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1、离体蛙心灌流及某些离子、药物对离体蛙心活动的影响主要内容主要内容uu相关理相关理论论知知识识uu实验实验部分部分u实验实验目的目的u实验对实验对象象u实验仪实验仪器与器与药药品品u实验实验步步骤骤uu结结果分析与果分析与讨论讨论相关理相关理论论知知识识 正常的蛙心能按静脉正常的蛙心能按静脉窦窦的的节节律性自律性自动产动产生生兴兴奋奋，心，心脏脏的自的自动节动节律性活律性活动动，需要有一个合适的，需要有一个合适的理化理化环环境。境。 蟾蜍心蟾蜍心脏脏离体后，用任氏液灌流，在一定离体后，用任氏液灌流，在一定时时间间内仍能保持内仍能保持节节律性律性兴奋兴奋和收和收缩缩活活动动。由于心。由于心脏脏的正
2、常活的正常活动还动还有有赖赖于内于内环环境因素的相境因素的相对稳对稳定，改定，改变变灌流液的成分可引起心灌流液的成分可引起心脏脏活活动动的改的改变变。相关理相关理论论知知识识 心肌心肌细细胞的生理特性表胞的生理特性表现为现为：自：自动节动节律性、律性、兴奋兴奋性、性、传导传导性和收性和收缩缩性。性。 心肌心肌细细胞外离子胞外离子浓浓度的度的变变化和因体内生物活性物化和因体内生物活性物质质（如激素）引起的（如激素）引起的细细胞膜离子通透性的改胞膜离子通透性的改变变，对对心肌心肌细细胞的生物胞的生物电电活活动动和生理特性必然会和生理特性必然会产产生明生明显显的影响。的影响。影响心肌影响心肌细细胞胞
3、电电生理特性的原因生理特性的原因1.1.心肌的自心肌的自动节动节律性律性（1 1）最大复极）最大复极电电位与位与阈电阈电位的差距位的差距（2 2）4 4期自期自动动除极速度除极速度2.2.心肌的心肌的兴奋兴奋性性（1 1）静息）静息电电位水平：依位水平：依赖赖于于细细胞外胞外K K+ +浓浓度度（2 2）NaNa+ +通道的性状通道的性状相关理相关理论论知知识识3.3.心肌的心肌的传导传导性性主要取决于主要取决于动动作作电电位位0 0期除极速度和幅度期除极速度和幅度4.4.心肌的收心肌的收缩缩性性依依赖赖于于细细胞外胞外钙钙离子离子浓浓度度相关理相关理论论知知识识影响心肌影响心肌细细胞胞电电生
4、理特性的原因生理特性的原因相关理相关理论论知知识识离子离子对对心心脏脏活活动动的影响的影响钾钾离子离子K+K+参与心肌参与心肌细细胞的复极化和自律胞的复极化和自律细细胞的胞的4 4期自期自动动去极化去极化过过程，其改程，其改变变不不仅仅取决于取决于细细胞内外胞内外K+K+浓浓度度梯度，梯度，还还与与细细胞膜胞膜对对K+K+通透性有关，因此其影响通透性有关，因此其影响是多方面的是多方面的相关理相关理论论知知识识离子离子对对心心脏脏活活动动的影响的影响钙钙离子离子 Ca Ca2+2+对对NaNa+ +内流存在内流存在竞竞争抑制作用，称膜屏障作争抑制作用，称膜屏障作用，用，对对静息静息电电位无影响。
5、位无影响。 Ca Ca2+2+o o ，可使心肌，可使心肌细细胞的胞的兴奋兴奋性降低，性降低，传导传导减慢，收减慢，收缩缩力增力增强强。相关理相关理论论知知识识迷走神迷走神经经和乙和乙酰酰胆碱胆碱 迷走神迷走神经兴奋时经兴奋时，节节后后纤维释纤维释放放Ach,Ach,激激动动心肌心肌细细胞膜上胞膜上M M型胆碱受体，型胆碱受体，产产生生负负性性变变力、力、负负性性传导传导、负负性性变时变时等效等效应应。心交感神心交感神经经与去甲与去甲肾肾上腺素上腺素 心交感神心交感神经节经节后后纤维释纤维释放的放的递质递质是去甲是去甲肾肾上上腺素，激腺素，激动动心肌心肌细细胞膜上的胞膜上的 受体，受体，产产生
6、正性生正性变变力、正性力、正性传导传导、正性、正性变时变时等效等效应应。实验实验目的目的1.1.本本实验实验的目的是学的目的是学习习离体蛙心的灌流方法。离体蛙心的灌流方法。2.2.用离体蛙心灌流的方法用离体蛙心灌流的方法观观察：察： K K+ +、CaCa2+2+ 酸、碱度酸、碱度 肾肾上腺素（上腺素（E E） 乙乙酰酰胆碱（胆碱（AchAch）对对心心脏脏活活动动的影响的影响实验对实验对象象 蟾蜍蟾蜍实验仪实验仪器器设备设备RM6240RM6240生物采集系生物采集系统统张张力力换换能器能器蛙蛙类类手手术术器械器械蛙心插管蛙心插管试试管管夹夹缝缝合合线线蛙心蛙心夹夹铁铁支架支架滴管滴管实验药
7、实验药品品任氏液任氏液l lKCl KCl 3 3CaC12CaC12l l：10,000 E10,000 El l：10,000 ACh10,000 ACh3 3乳酸乳酸2.52.5NaHCO3NaHCO3实验实验步步骤骤一、离体蟾蜍心一、离体蟾蜍心脏标脏标本制本制备备 1. 1.破坏破坏脑脑和脊髓和脊髓 2. 2.暴露心暴露心脏脏一、离体蟾蜍心一、离体蟾蜍心脏标脏标本制本制备备1.1.观观察心察心脏脏的解剖的解剖结结构构实验实验步步骤骤（腹面）（腹面） （背面）（背面）实验实验步步骤骤一、离体蟾蜍心一、离体蟾蜍心脏标脏标本制本制备备1.1.蛙心插管蛙心插管1.11.1 在主在主A A干下穿
8、一干下穿一线线打一打一松松结结；在左主；在左主A A下再穿一下再穿一线结线结扎。扎。实验实验步步骤骤一、离体蟾蜍心一、离体蟾蜍心脏标脏标本制本制备备1.1.蛙心插管蛙心插管1.21.2 在主在主动动脉根部剪一脉根部剪一斜口，将插管插入斜口，将插管插入动动脉脉圆锥圆锥， 在心室收在心室收缩时缩时将插管插入心室，将插管插入心室，结结扎扎固定。固定。1.1.用用试试管管夹夹将蛙心管固定将蛙心管固定在在铁铁支架上支架上2.2.把把张张力力换换能器固定能器固定铁铁支支架支台上，在心室舒架支台上，在心室舒张张期期将与将与换换能器相能器相连连的蛙心的蛙心夹夹夹夹在心尖上。在心尖上。实验实验步步骤骤二、二、连
9、连接接仪仪器和装置器和装置注意事注意事项项1.1.蛙心插管内液面勿蛙心插管内液面勿过过高或高或过过低，每次低，每次换换液液时时，必，必须须用任氏液冲洗用任氏液冲洗3 3次。次。2.2.每次加每次加药药，心搏曲，心搏曲线线出出现变现变化后立即将插管内液化后立即将插管内液体吸出。体吸出。3.3.随随时时滴加任氏液于心滴加任氏液于心脏脏表面使之保持湿表面使之保持湿润润。4.4.换换能器能器头头端端应应向下向下倾倾斜以免液体斜以免液体进进人人换换能器。能器。5.5.各种各种试剂试剂的滴管不要混淆的滴管不要混淆, ,以免影响以免影响实验结实验结果果。观观察察项项目目 一、描一、描记记正常心搏曲正常心搏曲
10、线线 曲曲线线幅度幅度 收收缩缩的程度的程度曲曲线线疏密疏密 心率心率曲曲线线基基线线 舒舒张张的程度的程度二、二、观观察离子、察离子、药药物和酸碱的影响物和酸碱的影响1)1)更更换换任氏液任氏液为为3%3%氯氯化化钙钙溶液溶液1 12 2滴，滴，记录记录心率和心率和收收缩缩幅度，冲洗（下同）幅度，冲洗（下同）2)2)滴加滴加1 12 2滴滴1%1%氯氯化化钾钾溶液溶液3)3)滴加滴加1 12 2滴滴1 1：1000010000去甲去甲肾肾上腺素溶液上腺素溶液4)4)滴加滴加1 12 2滴滴1 1：1000010000肾肾上腺素溶液上腺素溶液5)5)滴加滴加1 12 2滴滴1 1：10000
11、10000 乙乙酰酰胆碱溶液胆碱溶液6)6)滴加滴加1 12 2滴滴 2.5% 2.5%碳酸碳酸氢钠氢钠溶液溶液7)7)滴加滴加1 12 2滴滴3%3%乳酸溶液乳酸溶液观观察察项项目目实验结实验结果果实验项实验项目目收收缩缩强强度度心率心率处处理前理前处处理后理后 处处理前理前处处理后理后任氏液任氏液2% CaCl21% KCl1：10000 E1：10000 Ach2.5% NaHCO33% 乳酸乳酸结结果分析与果分析与讨论讨论1.1.任氏液：正常任氏液：正常对对照照2. 3%CaCl2. 3%CaCl2 2灌流：灌流：Ca2+ o Ca2+ o Ca2+Ca2+内流内流Ca2+iCa2+i
12、兴奋兴奋- -收收缩缩耦耦联联收收缩缩力力结结果分析与果分析与讨论讨论3. 1%KCl3. 1%KCl灌流：灌流：K+ oK+ oAPAP平台期平台期缩缩短短 Ca2+ Ca2+内流内流兴奋兴奋- -收收缩缩耦耦联联收收缩缩力力结结果分析与果分析与讨论讨论4. 1:10000 E4. 1:10000 E灌流灌流4 4期期 If If 、I CaTI CaT通道通道4 4期自期自动动去极速度去极速度自律性自律性心率心率与心肌与心肌1 1受体受体结结合合Ca2+Ca2+内流内流肌肌浆浆网网释释放放Ca2+Ca2+兴奋兴奋- -收收缩缩耦耦联联收收缩缩力力cAMPcAMP结结果分析与果分析与讨论讨论
13、5. 1:10000 Ach5. 1:10000 Ach灌流灌流与心肌与心肌M M受体受体结结合合K K+ +外流外流, Ca, Ca2+2+内流内流E-CE-C耦耦联联收收缩缩力力最大复极最大复极电电位位 4 4期期K K+ +外流外流 自律性自律性心率心率CaCa2+2+ii碳酸碳酸氢钠氢钠 乳酸乳酸结结果分析与果分析与讨论讨论6. 2.56. 2.5NaHCONaHCO3 3 灌流灌流中和中和H+H+，Ca2+Ca2+与肌与肌钙钙蛋白蛋白结结合，心肌收合，心肌收缩缩力恢复。力恢复。7. 3%7. 3%乳酸灌流乳酸灌流H H+ +与与CaCa2+2+竞竞争肌争肌钙钙蛋白，蛋白， Ca Ca2+2+不能与肌不能与肌钙钙蛋白蛋白结结合，心肌收合，心肌收缩缩力力。 思考思考题题通通过过本次本次实验结实验结果，分析离子、果，分析离子、药药物和物和递对递对心搏曲心搏曲线线有什么影响？有什么影响？为为什么？什么？
