。93 支原体检验支原体检验3.3每次检查需同时设阴、阳性对照，在同条件每次检查需同时设阴、阳性对照，在同条件下培养观察。检测猪瘟活疫苗（传代细胞源）下
7、培养观察。检测猪瘟活疫苗（传代细胞源）疫苗，用猪鼻支原体作为阳性对照。疫苗，用猪鼻支原体作为阳性对照。3.4结果判定结果判定3.4.1接种样品的任何一个琼脂平板上出现支原接种样品的任何一个琼脂平板上出现支原体菌落时，判疫苗不合格。体菌落时，判疫苗不合格。3.4.2阳性对照中至少有一个平板出现支原体菌阳性对照中至少有一个平板出现支原体菌落，而阴性对照中无支原体生长，则检验有效。落，而阴性对照中无支原体生长，则检验有效。103 支原体检验支原体检验3.4结果判定结果判定3.4.1接种样品的任何一个琼脂平板上出现接种样品的任何一个琼脂平板上出现支原体菌落时，判疫苗不合格。支原体菌落时，判疫苗不合格。
8、3.4.2阳性对照中至少有一个平板出现支原阳性对照中至少有一个平板出现支原体菌落，而阴性对照中无支原体生长，则体菌落，而阴性对照中无支原体生长，则检验有效。检验有效。114 鉴别检验鉴别检验 中和试验中和试验将疫苗用灭菌生理盐水稀释成将疫苗用灭菌生理盐水稀释成为每毫升含有为每毫升含有100个兔个兔MID的病毒悬液，的病毒悬液，与等量的抗猪瘟病毒特异性血清充分混与等量的抗猪瘟病毒特异性血清充分混合，置合，置1015作用作用60分钟，其间振摇分钟，其间振摇23次。同时设立病毒对照和生理盐水对次。同时设立病毒对照和生理盐水对照。照。124 鉴别检验鉴别检验注射、观察与判定注射、观察与判定中和结束后，
9、分别中和结束后，分别耳静脉注射兔耳静脉注射兔2只，每兔只，每兔1.0ml，按效，按效力检验（力检验（1）项进行观察和判定。除病）项进行观察和判定。除病毒对照组应出现热反应外，其余毒对照组应出现热反应外，其余2组在组在接种后接种后120小时内不出现热反应。小时内不出现热反应。135 外源病毒检验外源病毒检验 按现行按现行中国兽药典中国兽药典附录进行检验，附录进行检验，应无外源病毒污染。应无外源病毒污染。 5.1样品处理样品处理取样品取样品23瓶，将样品混瓶，将样品混合，用相应的特异性阳性血清中和后合，用相应的特异性阳性血清中和后作为检品。作为检品。n n5.2细胞的选择与样品培养细胞的选择与样品
10、培养n n5.2.1细胞的选择细胞的选择n nVero、MDBK、ST传代细胞传代细胞145 外源病毒检验外源病毒检验5.2.2样品的接种与培养样品的接种与培养n n（1）至少）至少1.0ml（制品至少含（制品至少含10头份）已处理被头份）已处理被检样品应接种到已长成良好单层的上述细胞，另检样品应接种到已长成良好单层的上述细胞，另至少设一瓶正常细胞对照。至少设一瓶正常细胞对照。n n（2）细胞培养物传代方式：上一代细胞培养物）细胞培养物传代方式：上一代细胞培养物冻融冻融3次后接种新细胞单层的方式继代，至少继次后接种新细胞单层的方式继代，至少继代一次，总培养时间应不少于代一次，总培养时间应不少于
11、14日。日。n n最后一次继代的细胞单层数量和培养面积应符合最后一次继代的细胞单层数量和培养面积应符合荧光抗体检查法、致细胞病变检查法和红细胞吸荧光抗体检查法、致细胞病变检查法和红细胞吸附性外源病毒检验的要求。附性外源病毒检验的要求。155 外源病毒检验外源病毒检验 5.2.3判定判定在至少在至少14日的培养期内，日的培养期内，要对细胞培养物进行常规检查，如果要对细胞培养物进行常规检查，如果培养期间出现细胞病变，则判为不符培养期间出现细胞病变，则判为不符合规定。如无细胞病变，培养结束时，合规定。如无细胞病变，培养结束时，细胞单层应按细胞单层应按5.2.4进行检验。进行检验。165 外源病毒检验
12、外源病毒检验5.2.4检查方法检查方法使用使用BVDV、PPV荧光抗荧光抗体。体。5.2.4.1荧光抗体检查法荧光抗体检查法最后一次继代的细最后一次继代的细胞单层应培养胞单层应培养57日后用于荧光抗体检查。日后用于荧光抗体检查。对每一种特定外源病毒的检验应至少含三对每一种特定外源病毒的检验应至少含三组细胞单层：（组细胞单层：（1）被检样品细胞培养物；）被检样品细胞培养物；（2）在最后一次继代时接种）在最后一次继代时接种100300FAID50特定病毒的阳性对照；特定病毒的阳性对照；（3）正常细胞对照。每一组细胞单层检查）正常细胞对照。每一组细胞单层检查面积应不小于面积应不小于6.0cm2。17
13、5 外源病毒检验外源病毒检验荧光检查判定荧光检查判定细胞单层样品经丙酮固定后，细胞单层样品经丙酮固定后，用适宜的荧光抗体进行染色，检查每一组用适宜的荧光抗体进行染色，检查每一组单层是否存在特定外源病毒的荧光。当阳单层是否存在特定外源病毒的荧光。当阳性对照出现特异荧光，正常细胞无荧光时，性对照出现特异荧光，正常细胞无荧光时，如果被检样品出现外源性病毒特异性荧光，如果被检样品出现外源性病毒特异性荧光，判为不合格。如果阳性对照组荧光不明显，判为不合格。如果阳性对照组荧光不明显，或者正常细胞出现不明显荧光，判为无结或者正常细胞出现不明显荧光，判为无结果，应重检。果，应重检。185 外源病毒检验外源病毒
14、检验5.2.4.2致细胞病变检查法致细胞病变检查法取经传代培养至少取经传代培养至少7日日的敏感细胞单层（每个至少的敏感细胞单层（每个至少6.0cm2）进行检验。）进行检验。用适宜染色液对细胞单层进行染色。观察细胞单用适宜染色液对细胞单层进行染色。观察细胞单层，检查包涵体、巨细胞或其他由外源病毒引起层，检查包涵体、巨细胞或其他由外源病毒引起的的CPE的出现情况。如果出现外源病毒所致的特的出现情况。如果出现外源病毒所致的特异性异性CPE，判为不合格；如果疑有外源病毒污染，判为不合格；如果疑有外源病毒污染，又不能通过其他试验排除这种可能性时，则判为又不能通过其他试验排除这种可能性时，则判为不合格。不
15、合格。195 外源病毒检验外源病毒检验5.2.4.3红细胞吸附性外源病毒检验红细胞吸附性外源病毒检验取经传取经传代后至少培养代后至少培养7日的细胞单层（每个至少日的细胞单层（每个至少6.0cm2）进行检验。以）进行检验。以PBS洗涤细胞单层洗涤细胞单层23次。加入适量次。加入适量0.2%的豚鼠红细胞和鸡的豚鼠红细胞和鸡红细胞的等量混合悬液，以覆盖整个单层红细胞的等量混合悬液，以覆盖整个单层表面为准，红细胞悬液可在加入前混合，表面为准，红细胞悬液可在加入前混合，亦可分别滴加于不同的细胞单层上。亦可分别滴加于不同的细胞单层上。205 外源病毒检验外源病毒检验5.2.4.3选选2个细胞单层，分别在个
16、细胞单层，分别在28和和2025放置放置30分钟，用分钟，用PBS洗涤，洗涤，检查红细胞吸附情况。若出现外源病检查红细胞吸附情况。若出现外源病毒所致的红细胞吸附现象，判为不合毒所致的红细胞吸附现象，判为不合格；若疑有外源病毒污染，又不能通格；若疑有外源病毒污染，又不能通过其他试验排除这种可能性时，则判过其他试验排除这种可能性时，则判为不合格。为不合格。216 安全检验安全检验 6.1猪瘟病毒中和试验方法猪瘟病毒中和试验方法6.1.1先测定猪瘟病毒兔化弱毒先测定猪瘟病毒兔化弱毒(抗原抗原)对对兔的最小感染量（兔的最小感染量（MID）。试验时，）。试验时，将抗原用灭菌生理盐水稀释成将抗原用灭菌生理
17、盐水稀释成100个兔个兔MID/ml，作为工作抗原，作为工作抗原(如果抗原对兔如果抗原对兔的的MID为为10-5.0/ml，则将抗原稀释成，则将抗原稀释成1000倍使用倍使用)。226 安全检验安全检验6.1.2将被检猪血清分别用灭菌生理盐水作将被检猪血清分别用灭菌生理盐水作2倍稀释，与含有倍稀释，与含有100个兔个兔MID/ml的工作抗原等的工作抗原等量混合，摇匀后，置量混合，摇匀后，置1015中和中和2小时，其小时，其间振摇间振摇23次。同时设含有相同工作抗原量加次。同时设含有相同工作抗原量加等量生理盐水等量生理盐水(不加血清不加血清)的对照组，与被检组的对照组，与被检组在同样条件下处理。
18、在同样条件下处理。 236 安全检验安全检验6.1.3中和完毕，被检组各注射兔中和完毕，被检组各注射兔12只，只，对照组注射兔对照组注射兔2只，每只兔耳静脉注射只，每只兔耳静脉注射l.0ml，观察体温反应，并判定结果。，观察体温反应，并判定结果。246 安全检验安全检验6.1.4结果判定结果判定体温反应标准同效力检验项。体温反应标准同效力检验项。当对照组当对照组2只兔均呈定型热反应只兔均呈定型热反应(+)，或，或1只兔呈定型热反应只兔呈定型热反应(+)、另一只兔呈轻热反、另一只兔呈轻热反应应(+)时，方能判定结果。被检组如果用时，方能判定结果。被检组如果用1只只兔，须呈定型热反应；如果用兔，须
19、呈定型热反应；如果用2只兔，每只只兔，每只兔应呈定型热或轻热反应，被检血清判为兔应呈定型热或轻热反应，被检血清判为阴性。阴性。256 安全检验安全检验6.1.5注意注意如被检组用如被检组用2只兔，其中只兔，其中1只兔无反应只兔无反应或呈可疑反应时，可采血复归或对或呈可疑反应时，可采血复归或对2只兔进行攻只兔进行攻毒。如被检血清出现阳性反应或复归兔仍为可疑毒。如被检血清出现阳性反应或复归兔仍为可疑反应时，则该头被检猪不得用于猪瘟疫苗的安全反应时，则该头被检猪不得用于猪瘟疫苗的安全(或效力或效力)检验。被检组用检验。被检组用1只兔时，不得复归或只兔时，不得复归或攻毒。用中和试验方法选择易感猪，无论
20、是否同攻毒。用中和试验方法选择易感猪，无论是否同窝猪，均须逐头检测。窝猪，均须逐头检测。266 安全检验安全检验6.2测常温及安全检验注射剂测常温及安全检验注射剂接种前接种前观察观察57日，每日上、下午各测体温日，每日上、下午各测体温1次。挑选体温、精神、食欲正常的易次。挑选体温、精神、食欲正常的易感猪使用。每批疫苗按瓶签注明头份感猪使用。每批疫苗按瓶签注明头份用灭菌生理盐水稀释成每毫升含用灭菌生理盐水稀释成每毫升含6头份，头份，肌肉注射猪肌肉注射猪5头，每头头，每头5.0ml(含含30头份头份)。276 安全检验安全检验6.3测温及判定测温及判定接种后，每日上、下午各观接种后，每日上、下午各
21、观察并测体温察并测体温1次，观察次，观察21日。体温、精神、日。体温、精神、食欲与接种前相比没有明显变化；或体温食欲与接种前相比没有明显变化；或体温升高超过升高超过0.5，但不超过，但不超过l，稽留不超过，稽留不超过4个温次；或减食不超过个温次；或减食不超过l日，疫苗可判为合日，疫苗可判为合格。如果有格。如果有l头猪体温超过常温头猪体温超过常温l以上，但以上，但不超过不超过1.5，稽留不超过，稽留不超过2个温次，疫苗也个温次，疫苗也可判为合格。可判为合格。286 安全检验安全检验6.3测温及判定测温及判定如果有如果有1头猪的反应超过头猪的反应超过上述标准；或出现可疑的其他体温反应上述标准；或出
22、现可疑的其他体温反应和其它异常现象时，可用和其它异常现象时，可用5头猪重检头猪重检1次。次。重检的猪仍出现同样反应，疫苗应判为重检的猪仍出现同样反应，疫苗应判为不合格。不合格。296 安全检验安全检验6.3测温及判定测温及判定也可在猪高温期采血复也可在猪高温期采血复归猪归猪2头，每头肌肉注射可疑猪原血头，每头肌肉注射可疑猪原血5.0m1，测温观察，测温观察16日。如果均无反应，日。如果均无反应，疫苗可判合格。如果第疫苗可判合格。如果第1次检验结果已经次检验结果已经确证疫苗不安全，则不应进行重检。确证疫苗不安全，则不应进行重检。307 效力检验效力检验 下列方法任择其一下列方法任择其一 7.1用
23、兔效检用兔效检 按瓶签注明头份，用无菌生按瓶签注明头份，用无菌生理盐水将每头份疫苗稀释理盐水将每头份疫苗稀释1/7500头份头份/ml，耳静脉注射体重为，耳静脉注射体重为1.53.0kg兔兔2只，只，每只每只l.0ml。接种后，上、下午各测体温。接种后，上、下午各测体温1次，次，48小时后，每隔小时后，每隔6小时测体温小时测体温1次，次，根据体温反应和攻毒结果进行综合判定。根据体温反应和攻毒结果进行综合判定。317 效力检验效力检验7.1.17.1.1兔接种疫苗后，体温反应标准如下：兔接种疫苗后，体温反应标准如下：兔接种疫苗后，体温反应标准如下：兔接种疫苗后，体温反应标准如下：n n定型热反应
24、定型热反应定型热反应定型热反应(+)(+)潜伏期潜伏期潜伏期潜伏期48489696小时，体温上升呈小时，体温上升呈小时，体温上升呈小时，体温上升呈明显曲线，明显曲线，明显曲线，明显曲线， 至少有至少有至少有至少有3 3个温次超过常温个温次超过常温个温次超过常温个温次超过常温1 1以上，并稽留以上，并稽留以上，并稽留以上，并稽留18183636小时。如稽留小时。如稽留小时。如稽留小时。如稽留4242小时以上，必须攻毒，攻毒后小时以上，必须攻毒，攻毒后小时以上，必须攻毒，攻毒后小时以上，必须攻毒，攻毒后无反应可判为定型热。无反应可判为定型热。无反应可判为定型热。无反应可判为定型热。n n轻热反应轻
25、热反应轻热反应轻热反应(+)(+)潜伏期潜伏期潜伏期潜伏期48489696小时，体温上升呈明小时，体温上升呈明小时，体温上升呈明小时，体温上升呈明显曲线，至少有显曲线，至少有显曲线，至少有显曲线，至少有2 2个温次超过常温个温次超过常温个温次超过常温个温次超过常温0.50.5以上，并稽留以上，并稽留以上，并稽留以上，并稽留12123636小时。小时。小时。小时。n n可疑反应可疑反应可疑反应可疑反应( ( )潜伏期潜伏期潜伏期潜伏期48489696小时，体温曲线起伏小时，体温曲线起伏小时，体温曲线起伏小时，体温曲线起伏不定，稽留不到不定，稽留不到不定，稽留不到不定，稽留不到1212小时；或潜伏
26、期在小时；或潜伏期在小时；或潜伏期在小时；或潜伏期在2424小时以上，不足小时以上，不足小时以上，不足小时以上，不足4848小时及超过小时及超过小时及超过小时及超过9696小时至小时至小时至小时至120120小时出现热反应。小时出现热反应。小时出现热反应。小时出现热反应。n n体温反应呈二次高峰，有一次高峰符合定型热反应体温反应呈二次高峰，有一次高峰符合定型热反应体温反应呈二次高峰，有一次高峰符合定型热反应体温反应呈二次高峰，有一次高峰符合定型热反应(+)(+)或轻热反应或轻热反应或轻热反应或轻热反应(+)(+)标准者，均须攻毒。攻毒后无反应时，标准者，均须攻毒。攻毒后无反应时，标准者，均须攻
27、毒。攻毒后无反应时，标准者，均须攻毒。攻毒后无反应时，该兔热反应可判为定型热或轻热反应。该兔热反应可判为定型热或轻热反应。该兔热反应可判为定型热或轻热反应。该兔热反应可判为定型热或轻热反应。n n无反应无反应无反应无反应( ()体温正常。体温正常。体温正常。体温正常。327 效力检验效力检验7.1.2结果判定：结果判定：n n注苗后，当注苗后，当2只兔均呈定型热反应只兔均呈定型热反应(+)，或或1只兔呈定型热反应只兔呈定型热反应(+)、另、另1只兔呈轻热反只兔呈轻热反应应(+)时，疫苗判为合格。时，疫苗判为合格。n n注苗后，当注苗后，当1只兔呈定型热反应只兔呈定型热反应(+)或轻或轻热反应热
28、反应(+)，另，另1只兔呈可疑反应只兔呈可疑反应( )；或；或2只兔只兔均呈轻热反应均呈轻热反应(+)时，可在注苗后时，可在注苗后710日攻毒日攻毒(接种新鲜脾淋毒或冻干毒接种新鲜脾淋毒或冻干毒)。攻毒时，加对照。攻毒时，加对照兔兔2只，攻毒剂量为只，攻毒剂量为50100倍乳剂。每兔耳倍乳剂。每兔耳静脉注射静脉注射1ml。337 效力检验效力检验攻毒后的体温反应标准如下：攻毒后的体温反应标准如下：n n热反应热反应(+)潜伏期潜伏期2472小时，体温上升呈小时，体温上升呈明显曲线，超过常温明显曲线，超过常温1以上，稽留以上，稽留1236小时。小时。n n可疑反应可疑反应( )潜伏期不到潜伏期不
29、到24小时或小时或72小时小时以上，体温曲线起伏不定，稽留不到以上，体温曲线起伏不定，稽留不到12小时或超小时或超过过36小时而不下降。小时而不下降。n n无反应无反应()体温正常。体温正常。n n攻毒后，当攻毒后，当2只对照兔均呈定型热反应只对照兔均呈定型热反应(+)，或，或1只兔呈定型热反应只兔呈定型热反应(+)，另，另1只兔呈轻热反只兔呈轻热反应应(+)，而，而2只注苗兔均无反应只注苗兔均无反应()，疫苗判合格。，疫苗判合格。347 效力检验效力检验注苗后，如有注苗后，如有1只兔呈定型热只兔呈定型热(+)或轻热反应或轻热反应(+)，另，另1只兔呈可疑反应只兔呈可疑反应( )或无热反应或无
30、热反应()，可对可疑反应兔或无反应兔采用剖杀或，可对可疑反应兔或无反应兔采用剖杀或采心血分离病毒的方法，判明是否隐性感采心血分离病毒的方法，判明是否隐性感染；或注苗后，染；或注苗后，2只兔均呈轻热反应，亦可只兔均呈轻热反应，亦可对其中对其中1只兔分离病毒。只兔分离病毒。357效力检验效力检验分离病毒方法是：接种疫苗后分离病毒方法是：接种疫苗后96120小时小时之间，将兔剖杀，采取脾脏，用生理盐水之间，将兔剖杀，采取脾脏，用生理盐水制成制成50倍稀释乳剂倍稀释乳剂(脾乳剂应无菌脾乳剂应无菌)，或采取，或采取心血心血(全血全血)，接种，接种2只兔，每只兔耳静脉注只兔，每只兔耳静脉注射射1ml。凡有
31、。凡有1只兔潜伏期只兔潜伏期2472小时出现小时出现定型热反应定型热反应(+)，疫苗可判为合格。，疫苗可判为合格。 367 效力检验效力检验重检规定重检规定接种疫苗后，由于出现其他接种疫苗后，由于出现其他反应情况无法判定时，可重检。用兔反应情况无法判定时，可重检。用兔做效力检验，应不超过做效力检验，应不超过3次。次。377 效力检验效力检验-用猪检验用猪检验 7.2稀释与免疫稀释与免疫按瓶签注明头份，用灭按瓶签注明头份，用灭菌生理盐水将每头份稀释菌生理盐水将每头份稀释1/3000头份头份/ml，肌肉注射无猪瘟中和抗体的健康，肌肉注射无猪瘟中和抗体的健康猪猪5头，每头头，每头l.0ml。387
32、效力检验效力检验-用猪检验用猪检验7.2攻毒与判定攻毒与判定1014日后，连同条件相日后，连同条件相同的对照猪同的对照猪5头，各注射猪瘟病毒石门系血头，各注射猪瘟病毒石门系血毒毒1.0ml(105.0MLD)，观察，观察16日。对照猪全日。对照猪全部发病，且至少死亡部发病，且至少死亡3头，免疫猪全部健活头，免疫猪全部健活或稍有体温反应，但无猪瘟临床症状。或稍有体温反应，但无猪瘟临床症状。398 剩余水分测定剩余水分测定 按现行按现行中国兽药典中国兽药典附录进行检验，应符合规附录进行检验，应符合规定。定。8.1将干净的称量瓶逐个做好标记，然后置将干净的称量瓶逐个做好标记，然后置150干燥箱中烘干
33、干燥箱中烘干2小时，待温度下降至小时，待温度下降至6070时，移入由无水氯化钙的玻璃干燥瓶时，移入由无水氯化钙的玻璃干燥瓶中备用。中备用。8.2接通天平电源，开显示器，校准（校准前至接通天平电源，开显示器，校准（校准前至少预热少预热60分钟）。分钟）。8.3接通真空干燥箱电源，打开开关，将温度调接通真空干燥箱电源，打开开关，将温度调节到节到40进行预热。进行预热。 408 剩余水分测定剩余水分测定 8.2接通天平电源，开显示器，校准（校接通天平电源，开显示器，校准（校准前至少预热准前至少预热60分钟）。分钟）。8.3接通真空干燥箱电源，打开开关，将接通真空干燥箱电源，打开开关，将温度调节到温度
34、调节到40进行预热。进行预热。 418 剩余水分测定剩余水分测定8.4取出待检样品。取出待检样品。8.5天平的显示屏全零时，置称量瓶于称盘上，天平的显示屏全零时，置称量瓶于称盘上，天平的显示屏自动显示称量瓶的重量（称量瓶天平的显示屏自动显示称量瓶的重量（称量瓶重重W1），待稳定后读数，记录称量瓶的重量），待稳定后读数，记录称量瓶的重量及标记号。及标记号。8.6取下称量瓶上的称量瓶，打开疫苗瓶，迅速取下称量瓶上的称量瓶，打开疫苗瓶，迅速将样品捣碎，倒入已知重量的称量瓶中，然后将样品捣碎，倒入已知重量的称量瓶中，然后盖好瓶盖再次称重（瓶重盖好瓶盖再次称重（瓶重+样品重样品重W2,），记），记录读数
35、，然后将其移入无水氯化钙的玻璃干燥录读数，然后将其移入无水氯化钙的玻璃干燥瓶中。以此类推各瓶依次进行。瓶中。以此类推各瓶依次进行。428 剩余水分测定剩余水分测定8.7待被检样品称重全部结束后，立即将玻璃干待被检样品称重全部结束后，立即将玻璃干燥瓶中盛有样品的称量瓶全部移入有五氧化二燥瓶中盛有样品的称量瓶全部移入有五氧化二磷的真空干燥箱内，使瓶与瓶之间摆放有一定磷的真空干燥箱内，使瓶与瓶之间摆放有一定距离，然后打开瓶盖，关闭真空干燥箱门。距离，然后打开瓶盖，关闭真空干燥箱门。8.8接通真空泵电源，打开开关；关闭真空干燥接通真空泵电源，打开开关；关闭真空干燥箱进气阀，开抽气阀，抽真空在箱进气阀，
36、开抽气阀，抽真空在2.67kpa(20mmHg)以下，加热至以下，加热至6070，连，连续烘干续烘干3小时（第一次烘干）。小时（第一次烘干）。438 剩余水分测定剩余水分测定8.9切断真空泵电源，关抽气阀，缓慢打开进气阀切断真空泵电源，关抽气阀，缓慢打开进气阀通入经过无水氯化钙过滤的干燥空气，待压力表通入经过无水氯化钙过滤的干燥空气，待压力表指针慢慢回指针慢慢回“”时，开启箱门，迅速将盖盖好时，开启箱门，迅速将盖盖好再移入玻璃干燥瓶中，待冷至室温后依次称重。再移入玻璃干燥瓶中，待冷至室温后依次称重。8.10将称重后的装有样品的称量瓶置真空干燥箱将称重后的装有样品的称量瓶置真空干燥箱内，连续烘干
37、内，连续烘干1小时（第二次烘干小时（第二次烘干W3）。）。448 剩余水分测定剩余水分测定8.11两次干燥后称取的重量差在两次干燥后称取的重量差在0.5mg以以下即为恒重。下即为恒重。8.12填写记录填写记录8.13计算及判定：含水量计算及判定：含水量%=（W2-W3）/（W2-W1）100%，每瓶样品含水，每瓶样品含水量不得超过量不得超过4.0%，如有超过时，可重检一，如有超过时，可重检一次。次。459 真空度测定真空度测定 1按现行按现行中国兽药典中国兽药典附录进行检验，应符附录进行检验，应符合规定。合规定。2使用高频火花真空测定器进行密封后容器内使用高频火花真空测定器进行密封后容器内的真空度测定。测定时，将高频火花真空的真空度测定。测定时，将高频火花真空测定器指向容器内无制品的部位，如果容测定器指向容器内无制品的部位，如果容器内出现白色、粉色和紫色辉光，则判制器内出现白色、粉色和紫色辉光，则判制品为合格。品为合格。46 谢谢！47
