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1、实验六实验六 绞股蓝总皂苷的提取分离和鉴别绞股蓝总皂苷的提取分离和鉴别（设计性试验）（设计性试验）1三叶绞股蓝三叶绞股蓝龙须绞股蓝龙须绞股蓝2人参皂苷人参皂苷3一、实验目的一、实验目的1掌握掌握D-101大孔吸附树脂分离纯化绞股蓝总皂苷大孔吸附树脂分离纯化绞股蓝总皂苷 的原理和实验操作方法；的原理和实验操作方法；2掌握查阅文献资料的方法和思路；掌握查阅文献资料的方法和思路；3熟悉皂苷类成分的性质及鉴别方法。熟悉皂苷类成分的性质及鉴别方法。4二、仪器与试药二、仪器与试药仪器仪器D-101大孔吸附树脂大孔吸附树脂 玻璃层析柱（玻璃层析柱（2.050）圆底烧瓶（圆底烧瓶（1000mL） SHB-循环
2、水式多用真空泵循环水式多用真空泵 锥形瓶（锥形瓶（100mL） 硅胶硅胶G（薄层层析用）（薄层层析用） 滤纸滤纸 研钵研钵等等等等5试药试药绞股蓝药材绞股蓝药材 乙醇乙醇 蒸馏水蒸馏水 盐酸盐酸 氢氧化钠等氢氧化钠等6三、实验原理三、实验原理 大孔吸附树脂是一类有机高聚物吸附剂，它大孔吸附树脂是一类有机高聚物吸附剂，它具有具有多孔网状多孔网状结构和较好的结构和较好的吸附性能吸附性能，为白色的，为白色的球状颗粒，粒度多为球状颗粒，粒度多为2060目目。7 理化性质稳定，理化性质稳定，不溶于酸、碱及有机溶剂不溶于酸、碱及有机溶剂；对对有机物的选择性较好，不受无机盐类及强离子低分有机物的选择性较好，
3、不受无机盐类及强离子低分子化合物存在的影响，在天然化合物的分离和富集子化合物存在的影响，在天然化合物的分离和富集工作中被广泛应用。工作中被广泛应用。 通常分为通常分为非极性、弱极性、中极性和强极性非极性、弱极性、中极性和强极性等等几大类。几大类。 D-101大孔吸附树脂属于苯乙烯型非极性类。大孔吸附树脂属于苯乙烯型非极性类。8原理：原理： 吸附和分子筛吸附和分子筛 以苯乙烯为母体，二乙烯苯为交联剂（非极以苯乙烯为母体，二乙烯苯为交联剂（非极性）。性）。 9树脂的预处理树脂的预处理无水乙醇浸泡无水乙醇浸泡2BV，24h湿法装柱湿法装柱2BV加等量水不变浑浊加等量水不变浑浊BV：试剂：试剂 / 树
4、脂体积比树脂体积比水洗至无醇味水洗至无醇味10树脂的再生树脂的再生4%HCl浸泡浸泡2-4h水洗至中性水洗至中性5%NaOH浸泡浸泡2-4h水洗至中性水洗至中性BV：试剂：试剂 / 树脂体积比树脂体积比57BVHCl淋洗淋洗57BVNaOH淋洗淋洗11影响因素：影响因素：a.一般非极性化合物在水中易被非极性树脂吸附，一般非极性化合物在水中易被非极性树脂吸附，极性化合物在水中易被极性树脂吸附。极性化合物在水中易被极性树脂吸附。b.物质在溶剂中的溶解度大，树脂对此物质的吸附物质在溶剂中的溶解度大，树脂对此物质的吸附力就小，反之就大。力就小，反之就大。c. 能与大孔吸附树脂形成氢键的化合物易吸附。能
5、与大孔吸附树脂形成氢键的化合物易吸附。12洗脱液的选择：洗脱液的选择： 最常用水、乙醇，此外甲醇、丙酮、乙酸乙最常用水、乙醇，此外甲醇、丙酮、乙酸乙酯也被应用。酯也被应用。13 该技术目前已较广泛应用于中药新药的开发和该技术目前已较广泛应用于中药新药的开发和中成药的生产和抗生素的分离精制，主要用于分离中成药的生产和抗生素的分离精制，主要用于分离和提纯过程。和提纯过程。基本程序基本程序中药提取液中药提取液过大孔树脂过大孔树脂吸附有效成分吸附有效成分洗脱洗脱洗脱液洗脱液回收溶液回收溶液药液有效成分药液有效成分干燥干燥半成品半成品14四、实验内容四、实验内容（一）绞股蓝总皂苷的提取分离和鉴别方法的（
6、一）绞股蓝总皂苷的提取分离和鉴别方法的实验设计实验设计15要求：要求：1查阅文献资料，综述绞股蓝提取、分离及鉴别方查阅文献资料，综述绞股蓝提取、分离及鉴别方 法；法；2设计适合于本实验室操作的提取方法（至少两种设计适合于本实验室操作的提取方法（至少两种 方法）；方法）；3设计采用设计采用D-101大孔吸附树脂分离纯化绞股蓝总大孔吸附树脂分离纯化绞股蓝总 皂苷的实验方法和鉴别方法（至少两种方法）。皂苷的实验方法和鉴别方法（至少两种方法）。16（二）实验操作（二）实验操作17要求：要求： 从设计的多种实验方法中选择最优的提取分离从设计的多种实验方法中选择最优的提取分离纯化及鉴别方案进行实验，确定绞
7、股蓝总皂苷的提纯化及鉴别方案进行实验，确定绞股蓝总皂苷的提取分离工艺。取分离工艺。18具体路线图具体路线图绞股蓝（绞股蓝（100g）加水加水1000mL/1h残渣残渣水清液水清液适量水适量水/0.5h残渣残渣水清液水清液合并合并19水清液水清液浓缩至浓缩至300500mL500mL浓缩液浓缩液上柱上柱水洗（水洗（A）(2mL/min)15%EtOH洗洗（B）35%EtOH洗洗（C）50%EtOH洗洗 （D）70%EtOH洗洗（E）A、B、C、D、E分别合并，取分别合并，取12mL置蒸馏水中，水浴蒸干，置蒸馏水中，水浴蒸干，加加95%乙醇溶解，做乙醇溶解，做TLC鉴别鉴别正丁醇萃取正丁醇萃取鉴别
8、鉴别20鉴别鉴别TLC鉴别鉴别硅胶硅胶G-CMC-Na板；板；展开剂：正丁醇：醋酸：水展开剂：正丁醇：醋酸：水 上层上层 （4 : 1 : 5）显色剂：显色剂：10%硫酸硫酸-乙醇液乙醇液21化学检识化学检识 醋酐醋酐/浓硫酸反应浓硫酸反应22五、实验结果五、实验结果1详细记录实验内容。详细记录实验内容。2详细记录定性鉴别结果，并绘制色谱图，计算详细记录定性鉴别结果，并绘制色谱图，计算 Rf值。值。3总结实验过程中遇到的问题和解决方法。总结实验过程中遇到的问题和解决方法。23六、思考题六、思考题1比较不同方法提取分离绞股蓝总皂苷的优缺点。比较不同方法提取分离绞股蓝总皂苷的优缺点。2在实验过程中遇到哪些困难？并如何解决？在实验过程中遇到哪些困难？并如何解决？3大孔吸附树脂吸附作用的影响因素有哪些？大孔吸附树脂吸附作用的影响因素有哪些？24
