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1、实验一实验一 MSMS培养基的配制及灭菌培养基的配制及灭菌实 验 室 守 则1.实验要穿白大褂。实验室内禁止吃食物，勿高声谈话。2.实验前必须认真预习，熟悉实验的内容，了解所用的仪器用具；3.实验中应严格按操作规程进行，认真操作、仔细观察，及时记录实验现象及结果；4.实验结束后仔细地分析和总结实验过程及结果，认真做好每一次的实验报告。5. 使用仪器时，应严格遵守操作规程，对任何自己不熟悉的实验仪器都不要随意操作（尤其是微量移液器！）。在操作的过程中发现任何意外的现象都要及时向任课教师报告。6.在实验的过程中制造的任何垃圾都要丢到垃圾桶里，严禁随地投弃！7.实验器具应保持清洁，例用过的玻璃器皿必
2、须洗净后放回原处。实验台面应随时保持整洁，仪器、药品摆放整齐。公用试剂用完后，应立即盖好放回原处。执行值日生制度，值日生的职责：1、实验课结束后关好门、窗、水、电；2、需要打扫的区域包括：211室的接种间、培养间、213课室、清洗间、清洗水槽；3、将211室的拖鞋摆放整齐；4、将211、213室的凳子摆放整齐；5、将211室的超净工作台收拾干净；6、将213室的实验桌抹干净，同学们离开后才拖地；7、将公用实验用具放回原处，母液放回冰箱。 本学期实验内容有： 1. 培养基母液及多种培养基提配制及灭菌。 2. 外植体的消毒及接种技术。 3. 愈伤组织、芽、根的诱导、继代和分化。 4. 种子的无菌萌
3、发。 5. 毛状根的诱导、培养及转化根的帅选。 发根农杆菌的活化及扩增 预培养、侵染及共培养 毛状根诱导 毛状根除菌培养 转化根的抗性帅选 1.MS培养基母液的配制 大量元素 (10倍 2000毫升) 第1、2小组配制 微量元素 (1000倍) 老师配制 铁盐 (100倍 100毫升) 第3小组配制 有机物 (100倍 100毫升) 第4小组配制2.植物生长调节物质母液的配制(0.5mg/mL，50mL/班) 生长调节物质 助溶剂 2，4-D 少量95%乙醇（第3小组） NAA 先用少量95%乙醇，再用热水溶解（第5小组） 6-BA 少量1N NaOH （第6小组）3.第7、8小组准备包好吸水
4、纸(1包/人)、接种用具(15套)、15个空果酱瓶、无菌水45瓶和40瓶装有湿润吸水纸的果酱瓶(用以下次黄瓜种子的无菌萌发)大量元素母液试剂称量计算公式： 试剂称量规定用量扩大倍数母液量 （ 注意：称量单位要统一）生长调节物质称量计算公式： 试剂称量母液浓度母液量注意事项注意事项 在配制母液时，按先后顺序添加各种各种无机盐，且要待前一种试剂完全溶解后才加后一种试剂。其目的是尽量避免Ca2+、SO42和PO43等离子形成难溶于水的盐。同时母液的扩大倍数应由低温下母液溶解程度和存放方便来决定。母液的配制和保存（续）配制好的母液瓶：分别贴上标签注明母液名称配制倍数日期配1L培养基时应取的量。一，培养
5、基组成第1组： MS+2,4-D0.5+6-BA1.0（单位：mg/L）+3%蔗糖第2组： MS+2,4-D0.5+6-BA2.0+3%蔗糖第3组： MS+NAA0.2+6-BA1.0+3%蔗糖第4组： MS+NAA0.5+6-BA2.0+3%蔗糖第5组： MS+NAA0.1+6-BA1.0+3%蔗糖第6组： MS+NAA0.2+6-BA2.0+AC0.3%+3%蔗糖每组培养基配 400毫升一，培养基组成第7组： MS+2,4-D0.5+NAA0.2+6-BA0.5+3%蔗糖第8组： MS+2,4-D0.5+6-BA2.0+NAA0.2+ 3%蔗糖第9组： MS+NAA1.0+6-BA1.0+
6、3%蔗糖第10组： MS+NAA1.0+6-BA2.0+3%蔗糖第11组： MS+NAA1.0+6-BA2.0+AC0.3%+3%蔗糖MS母液用量的计算 母液吸取量(ml) 需要配制培养基的体积/母液扩大倍数生长调节物质母液用量的计算母液吸取量(mL) 需要配制培养基的体积(规定浓度/母液浓度)3、培养基配制操作顺序 按 加水加各母液加蔗糖加琼脂加热溶解 定容（烧杯）调节pH(5.8-6.0) 分装 的顺序操作，配制各种培养基。每瓶装量约为25ml，各瓶要做好标记（不能在灭菌时脱掉）。（三）培养基及用具灭菌1、检查全自动高压灭菌锅水位，加水至水位线，把分装好的培养基及其他需灭菌的各种用具（如用牛皮纸包扎好的剪刀、镊子、解剖刀，培养皿）和清水（灭菌后作无菌水用）等，然后盖好锅盖。2、设置灭菌方式（液体方式）121,20min，开始灭菌。3、灭菌完成（仪器有提示）后，开启锅盖，取出已灭菌的培养基放进培养室的架子上。 注意：刚灭过菌的培养基应在室温下放置23天后，观察有无菌类生长，以确定培养基是否彻底灭菌。经检查没有杂菌生长，方可使用。
