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1、1、植物细胞工程常用的技术手段有哪些？、植物细胞工程常用的技术手段有哪些？2、原理？、原理？3、关键词？、关键词？4、植物细胞工程的实际应用？、植物细胞工程的实际应用？植物组织培养技术植物组织培养技术、 植物体细胞杂交技术植物体细胞杂交技术细胞的全能性；细胞的全能性；细胞膜的流动性和细胞的全能性细胞膜的流动性和细胞的全能性细胞的全能性、离体、脱分化、愈伤组织、再分化、细胞的全能性、离体、脱分化、愈伤组织、再分化、酶解法酶解法 、 物理法（电激、振动、离心）、化学法物理法（电激、振动、离心）、化学法聚乙二醇（聚乙二醇（PEG）、）、植物细胞工程的实际应用一、植物繁殖的新途径一、植物繁殖的新途径二
2、、作物新品种的培育二、作物新品种的培育三、（三、（6）细胞产物的工厂化生产）细胞产物的工厂化生产（5）突变体的利用）突变体的利用（3）人工种子）人工种子（4）单倍体育种）单倍体育种（2）作物脱毒）作物脱毒（1）微型繁殖）微型繁殖专题专题2.22.2动物细胞工程动物细胞工程动物细胞培养动物细胞培养动物细胞融合动物细胞融合单克隆抗体制备单克隆抗体制备细胞核移植细胞核移植动物动物细胞细胞工程工程技术技术动物细胞工程的动物细胞工程的基础基础2.2.1动物细胞培养和核移植技术动物细胞培养和核移植技术（三）过程（三）过程幼龄动物幼龄动物剪碎组织剪碎组织原代培养原代培养取动物器官取动物器官和组织和组织细胞悬
3、浮液细胞悬浮液传代培养传代培养胰蛋白酶处理胰蛋白酶处理单个细胞单个细胞胰蛋白酶处理胰蛋白酶处理单个细胞单个细胞细胞贴壁细胞贴壁细胞的接触抑制细胞的接触抑制分瓶分瓶动物胚胎或幼龄动物的组织、器官动物胚胎或幼龄动物的组织、器官细胞悬液细胞悬液1010代细胞代细胞5050代细胞代细胞传代培养传代培养无限传代无限传代单个细胞单个细胞加培养液加培养液（分解细胞间的蛋白）（分解细胞间的蛋白）原代培养原代培养胰蛋白酶或胶原蛋白酶胰蛋白酶或胶原蛋白酶剪碎剪碎细胞株细胞株细胞系细胞系动物组织细胞间隙中含动物组织细胞间隙中含有一定量蛋白质有一定量蛋白质遗传物质遗传物质未未改变改变遗传物质遗传物质已已改变改变分瓶分
4、瓶 目前使用的或目前使用的或冷冻保存的正常细胞冷冻保存的正常细胞通常为通常为1010代以内，以代以内，以保持正常二倍体核型保持正常二倍体核型。（一）、概念（一）、概念 是指从动物机体内取出是指从动物机体内取出相关相关的组织，的组织，将它分散成将它分散成单个细胞单个细胞，然后放在，然后放在适宜的适宜的培养基中，让这些细胞培养基中，让这些细胞生长生长和和增殖增殖。（二）、原理（二）、原理细胞分裂增殖细胞分裂增殖有关概念有关概念v原代培养原代培养：人们通常将动物组织消化后的初人们通常将动物组织消化后的初次培养成为原代培养。次培养成为原代培养。通常把第一代至第十通常把第一代至第十代以内的培养细胞统称为
5、原代培养。代以内的培养细胞统称为原代培养。v传代培养传代培养：贴满瓶壁的细胞需要重新用胰蛋：贴满瓶壁的细胞需要重新用胰蛋白酶等处理，然后白酶等处理，然后分瓶分瓶继续培养，让细胞继继续培养，让细胞继续增殖，通常被称为传代培养。续增殖，通常被称为传代培养。v（将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞（将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。）继续培养，称为传代培养。）原代培养：原代培养：传代培养：传代培养：原代培养与传代培养的区别原代培养与传代培养的区别分装之前，分装之前，1010代以前代以前分装后继续培养
6、，分装后继续培养，1010代以后代以后 细胞株和细胞系的区别细胞株和细胞系的区别： 细胞细胞系系的遗传物的遗传物质质改变改变，具有癌细胞的特点，具有癌细胞的特点，失去失去细胞接触抑细胞接触抑制，容易传代培养。制，容易传代培养。细胞的接触抑制细胞的接触抑制 细胞贴壁细胞贴壁生长过程中，随着细胞分裂，数量不断增生长过程中，随着细胞分裂，数量不断增加，最后形成一个加，最后形成一个单层单层，此时细胞间相互接触，细胞分，此时细胞间相互接触，细胞分裂和生长裂和生长停止停止，数量不再增加。，数量不再增加。细胞系细胞系思考题：思考题：1 1、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织、为什么选用动物胚胎或幼龄个
7、体的器官或组织做动物细胞培养材料？做动物细胞培养材料？2 2、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？因为这些组织或器官，分裂能力旺盛，易于培养。因为这些组织或器官，分裂能力旺盛，易于培养。(1)(1)成块组织使细胞靠在一起限制了细胞的生长成块组织使细胞靠在一起限制了细胞的生长和增殖和增殖(2)(2)成块组织使细胞不能与培养液充分接触，不成块组织使细胞不能与培养液充分接触，不利于培养。利于培养。3、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可说明细胞间、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可说明细胞间的物质是什么成份？的物质是什么成份？催化蛋白质水解。细胞间的物质主要是蛋催
8、化蛋白质水解。细胞间的物质主要是蛋白质白质( (胶原蛋白等胶原蛋白等) )。4、细胞膜的主要成份是什么？、细胞膜的主要成份是什么？蛋白质和磷脂蛋白质和磷脂5、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？能能6 6、既然、既然胰蛋白酶能将细胞消化掉胰蛋白酶能将细胞消化掉，那，那将动物组将动物组织分散成单个细胞要织分散成单个细胞要注意什么问题呢？注意什么问题呢？7 7、能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么、能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？注意时间的控制注意时间的控制 不能，因为两者的最适不能，因为两者的最适PHPH不同，而正常组织不同，而正常组织细胞的生存环境与胰蛋白酶的最适细胞的
9、生存环境与胰蛋白酶的最适PHPH较接近较接近8、动物细胞培养瓶内表面为何要光滑、无、动物细胞培养瓶内表面为何要光滑、无毒？毒？易于培养细胞贴壁，进行生长增殖易于培养细胞贴壁，进行生长增殖1 1、无菌、无毒的环境、无菌、无毒的环境 保证细胞保证细胞顺利的生顺利的生长增殖长增殖 添加一定量的抗生素，定期更换培养液添加一定量的抗生素，定期更换培养液添加：糖（葡萄糖）、氨基酸、促生长因子、无添加：糖（葡萄糖）、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素、机盐、微量元素、动物血清、血浆动物血清、血浆等。等。（四）、动物细胞培养的条件（四）、动物细胞培养的条件2 2、营养、营养3 3、温度和、温度和pHpH 培
10、养室中控制培养室中控制, ,使之达到使之达到36.5 0.5, 7.27.436.5 0.5, 7.27.4培养所需气体培养所需气体O O2 2和和COCO2 2 （置于含（置于含95%95%空气空气和和5%5%的的COCO2 2培养箱中）培养箱中）4 4、气体环境、气体环境：O O2 2和和COCO2 2作用？作用？O O2 2和是细胞代谢所必需的，（有氧呼吸）和是细胞代谢所必需的，（有氧呼吸）COCO2 2的主要作用是维持培养瓶的的主要作用是维持培养瓶的pHpH（五）、动物细胞培养技术的应用（五）、动物细胞培养技术的应用（4）细胞的生理、药理、病理研究）细胞的生理、药理、病理研究 （1）
11、获得有重要价值的生物制品，如疫苗、获得有重要价值的生物制品，如疫苗、 干扰素干扰素（2） 基因工程的受体细胞基因工程的受体细胞（3）用于检测有毒物质）用于检测有毒物质 细胞的全能性细胞的全能性细胞株、细胞系细胞株、细胞系植物体植物体培养结果培养结果获得细胞获得细胞或或细胞产物细胞产物快速繁殖、培育快速繁殖、培育无病毒植株等无病毒植株等培养目的培养目的葡萄糖、血清、葡萄糖、血清、血浆血浆蔗糖、植物激素蔗糖、植物激素培养基特有成分培养基特有成分液体培养基液体培养基固体培养基固体培养基培养基性质培养基性质细胞增殖细胞增殖原理原理动物细胞培养动物细胞培养植物组织培养植物组织培养比较项目比较项目植物细胞
12、和动物细胞培养的比较植物细胞和动物细胞培养的比较（一）、动物细胞核移植的概念：（一）、动物细胞核移植的概念： 动物核移植是将动物的一个细胞的动物核移植是将动物的一个细胞的细胞细胞核核, ,移入一个已经去移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞掉细胞核的卵母细胞中中. .使其重组并发育成一个新的胚胎使其重组并发育成一个新的胚胎, ,这个新的这个新的胚胎最终发育为动物个体胚胎最终发育为动物个体. .克隆动物：用核移植的方法得到的动物。克隆动物：用核移植的方法得到的动物。（二）、分类：（二）、分类：胚胎细胞胚胎细胞核移植核移植：体细胞体细胞核移植核移植：细胞分化程度细胞分化程度低低，恢复，恢复全能性容易全能
13、性容易 细胞分化程度细胞分化程度高高，恢复，恢复全能性困难全能性困难卵细胞卵细胞母绵羊母绵羊母绵羊母绵羊乳腺细胞乳腺细胞细胞质细胞质细胞核细胞核细胞核移植细胞核移植早期胚胎早期胚胎卵裂卵裂C母绵羊子宫母绵羊子宫胚胎移植胚胎移植多莉羊多莉羊分娩分娩妊娠妊娠多多莉莉羊羊的的培培育育过过程程融合后的卵细胞融合后的卵细胞(三三）体体细细胞胞的的核核移移植植过过程程卵母卵母细胞细胞去核去核体细体细胞取胞取核核重组细胞重组细胞重组胚胎重组胚胎新个体新个体电激电激 使两细胞融合使两细胞融合或或核移植核移植M期期（减（减中）中）的卵母细胞的卵母细胞、在体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之、在体细胞的细胞核移植到
14、受体卵母细胞之前，为什么必须先去掉受体卵母细胞的核？前，为什么必须先去掉受体卵母细胞的核？为使核移植动物的核遗传物质全部来自有利为使核移植动物的核遗传物质全部来自有利用价值的动物提供的细胞。用价值的动物提供的细胞。、用于核移植的供体细胞一般都选用传代、用于核移植的供体细胞一般都选用传代1010代以内的细胞，为什么？代以内的细胞，为什么？1010代以内的细胞一般保持正常二倍体的核型代以内的细胞一般保持正常二倍体的核型3 3、体细胞核移植方法生产的克隆动物是对体细、体细胞核移植方法生产的克隆动物是对体细胞供体动物进行了胞供体动物进行了100%的复制吗？为什么？的复制吗？为什么？不是，克隆动物绝大部
15、分不是，克隆动物绝大部分DNADNA来自供体细胞核，来自供体细胞核，但核外还有少部分但核外还有少部分DNADNA（如线粒体（如线粒体DNADNA）来自）来自受体卵母细胞受体卵母细胞（四）体细胞核移植技术的应用前景（四）体细胞核移植技术的应用前景 1、在畜牧业中可以加速家畜遗传改良的进程、在畜牧业中可以加速家畜遗传改良的进程2、保护濒危物种、保护濒危物种3、生产医用蛋白质、生产医用蛋白质及组织器官的移植的及组织器官的移植的供体供体（五）、体细胞核移植技术存在的问题（五）、体细胞核移植技术存在的问题 1、克隆动物基因组重新编程的机制尚不清楚。、克隆动物基因组重新编程的机制尚不清楚。2、克隆技术效率
16、低，畸形率高、死亡率高、易出、克隆技术效率低，畸形率高、死亡率高、易出 现早衰等问题。现早衰等问题。3、生产克隆动物费用昂贵。、生产克隆动物费用昂贵。二二 动物体细胞核移植动物体细胞核移植技术和克隆动物技术和克隆动物一动物细胞培养一动物细胞培养概念概念过程过程原理原理应用概念概念过程过程应用存在问题体细胞体细胞核移植核移植胚胎细胞胚胎细胞核移植核移植 2 2、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的细胞是细胞是 （ ） A A获得不死性的细胞获得不死性的细胞 B B1010代以内细胞代以内细胞 C C原代细胞原代细胞 D D传代细胞传代细胞1 1、动物细胞
17、工程技术的基础是、动物细胞工程技术的基础是 （ ） A.A.动物细胞融合动物细胞融合 B.B.单克隆抗体单克隆抗体 C.C.胚胎移植胚胎移植 D.D.动物细胞培养动物细胞培养A AD D课堂反馈练习课堂反馈练习3 3、在动物细胞培养的有关叙述中正确的是：（、在动物细胞培养的有关叙述中正确的是：（ ）A A、动物细胞培养的目的只是为了获得大量的细胞、动物细胞培养的目的只是为了获得大量的细胞 分泌蛋白分泌蛋白B B、动物细胞培养前要用胰蛋白酶使细胞分散、动物细胞培养前要用胰蛋白酶使细胞分散C C、细胞的癌变发生在原代培养向传代培养的过渡、细胞的癌变发生在原代培养向传代培养的过渡 过程中过程中D D
18、、培养至、培养至5050代后传代细胞遗传物质没有发生改变代后传代细胞遗传物质没有发生改变B B4 4、一般说来，动物细胞体外培养需要满足以下条件（、一般说来，动物细胞体外培养需要满足以下条件（ ）无毒的环境无毒的环境 无菌的环境无菌的环境 培养基需要加入血培养基需要加入血清清 温度与动物体温相似温度与动物体温相似 需要需要O O2 2，不需要，不需要COCO2 2 COCO2 2能调节培养液能调节培养液PHPHA A、 B B、 C C、 D D、 D D5 5、动物细胞培养的特点、动物细胞培养的特点 （ ）细胞贴壁细胞贴壁 有丝分裂有丝分裂 细胞分化细胞分化 接触抑制接触抑制 减数分裂减数分
19、裂 原代培养一般传原代培养一般传1 11010代代A A、 B B、C C、 D D、A A 6 6、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的细胞是变的细胞是 -（ ） A A细胞系细胞系 B B细胞株细胞株 C C原代细胞原代细胞 D D传代细胞传代细胞A7 7、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这样的组织细胞是这样的组织细胞 （ ） A.A.容易产生各种变异容易产生各种变异 B B具有更强的全能性具有更强的全能性 C.C
20、.取材十分方便取材十分方便 D D分裂增殖的能力强分裂增殖的能力强D 8.8.动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在于动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在于-（ ） A.A.培养基不同；培养基不同； B.B.动物细胞培养不需要在无菌条件下进行；动物细胞培养不需要在无菌条件下进行； C.C.动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能；动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能； D.D.动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培 养成植株。养成植株。A9 9、下图是动物细胞培养的基本过程示意图。请据、下图是动物细胞培养的基本过程示意图。请据此回答：此回答：（1 1）容器）
21、容器A A中放置的是动物器官或组织。它一中放置的是动物器官或组织。它一般取自般取自_。（2 2）容器）容器A A中的动物器官或组织首先要进行的中的动物器官或组织首先要进行的处理是处理是 ，然后用，然后用 酶处理，酶处理，这是为了使细胞分散开来，这样做的目的是这是为了使细胞分散开来，这样做的目的是 _ _ 。动物胚胎或幼龄动物动物胚胎或幼龄动物剪碎剪碎胰蛋白胰蛋白使细胞与培养液充分接触，便于培养使细胞与培养液充分接触，便于培养（3 3）培养首先在）培养首先在B B瓶中进行，瓶中的培养基成瓶中进行，瓶中的培养基成分有分有 _等。在此瓶中培养等。在此瓶中培养一段时间后，有许多细胞衰老死亡，这是培养一
22、段时间后，有许多细胞衰老死亡，这是培养到第到第 代，到这时的培养称为代，到这时的培养称为_ _ 。（4 4）为了把）为了把B B瓶中的细胞分装到瓶中的细胞分装到C C瓶中，用瓶中，用 处理，然后配置成处理，然后配置成 ，再，再分装。分装。 动物血清动物血清10原代培养原代培养胰蛋白酶胰蛋白酶细胞悬浮液细胞悬浮液一、动物细胞融合一、动物细胞融合 受精作用受精作用动物动物细胞细胞融合融合细胞细胞A细胞细胞B杂种细胞杂种细胞灭活的病毒灭活的病毒物理法物理法化学法化学法用灭活的病毒诱导动物细胞融合过程用灭活的病毒诱导动物细胞融合过程细胞核细胞核病毒颗粒病毒颗粒细胞核细胞核细胞融合与融合诱导细胞融合物质
23、细胞融合与融合诱导细胞融合物质诱导剂：病毒、聚乙二醇诱导剂：病毒、聚乙二醇诱导细胞融合的病毒必须灭活。诱导细胞融合的病毒必须灭活。思考讨论：为什么细胞融合过程中使用的思考讨论：为什么细胞融合过程中使用的病毒需要灭活？病毒需要灭活？二、单克隆抗体二、单克隆抗体什么是抗体？什么是抗体？ 抗体是机体受抗原刺激后产生抗体是机体受抗原刺激后产生的的,并能与该抗原发生特异性结合的并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。具有免疫功能的球蛋白。效应效应B淋巴细胞产生抗体。淋巴细胞产生抗体。效应效应B淋巴细胞与抗体淋巴细胞与抗体 B淋巴细胞受抗原刺激后，可以产生淋巴细胞受抗原刺激后，可以产生抗体。抗体
24、。 动物体内的效应动物体内的效应B淋巴细胞可以产生淋巴细胞可以产生百万种以上的抗体，每种抗体对特定的抗原百万种以上的抗体，每种抗体对特定的抗原具有特异性免疫作用。具有特异性免疫作用。 每一个淋巴细胞只能产生一种抗体。每一个淋巴细胞只能产生一种抗体。单克隆抗体单克隆抗体 由单个效应由单个效应B淋巴细胞经过无性繁殖淋巴细胞经过无性繁殖（克隆），形成基因型相同的细胞群，这（克隆），形成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。强的抗体称为单克隆抗体。 特点特点：特异性强、灵敏度高特异性强、灵敏度高 单克隆抗体制备过程单克隆抗
25、体制备过程 注射抗原注射抗原B淋巴细胞淋巴细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞细胞融合、筛选细胞融合、筛选杂交瘤细胞杂交瘤细胞细胞培养细胞培养筛选，继续培养筛选，继续培养足够数量的、能产生足够数量的、能产生特定抗体的细胞群特定抗体的细胞群体外培养体外培养注射到小鼠腹腔（体内）注射到小鼠腹腔（体内）单克隆抗体单克隆抗体如何大量生产单克隆抗体？如何大量生产单克隆抗体？利用淋巴细胞产生抗体的功能利用淋巴细胞产生抗体的功能利用肿瘤细胞无限增殖的特性利用肿瘤细胞无限增殖的特性利用细胞融合的技术将两种细胞融合获利用细胞融合的技术将两种细胞融合获得具有淋巴细胞和肿瘤细胞特性的杂交得具有淋巴细胞和肿瘤细胞特性的杂交瘤细胞
26、瘤细胞利用动物细胞培养技术大量培养杂交瘤利用动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞细胞思考：思考：1、本过程利用了哪些原理？、本过程利用了哪些原理？免疫原理，细胞融合原理和动物细胞培养原理免疫原理，细胞融合原理和动物细胞培养原理2、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合？细胞融合？这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物质，不仅具有物质，不仅具有B细胞分泌抗体的能力，而且还有无细胞分泌抗体的能力，而且还有无限增殖的本领，因而可以获得大量单克隆抗体限增殖的本领，因而可以获得大量单克隆抗体3 3、整个制备过程为何要经过两次筛选
27、、整个制备过程为何要经过两次筛选? ?（1 1）第一次筛选得到杂交瘤细胞（多种）。）第一次筛选得到杂交瘤细胞（多种）。（2 2）第二次需先在多孔培养板上，在每孔只有一）第二次需先在多孔培养板上，在每孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始培养，然后再筛选出个杂交瘤细胞的情况下开始培养，然后再筛选出能产生特异性抗体的细胞群。能产生特异性抗体的细胞群。 由于该细胞群是单个杂交瘤细胞克隆得来的，由于该细胞群是单个杂交瘤细胞克隆得来的，所以产生的抗体必然是化学性质单一的，特异性所以产生的抗体必然是化学性质单一的，特异性强的单克隆抗体。这里的强的单克隆抗体。这里的单克隆单克隆确有确有单个细胞单个细胞克克隆的含义
28、，只不过克隆的不是隆的含义，只不过克隆的不是B B淋巴细胞，而是淋巴细胞，而是杂杂交瘤细胞交瘤细胞。 单克隆抗体的应用单克隆抗体的应用与常规抗体相比，单克隆抗体产量高，特与常规抗体相比，单克隆抗体产量高，特异性强，灵敏度高异性强，灵敏度高。应用主要有：应用主要有：1、作为诊断试剂、作为诊断试剂2、用于治疗疾病和运载、用于治疗疾病和运载药物。药物。 作为载体，运载抗癌药作为载体，运载抗癌药物，形成物，形成“生物导弹生物导弹”治疗肿瘤治疗肿瘤生物导弹生物导弹：单克隆抗体作为：单克隆抗体作为载体分子，同抗癌药物相结载体分子，同抗癌药物相结合，将他们运载到肿瘤部位，合，将他们运载到肿瘤部位，杀死癌细胞
29、，这种抗体杀死癌细胞，这种抗体药物结合物称之为药物结合物称之为“生物导生物导弹弹”。 它能它能定向定向杀灭癌细胞。杀灭癌细胞。既不损伤正常细胞，又减少既不损伤正常细胞，又减少了用药剂量。了用药剂量。植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较比较项目比较项目植物体细胞杂交植物体细胞杂交动物细胞融合动物细胞融合细胞融合原理细胞融合原理细胞膜的流动性、细胞膜的流动性、细胞全能性细胞全能性细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞融合的方法细胞融合的方法 去除细胞壁后诱导去除细胞壁后诱导原生质体融合原生质体融合使细胞分散后诱使细胞分散后诱导细胞融合导细胞融合诱导方法诱导方法物理（离心、
30、振荡、物理（离心、振荡、电刺激）电刺激）化学（聚乙二醇）化学（聚乙二醇）物理、化学方法物理、化学方法（同左）（同左）灭活的病毒灭活的病毒用途用途获得杂种植株获得杂种植株制备单克隆抗体制备单克隆抗体小结小结两个过程两个过程动物细胞培养过程动物细胞培养过程单克隆抗体制备过程单克隆抗体制备过程三个三个“一一”一个诱导细胞融合的新方法一个诱导细胞融合的新方法 灭活病毒灭活病毒一个新细胞杂交瘤细胞一个新细胞杂交瘤细胞一个优势单克隆抗体特异性一个优势单克隆抗体特异性 强、灵敏度高的优势强、灵敏度高的优势 下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌
31、的实验方案风杆菌的实验方案2、该方案能达到预期效果吗？为什么？、该方案能达到预期效果吗？为什么？4、图中、图中B为为_过程，常用过程，常用_作为诱导剂，该细胞继作为诱导剂，该细胞继承承_的遗传特性，既能的遗传特性，既能_,又能又能_。1、该实验方案的目的是、该实验方案的目的是_3、A是从小鼠的脾脏中取得是从小鼠的脾脏中取得_,该细胞能够产生该细胞能够产生_5、C过程指细胞培养，该过程包括过程指细胞培养，该过程包括_培养和培养和_培养两个阶段，其培养两个阶段，其中中_代以内的的细胞属于细胞株。代以内的的细胞属于细胞株。制备单克隆抗体制备单克隆抗体B细胞细胞抗体抗体细胞融合细胞融合灭活病毒灭活病毒
32、双亲细胞双亲细胞分泌抗体分泌抗体无限增殖无限增殖原代原代传代传代50B体外培养体外培养骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞足够数量的细胞群足够数量的细胞群注射到注射到小鼠腹腔小鼠腹腔AC1.动物细胞工程技术的基础是：（）动物细胞工程技术的基础是：（）A动物细胞融合动物细胞融合B胚胎移植胚胎移植C动物细胞培养动物细胞培养D核移植核移植在动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正在动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的是（）确的是（）A结果是相同的结果是相同的B杂种细胞的形成过程基本相同杂种细胞的形成过程基本相同C操作过程中酶的作用相同操作过程中酶的作用相同D诱导融合的手段相同诱导融合的手
33、段相同. 单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（ ） 淋巴细胞淋巴细胞小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞B淋巴细胞自身融合细胞淋巴细胞自身融合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞A BC D C4 4、以下不能说明细胞全能性的实验是、以下不能说明细胞全能性的实验是A.A.胡萝卜韧皮部细胞培育出植株胡萝卜韧皮部细胞培育出植株B.B.紫色糯性王米种子培育出植株
34、紫色糯性王米种子培育出植株 C.C.转入抗虫基因的棉花细胞培育出植株转入抗虫基因的棉花细胞培育出植株D.D.番茄与马铃薯体细胞杂交后培育出植株番茄与马铃薯体细胞杂交后培育出植株5 5、下列关于动物细胞培养的叙述，正确的是、下列关于动物细胞培养的叙述，正确的是A A培养中的人效应培养中的人效应T T细胞能产生单克隆抗体细胞能产生单克隆抗体B B培养中的人培养中的人B B细胞能够无限地增殖细胞能够无限地增殖C C人的成熟红细胞经过培养能形成细胞株人的成熟红细胞经过培养能形成细胞株 D D用胰蛋白酶处理肝组织可获得单个肝细胞用胰蛋白酶处理肝组织可获得单个肝细胞D右图是某种淋巴细胞，膜外颗右图是某种淋
35、巴细胞，膜外颗粒状物质为抗体。据图回粒状物质为抗体。据图回 答：答：（1 1）这是）这是细胞，细胞，它是由它是由分化而来。分化而来。（2 2）抗体从开始合成到）抗体从开始合成到分泌出细胞，经过的细胞结构分泌出细胞，经过的细胞结构顺序是（填标号）顺序是（填标号）。抗体的分泌说明细胞的各种生抗体的分泌说明细胞的各种生物膜在结构上具有物膜在结构上具有。并。并以以的形式转变。的形式转变。（4 4）抗体的化学本质是）抗体的化学本质是，它能与，它能与发生特异性结合，发挥免疫效应。该过程属发生特异性结合，发挥免疫效应。该过程属于于免疫。免疫。（5 5）若该抗体是单克隆抗体，则该细胞名称为）若该抗体是单克隆抗体，则该细胞名称为。在制备单克隆抗体的过程中，应用。在制备单克隆抗体的过程中，应用的动物细胞工程的技术手段是的动物细胞工程的技术手段是。（3 3）在分泌抗体时要消耗由）在分泌抗体时要消耗由提供的能量。提供的能量。（1 1）效应）效应B B；B B细胞或记忆性细胞或记忆性B B细胞细胞（2 2）；一定的连续性；一定的连续性；具膜小泡具膜小泡（3 3）线粒体线粒体（4 4）球蛋白；相应的抗原；体液；）球蛋白；相应的抗原；体液； （5 5）杂交瘤细胞；动物细胞融合、动物细）杂交瘤细胞；动物细胞融合、动物细胞培养胞培养个人观点供参考，欢迎讨论
