《药理学实验课件：实验一实验小鼠的捉持、分组和标记》由会员分享，可在线阅读，更多相关《药理学实验课件：实验一实验小鼠的捉持、分组和标记（34页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、药药理学理学实验实验实验实验一一实验实验小鼠的捉持、分小鼠的捉持、分组组和和标记标记 课课程介程介绍绍实验小鼠的捉持、随机均衡分小鼠的捉持、随机均衡分组和和标记的方法；的方法；实验小鼠常用的小鼠常用的给药和取血的方法；和取血的方法；盐酸普酸普鲁卡因卡因LD50和和ED50的的测定方法；定方法；联合用合用药引起的引起的药物相互作用；物相互作用；不同不同给药途径途径对硫酸硫酸镁作用的影响；作用的影响；糖皮糖皮质激素激素对小鼠毛小鼠毛细管通透性的作用和抗炎作管通透性的作用和抗炎作用用参考参考书书目目药理学理学实验与指与指导钱之玉主之玉主编实验药理学理学丁虹主丁虹主编 机能机能药理学理学实验教程教程胡
2、胡爱萍主萍主编动物机能物机能药理学理学实验教程教程赵红梅梅 苏加加义主主编药理学理学实验教程教程叶春玲主叶春玲主编实验动实验动物的物的3R3R原原则则减少（减少（Reduction）：）：在在实验中尽可能减少中尽可能减少实验动物的使用数量，既提高物的使用数量，既提高实验动物的利用物的利用率也保率也保证实验的准确性。的准确性。优化（化（Refinement）：）：确保确保动物在麻醉、物在麻醉、镇痛和痛和镇静静剂或其他适当手段作用下或其他适当手段作用下进行行实验，不使其遭受不必要的不使其遭受不必要的伤害或痛苦。害或痛苦。替代（替代（Replacement）：）：不再利用活体不再利用活体动物物进行行
3、实验而是以而是以组织细胞培养或是胞培养或是计算机模算机模拟以及以及统计分析等方法加以替代分析等方法加以替代动物的福利可简述为动物的福利可简述为“善待活着的动物，减少死亡的痛苦善待活着的动物，减少死亡的痛苦”实验动实验动物的分物的分类类按按遗传学控制原理分学控制原理分类即根据即根据基因基因纯合合的程度，将的程度，将实验动物分物分为：近交系，突近交系，突变系，系，杂交系，封交系，封闭群群近交系：近交系：一般称一般称为纯系系动物，即采用兄妹交配或者物，即采用兄妹交配或者亲子交配，子交配，连续繁殖繁殖20代以上而培育出来的代以上而培育出来的纯品系品系动物。一般以小鼠物。一般以小鼠为代表。代表。优点：点
4、：具有相同的基因型，具有相同的基因型，实验重复性好；重复性好； 遗传背景明确，其生物学特征、生理生化特点、常背景明确，其生物学特征、生理生化特点、常见疾病等信息便于研究者疾病等信息便于研究者查阅和和选择应用。用。 按微生物学控制原理按微生物学控制原理我国我国实验动物物 分分为四四级普通普通动物（物（CV）：）：不不带有人有人兽共患病原体及体外共患病原体及体外寄生虫；寄生虫；清清洁级动物（物（CL）：）：在在CV的基的基础上，不上，不带有有动物物传染病的病原体；染病的病原体；无特定病原体无特定病原体动物（物（SPF）：）：机体内无特定的微机体内无特定的微生物和寄生虫存在，即无病原菌的健康生物和寄
5、生虫存在，即无病原菌的健康动物。物。无菌无菌动物（物（GF）：）：此此动物是人物是人为的方法培育出来的方法培育出来的。的。悉生悉生动物（物（GN）：）：机体内机体内带着已知微生物的着已知微生物的动物。物。实验动实验动物的物的选择选择不同种不同种类的的实验动物根据物根据实验要求，要求，选择；同一同一类实验动物因其品系不同，反物因其品系不同，反应也有差异。也有差异。一般原一般原则：纯系系动物：物：实验结果的重复性、可比性好；果的重复性、可比性好；年年龄：小鼠成年后的体重一般小鼠成年后的体重一般1828g，常，常选1822g进行行实验，同一同一实验所用所用动物年物年龄应尽可能一致；尽可能一致；性性别
6、：如果如果实验研究无特殊要求，一般采用雌雄各半；研究无特殊要求，一般采用雌雄各半；生理状生理状态：除特殊要求，一般不用妊娠、哺乳期的除特殊要求，一般不用妊娠、哺乳期的动物；物；健康状况：健康状况：健康小鼠的特征健康小鼠的特征为毛色毛色发亮，活亮，活动自如，无自如，无发育异常。育异常。小鼠的主要品系及小鼠的主要品系及应应用用昆明种（昆明种（KM）：白色，是目前最：白色，是目前最应用的品系；用的品系；C57BL：黑色，：黑色，为标准的近交系，准的近交系，为许多突多突变基因提供基因提供遗传背景；背景；BALB/C：白色，：白色，对放射放射线特特别敏感；敏感；Nude裸鼠：裸鼠：表皮无毛，胸腺先天性缺
7、陷，缺表皮无毛，胸腺先天性缺陷，缺乏免疫乏免疫应答性，适合异种移植答性，适合异种移植实验。药药理学理学实验设计实验设计的基本原的基本原则则对照：按照照：按照“齐同可比同可比”的原的原则（一）按照分（一）按照分组的的类型型阴性阴性对照照组阳性阳性对照照组实验用用药组（二）（二）对比的性比的性质自身自身对比比配配对对比比组间对比：比：药理理实验应用得用得较广，但广，但应尽可能减尽可能减少非用少非用药因素因素导致的致的误差。差。重复重复为了得到了得到统计学所要求的学所要求的重重现性性，必，必须选择相相应的适当的的适当的重复数重复数。实验动物的基本例数：物的基本例数：小型小型动物（如小鼠）：物（如小鼠
8、）：计量量实验每每组10例，例，计数数实验每每组30例；例；中型中型动物（如兔）：物（如兔）：计量量实验每每组6例，例，计数数实验每每组20例；例；大型大型动物（如犬）：物（如犬）：计量量实验每每组5例，例，计数数实验每每组10例。例。随机随机指每个指每个实验对象在接受象在接受处理（如用理（如用药）时，都有相等的机会，随机遇而定。都有相等的机会，随机遇而定。随机抽随机抽样的方案：的方案：单纯随机：随机：所有所有实验对象完全按随机原象完全按随机原则分配，可通分配，可通过随机数字表或者抽随机数字表或者抽签完成。完成。均衡随机：均衡随机：又叫分层随机，首先将易于控又叫分层随机，首先将易于控制且对实验
9、影响较大的因素作为制且对实验影响较大的因素作为分层指标分层指标，人为地使各组在这些指标上达到均衡一致，人为地使各组在这些指标上达到均衡一致，再按再按随机原则随机原则将各实验对象分配到各组，将各实验对象分配到各组，使使各组在已知因素的构成比各组在已知因素的构成比上基本一致。上基本一致。实验实验目的目的掌握掌握实验小鼠捉持和小鼠捉持和标记的方法；的方法；掌握掌握实验动物随机均衡分物随机均衡分组的基本方法。的基本方法。实验实验材料材料实验动物：物：昆明种小鼠（雌雄各半，昆明种小鼠（雌雄各半， 1822g）试剂：3%5%苦味酸溶液苦味酸溶液其它材料：其它材料：粗粗电子天平，鼠子天平，鼠笼，饮水瓶，水瓶
10、， 毛笔毛笔实验实验内容内容学学习单手捉持小鼠手捉持小鼠按性按性别随机均衡分随机均衡分组小鼠小鼠标记各各笼小鼠小鼠常用常用实验动实验动物的捉持方法物的捉持方法小鼠的双手捉持方法小鼠的双手捉持方法右手提鼠尾右手提鼠尾放在鼠笼盖或粗放在鼠笼盖或粗糙表面，向后方糙表面，向后方轻拉鼠尾，使小轻拉鼠尾，使小鼠前肢固定在粗鼠前肢固定在粗糙表面上糙表面上左手拇指和食指捏左手拇指和食指捏其双耳间颈背部皮其双耳间颈背部皮肤，无名指、小指肤，无名指、小指和掌心夹其背部皮和掌心夹其背部皮肤和尾部肤和尾部小鼠的小鼠的单手捉持方法手捉持方法小鼠置于鼠笼盖上，小鼠置于鼠笼盖上，先用左手食指和拇先用左手食指和拇指抓住鼠尾，
11、指抓住鼠尾，然后手掌侧和小指然后手掌侧和小指夹住鼠尾，夹住鼠尾，最后左手拇指和食最后左手拇指和食指捏住颈部皮肤指捏住颈部皮肤大鼠的捉持豚鼠的捉持先先用用左左手手轻轻轻轻按按住住豚豚鼠鼠背背部部，顺势抓紧其肩胛上方皮肤，顺势抓紧其肩胛上方皮肤，拇指和食指环箍其颈部。拇指和食指环箍其颈部。 右手轻轻托起其臀部右手轻轻托起其臀部兔子的捉持方法兔子的捉持方法用用右右手手抓抓住住兔兔颈颈部部的的被被毛毛和和皮皮肤肤，轻轻轻轻把把兔兔提提起。起。 然后用左手然后用左手托住托住兔的臀兔的臀部。部。 按性按性别别随机均衡分随机均衡分组组前四组同学将雌性小鼠分前四组同学将雌性小鼠分4 4组组（采用循（采用循环分
12、组法）环分组法）后四组同学将雄性小鼠分后四组同学将雄性小鼠分4 4组组（采用（采用ExcelExcel软件随机分组）软件随机分组）循循环分分组法法1.1.在粗在粗电子天平上子天平上给小鼠小鼠称重称重2.2.将将相同重量相同重量的小鼠放在同一个的鼠的小鼠放在同一个的鼠笼中中3.3.然后从然后从体重体重轻（或者重）（或者重）的小鼠开始，按照的小鼠开始，按照下表下表循循环分分组ABCD第一次循第一次循环环1234第二次循第二次循环环4123第三次循第三次循环环3412注：字母表示组别；数字表示次序注：字母表示组别；数字表示次序l软件随机分组软件随机分组法法1.按顺序标记按顺序标记每只小鼠，每只小鼠，
13、按照按照编号编号依依次次称重称重2.进入进入Excel，输入输入小鼠编小鼠编号和体重号和体重3、按体重从小到、按体重从小到大大排序排序：在：在“数据数据”菜单中，选取菜单中，选取“排序排序”4、使用、使用Rand（）（）函数函数产生随机数产生随机数5 5、单击、单击C C列，按鼠标右键，列，按鼠标右键，选取选取“复制复制”6 6、再按右键，选取、再按右键，选取“选择选择性黏贴性黏贴”7 7、在对话框中，选择、在对话框中，选择“数数值值”然后然后“确定确定”以此以此固定随机数固定随机数8、将、将随机数排序随机数排序，完成，完成这一步一步骤后，后，12只小鼠只小鼠的的标号就按体重特征随机排序了号就
14、按体重特征随机排序了9、分分组：本：本实验分成分成4组，所以排序后的随机，所以排序后的随机数按数按3个个为一一组，如最小的，如最小的3个随机数个随机数对应的的小鼠小鼠归为一一组，其次的，其次的3个随机数个随机数对应的小鼠的小鼠归为二二组。实验动实验动物的物的编编号号常用的标记法： 染色染色，耳缘剪孔，烙印，号牌等方法耳缘剪孔，烙印，号牌等方法 颜料涂染：颜料涂染：在动物体的不同部位涂上斑点，在动物体的不同部位涂上斑点，以示不同号码。以示不同号码。 常用染料：常用染料：3%5%3%5%苦味酸溶液，苦味酸溶液，2%2%硝硝酸银溶液，酸银溶液，0.5%0.5%中性品红溶液中性品红溶液 适用的实验动物
15、：适用的实验动物：小鼠、大鼠小鼠、大鼠 （一）单染色法（一）单染色法方法步骤：方法步骤： (1)(1)涂涂染染原原则则：从从左左到到右右、从从上上到下。到下。 (2)(2)左左前前肢肢为为l l号号、左左侧侧腹腹部部2 2号号、左后肢左后肢3 3号。号。 (3)(3)两耳后部两耳后部4 4号、背中部号、背中部5 5号、号、后肢背部后肢背部6 6号。号。 (4)(4)右前肢右前肢7 7号、右侧腹部号、右侧腹部8 8号、号、右后肢右后肢9 9号。号。 (5)(5)尾巴根为尾巴根为1010号号 (6) (6)额部为额部为2020号号（二）双染色法（二）双染色法 常用染色常用染色剂：3-53-5苦味酸
16、溶液，苦味酸溶液，可染成黄色。可染成黄色。 作作为“个个”位数。位数。 0.5% 0.5%中性品中性品红溶液，溶液，可染成可染成红色。色。 作作为“十十”位数。位数。 方法步方法步骤：(1)(1)用两种用两种颜色同色同时进行染色行染色标记。 (2) (2) 个位数的染色个位数的染色标记方法同方法同单染色法。染色法。(3) (3) 用中性品用中性品红染色染色标记作作为十位数，十位数，十位数染色方法：十位数染色方法：(1)(1)左前肢为左前肢为1010号、号、 左侧腹部左侧腹部2020号、号、 左后肢左后肢3030号，号，(2)(2)两耳后部两耳后部4040号、号、 背部背部5050号、号、 后肢
17、背部后肢背部6060号，号，(3)(3)右前肢右前肢7070号、号、 右侧腹部右侧腹部 8080号、号、 右后肢右后肢9090号号 (4)(4)第第100100号号不不作作染染色色标记。标记。耳耳缘剪孔法：剪孔法： 在动物耳朵不同部在动物耳朵不同部位打一小孔或缺口表位打一小孔或缺口表示一定号码。示一定号码。原原则：左耳代表十位，左耳代表十位，右耳代表个位。右耳代表个位。适用的适用的实验动物：物：兔、兔、犬、猪犬、猪作作业业计算各算各组小鼠的体重平均小鼠的体重平均值，进行行F检验，看，看是否是否满足均衡可比的要求。足均衡可比的要求。请将分好将分好组的小鼠放到的小鼠放到319房房间进行行饲养，每天更养，每天更换垫料，添加鼠粮料，添加鼠粮和和饮用水。用水。第一、二第一、二组同学留下来打同学留下来打扫卫生。生。
