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1、第二章第二章第二章第二章 基因工程的基本条件基因工程的基本条件基因工程的基本条件基因工程的基本条件一、用于核酸操作的工具酶一、用于核酸操作的工具酶一、用于核酸操作的工具酶一、用于核酸操作的工具酶二、基因克隆载体二、基因克隆载体二、基因克隆载体二、基因克隆载体三、目的基因的获得三、目的基因的获得三、目的基因的获得三、目的基因的获得四、基因工程受体菌或细胞四、基因工程受体菌或细胞四、基因工程受体菌或细胞四、基因工程受体菌或细胞四、基因工程受体菌或细胞四、基因工程受体菌或细胞四、基因工程受体菌或细胞四、基因工程受体菌或细胞受体细胞应具备的条件受体细胞应具备的条件受体细胞应具备的条件受体细胞应具备的条
2、件各种基因工程受体及其特性各种基因工程受体及其特性各种基因工程受体及其特性各种基因工程受体及其特性实验室常用的基因工程受体实验室常用的基因工程受体实验室常用的基因工程受体实验室常用的基因工程受体受体细胞应具备的条件受体细胞应具备的条件受体细胞应具备的条件受体细胞应具备的条件限制性缺陷型限制性缺陷型限制性缺陷型限制性缺陷型外切酶和内切酶活性缺陷外切酶和内切酶活性缺陷外切酶和内切酶活性缺陷外切酶和内切酶活性缺陷 ( (recBrecB-、recCrecC-、hsdRhsdR-) )； 重组整合缺陷型重组整合缺陷型重组整合缺陷型重组整合缺陷型用于基因扩增或高效表达的受体细胞用于基因扩增或高效表达的受
3、体细胞用于基因扩增或高效表达的受体细胞用于基因扩增或高效表达的受体细胞 ( (recArecA-) )； 具有较高的转化效率具有较高的转化效率具有较高的转化效率具有较高的转化效率具有与载体选择标记互补的表型具有与载体选择标记互补的表型具有与载体选择标记互补的表型具有与载体选择标记互补的表型感染寄生缺陷型感染寄生缺陷型感染寄生缺陷型感染寄生缺陷型防止重组细菌扩散污染，生物武器除外。防止重组细菌扩散污染，生物武器除外。防止重组细菌扩散污染，生物武器除外。防止重组细菌扩散污染，生物武器除外。各种基因工程受体及其特性各种基因工程受体及其特性各种基因工程受体及其特性各种基因工程受体及其特性遗传背景清楚遗
4、传背景清楚遗传背景清楚遗传背景清楚载体受体系统完备载体受体系统完备载体受体系统完备载体受体系统完备 生长迅速生长迅速生长迅速生长迅速培养简单培养简单培养简单培养简单重组子稳定重组子稳定重组子稳定重组子稳定产结构复杂、种类产结构复杂、种类产结构复杂、种类产结构复杂、种类繁多的内毒素繁多的内毒素繁多的内毒素繁多的内毒素大肠杆菌：大肠杆菌：大肠杆菌：大肠杆菌：优点：优点：优点：优点：缺点：缺点：缺点：缺点：外源外源外源外源DNADNA克隆和扩增；克隆和扩增；克隆和扩增；克隆和扩增；原核基因高效表达；原核基因高效表达；原核基因高效表达；原核基因高效表达；基因文库构建。基因文库构建。基因文库构建。基因文
5、库构建。用途：用途：用途：用途： 是基因工程主要原核受体菌。是基因工程主要原核受体菌。遗传背景清楚遗传背景清楚遗传背景清楚遗传背景清楚蛋白质蛋白质蛋白质蛋白质分泌分泌分泌分泌机制健全机制健全机制健全机制健全 生长迅速生长迅速生长迅速生长迅速培养简单培养简单培养简单培养简单不产内毒素不产内毒素不产内毒素不产内毒素遗传欠稳定遗传欠稳定遗传欠稳定遗传欠稳定载体受体系统欠完备载体受体系统欠完备载体受体系统欠完备载体受体系统欠完备枯草杆菌：枯草杆菌：枯草杆菌：枯草杆菌：优点：优点：优点：优点：缺点：缺点：缺点：缺点：用途：用途：用途：用途：原核基因的克隆与表达；原核基因的克隆与表达；原核基因的克隆与表达
6、；原核基因的克隆与表达；重组蛋白多肽的重组蛋白多肽的重组蛋白多肽的重组蛋白多肽的分泌分泌分泌分泌。链霉菌：链霉菌：链霉菌：链霉菌：抗生素的主要生产者抗生素的主要生产者抗生素的主要生产者抗生素的主要生产者遗传操作简单遗传操作简单遗传操作简单遗传操作简单不产内毒素不产内毒素不产内毒素不产内毒素用途：用途：用途：用途：抗生素生产菌株的改良。抗生素生产菌株的改良。抗生素生产菌株的改良。抗生素生产菌株的改良。遗传不稳定遗传不稳定遗传不稳定遗传不稳定生长相对缓慢生长相对缓慢生长相对缓慢生长相对缓慢优点：优点：优点：优点：缺点：缺点：缺点：缺点：酵母菌：酵母菌：酵母菌：酵母菌：具有真核生物的特征具有真核生物
7、的特征具有真核生物的特征具有真核生物的特征遗传背景清楚遗传背景清楚遗传背景清楚遗传背景清楚生长迅速生长迅速生长迅速生长迅速培养简单培养简单培养简单培养简单外源基因表达系统完善外源基因表达系统完善外源基因表达系统完善外源基因表达系统完善遗传稳定遗传稳定遗传稳定遗传稳定内源蛋白产物的内源蛋白产物的内源蛋白产物的内源蛋白产物的种类多、含量高种类多、含量高种类多、含量高种类多、含量高优点：优点：优点：优点：缺点：缺点：缺点：缺点：用途：用途：用途：用途：外源外源外源外源DNADNA扩增和克隆扩增和克隆扩增和克隆扩增和克隆真核基因高效表达真核基因高效表达真核基因高效表达真核基因高效表达基因文库构建基因文
8、库构建基因文库构建基因文库构建真核基因表达调控研究真核基因表达调控研究真核基因表达调控研究真核基因表达调控研究是基因工程重要的真核受体菌。是基因工程重要的真核受体菌。是基因工程重要的真核受体菌。是基因工程重要的真核受体菌。昆虫细胞（家蚕）：昆虫细胞（家蚕）：昆虫细胞（家蚕）：昆虫细胞（家蚕）：具有真核生物的特征具有真核生物的特征具有真核生物的特征具有真核生物的特征外源基因表达量高外源基因表达量高外源基因表达量高外源基因表达量高繁殖较快繁殖较快繁殖较快繁殖较快培养成本低培养成本低培养成本低培养成本低遗传稳定遗传稳定遗传稳定遗传稳定用途：用途：用途：用途：真核生物基因的高效表达。真核生物基因的高效
9、表达。真核生物基因的高效表达。真核生物基因的高效表达。DNADNA重组操作重组操作重组操作重组操作系统欠完善系统欠完善系统欠完善系统欠完善优点：优点：优点：优点：缺点：缺点：缺点：缺点：哺乳动物细胞（中国仓鼠卵巢细胞哺乳动物细胞（中国仓鼠卵巢细胞哺乳动物细胞（中国仓鼠卵巢细胞哺乳动物细胞（中国仓鼠卵巢细胞 CHOCHO）：）：）：）： 与人的亲缘关系近与人的亲缘关系近与人的亲缘关系近与人的亲缘关系近分子重组表达系统健全分子重组表达系统健全分子重组表达系统健全分子重组表达系统健全具有合适的糖基化修饰系统具有合适的糖基化修饰系统具有合适的糖基化修饰系统具有合适的糖基化修饰系统细胞培养条件苛刻细胞培
10、养条件苛刻细胞培养条件苛刻细胞培养条件苛刻生长缓慢生长缓慢生长缓慢生长缓慢 优点：优点：优点：优点：缺点：缺点：缺点：缺点：用途：用途：用途：用途：哺乳动物和人基因表达调控研究哺乳动物和人基因表达调控研究哺乳动物和人基因表达调控研究哺乳动物和人基因表达调控研究基因药物生产基因药物生产基因药物生产基因药物生产是基因工程的主要哺乳动物受体。是基因工程的主要哺乳动物受体。植物细胞（拟南芥、烟叶植物细胞（拟南芥、烟叶植物细胞（拟南芥、烟叶植物细胞（拟南芥、烟叶）：）：）：）：转基因植物细胞易分化转基因植物细胞易分化转基因植物细胞易分化转基因植物细胞易分化细胞培养简单细胞培养简单细胞培养简单细胞培养简单
11、成本低廉成本低廉成本低廉成本低廉具有光合作用具有光合作用具有光合作用具有光合作用遗传操作繁琐遗传操作繁琐遗传操作繁琐遗传操作繁琐 优点：优点：优点：优点：缺点：缺点：缺点：缺点：用途：用途：用途：用途：高等植物基因表达调控研究高等植物基因表达调控研究高等植物基因表达调控研究高等植物基因表达调控研究农作物品质改良农作物品质改良农作物品质改良农作物品质改良实验室常用的基因工程受体实验室常用的基因工程受体实验室常用的基因工程受体实验室常用的基因工程受体酵母菌酵母菌酵母菌酵母菌：毕赤酵母、啤酒酵母：毕赤酵母、啤酒酵母：毕赤酵母、啤酒酵母：毕赤酵母、啤酒酵母哺乳动物细胞哺乳动物细胞哺乳动物细胞哺乳动物细胞：CHO CHO LE392LE392、ED8654 ED8654 C600C600、DH5DH5 、HB101HB101、JM109 JM109 大肠杆菌大肠杆菌大肠杆菌大肠杆菌用于接受质粒：用于接受质粒：用于接受质粒：用于接受质粒：用于接受用于接受用于接受用于接受 -DNA-DNA：
