《丁芬小容量注射剂药液微生物污染水平测试及工艺时间限确定学习教案》由会员分享，可在线阅读，更多相关《丁芬小容量注射剂药液微生物污染水平测试及工艺时间限确定学习教案（67页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、会计学1丁芬小容量注射剂药液微生物污染水平丁芬小容量注射剂药液微生物污染水平(shupng)测试及工艺时间限确定测试及工艺时间限确定第一页，共67页。n n一一、概概述述n n二二、试试验验( (s sh h y y n n) )目目的的n n三三、试试验验( (s sh h y y n n) )方方案案n n四四、试试验验( (s sh h y y n n) )结结果果及及讨讨论论n n五五、污污染染菌菌鉴鉴定定n n六六、注注意意事事项项第1页/共66页第二页，共67页。一、概述一、概述(ish)(ish)n n在无菌药品的生产中，防止微生物污染一直是生产企业关注重点。无菌是注射剂的主要质
2、量要求和安全性指标之一。按照药典进行无菌检查是存在局限性的：污染率越低，同样的取样量误将产品判为合格(hg)的概率越高；在同一个污染率下，取样量越大，以无菌实验结果判断批产品无菌的可信度就越高。第2页/共66页第三页，共67页。一、概述一、概述(ish)(ish)n n但是，对于污染(wrn)率极低（如1%）的批产品，即使加大取样数，提高的可信度也是微不足道的。同时，过多的取样量也增加了实验过程的污染(wrn)概率，对无菌实验结果的判断同样造成影响。从无菌药品生产的各个环节分析存在微生物污染(wrn)的因素，有利于进行微生物污染(wrn)控制，从而保证药品的无菌水平。第3页/共66页第四页，共
3、67页。一、概述一、概述(ish)(ish)n n药品生产(shngchn)质量管理规范（2010年修订）无菌药品附录第五十七条应当尽可能缩短药液从开始配制到灭菌（或除菌过滤）的间隔时间。应当根据产品的特性及贮存条件建立相应的间隔时间控制标准。第4页/共66页第五页，共67页。二、试验二、试验(shyn)(shyn)目的目的n n在一定的条件下，微生物将根据时间成几何级数的增长，因此(ync)“微生物污染水平监测”实质也是一种时间间隔管理的实施方法。我们通过检测药液稀配后至灭菌前生产过程不同时段药液的微生物数量，建立微生物随时间的变化趋势关系，找到达到污染控制限度的时间点，预留一定的安全时间作
4、为内部控制时限要求。第5页/共66页第六页，共67页。二、试验二、试验(shyn)(shyn)目的目的n n无菌药品灭菌与灭菌前产品的微生物污染程度有关，对灭菌前微生物污染状况进行检控是对产品作无菌评价(pngji)的先决条件。本次试验模拟生产品种：XX注射液，规格：5ml，生产批量：12万支，灌装时间：8h，灭菌：6柜次。第6页/共66页第七页，共67页。二、试验二、试验(shyn)(shyn)目的目的n n除了微生物相关要求外，必须指出，部分产品在溶液或其他状态下存在不稳定性，极易降解，产生新的杂质，因此基于药品化学稳定性的时间管理，也是确定存放时限的制定(zhdng)依据。第7页/共66
5、页第八页，共67页。三、试验三、试验(shyn)(shyn)方案方案n n（一一）成成立立( (c ch h n ng gl l ) )试试验验小小组组，明明确确职职责责n n1 1、小小组组成成员员：n n组组长长：质质量量负负责责人人n n成成员员：Q QA A、Q QC C、针针剂剂车车间间n n2 2、职职责责n n2 2. .1 1 组组长长负负责责审审批批。第8页/共66页第九页，共67页。三、试验三、试验(shyn)(shyn)方案方案n n2 2. .2 2 QQA An n负负责责起起草草试试验验方方案案和和报报告告n n试试验验过过程程取取样样和和环环境境监监测测（生生产产
6、( (s sh h n ng gc ch h n n) )全全过过程程沉沉降降菌菌和和生生产产( (s sh h n ng gc ch h n n) )前前中中后后尘尘埃埃粒粒子子、风风速速、温温湿湿度度）。n n负负责责协协调调工工作作，以以保保证证按按规规定定项项目目顺顺利利实实施施。n n负负责责现现场场监监督督。n n负负责责数数据据及及结结果果的的审审核核。第9页/共66页第十页，共67页。三、试验三、试验(shyn)(shyn)方案方案n n2.3 QCn n微生物检验实验的准备及测试工作。n n负责根据(gnj)检验结果出具检验报告单。n n2.4 针剂车间n n负责指定操作人员
7、和清洁人员。n n负责按照生产工艺规程和操作SOP进行操作。第10页/共66页第十一页，共67页。三、试验三、试验(shyn)(shyn)方案方案n n（二二）确确定定风风险险点点n n无无菌菌检检查查并并不不能能保保证证最最终终灭灭菌菌产产品品的的无无菌菌状状态态。应应当当把把成成品品的的无无菌菌检检查查看看做做确确保保无无菌菌的的一一系系列列控控制制措措施施中中的的最最后后一一项项措措施施。因因此此( (y y n nc c) )，灭灭菌菌前前产产品品的的微微生生物物控控制制应应当当作作为为生生产产中中最最重重要要的的质质量量保保证证措措施施和和正正常常生生产产的的先先决决条条件件。第11
8、页/共66页第十二页，共67页。三、试验三、试验(shyn)(shyn)方案方案n n我公司XX小容量注射剂为最终灭菌制剂，5ml生产线关键生产工艺流程(nylichn)为：称量、浓配、超滤、稀配定容、过滤（微生物负载滤器）、除菌过滤、灌装、灭菌检漏。第12页/共66页第十三页，共67页。三、试验三、试验(shyn)(shyn)方案方案第13页/共66页第十四页，共67页。三、试验三、试验(shyn)(shyn)方案方案n n经过分析，对成品无菌可能产生影响的关键点为稀配液微生物污染(wrn)水平，包括稀配结束时的稀配液、灌装完成过程的稀配液、灌装即将结束时的稀配液；灌装液微生物污染(wrn)
9、水平，包括灌装开始时的灌装药液、灌装过程的灌装药液、灌装即将完成时的灌装药液；灭菌前药液微生物污染(wrn)水平。第14页/共66页第十五页，共67页。三、试验三、试验(shyn)(shyn)方案方案n n（三）制定取样计划（三）制定取样计划n n本次试验计划模拟灌装的时间为本次试验计划模拟灌装的时间为8 8小时，根据灌装机的灌装能力，小时，根据灌装机的灌装能力，确定生产批量为确定生产批量为1212万支，灭菌万支，灭菌6 6柜柜次，按照次，按照(nzho)xx(nzho)xx注射液工艺注射液工艺规程组织生产。对生产当天的注规程组织生产。对生产当天的注射用水进行微生物限度检查，生射用水进行微生物
10、限度检查，生产环境进行监测：温度、湿度、产环境进行监测：温度、湿度、尘埃粒子（生产前、生产过程、尘埃粒子（生产前、生产过程、生产结束）、风速（生产前、生生产结束）、风速（生产前、生产结束）沉降菌（生产全过程），产结束）沉降菌（生产全过程），人员人员5 5指手套，接触碟表面微生物指手套，接触碟表面微生物（生产结束）（生产结束）第15页/共66页第十六页，共67页。三、试验三、试验(shyn)(shyn)方案方案n n1、取样点及取样频次(pn c)n n样品1：稀配罐内的稀配液，自稀配定容结束后至生产结束，每隔1小时取样检测一次微生物量n n样品2：除菌过滤之前的药液，即自微生物负载滤器过滤后的
11、药液，自灌装开始至灌装结束，每隔1小时取样检测一次微生物量第16页/共66页第十七页，共67页。三、试验三、试验(shyn)(shyn)方案方案n n样品3：灌装后的药品，即除菌过滤后的药液，自灌装开始(kish)至灌装结束，每隔1小时取样检测一次微生物量n n样品4：灭菌前药液，即灭菌前放置时间最长的药液，取第一锅和最后一锅分别检测微生物量n n样品5：待灭菌药液放置1小时后，取第一锅和最后一锅待灭菌时间最长的药液，灭菌程序启动后再放置一小时后检测微生物量第17页/共66页第十八页，共67页。三、试验三、试验(shyn)(shyn)方案方案第18页/共66页第十九页，共67页。三、试验三、试
12、验(shyn)(shyn)方案方案第19页/共66页第二十页，共67页。三、试验三、试验(shyn)(shyn)方案方案n n2、样品(yngpn)标签第20页/共66页第二十一页，共67页。三、试验三、试验(shyn)(shyn)方案方案n n3、依据标准及相关(xinggun)文件n n药品GMP指南无菌药品n n药品生产验证指南2003年版n n中华人民共和国药典2010年版n nXX注射液工艺规程第21页/共66页第二十二页，共67页。三、试验三、试验(shyn)(shyn)方案方案n n现代医药工业微生物实验室质量管理与验证技术n n4、取样(qyng)器具n n取样(qyng)瓶为
13、250ml无菌玻璃磨口瓶。第22页/共66页第二十三页，共67页。三、试验三、试验(shyn)(shyn)方案方案n n（四四）检检验验方方法法n n采采用用薄薄膜膜过过滤滤法法进进行行药药液液的的微微生生物物限限度度检检查查。取取滤滤膜膜孔孔径径( (k kn ng gj j n ng g) ) ，直直径径为为 7 75 5m mm m的的一一次次性性全全封封闭闭薄薄膜膜过过滤滤器器（北北京京牛牛牛牛基基因因技技术术有有限限公公司司，滤滤器器类类型型：N NS S0 01 1- -7 75 5D D1 1），将将过过滤滤器器逐逐一一插插放放在在滤滤液液槽槽座座上上，将将其其塑塑胶胶软软管管装
14、装入入集集菌菌仪仪的的蠕蠕动动泵泵的的管管槽槽内内，注注意意定定位位准准确确，软软管管走走势势顺顺畅畅。第23页/共66页第二十四页，共67页。三、试验三、试验(shyn)(shyn)方案方案n n其进液软管的双芯针头插入供试液容器的塞上，开启集菌仪，将供试液容器倒置，使药液均匀通过滤器，滤净。打开过滤器菌面朝上贴于营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基平板上培养。每种培养基制备一张滤膜。细菌培养3天，霉菌、酵母菌培养5天，逐日观察菌落生长情况，点计菌落数，必要时，可适当延长培养时间(shjin)至7天进行菌落计数并报告。第24页/共66页第二十五页，共67页。四、试验四、试验(shyn)(shy
15、n)结果及讨论结果及讨论n n（一）微生物污染水平(shupng)检测结果见下表第25页/共66页第二十六页，共67页。第26页/共66页第二十七页，共67页。四、试验四、试验(shyn)(shyn)结果及讨论结果及讨论n n样品1：稀配罐内的稀配液，稀配定容后至生产结束，每隔1小时取样检测一次微生物量，微生物量随时间变化(binhu)的趋势图如下：第27页/共66页第二十八页，共67页。四、试验四、试验(shyn)(shyn)结果及讨论结果及讨论第28页/共66页第二十九页，共67页。四、试验结果四、试验结果(jigu)(jigu)及讨论及讨论n n讨论：第0、1、2、3、4、5、6、7、8
16、小时在稀配罐分别取样进行微生物限度检查，在第5小时后开始检出微生物，数量(shling)为8cfu/100ml，随时间增长微生物数量(shling)呈上升趋势。在生产即将结束时检测药液的微生物数为369cfu/100ml。第29页/共66页第三十页，共67页。四、试验四、试验(shyn)(shyn)结果及讨论结果及讨论n n根据颇尔的除菌过滤器的过滤效果的验证，理论上定容后的药液的载菌量为：6.01010cfu，（除菌过滤器至少能达到107/cm2过滤面积浓度的缺陷假单胞菌，过滤面积为2）在除菌过滤器的除菌能力范围内。我公司工艺验证规定微生物限度(xind)检查结果应小于10cfu/ml。第3
17、0页/共66页第三十一页，共67页。n n我们通过检测稀配罐药液在生产过程不同时段药液的微生物数量(shling)，8小时可以作为稀配液污染控制限度的时间点。第31页/共66页第三十二页，共67页。四、试验结果四、试验结果(jigu)(jigu)及讨论及讨论n n样品2：除菌过滤之前的药液，即自微生物负载(fzi)滤器过滤后的药液，自灌装开始至灌装结束，每隔1小时取样检测一次微生物量，微生物量随时间变化的趋势图如下：第32页/共66页第三十三页，共67页。四、试验四、试验(shyn)(shyn)结果及讨论结果及讨论第33页/共66页第三十四页，共67页。四、试验结果四、试验结果(jigu)(j
18、igu)及讨论及讨论n n讨论：第0、1、2、3、4、5、6、7、8小时对微生物负载过滤器过滤后的药液分别取样进行微生物限度检查，在第6小时后开始检出微生物，并随时间增长呈上升趋势。在生产即将(jjing)结束时检测药液的微生物量为7cfu/100ml，符合除菌过滤前药液小于10cfu/100ml微生物负荷要求。第34页/共66页第三十五页，共67页。四、试验结果四、试验结果(jigu)(jigu)及讨论及讨论n n我们通过检测除菌过滤前的药液在生产过程不同时段的微生物数量，8小时可以作为(zuwi)除菌过滤前药液污染控制限度的时间点，可以将7小时作为(zuwi)预留的安全时间作为(zuwi)
19、内部控制时限要求。第35页/共66页第三十六页，共67页。四、试验结果四、试验结果(jigu)(jigu)及讨论及讨论n n样品3：灌装后的药品，即除菌过滤后的药液，自灌装开始至灌装结束，每隔1小时取样检测一次微生物量，微生物量随时间(shjin)变化的趋势图如下：第36页/共66页第三十七页，共67页。四、试验四、试验(shyn)(shyn)结果及讨论结果及讨论第37页/共66页第三十八页，共67页。四、试验结果四、试验结果(jigu)(jigu)及讨论及讨论n n讨论：第0、1、2、3、4、5、6、7、8小时灌装药液分别取样进行微生物限度(xind)检查，在第7小时后开始检出微生物，并随时
20、间增长呈上升趋势。在生产即将结束时检测药液的微生物数为50cfu/100ml，药品的载菌量为2cfu/支。符合100cfu/100ml的灭菌前药液的微生物数量。第38页/共66页第三十九页，共67页。四、试验结果四、试验结果(jigu)(jigu)及讨论及讨论n n我们通过检测灌装药液在生产过程不同时段的微生物数量，8小时可以(ky)作为灌装药液污染控制限度的时间点，可以(ky)将6小时作为预留的安全时间作为内部控制时限要求。第39页/共66页第四十页，共67页。四、试验四、试验(shyn)(shyn)结果及讨论结果及讨论n n样品(yngpn)4：灭菌前药液，即灭菌前放置时间最长的药液，第一
21、锅灭菌前药液微生物数量为0，第六锅灭菌前药液微生物数量为37cfu/100ml，符合100cfu/100ml的灭菌前药液的微生物数量。第40页/共66页第四十一页，共67页。四、试验四、试验(shyn)(shyn)结果及讨论结果及讨论n n样品5：待灭菌(mijn)药液放置1小时后，取第一锅和最后一锅待灭菌(mijn)时间最长的药液，灭菌(mijn)程序启动后再放置一小时后检测微生物量，第一锅待灭菌(mijn)放置1小时后微生物数量为3cfu/100ml，第六锅待灭菌(mijn)放置1小时后微生物数量为118cfu/100ml，已经超过100cfu/100ml的灭菌(mijn)前药液的微生物数
22、量。第41页/共66页第四十二页，共67页。四、试验结果四、试验结果(jigu)(jigu)及讨论及讨论n n我们通过检测灭菌前药液和待灭菌药液放置1小时后的药液的微生物数量，9小时可以作为(zuwi)稀配至灭菌污染控制限度的时间点，可以将7小时作为(zuwi)预留的安全时间作为(zuwi)内部控制时限要求。第42页/共66页第四十三页，共67页。四、试验四、试验(shyn)(shyn)结果及讨论结果及讨论n n污染控制限度(xind)的时间点和内部控制时限汇总表第43页/共66页第四十四页，共67页。四、试验结果四、试验结果(jigu)(jigu)及讨论及讨论n n确定微生物污染内部控制内部
23、时限：稀配定容至灌装结束(jish)时限为6小时，灌装开始至灭菌结束(jish)时限为7小时，每次最长待灭菌时限为3小时。第44页/共66页第四十五页，共67页。四、试验四、试验(shyn)(shyn)结果及讨论结果及讨论n n（二）其他检测结果n n生产当天的注射用水微生物限度检查结果0，标准10cfu/100ml，符合规定。n n灌装间生产环境：温度、湿度(shd)、尘埃粒子（生产前、生产过程、生产结束）、风速（生产前、生产结束）沉降菌（生产全过程），人员5指手套，接触碟表面微生物（生产结束）结果均符合规定。第45页/共66页第四十六页，共67页。四、试验四、试验(shyn)(shyn)结
24、果及讨论结果及讨论n n（三）最终(zuzhn)成品检验情况n n成品按照灭菌柜次检验无菌和热原，结果均符合规定。第46页/共66页第四十七页，共67页。五、污染五、污染(wrn)(wrn)菌鉴定菌鉴定n n微生物鉴定程序（参见现代医药工业微生物实验室质量管理与验证技术P205）n n（一）原则n n微生物鉴别应遵循逐步(zhb)缩小范围的原则，用细菌分类学的知识和操作步骤，一步一步的将未知微生物逐步(zhb)落实到科、属，然后选择相应的数码鉴定系统将未知微生物鉴定到种。第47页/共66页第四十八页，共67页。五、污染五、污染(wrn)(wrn)菌鉴定菌鉴定n n鉴定包括以下几个环节：1、菌株
25、采集；2、菌株纯化；3、菌落形态学观察如形状、大小、色泽；4、细胞形态观察如球状、杆状、螺旋状、弧状、丝状及其排列方式；5、革兰染色反应(fnyng)，阳性或阴性；6、氧化与发酵试验；7、接触酶与氧化酶试验；8、鞭毛与动力等等。第48页/共66页第四十九页，共67页。五、污染五、污染(wrn)(wrn)菌鉴定菌鉴定n n通过上述基础实验结果再结合细菌(xjn)鉴定检索表从而确定微生物所属范围，并选择合适的数值分类鉴别试验条（API试验条）将微生物鉴定到种。第49页/共66页第五十页，共67页。五、污染五、污染(wrn)(wrn)菌鉴定菌鉴定第50页/共66页第五十一页，共67页。五、污染五、污
26、染(wrn)(wrn)菌鉴定菌鉴定n n细菌鉴定检索表包含细菌鉴定时所涉及的基本定向生化鉴别试验，根据这些定向生化试验能为大部分未知菌的鉴定选择合适(hsh)API试纸条。第51页/共66页第五十二页，共67页。五、污染五、污染(wrn)(wrn)菌鉴定菌鉴定n n如何根据这张鉴定表来选择所使用方法的步骤：n n1、纯化、分离(fnl)待鉴定菌n n无菌操作用接种环挑取待鉴定菌落或少许含菌溶液到相应的培养基上（如：TSA）划线分离(fnl)，以纯化至单菌落。n n2、挑取纯化后单菌落做革兰染色、镜检，以确定待鉴定菌的革兰属性。第52页/共66页第五十三页，共67页。五、污染五、污染(wrn)(
27、wrn)菌鉴定菌鉴定n n3、如镜检结果为革兰阴性杆菌，则先进行(jnxng)发酵实验。如发酵实验结果为阴性，则选用API20NE试剂条进行(jnxng)鉴定；如发酵实验结果为阳性，则在经过细胞色素氧化酶实验后选用API20E试剂条进行(jnxng)鉴定。n n4、如镜检结果为革兰阳性球菌，则先进行(jnxng)过氧化氢酶实验。如实验结果为阴性则选用API Strep试剂条进行(jnxng)鉴定，如实验结果为阳性则选用API Staph试剂条进行(jnxng)鉴定。第53页/共66页第五十四页，共67页。五、污染五、污染(wrn)(wrn)菌鉴定菌鉴定n n5、假如镜检结果为革兰阳性杆菌并且有
28、内生芽胞，则选用API 50CHB试剂条进行(jnxng)鉴定；否则，根据运动性实验和过氧化氢酶实验结果选用API Coryne或其他试剂条进行(jnxng)鉴定。n n6、表中未列出的其他试剂条n nAPI 20A试剂条可用于鉴定厌氧菌。API 20C AUX试剂条可用于鉴定酵母菌。第54页/共66页第五十五页，共67页。五、污染五、污染(wrn)(wrn)菌鉴定菌鉴定n n7、选定正确(zhngqu)的试剂条后，根据不同的API试剂条的标准操作规程准备接种物，进行接种、培养等操作并将结果形成数码，用API鉴定软件鉴定或查询待检菌的名称均可。鉴定结果应记录，必要时，给出相应解释。第55页/共
29、66页第五十六页，共67页。五、污染五、污染(wrn)(wrn)菌鉴定菌鉴定n n（三）革兰染色试验n n在细菌鉴定过程中，需要最先完成的一些实验称为基本(jbn)定向生化试验。介绍革兰染色实验的原理、操作步骤和试剂配制的内容。第56页/共66页第五十七页，共67页。五、污染五、污染(wrn)(wrn)菌鉴定菌鉴定n n1、原理n n由于革兰阳性细菌的细胞壁较厚，细胞壁中的肽聚糖含量高且网格结构紧密，含脂量又低，当用结晶紫复合溶液染色细胞后用脱色(tu s)剂脱色(tu s)时，引起了细胞壁肽聚糖层网状结构的孔径缩小以致关闭，从而阻止了结晶紫-碘复合物的逸出，故而菌体呈现深紫色；第57页/共6
30、6页第五十八页，共67页。五、污染五、污染(wrn)(wrn)菌鉴定菌鉴定n n而革兰阴性细菌细胞壁中肽聚糖含量低，含脂量又高，当用酒精脱色时，脂类物物质被溶解(rngji)，细胞壁通透性增大，结晶紫-碘复合物被抽提出来，从而使菌体呈现复染液的红色。第58页/共66页第五十九页，共67页。五、污染五、污染(wrn)(wrn)菌鉴定菌鉴定n n2、染色液的配制n n结晶(jijng)紫染液n n将A液（结晶(jijng)紫溶于20ml95%乙醇中）与B液（草酸铵溶于80ml蒸馏水）混合，静置48小时后过滤。第59页/共66页第六十页，共67页。五、污染五、污染(wrn)(wrn)菌鉴定菌鉴定n
31、n卢戈碘液n n取碘化钾溶于5ml蒸馏水中，再加入碘片，待碘全部(qunb)溶解后，加蒸馏水至300ml即成。也可只加蒸馏水至100ml，配制母液储存，用时加两倍蒸馏水。n n脱色液n n95%乙醇溶液。第60页/共66页第六十一页，共67页。五、污染五、污染(wrn)(wrn)菌鉴定菌鉴定n n复复染染液液（0 0. .2 25 5% %的的沙沙黄黄液液）n n取取沙沙黄黄溶溶于于9 95 5% %乙乙醇醇1 10 0m ml l中中，待待完完全全溶溶解解后后再再加加蒸蒸馏馏水水至至1 10 00 0m ml l。n n3 3制制片片、染染色色操操作作n n在在洁洁净净的的载载玻玻片片上上滴
32、滴一一滴滴蒸蒸馏馏水水或或生生理理盐盐水水，用用接接种种( (j ji i z zh h n ng g) )环环挑挑取取少少量量菌菌龄龄为为1 18 8- -2 24 4小小时时的的菌菌苔苔与与水水滴滴充充分分涂涂抹抹混混匀匀成成1 1c cm mX X1 1c cm m大大小小区区域域的的菌菌膜膜，自自然然烘烘干干或或在在酒酒精精灯灯火火焰焰上上方方微微热热烘烘干干，并并在在火火焰焰上上通通过过几几次次，以以固固定定涂涂片片。第61页/共66页第六十二页，共67页。五、污染五、污染(wrn)(wrn)菌鉴定菌鉴定n n滴加结晶紫液，初染1分钟，用自来水冲去结晶紫液。滴加卢戈碘液冲去残水并媒染
33、约1分钟，再用自来水冲去卢戈碘液，将玻片上的水甩干。滴加95%乙醇脱色约20-30秒，并立即(lj)用水冲净。滴加沙黄液染1-2分钟后，用水洗净沙黄液，晾干供镜检。第62页/共66页第六十三页，共67页。五、污染五、污染(wrn)(wrn)菌鉴定菌鉴定n n4阳性-阴性对照控制n n取金黄色葡萄球菌和大肠杆菌(d chn n jn)悬浮液，制成细菌涂片；或是使用已知的革兰阳性细菌和阴性细菌制成涂片，分别染色操作后作为阳性和阴性的对照控制。n n5镜检观察n n在载玻片的菌膜上滴一滴香柏油，用显微镜的油镜观察标本，菌体呈红色为革兰阴性菌；菌体呈蓝紫色为革兰阳性菌。第63页/共66页第六十四页，共
34、67页。六、注意事项六、注意事项n n1、小容量注射剂5ml生产线处于正常生产状态。n n2、因为是工艺(gngy)试验的批次，生产结束后应立即进行彻底的清场，必要时进行清洁灭菌后的效果确认。第64页/共66页第六十五页，共67页。六、注意事项六、注意事项n n3、试验过程中相关活动必须详细真实记录，如具体的取样时间，进行(jnxng)检测的时间等，样品取样和检验需编号管理，要求及时正确标识清晰。取样注意按计划进行(jnxng)，避免样品的漏取和错标。n n4、样品应及时传递，QC第一时间安排进行(jnxng)微生物限度检查。第65页/共66页第六十六页，共67页。内容(nirng)总结会计学。负责根据检验结果出具检验报告单。负责指定操作人员和清洁人员。负责按照生产工艺规程和操作SOP进行操作。打开过滤器菌面朝上贴于营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基平板上培养。无菌操作用接种环挑取待鉴定菌落或少许含菌溶液到相应(xingyng)的培养基上（如：TSA）划线分离，以纯化至单菌落。如发酵实验结果为阳性，则在经过细胞色素氧化酶实验后选用API20E试剂条进行鉴定。4、样品应及时传递，QC第一时间安排进行微生物限度检查第六十七页，共67页。
