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1、生物化学与分子生物学教研室xxxQQ:xxxxxxxxxx电话:xxxxxxxxxxx血糖测定（葡萄糖氧化酶血糖测定（葡萄糖氧化酶- -过氧化过氧化物酶法）及肾上腺素对血糖浓度的物酶法）及肾上腺素对血糖浓度的影响影响, , 尿糖检测尿糖检测实验课安排实验课安排二、注射肾上腺素二、注射肾上腺素三、三、30min30min（尿糖检测）（尿糖检测）四、注射后取血四、注射后取血五、血糖检测五、血糖检测一、注射前取血一、注射前取血实验内容：实验内容：测定血糖浓度，观察肾上腺素对血糖浓测定血糖浓度，观察肾上腺素对血糖浓度的影响度的影响半定量测量尿糖半定量测量尿糖实验要求：实验要求：掌握葡萄糖氧化酶测定血糖
2、的方法、原掌握葡萄糖氧化酶测定血糖的方法、原理、测定操作、正常参考值、临床意义理、测定操作、正常参考值、临床意义熟悉尿糖测定及意义熟悉尿糖测定及意义血糖的调节血糖的调节血糖过高血糖过高血糖不足血糖不足胰高血糖素胰高血糖素糖皮质激素糖皮质激素血糖血糖的来源和去路的来源和去路血糖血糖氧化分解氧化分解合成合成转转化化H H2 2O+COO+CO2 2+ATP+ATP糖原糖原其它糖、其它糖、非糖物质非糖物质食物食物糖原糖原非糖物质非糖物质消化吸收消化吸收分解分解糖异生糖异生胰岛素胰岛素血糖平衡血糖平衡肾肾上腺素上腺素血糖调节相关神经系统：下丘脑血糖调节相关神经系统：下丘脑+ +自主神经自主神经尿糖尿糖
3、注射葡萄糖注射葡萄糖血糖指血液中所含的葡萄糖，它是给机体血糖指血液中所含的葡萄糖，它是给机体提供能量的主要物质，也是体内糖代谢情提供能量的主要物质，也是体内糖代谢情况的重要生理指标。况的重要生理指标。一）神经系统调节：下丘脑一）神经系统调节：下丘脑+ +自主神经自主神经二）体液调节，也叫激素调节，有升糖激素和二）体液调节，也叫激素调节，有升糖激素和 降糖激素降糖激素三）还有一些器官：肝、肌肉以及肾脏等三）还有一些器官：肝、肌肉以及肾脏等 化学感受器化学感受器肾上腺素是肾上腺髓质分泌的一种儿茶酚肾上腺素是肾上腺髓质分泌的一种儿茶酚胺类激素，胺类激素，主要在应激状态下发挥升高血主要在应激状态下发挥
4、升高血糖的作用。糖的作用。肾上腺素肾上腺素机制机制cAMP肝、肌肝、肌细细胞的膜受体胞的膜受体血中的血中的肾肾上腺素上腺素磷酸化磷酸化酶酶葡萄糖葡萄糖乳酸乳酸肝肝糖原糖原糖酵解糖酵解乳酸循乳酸循环环级联级联激活激活受刺激受刺激结结合合促促进进肌肌糖原糖原分解分解糖代谢紊乱糖代谢紊乱高血糖低血糖6.93.0检测1.临床医生：作为疾病诊断依据、指导用药以及判断升糖药或降糖药的疗效2.糖尿病患者：监控自身血糖及尿糖变化，调节饮食、运动、就医等生活规律。肾糖阈单位：mmol/L尿糖正常血糖病理性病理性生理性生理性生理性 长期饥饿、剧烈运动后病理性胰岛细胞增生、胰岛细胞瘤、胰高血糖素分泌不足、严重肝病患
5、者生理性餐后、情绪紧张时,肾上腺素分泌增加、注射葡萄糖病理性糖尿病、内分泌腺功能障碍、颅内压增高、严重脱水临床上重要的糖代谢紊乱也主要是血糖浓度过高（高血糖症）和过低（低血糖症）。血糖测定方法血糖测定方法葡萄糖氧化酶法葡萄糖氧化酶法广泛使用广泛使用, ,特异性强、价廉、操作简单特异性强、价廉、操作简单福林福林- -吴宪法吴宪法邻甲苯胺法邻甲苯胺法己糖激酶法己糖激酶法超微量还原铁氰化钾法超微量还原铁氰化钾法第一步：第一步：第二步：第二步：TrinderTrinder反应反应H H2 2O O2 2 苯酚苯酚4-4-氨基安氨基安 替比林替比林H H2 2O O 醌亚胺醌亚胺 + +O O2 2红色
6、红色氧化氧化缩缩合合3737o oC C505nm505nm比色测定比色测定3737o oC C葡萄糖葡萄糖O O2 2H H2 2O O葡萄糖酸葡萄糖酸H H2 2O O2 2氧化氧化葡萄糖氧化酶法原理葡萄糖氧化酶法原理葡萄糖氧化酶（葡萄糖氧化酶（GODGOD）辣根过氧化物酶（辣根过氧化物酶（PODPOD）具体操作具体操作（1 1）空腹称重（已称好）空腹称重（已称好）（2 2）耳缘静脉取血耳缘静脉取血取血部位去毛，接着擦拭酒精，涂二甲苯、取血部位去毛，接着擦拭酒精，涂二甲苯、凡士林。凡士林。用三棱针刺破耳缘静脉放血，离心管收集血用三棱针刺破耳缘静脉放血，离心管收集血液液2-3ml2-3ml（
7、干棉球压迫止血），离心，（干棉球压迫止血），离心，1500rpm1500rpm，10min10min，取出放试管架上备用。，取出放试管架上备用。（3 3）注射肾上腺素注射肾上腺素腹侧皮下注射肾上腺素腹侧皮下注射肾上腺素(0.4mL/kg(0.4mL/kg体重体重) )，记录，记录在注射时间，操作如图：在注射时间，操作如图：9正确抓兔耳缘静脉皮下注射1.注射注射时时，把兔子皮肤，把兔子皮肤提起来，在褶提起来，在褶皱处皱处，竖竖着着进针进针1.5-2cm。2.注射完后等一会再把注射完后等一会再把针头针头拔出。拔出。轻轻按注射部按注射部位。位。30 min后再采血。后再采血。错误抓兔（5 5）取取4
8、 4支试管，按下表加入试剂支试管，按下表加入试剂: :（6 6）混匀混匀后，后，3737O OC C水浴水浴15min15min；取出；取出冷却冷却，空白管调零，空白管调零，505nm505nm处处比色比色测定。测定。（4 4）注射后取血注射后取血: : 2-3ml,2-3ml,离心，取出备用。离心，取出备用。(ml)血糖检测结果记录血糖检测结果记录计算：计算：1.1.注射注射前、后前、后的血糖浓度的血糖浓度2.2. 注射后血糖浓度增高率注射后血糖浓度增高率A A肾肾 - A- A正正A A正正 100%100%增高率增高率 = = C C测测A A测测 A A标标 C C标标= =（mmol
9、/Lmmol/L）家兔血糖正常参考值（家兔血糖正常参考值（5.34-6.62 mmol/L)5.34-6.62 mmol/L)1.1.葡萄糖氧化酶试纸法（干化学法）：特异性葡萄糖氧化酶试纸法（干化学法）：特异性强，临床常用。检测原理是葡萄糖氧化酶法。强，临床常用。检测原理是葡萄糖氧化酶法。2.2.班氏定性试验：班氏定性试验：价廉，操作简单，比较常价廉，操作简单，比较常用，但易受尿中还原性物质干扰。用，但易受尿中还原性物质干扰。尿糖测定尿糖测定14班氏定性试验原理：班氏定性试验原理： 根据沉淀显色的深浅，对尿糖作半定量检测。根据沉淀显色的深浅，对尿糖作半定量检测。(CHOH)(CHOH)n nC
10、HCH2 2OHOH+ + +4OH4OH- -(CHOH)(CHOH)n nCHCH2 2OHOH+ + +H H2 2O O2CuOHH H2 2O O+ +黄色黄色碱性碱性葡萄糖葡萄糖葡萄糖酸葡萄糖酸红红色色COOHCOOH2CuOH2CuOHCHOCHO2Cu2Cu2+2+CuCu2 2O O煮沸煮沸分解分解操作步骤操作步骤A尿2滴 B尿2滴再煮沸5min班氏剂20滴班氏剂20滴煮沸5min待完全沉淀到管待完全沉淀到管底后（底后（10min），），对对比比判断判断标标准准判判定定结结果。果。尿糖结果判断标准尿糖结果判断标准尿糖检测结果记录尿糖检测结果记录【注意事注意事项项】1.微量加样枪的使用2.先加0.02ml，完全冲到管底。加样要精确下一次实验下一次实验牛血清白蛋白的分离、纯化及鉴定牛血清白蛋白的分离、纯化及鉴定尿糖：指尿中的葡萄糖。尿糖：指尿中的葡萄糖。重吸收原尿尿糖尿糖血液血液葡萄糖肾糖阈：肾糖阈：尿中开始出现尿中开始出现葡萄糖时最低血糖浓度葡萄糖时最低血糖浓度（）。（）。尿糖阳性见于：尿糖阳性见于：高糖饮食、精神激动、高糖饮食、精神激动、糖尿病、肾性糖尿病、糖尿病、肾性糖尿病、甲状腺功能亢进、内服甲状腺功能亢进、内服或注射大量葡萄糖等。或注射大量葡萄糖等。
