《细菌的耐药机理及检测方法课件》由会员分享，可在线阅读，更多相关《细菌的耐药机理及检测方法课件（47页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、n n随随随随着着着着抗抗抗抗生生生生素素素素的的的的广广广广泛泛泛泛大大大大量量量量的的的的滥滥滥滥用用用用、介介介介入入入入性性性性治治治治疗疗疗疗、免免免免疫疫疫疫抑抑抑抑制制制制剂剂剂剂应应应应用用用用及及及及某某某某些些些些基基基基础础础础疾疾疾疾病病病病的的的的发发发发生生生生。细细细细菌菌菌菌性性性性感感感感染染染染已已已已是是是是临临临临床床床床重重重重要要要要的的的的常常常常见见见见病病病病，且且且且耐耐耐耐药药药药性性性性和和和和耐耐耐耐药药药药水水水水平平平平越越越越来来来来越越越越高高高高，给给给给疾疾疾疾病病病病的的的的治治治治疗疗疗疗及及及及临临临临床床床床用用用用
2、药药药药造造造造成成成成诸诸诸诸多多多多困困困困难难难难。病病病病原原原原菌菌菌菌对对对对常常常常用用用用抗抗抗抗生生生生素素素素，如如如如-内内内内酰酰酰酰胺胺胺胺类类类类、氨氨氨氨基基基基糖糖糖糖甙甙甙甙类类类类和和和和喹喹喹喹诺诺诺诺酮酮酮酮类类类类药药药药物物物物的的的的耐耐耐耐药药药药性性性性尤尤尤尤为为为为突突突突出出出出，及及及及时时时时了了了了解解解解细细细细菌菌菌菌的的的的耐耐耐耐药药药药机机机机制制制制和和和和抗抗抗抗生生生生素素素素的的的的发发发发展展展展及及及及应应应应用用用用对对对对策策策策，对对对对我我我我们们们们预预预预防防防防和和和和治治治治疗疗疗疗细细细细菌菌
3、菌菌性性性性感感感感染染染染、制制制制备备备备新新新新的的的的抗抗抗抗菌菌菌菌药药药药物及控制耐药性的蔓延是非常重要的。物及控制耐药性的蔓延是非常重要的。物及控制耐药性的蔓延是非常重要的。物及控制耐药性的蔓延是非常重要的。 n n药药药药物物物物作作作作用用用用机机机机制制制制落落落落后后后后于于于于细细细细菌菌菌菌对对对对抗抗抗抗生生生生素素素素耐耐耐耐药药药药性性性性传传传传播播播播的的的的发发发发展展展展，药药药药物物物物作作作作用用用用机机机机理理理理主主主主要要要要是是是是通通通通过过过过干干干干扰扰扰扰细细细细菌菌菌菌核核核核酸酸酸酸的的的的合合合合成成成成、抑抑抑抑制制制制核核核
4、核糖糖糖糖体体体体的的的的功功功功能能能能、抑抑抑抑制制制制胞胞胞胞壁壁壁壁的的的的合合合合成成成成及及及及叶叶叶叶酸酸酸酸盐盐盐盐的的的的代代代代谢谢谢谢等等等等。细细细细菌菌菌菌对对对对抗抗抗抗生生生生素素素素的的的的耐耐耐耐药药药药机机机机制制制制包包包包括括括括遗遗遗遗传传传传和和和和生生生生化化化化两两两两种种种种方方方方式式式式：遗遗遗遗传传传传方方方方式式式式包包包包括括括括固固固固有有有有耐耐耐耐药药药药（天天天天然然然然性性性性）和和和和染染染染色色色色体体体体突突突突变变变变产产产产生生生生的的的的耐耐耐耐药药药药或或或或获获获获得得得得新新新新的的的的DNADNA分分分分
5、子子子子；生生生生化化化化方方方方式式式式是是是是指指指指细细细细菌菌菌菌获获获获得得得得性性性性耐耐耐耐药药药药或或或或质质质质粒粒粒粒介介介介导导导导的的的的耐耐耐耐药药药药，主主主主要要要要包包包包括括括括：产产产产生生生生B-B-内内内内酰酰酰酰胺胺胺胺酶酶酶酶、乙乙乙乙酰酰酰酰基基基基转转转转移移移移酶酶酶酶、腺腺腺腺甘甘甘甘酸酸酸酸酶酶酶酶、磷磷磷磷酸酸酸酸化化化化酶酶酶酶、拓拓拓拓扑扑扑扑异异异异构构构构酶酶酶酶等等等等对对对对药药药药物物物物的的的的灭灭灭灭活活活活作作作作用用用用；依依依依靠靠靠靠菌菌菌菌膜膜膜膜的的的的特特特特性性性性降降降降低低低低药药药药物物物物的的的的
6、通通通通透透透透性性性性；改改改改变变变变抗抗抗抗生生生生素素素素作作作作用用用用的的的的靶靶靶靶位位位位，缩缩缩缩短短短短与与与与药药药药物物物物结结结结合合合合的的的的时时时时间间间间；产产产产生生生生药药药药物物物物代代代代谢谢谢谢的的的的旁旁旁旁路路路路；大大大大量量量量产产产产生生生生青青青青霉霉霉霉素素素素结结结结合合合合蛋蛋蛋蛋白白白白（PBPSPBPS），降降降降低低低低抗抗抗抗生生生生素素素素的的的的新新新新生生生生力；发展产生耐受；产生抗生素导出泵。力；发展产生耐受；产生抗生素导出泵。力；发展产生耐受；产生抗生素导出泵。力；发展产生耐受；产生抗生素导出泵。 遗传方式遗传方式
7、n n固固固固有有有有耐耐耐耐药药药药 固固固固有有有有耐耐耐耐药药药药具具具具有有有有种种种种属属属属特特特特异异异异性性性性，来来来来源源源源于于于于该该该该细细细细菌菌菌菌固固固固有有有有的的的的自自自自然然然然特特特特性性性性，即即即即本本本本身身身身具具具具有有有有耐耐耐耐药药药药基基基基因因因因存存存存在在在在染染染染色色色色体体体体上上上上，非非非非发发发发酵酵酵酵的的的的G-G-杆杆杆杆菌菌菌菌如如如如绿绿绿绿脓脓脓脓秆秆秆秆菌菌菌菌、醋醋醋醋酸酸酸酸钙钙钙钙不不不不动动动动杆杆杆杆菌菌菌菌、假假假假单单单单胞胞胞胞菌菌菌菌属属属属及及及及大大大大多多多多数数数数G-G-杆杆杆
8、杆菌菌菌菌耐耐耐耐万万万万古古古古霉霉霉霉素素素素和和和和甲甲甲甲氧氧氧氧西西西西林林林林，肠肠肠肠球球球球菌菌菌菌耐耐耐耐头头头头孢孢孢孢菌菌菌菌素素素素，厌厌厌厌氧氧氧氧菌菌菌菌耐耐耐耐氨氨氨氨基基基基糖糖糖糖甙甙甙甙类类类类药药药药物物物物等等等等，这这这这些些些些菌菌菌菌的的的的高高高高度度度度固固固固有有有有耐耐耐耐药药药药性性性性是是是是由由由由于于于于菌菌菌菌体体体体外外外外膜膜膜膜的的的的通通通通透透透透性性性性低低低低与与与与继继继继发发发发的的的的双双双双重重重重耐耐耐耐药药药药机机机机理理理理（诱诱诱诱导产生头孢菌素酶和抗生素导出泵）导致的。导产生头孢菌素酶和抗生素导出泵
9、）导致的。导产生头孢菌素酶和抗生素导出泵）导致的。导产生头孢菌素酶和抗生素导出泵）导致的。n n染染染染色色色色体体体体突突突突变变变变或或或或获获获获得得得得新新新新的的的的DNADNA分分分分子子子子 突突突突变变变变可可可可发发发发生生生生于于于于DNADNA分分分分子子子子，如如如如结结结结核核核核杆杆杆杆菌菌菌菌的的的的点点点点突突突突变变变变可可可可导导导导致致致致对对对对利利利利福福福福平平平平的的的的耐耐耐耐药药药药，淋淋淋淋球球球球菌菌菌菌的的的的点点点点突突突突变变变变可可可可导导导导致致致致对对对对苯苯苯苯唑唑唑唑西西西西林林林林的的的的耐耐耐耐药药药药；也也也也可可可可
10、发发发发生生生生于于于于质质质质粒粒粒粒和和和和转转转转座座座座子子子子的的的的基基基基因因因因上上上上，如如如如质质质质粒粒粒粒编编编编码码码码产产产产生生生生的的的的超超超超广广广广谱谱谱谱B-B-内内内内酰酰酰酰胺胺胺胺酶酶酶酶（ESBLESBL）可可可可能能能能由由由由于于于于TEMTEM和和和和SHVSHV酶酶酶酶基基基基因因因因的的的的点点点点突突突突变变变变导导导导致致致致的的的的，这这这这些些些些点点点点突突突突变变变变集集集集中中中中于于于于基基基基因因因因的的的的5 5个个个个区区区区域域域域内内内内，残残残残基基基基的的的的突突突突变变变变能能能能改改改改变变变变B-B-
11、内内内内酰酰酰酰胺胺胺胺酶酶酶酶与与与与头头头头孢孢孢孢菌菌菌菌素素素素的的的的结结结结合合合合形形形形成成成成，消消消消除除除除阻阻阻阻遏遏遏遏作作作作用用用用，导导导导致致致致抑抑抑抑制制制制和和和和水水水水解解解解三三三三代代代代头头头头孢孢孢孢菌菌菌菌素素素素，如如如如果果果果酶酶酶酶基基基基因因因因的的的的连连连连续续续续突突突突变变变变可可可可从从从从本本本本质质质质上上上上增增增增强强强强酶酶酶酶的的的的活活活活力力力力，使使使使新新新新一一一一代代代代头头头头孢孢孢孢菌菌菌菌素素素素灭灭灭灭活活活活；某某某某些些些些DNADNA调调调调节节节节区区区区基基基基因因因因的的的的突
12、突突突变变变变可可可可产产产产生生生生头头头头孢菌素酶导致对第三代头孢菌素耐药。孢菌素酶导致对第三代头孢菌素耐药。孢菌素酶导致对第三代头孢菌素耐药。孢菌素酶导致对第三代头孢菌素耐药。n n耐耐耐耐药药药药性性性性可可可可通通通通过过过过接接接接合合合合、转转转转导导导导和和和和转转转转化化化化在在在在微微微微生生生生物物物物间间间间传传传传递递递递，外外外外源源源源性性性性相相相相关关关关的的的的DNADNA小小小小片片片片段段段段组组组组合合合合为为为为内内内内源源源源性性性性基基基基因因因因几几几几乎乎乎乎都都都都通通通通过过过过自自自自然然然然转转转转化化化化和和和和重重重重组组组组形形
13、形形成成成成，质质质质粒粒粒粒接接接接合合合合传传传传播播播播的的的的方方方方式式式式最最最最普普普普遍遍遍遍，但但但但宿宿宿宿主主主主范范范范围围围围局局局局限限限限，尚尚尚尚未未未未发发发发生生生生可可可可在在在在G+G+和和和和G-G-菌菌菌菌中中中中都都都都能能能能复复复复制制制制的的的的质质质质粒粒粒粒，而而而而转转转转座座座座子子子子的的的的宿宿宿宿主主主主范范范范围围围围较较较较广广广广，可可可可在在在在G+G+和和和和G-G-菌菌菌菌间间间间转转转转移移移移，如如如如染染染染色色色色体体体体内内内内的的的的AmpCAmpC基基基基因因因因可可可可通通通通过过过过转转转转座座座座
14、子子子子越越越越位位位位至至至至质质质质粒粒粒粒中中中中，使使使使某某某某些些些些细细细细菌菌菌菌获获获获得得得得诱诱诱诱导导导导产产产产生生生生能能能能力力力力极极极极强强强强的的的的I I型型型型酶酶酶酶，称称称称之之之之为为为为AmpCAmpC型型型型ESBLSESBLS株株株株（如如如如肠肠肠肠球球球球菌菌菌菌、克克克克雷雷雷雷伯伯伯伯氏氏氏氏菌菌菌菌、某某某某些些些些肠肠肠肠杆杆杆杆菌菌菌菌科的细菌），是耐药性传播的重要原因之一。科的细菌），是耐药性传播的重要原因之一。科的细菌），是耐药性传播的重要原因之一。科的细菌），是耐药性传播的重要原因之一。 生化方式生化方式细菌获得性耐药的生
15、化机理主要有以下几种。细菌获得性耐药的生化机理主要有以下几种。细菌获得性耐药的生化机理主要有以下几种。细菌获得性耐药的生化机理主要有以下几种。1. 1.酶酶酶酶的的的的灭灭灭灭活活活活作作作作用用用用 通通通通过过过过水水水水解解解解或或或或修修修修饰饰饰饰作作作作用用用用破破破破坏坏坏坏抗抗抗抗生生生生素素素素的的的的活性。活性。活性。活性。 （1 1）-内内内内酰酰酰酰胺胺胺胺酶酶酶酶 质质质质粒粒粒粒介介介介导导导导或或或或染染染染色色色色体体体体突突突突变变变变使使使使细细细细菌菌菌菌产产产产生生生生-内内内内酰酰酰酰胺胺胺胺酶酶酶酶，可可可可水水水水解解解解破破破破坏坏坏坏-内内内内
16、酰酰酰酰胺胺胺胺酶酶酶酶，使使使使B-B-内内内内酰酰酰酰胺胺胺胺类类类类抗抗抗抗生生生生素素素素失失失失活活活活，这这这这是是是是大大大大多多多多数数数数致致致致病病病病菌菌菌菌对对对对此此此此类类类类抗抗抗抗生生生生素素素素产产产产生生生生耐耐耐耐药药药药性性性性的的的的主主主主要要要要机机机机制制制制。目目目目前前前前B-B-内内内内酶酶酶酶胺胺胺胺酶酶酶酶已已已已有有有有230230余余余余种种种种，包包包包括括括括TEMTEM系系系系列列列列酶酶酶酶、SHVSHV系系系系列列列列酶酶酶酶、OXAOXA系系系系列列列列酶酶酶酶、PSEPSE系系系系列列列列酶酶酶酶、头头头头孢孢孢孢菌菌
17、菌菌素素素素酶酶酶酶等等等等，质质质质粒粒粒粒介介介介导导导导的的的的酶酶酶酶在在在在G-G-菌菌菌菌中中中中分分分分布布布布较较较较广广广广，以以以以TEM-1TEM-1最最最最普普普普遍遍遍遍，其次为其次为其次为其次为OXA-1OXA-1。 根根根根据据据据分分分分子子子子量量量量、等等等等电电电电点点点点、被被被被抑抑抑抑制制制制谱谱谱谱、对对对对底底底底物物物物的的的的水水水水解解解解谱谱谱谱等等等等将将将将B-B-内内内内酰酰酰酰胺胺胺胺酶酶酶酶又又又又分分分分为为为为4 4类类类类， 类类类类酶酶酶酶由由由由染染染染色色色色体体体体的的的的AmpCAmpC基基基基因因因因诱诱诱诱导
18、导导导产产产产生生生生，多多多多种种种种需需需需氧氧氧氧G-G-杆杆杆杆菌菌菌菌（如如如如大大大大肠肠肠肠杆杆杆杆菌菌菌菌、弗弗弗弗氏氏氏氏枸枸枸枸橼橼橼橼酸酸酸酸杆杆杆杆菌菌菌菌、阴阴阴阴沟沟沟沟杆杆杆杆菌菌菌菌等等等等）可可可可产产产产生生生生此此此此酶酶酶酶；类类类类酶酶酶酶临临临临床床床床上上上上最最最最为为为为重重重重要要要要，分分分分5 5个个个个亚亚亚亚类类类类（2a2a、2b-2b2b-2b、2c2c、2d2d、2e2e），大大大大多多多多数数数数G+G+菌菌菌菌产产产产生生生生的的的的酶酶酶酶（ 如如如如 pc1pc1） 属属属属 于于于于 2a2a亚亚亚亚 类类类类 ， 2
19、b2b亚亚亚亚 类类类类 （ 如如如如 SHV-1SHV-1、TEM-1TEM-1），2b2b亚亚亚亚类类类类（如如如如TEM-3TEM-3、SHV-2SHV-2），2c2c亚亚亚亚类类类类 （ 如如如如 PSE-1PSE-1， PSE-4PSE-4） ,2d,2d亚亚亚亚 类类类类 （ 如如如如 OXA-1OXA-1和和和和PSE-2PSE-2），2e2e亚亚亚亚类类类类（如如如如FEC-1FEC-1）少少少少见见见见，由由由由大大大大部部部部分分分分G-G-菌菌菌菌产产产产生生生生。随随随随着着着着新新新新的的的的-内内内内酶酶酶酶胺胺胺胺类类类类抗抗抗抗生生生生素素素素的的的的临临临临床
20、床床床应应应应用用用用，由大部分由大部分由大部分由大部分G-G-菌产生。菌产生。菌产生。菌产生。随随随随着着着着新新新新的的的的-内内内内酶酶酶酶胺胺胺胺类类类类抗抗抗抗生生生生素素素素的的的的临临临临床床床床应应应应用用用用，新新新新的的的的酶酶酶酶类类类类不不不不断断断断产产产产生生生生，近近近近年年年年报报报报道道道道的的的的ESBLESBL可可可可能能能能来来来来源源源源于于于于TEMTEM和和和和SHVSHV酶酶酶酶，由由由由于于于于其其其其有有有有有有有有序序序序列列列列的的的的基基基基因因因因点点点点突突突突变变变变导导导导致致致致的的的的，该该该该酶酶酶酶最最最最早早早早发发发
21、发现现现现于于于于肺肺肺肺炎炎炎炎克克克克雷雷雷雷伯伯伯伯氏氏氏氏菌菌菌菌中中中中，仅仅仅仅局局局局限限限限于于于于少少少少数数数数肠肠肠肠杆杆杆杆菌菌菌菌和和和和肠肠肠肠球球球球菌菌菌菌中中中中，可可可可水水水水解解解解头头头头孢孢孢孢菌菌菌菌素素素素及及及及单单单单酰酰酰酰胺胺胺胺类类类类抗抗抗抗生生生生素素素素，特特特特别别别别表表表表现现现现为为为为相相相相应应应应的的的的产产产产酶酶酶酶菌菌菌菌对对对对头头头头孢孢孢孢噻噻噻噻肟肟肟肟、头头头头孢孢孢孢他他他他啶啶啶啶和和和和氨氨氨氨曲曲曲曲南南南南的的的的耐耐耐耐药药药药，并并并并可可可可引引引引起起起起对对对对其其其其氨氨氨氨基基
22、基基糖糖糖糖甙类抗生素的耐药。甙类抗生素的耐药。甙类抗生素的耐药。甙类抗生素的耐药。 新新新新近近近近研研研研究究究究发发发发现现现现，过过过过量量量量产产产产TEMTEM和和和和SHVSHV型型型型酶酶酶酶的的的的的的的的细细细细菌菌菌菌具具具具有有有有含含含含锌锌锌锌的的的的-内内内内酶酶酶酶胺胺胺胺金金金金属属属属酶酶酶酶，此此此此酶酶酶酶的的的的催催催催化化化化效效效效率率率率极极极极高高高高，不不不不仅仅仅仅存存存存在在在在于于于于窄窄窄窄食食食食假假假假单单单单胞胞胞胞菌菌菌菌中中中中，也也也也偶偶偶偶见见见见于于于于其其其其它它它它细细细细菌菌菌菌，此此此此酶酶酶酶对对对对碳碳碳
23、碳青青青青霉霉霉霉烯烯烯烯类类类类抗抗抗抗生生生生素素素素也也也也有有有有耐耐耐耐药药药药性性性性，且且且且不不不不易易易易受受受受酶酶酶酶抑抑抑抑制制制制剂剂剂剂的的的的影影影影响响响响。 内内内内酰酰酰酰胺胺胺胺酶酶酶酶阳阳阳阳性性性性的的的的嗜嗜嗜嗜血血血血杆杆杆杆菌菌菌菌属属属属、淋淋淋淋球球球球菌菌菌菌和和和和卡卡卡卡他他他他莫莫莫莫拉拉拉拉菌菌菌菌对对对对青青青青霉霉霉霉素素素素、氨氨氨氨苄苄苄苄西西西西林林林林和和和和阿阿阿阿莫莫莫莫西西西西林林林林耐耐耐耐药药药药；-内内内内酰酰酰酰胺胺胺胺酶酶酶酶阳阳阳阳性性性性的的的的葡葡葡葡萄萄萄萄球球球球菌菌菌菌和和和和肠肠肠肠球球球球
24、菌菌菌菌对对对对青青青青霉霉霉霉素素素素和和和和乙乙乙乙酰酰酰酰氨氨氨氨基基基基青青青青霉霉霉霉素素素素、羧羧羧羧基基基基青青青青霉霉霉霉素素素素和和和和脲脲脲脲基基基基青青青青霉霉霉霉素素素素耐耐耐耐药药药药。注注注注：只只只只对对对对嗜嗜嗜嗜血血血血杆杆杆杆菌菌菌菌属属属属，淋淋淋淋球球球球菌菌菌菌，卡卡卡卡那那那那莫莫莫莫拉拉拉拉菌菌菌菌、葡葡葡葡萄萄萄萄球球球球菌菌菌菌和和和和肠肠肠肠球球球球菌菌菌菌测测测测定定定定-内内内内酶酶酶酶胺胺胺胺酶酶酶酶，不不不不要要要要对对对对肠肠肠肠杆杆杆杆菌菌菌菌科科科科，假假假假单单单单胞胞胞胞菌菌菌菌属属属属及及及及其其其其他他他他需需需需氧氧氧
25、氧G-G-杆菌进行此试验。杆菌进行此试验。杆菌进行此试验。杆菌进行此试验。（2 2） ESBLs ESBLs 19831983年年年年由由由由khothekhothe在在在在德德德德国国国国发发发发现现现现，19851985年年年年正正正正式式式式报报报报道道道道，该该该该酶酶酶酶为为为为丝丝丝丝氨氨氨氨酸酸酸酸蛋蛋蛋蛋白白白白酶酶酶酶的的的的衍衍衍衍生生生生物物物物，它它它它是是是是由由由由于于于于-内内内内酰酰酰酰胺胺胺胺酶酶酶酶上上上上1 14 4位位位位点点点点氨氨氨氨基基基基酸酸酸酸发发发发生生生生了了了了突突突突变变变变，并并并并可可可可以以以以通通通通过过过过质质质质粒粒粒粒传传
26、传传播播播播，由由由由质质质质粒粒粒粒介介介介导导导导的的的的耐耐耐耐药药药药比比比比由由由由染染染染色色色色体体体体介介介介导导导导的的的的耐耐耐耐药药药药多多多多，它它它它可可可可在在在在不不不不同同同同菌菌菌菌株株株株、菌菌菌菌种种种种或或或或菌菌菌菌属属属属间间间间转转转转移移移移扩扩扩扩散散散散。突突突突变变变变产产产产生生生生的的的的ESBLsESBLs抗抗抗抗药药药药性性性性广广广广，且且且且在在在在ESBLSESBLS的的的的质质质质粒粒粒粒上上上上常常常常携携携携带带带带对对对对其其其其它它它它抗抗抗抗生生生生素素素素如如如如氨氨氨氨基基基基糖糖糖糖苷类及氟喹诺酮类的耐药基因
27、，呈多重耐药性。苷类及氟喹诺酮类的耐药基因，呈多重耐药性。苷类及氟喹诺酮类的耐药基因，呈多重耐药性。苷类及氟喹诺酮类的耐药基因，呈多重耐药性。ESBLSESBLS的的的的分分分分类类类类：根根根根据据据据酶酶酶酶的的的的来来来来源源源源可可可可分分分分为为为为TEMTEM系系系系列列列列：为为为为TEM1TEM1、TEM2TEM2的的的的突突突突变变变变酶酶酶酶，此此此此系系系系列列列列酶酶酶酶等等等等电电电电点点点点一一一一般般般般介介介介于于于于5.16.55.16.5，绝绝绝绝大大大大多多多多数数数数酶酶酶酶分分分分子子子子量量量量（MWMW）为为为为29KD29KD，从从从从TEM3T
28、EM3起起起起已已已已发发发发现现现现有有有有TEM-70TEM-70，而而而而且且且且还还还还在在在在增增增增加加加加；SHVSHV系系系系列列列列：此此此此系系系系列列列列酶酶酶酶的的的的等等等等电电电电点点点点较较较较高高高高，介介介介于于于于7.08.27.08.2，分分分分子子子子量量量量主主主主要要要要为为为为29KD29KD，从从从从SHV-2SHV-2起起起起，现现现现已已已已发发发发现现现现SHV-12SHV-12；非非非非TEMTEM和和和和SHVSHV系系系系列列列列。如如如如确确确确认认认认为为为为ESBLsESBLs菌菌菌菌株株株株，不不不不管管管管体体体体外外外外药
29、药药药敏敏敏敏试试试试验验验验的的的的结结结结果果果果如如如如何何何何，对对对对所所所所有有有有青青青青霉霉霉霉素素素素类类类类、头头头头孢孢孢孢菌菌菌菌素素素素类类类类和和和和氨氨氨氨曲曲曲曲南南南南均均均均应应应应报报报报告告告告耐耐耐耐药药药药。此此此此酶酶酶酶对对对对酶酶酶酶的的的的抑抑抑抑制制制制剂剂剂剂如如如如克克克克拉维酸、舒巴坦、他唑巴坦抑制。拉维酸、舒巴坦、他唑巴坦抑制。拉维酸、舒巴坦、他唑巴坦抑制。拉维酸、舒巴坦、他唑巴坦抑制。（3 3）AmpCAmpC酶酶酶酶：19761976年年年年开开开开始始始始研研研研究究究究，但但但但直直直直到到到到19901990年年年年由由由
30、由PaPani PaPani ColaollColaoll等等等等才才才才首首首首先先先先证证证证实实实实了了了了此此此此酶酶酶酶的的的的存存存存在在在在。由由由由染染染染色色色色体体体体介介介介导导导导的的的的AmpCAmpC酶酶酶酶已已已已发发发发现现现现5050多多多多种种种种，基基基基因因因因带带带带有有有有调调调调控控控控序序序序列列列列，呈呈呈呈诱诱诱诱导导导导型型型型表表表表达达达达，酶酶酶酶的的的的活活活活性性性性不不不不被被被被克克克克拉拉拉拉维维维维酸酸酸酸、EDTAEDTA抑抑抑抑制制制制，可可可可被被被被邻邻邻邻氯氯氯氯西西西西林林林林、头头头头孢孢孢孢西西西西丁丁丁丁
31、、BRL-42715BRL-42715、RO47RO47、RO48RO48等等等等抑抑抑抑制制制制剂剂剂剂抑抑抑抑制制制制。携携携携带带带带染染染染色色色色体体体体型型型型AmPCAmPC基基基基因因因因的的的的细细细细菌菌菌菌主主主主要要要要有有有有肠肠肠肠杆杆杆杆菌菌菌菌科科科科、不不不不动动动动杆杆杆杆菌菌菌菌属属属属、绿绿绿绿脓脓脓脓杆杆杆杆菌菌菌菌等等等等，根根根根据据据据产产产产酶酶酶酶水水水水平平平平的的的的高高高高低低低低和和和和表表表表达达达达方方方方式式式式可可可可分分分分为为为为：野野野野生生生生型型型型，通通通通常常常常所所所所定定定定义义义义的的的的AmpCAmpC酶
32、酶酶酶属属属属于于于于此此此此型型型型；基基基基础础础础型型型型、低低低低水水水水平平平平非非非非诱诱诱诱导导导导型型型型表表表表达达达达，临临临临床床床床定定定定义义义义不不不不大大大大，如如如如E.ColiE.Coli的的的的染染染染色色色色体体体体型型型型AmpCAmpC酶酶酶酶；高高高高诱诱诱诱导导导导型型型型，诱诱诱诱导导导导后后后后的的的的产产产产酶酶酶酶水水水水平平平平远远远远高高高高于于于于野野野野生生生生型型型型；去去去去阻阻阻阻遏遏遏遏突突突突变变变变型型型型，持持持持续续续续或或或或半半半半持持持持续续续续高高高高水水水水平产酶。平产酶。平产酶。平产酶。 由由由由质质质质
33、粒粒粒粒介介介介导导导导的的的的酶酶酶酶可可可可分分分分5 56 6组组组组：弗弗弗弗氏氏氏氏枸枸枸枸橼橼橼橼酸酸酸酸杆杆杆杆菌菌菌菌组组组组有有有有LATLAT型型型型和和和和某某某某些些些些CMYCMY型型型型，肠肠肠肠杆杆杆杆菌菌菌菌属属属属有有有有MIR-1MIR-1型型型型和和和和ACT-ACT-1 1型型型型，摩摩摩摩根根根根摩摩摩摩根根根根组组组组有有有有DHA-1DHA-1型型型型和和和和DHA-2DHA-2型型型型，气气气气单单单单胞胞胞胞菌菌菌菌组组组组有有有有MOXMOX型型型型、FOXFOX型型型型和和和和其其其其他他他他CMYCMY型型型型等等等等。质质质质粒粒粒粒上
34、上上上的的的的AmpCAmpC酶酶酶酶基基基基因因因因大大大大小小小小从从从从7 7180kb180kb。酶酶酶酶分分分分子子子子大大大大小小小小约约约约383842KD42KD，具具具具有有有有378378386386个个个个氨氨氨氨基基基基酸酸酸酸。高高高高产产产产AmpCAmpC酶酶酶酶细细细细菌菌菌菌通通通通常常常常对对对对第第第第四四四四代代代代头头头头孢孢孢孢菌菌菌菌（如如如如头头头头孢孢孢孢吡吡吡吡肟肟肟肟）敏敏敏敏感感感感，对对对对碳碳碳碳青青青青霉霉霉霉烯烯烯烯类类类类敏敏敏敏感感感感，对对对对头头头头霉霉霉霉素素素素类类类类（如如如如头头头头孢孢孢孢西西西西汀汀汀汀）耐耐耐
35、耐药药药药，不不不不被被被被酶酶酶酶抑抑抑抑制制制制剂剂剂剂所所所所抑抑抑抑制制制制。如如如如果果果果分分分分离离离离的的的的菌菌菌菌株株株株对对对对三三三三代代代代头头头头孢孢孢孢菌菌菌菌素素素素耐耐耐耐药药药药，且且且且不不不不能能能能被被被被克克克克拉拉拉拉维维维维酸酸酸酸抑抑抑抑制制制制、对对对对泰泰泰泰能能能能敏敏敏敏感感感感、对对对对头孢西汀耐药可初步推断为高产头孢西汀耐药可初步推断为高产头孢西汀耐药可初步推断为高产头孢西汀耐药可初步推断为高产AmpCAmpC酶的细菌。酶的细菌。酶的细菌。酶的细菌。（4 4）氨氨氨氨基基基基糖糖糖糖甙甙甙甙类类类类灭灭灭灭活活活活酶酶酶酶 双双双双
36、功功功功能能能能的的的的氨氨氨氨基基基基糖糖糖糖甙甙甙甙类类类类灭灭灭灭活活活活酶酶酶酶（6-N-6-N-氨氨氨氨基基基基糖糖糖糖甙甙甙甙类类类类乙乙乙乙酰酰酰酰转转转转移移移移酶酶酶酶，2-O-2-O-氨氨氨氨基基基基糖糖糖糖甙甙甙甙类类类类磷磷磷磷酶酶酶酶转转转转移移移移酶酶酶酶）是是是是葡葡葡葡萄萄萄萄球球球球菌菌菌菌和和和和肠肠肠肠球球球球菌菌菌菌高高高高水水水水平平平平耐耐耐耐氨氨氨氨基基基基糖糖糖糖甙甙甙甙类类类类药药药药物物物物的的的的重重重重要要要要机机机机制制制制。此此此此酶酶酶酶在在在在分分分分子子子子不不不不同同同同的的的的区区区区域域域域内内内内存存存存在在在在两两两两
37、种种种种不不不不同同同同的的的的氨氨氨氨基基基基糖糖糖糖甙甙甙甙改改改改造造造造因因因因子子子子，是是是是由由由由Th4100Th4100转转转转座座座座子子子子内内内内6-aac-a-26-aac-a-2基基基基因因因因编编编编码码码码合合合合成成成成，该该该该基基基基因因因因可可可可插插插插入入入入R R质质质质粒粒粒粒及及及及氨氨氨氨基基基基糖糖糖糖甙甙甙甙类类类类抗抗抗抗生生生生素素素素染染染染色色色色体体体体基基基基因因因因中中中中，导导导导致致致致在在在在G+G+菌菌菌菌中中中中氨氨氨氨基基基基糖糖糖糖甙甙甙甙类类类类抗抗抗抗性性性性的的的的快快快快速速速速传传传传播播播播。这这这
38、这种种种种双双双双功功功功能能能能酶酶酶酶与与与与其其其其它它它它抗抗抗抗生生生生素素素素抗抗抗抗性性性性因因因因子子子子无无无无任任任任何何何何基基基基因因因因关关关关联联联联，真真真真核核核核蛋蛋蛋蛋白白白白激激激激酶酶酶酶抑抑抑抑制制制制剂剂剂剂能能能能抑抑抑抑制制制制磷磷磷磷酸酸酸酸转转转转移移移移酶酶酶酶的的的的活活活活性性性性，提提提提示示示示这这这这种种种种双双双双功功功功能能能能酶酶酶酶可可可可能能能能是是是是蛋蛋蛋蛋白白白白质质质质家家家家族族族族中中中中的的的的两两两两种种种种普普普普通通通通结结结结构构构构，为为为为临临临临床床床床提提提提供供供供开开开开发发发发这这这这
39、种种种种功功功功能能能能酶酶酶酶抑抑抑抑制制制制剂的可能。剂的可能。剂的可能。剂的可能。 （5 5）乙乙乙乙酰酰酰酰基基基基转转转转移移移移酶酶酶酶 某某某某些些些些细细细细菌菌菌菌（如如如如金金金金黄黄黄黄色色色色葡葡葡葡萄萄萄萄球球球球菌菌菌菌、表表表表皮皮皮皮葡葡葡葡萄萄萄萄球球球球菌菌菌菌、肠肠肠肠球球球球菌菌菌菌、肺肺肺肺炎炎炎炎球球球球菌菌菌菌及及及及流流流流感感感感嗜嗜嗜嗜血血血血杆杆杆杆菌菌菌菌等等等等）对对对对氯氯氯氯霉霉霉霉素素素素耐耐耐耐药药药药性性性性主主主主要要要要是是是是由由由由于于于于质质质质粒粒粒粒编编编编码码码码产产产产生生生生的的的的乙乙乙乙酰酰酰酰基基基基
40、转转转转移移移移酶酶酶酶所所所所致致致致，该该该该酶酶酶酶使使使使氯氯氯氯霉霉霉霉素素素素转转转转化化化化为为为为无无无无活活活活性的代谢产物，失去抗菌活性。性的代谢产物，失去抗菌活性。性的代谢产物，失去抗菌活性。性的代谢产物，失去抗菌活性。（6 6） 拓拓拓拓扑扑扑扑异异异异构构构构酶酶酶酶 该该该该酶酶酶酶又又又又称称称称DNADNA旋旋旋旋转转转转酶酶酶酶，由由由由gyrAgyrA和和和和gyrBgyrB编编编编码码码码，基基基基因因因因的的的的突突突突变变变变引引引引起起起起靶靶靶靶酶酶酶酶DNADNA旋旋旋旋转转转转酶酶酶酶的的的的改改改改变变变变，使使使使喹喹喹喹诺诺诺诺酮酮酮酮类
41、类类类药药药药物物物物失失失失去去去去抑抑抑抑制制制制此此此此酶酶酶酶的的的的活活活活性性性性，而而而而使使使使细细细细菌菌菌菌获获获获得得得得耐耐耐耐药药药药。基基基基因因因因的的的的突突突突变变变变常常常常位位位位于于于于60-10660-106残残残残基基基基区区区区域域域域内内内内，在在在在大大大大肠肠肠肠杆杆杆杆菌菌菌菌中中中中约约约约为为为为第第第第8383个个个个丝丝丝丝氨氨氨氨酸酸酸酸，金金金金黄黄黄黄色葡萄球菌中为第色葡萄球菌中为第色葡萄球菌中为第色葡萄球菌中为第8484个丝氨酸。个丝氨酸。个丝氨酸。个丝氨酸。 2. 2.菌菌菌菌膜膜膜膜通通通通透透透透性性性性的的的的改改改
42、改变变变变 由由由由于于于于药药药药物物物物的的的的作作作作用用用用，细细细细菌菌菌菌改改改改变变变变了了了了外外外外膜膜膜膜蛋蛋蛋蛋白白白白，使使使使菌菌菌菌体体体体外外外外膜膜膜膜通通通通透透透透性性性性降降降降低低低低，阻阻阻阻碍碍碍碍抗抗抗抗生生生生素素素素进进进进入入入入细细细细菌菌菌菌内内内内膜膜膜膜靶靶靶靶位位位位。外外外外膜膜膜膜通通通通透透透透性性性性降降降降低低低低主主主主要要要要由由由由于于于于膜膜膜膜孔孔孔孔蛋蛋蛋蛋白白白白缺缺缺缺陷陷陷陷、多多多多向向向向性性性性突突突突变变变变、特特特特异异异异性性性性通通通通道道道道的的的的改改改改变变变变及及及及膜膜膜膜脂脂脂脂
43、质质质质双双双双层层层层的的的的改改改改变变变变。常常常常见见见见于于于于假假假假单单单单胞胞胞胞菌菌菌菌、醋醋醋醋酸酸酸酸钙钙钙钙不不不不动动动动杆杆杆杆菌菌菌菌、肠肠肠肠球球球球菌菌菌菌等等等等对对对对B-B-内内内内酰酰酰酰胺胺胺胺类类类类、氨氨氨氨基基基基糖糖糖糖甙甙甙甙类类类类、氯霉素、喹诺酮类抗生素的耐药。氯霉素、喹诺酮类抗生素的耐药。氯霉素、喹诺酮类抗生素的耐药。氯霉素、喹诺酮类抗生素的耐药。3. 3.改改改改变变变变抗抗抗抗生生生生素素素素的的的的作作作作用用用用靶靶靶靶位位位位 细细细细菌菌菌菌在在在在抗抗抗抗生生生生素素素素的的的的作作作作用用用用下下下下通通通通过过过过产
44、产产产生生生生诱诱诱诱导导导导酶酶酶酶对对对对菌菌菌菌体体体体成成成成分分分分进进进进行行行行化化化化学学学学修修修修饰饰饰饰，使使使使其其其其与与与与抗抗抗抗生生生生素素素素结结结结合合合合的的的的有有有有效效效效部部部部位位位位变变变变异异异异，使使使使药药药药物物物物不不不不敏敏敏敏感感感感，而而而而细细细细菌菌菌菌的的的的生生生生理理理理功功功功能能能能正正正正常常常常。常常常常见见见见的的的的药药药药物物物物有有有有甲甲甲甲氧氧氧氧苄苄苄苄胺胺胺胺嘧嘧嘧嘧啶啶啶啶、磺磺磺磺胺胺胺胺类类类类、氨氨氨氨基基基基糖糖糖糖甙甙甙甙类类类类、氯氯氯氯霉霉霉霉素素素素、喹喹喹喹诺诺诺诺酮酮酮酮类
45、类类类药药药药物物物物。如如如如DNADNA中中中中A A位位位位点点点点基基基基因因因因的的的的突突突突变变变变导导导导致致致致回回回回旋旋旋旋改改改改变变变变造造造造成成成成喹喹喹喹诺诺诺诺酮酮酮酮类类类类耐耐耐耐药药药药；核核核核糖糖糖糖体体体体RNARNA甲甲甲甲基基基基化化化化抑抑抑抑制制制制红红红红霉霉霉霉素素素素结结结结合合合合；PBPPBP的的的的改改改改变变变变导导导导致致致致对对对对B-B-内内内内酰酰酰酰胺胺胺胺类类类类抗抗抗抗生生生生素素素素的的的的耐耐耐耐药药药药，PBPPBP的的的的改改改改变变变变主主主主要要要要有有有有PBPPBP数数数数量量量量改改改改变变变变
46、或或或或缺缺缺缺失失失失、药药药药物物物物与与与与PBPPBP的的的的结结结结合合合合力力力力降降降降低低低低、细细细细菌菌菌菌产产产产生生生生诱诱诱诱导导导导型型型型PBPPBP或或或或缓慢结合的缓慢结合的缓慢结合的缓慢结合的PBPPBP。 这这这这种种种种由由由由PBPPBP介介介介导导导导的的的的耐耐耐耐药药药药性性性性在在在在G+G+菌菌菌菌中中中中较较较较G-G-菌菌菌菌更更更更常常常常见见见见，最最最最常常常常见见见见于于于于耐耐耐耐甲甲甲甲氧氧氧氧西西西西林林林林的的的的葡葡葡葡萄萄萄萄球球球球菌菌菌菌，主主主主要要要要与与与与PBP2aPBP2a的的的的存存存存在在在在有有有有
47、关关关关，该该该该蛋蛋蛋蛋白白白白是是是是一一一一种种种种转转转转肽肽肽肽酶酶酶酶，负负负负责责责责细细细细胞胞胞胞壁壁壁壁的的的的合合合合成成成成，且且且且由由由由mecAmecA基基基基因因因因编编编编码码码码，位位位位于于于于DNADNA外外外外区区区区域域域域mecmec内内内内， 受受受受质质质质粒粒粒粒携携携携带带带带的的的的blaRI-blaIblaRI-blaI诱诱诱诱导导导导抑抑抑抑制制制制子子子子及及及及mecRI-mecImecRI-mecI基基基基因因因因所所所所编编编编码码码码的的的的蛋蛋蛋蛋白白白白质质质质调调调调控控控控的的的的，在在在在抗抗抗抗生生生生素素素素的
48、的的的治治治治疗疗疗疗中中中中，mecAmecA基基基基因因因因编编编编码码码码产产产产生生生生OXAOXA系系系系列列列列酶酶酶酶，诱诱诱诱导导导导表表表表达达达达产产产产生生生生大大大大量量量量的的的的PBPPBP，使使使使药药药药物物物物不不不不易易易易与与与与胞胞胞胞壁壁壁壁结结结结合合合合，导导导导致致致致药药药药物物物物的的的的作作作作用降低或失活。用降低或失活。用降低或失活。用降低或失活。4. 4.产产产产生生生生药药药药物物物物代代代代谢谢谢谢的的的的旁旁旁旁路路路路 抗抗抗抗生生生生素素素素可可可可与与与与靶靶靶靶位位位位结结结结合合合合，但但但但靶靶靶靶位位位位的的的的生生
49、生生理理理理作作作作用用用用已已已已被被被被某某某某种种种种新新新新生生生生成成成成份份份份代代代代替替替替，如如如如G+G+菌菌菌菌耐耐耐耐灰黄霉素的机制可能与其产生旁路有关。灰黄霉素的机制可能与其产生旁路有关。灰黄霉素的机制可能与其产生旁路有关。灰黄霉素的机制可能与其产生旁路有关。 5.产产生生耐耐受受 对对-内内酰酰胺胺类类杀杀菌菌效效应应的的耐耐受受发发生生在在抗抗生生素素低低浓浓度度时时，细细菌菌的的生生长长状状态态被被抑抑制制，需需很很高高浓浓度度才才能能将将其其杀杀灭灭，呈呈最最低低仰仰菌菌与与最最低低杀杀菌菌浓浓度度分分离离，这这是是由由于于细细菌菌过过度度分分泌泌自自溶溶抑抑
50、制制因因子子而而降降低低了了细细菌菌的的自自溶溶性性，这这种种耐耐受受性性表表现现为为细细菌菌虽虽不不对对B-内内酰酰胺胺类类抗抗生生素素耐耐药药，但但仍仍不不被被杀杀灭灭，致致使使抗抗生生素素治治疗疗效效果果不不佳佳，噬噬菌菌体体可可能能与与非非耐耐受性转化有关，但其转染机理不明。受性转化有关，但其转染机理不明。6. 6. 产产产产生生生生导导导导出出出出泵泵泵泵 导导导导出出出出泵泵泵泵的的的的产产产产生生生生是是是是受受受受流流流流出出出出基基基基因因因因控控控控制制制制的的的的，此此此此基基基基因因因因存存存存在在在在于于于于质质质质粒粒粒粒上上上上，在在在在G-G-肠肠肠肠杆杆杆杆菌
51、菌菌菌中中中中该该该该基基基基因因因因受受受受抑抑抑抑制制制制子子子子调调调调控控控控，在在在在G+G+菌菌菌菌中中中中此此此此基基基基因因因因受受受受减减减减毒毒毒毒机机机机制制制制调调调调控控控控，如如如如G+G+菌菌菌菌对对对对四四四四环环环环素素素素的的的的耐耐耐耐药药药药性性性性主主主主要要要要是是是是导导导导出出出出泵泵泵泵的的的的建建建建立立立立和和和和核核核核糖糖糖糖体体体体的的的的保保保保护护护护作作作作用用用用，至至至至少少少少有有有有一一一一种种种种核核核核糖糖糖糖体体体体保保保保护护护护基基基基因因因因受受受受减减减减毒毒毒毒机机机机制制制制调调调调控控控控，且且且且其
52、其其其耐耐耐耐药药药药流流流流出出出出基基基基因因因因可可可可以以以以在在在在不不不不同同同同的的的的细细细细菌菌菌菌间间间间传传传传递递递递。与与与与核核核核糖糖糖糖体体体体保保保保护护护护性性性性相相相相关关关关的的的的基基基基因因因因既既既既存存存存在在在在于于于于质质质质粒粒粒粒上上上上，也也也也存存存存在在在在于于于于染染染染色色色色体体体体的的的的共共共共轭轭轭轭转转转转座座座座子子子子上上上上，该该该该转转转转座座座座子子子子最最最最初初初初发发发发现现现现于于于于链链链链球球球球菌菌菌菌中中中中，可可可可转转转转染染染染给给给给其其其其它它它它G+G+菌菌菌菌、G-G-菌菌菌菌
53、及及及及支支支支原原原原体体体体，四四四四环环环环素素素素耐耐耐耐药药药药基基基基因因因因和和和和基基基基因因因因的的的的刺刺刺刺激激激激转转转转导对其它受体菌来说具有双重效应。导对其它受体菌来说具有双重效应。导对其它受体菌来说具有双重效应。导对其它受体菌来说具有双重效应。 另另另另外外外外，G-G-杆杆杆杆菌菌菌菌导导导导出出出出泵泵泵泵的的的的建建建建立立立立，易易易易造造造造成成成成多多多多重重重重耐耐耐耐药药药药，已已已已发发发发现现现现旋旋旋旋转转转转酶酶酶酶突突突突变变变变与与与与导导导导出出出出性性性性耐耐耐耐药药药药机机机机制制制制共共共共同同同同存存存存在在在在，多多多多重重
54、重重耐耐耐耐药药药药机机机机制制制制在在在在同同同同一一一一菌菌菌菌株株株株中中中中同同同同时时时时产产产产生生生生，容容容容易易易易产产产产生生生生对药物的高度耐药。对药物的高度耐药。对药物的高度耐药。对药物的高度耐药。7.超级整合子超级整合子(基因盒基因盒) 铜铜绿绿假假单单胞胞菌菌对对碳碳青青酶酶稀稀类类的的泵泵出出机机制制：美美平平/ /泰泰能能(MIC) (MIC) 11占占17.6%17.6%。( (国外国外15%-35%)15%-35%)。 超级整合子（耐药基因盒）：超级整合子（耐药基因盒）：10.26%10.26%。耐药筛选耐药筛选细菌耐药的主要机制细菌耐药的主要机制 抗生素靶
55、位点改变抗生素靶位点改变 ,孔蛋白改变，孔蛋白改变，细胞壁细胞壁/膜膜 通透性改变通透性改变,超级整合子超级整合子(基因盒基因盒)产生灭活酶产生灭活酶新的耐药细菌新的耐药细菌突变突变XX耐药细菌的扩散敏感细菌敏感细菌耐药细菌耐药细菌耐药基因转移耐药基因转移耐药细菌感染的后果耐药细菌感染的后果n n细菌耐药的直接后果细菌耐药的直接后果 增加患者住院时间与住院率增加患者住院时间与住院率 增加死亡率增加死亡率 增加感染发病率增加感染发病率(MRSA, VRE, ESBL)(MRSA, VRE, ESBL) 增加医疗费用增加医疗费用 抗生素后时代抗生素后时代n n间接后果间接后果 无法治疗的感染无法治
56、疗的感染 对生产力损失对生产力损失n n估计美国每年损失：估计美国每年损失： $40$40亿美圆亿美圆关于药物的几个概念（1 1）抗感染药物（抗感染药物（anti-infective agentsanti-infective agents）” ”包括用以治疗各种病包括用以治疗各种病原体（病毒、衣原体、支原体、立克次体、细菌、螺旋体、真菌、原原体（病毒、衣原体、支原体、立克次体、细菌、螺旋体、真菌、原虫、蠕虫等）所致感染的各种药物虫、蠕虫等）所致感染的各种药物“ “（2 2）抗微生物药物（）抗微生物药物（anti-micyobialanti-micyobial）较抗感染药物略窄，抗蠕虫药）较抗感
57、染药物略窄，抗蠕虫药物一般不包括在内物一般不包括在内（3 3）抗生素（）抗生素（antibioticsantibiotics）：在高稀释度下对一些特异微生物有杀灭）：在高稀释度下对一些特异微生物有杀灭或抑制作用的微生物产物。以后将用化学方法合成的仿制品，具有抗或抑制作用的微生物产物。以后将用化学方法合成的仿制品，具有抗肿瘤、寄生虫等作用的微生物产物，以及抗生素的半合成衍生物等也肿瘤、寄生虫等作用的微生物产物，以及抗生素的半合成衍生物等也统称为抗生素。但非微生物产物的全合成药物如喹诺酮类、咪唑类等统称为抗生素。但非微生物产物的全合成药物如喹诺酮类、咪唑类等不应列入抗生素。不应列入抗生素。（4 4
58、）抗菌素（）抗菌素（antibacterialantibacterial）：此名称现已摒弃不用）：此名称现已摒弃不用（5 5）抗菌药物（）抗菌药物（antibacterial agentsantibacterial agents）：指具有杀菌或抑菌活性，）：指具有杀菌或抑菌活性，主要供全身应用（含口服、肌注、静注、静滴等，部分也可用于局部）主要供全身应用（含口服、肌注、静注、静滴等，部分也可用于局部）的各种抗生素、磺胺药、异烟肼、咪唑类、硝咪唑类、喹诺酮类、呋的各种抗生素、磺胺药、异烟肼、咪唑类、硝咪唑类、喹诺酮类、呋喃类等化学药物。喃类等化学药物。（6 6）化学治疗药（）化学治疗药（chem
59、otherapeutic agentschemotherapeutic agents）：应用于临床上一切）：应用于临床上一切具有化学结构（含尚未阐明者）的药物统称。具有化学结构（含尚未阐明者）的药物统称。 对对对对当当当当前前前前临临临临床床床床上上上上面面面面临临临临严严严严峻峻峻峻的的的的细细细细菌菌菌菌耐耐耐耐药药药药性性性性及及及及其其其其发发发发展展展展，耐耐耐耐药药药药性性性性从从从从G-G-杆杆杆杆菌菌菌菌发发发发展展展展到到到到G+G+球球球球菌菌菌菌，由由由由院院院院内内内内感感感感染染染染发发发发展展展展到到到到院院院院外外外外感感感感染染染染。对对对对耐耐耐耐药药药药菌菌
60、菌菌感感感感染染染染的的的的治治治治疗疗疗疗尚尚尚尚无无无无可可可可靠靠靠靠的的的的药药药药物物物物，对对对对预预预预防防防防和和和和控控控控制制制制耐耐耐耐药药药药菌菌菌菌的的的的出出出出现现现现和和和和传传传传播播播播尤尤尤尤为为为为重重重重要要要要，我我我我们们们们应应应应采采采采取取取取积积积积极极极极有有有有效效效效的的的的措措措措施施施施来来来来保保保保护护护护人人人人类类类类的的的的健健健健康康康康。控控控控制制制制细细细细菌菌菌菌耐耐耐耐药药药药性性性性的的的的对对对对策策策策主主主主要要要要有有有有：加加加加强强强强对对对对已已已已出出出出现现现现的的的的耐耐耐耐药药药药菌菌
61、菌菌进进进进行行行行动动动动态态态态耐耐耐耐药药药药性性性性监监监监测测测测，争争争争取取取取及及及及早早早早作作作作出出出出病病病病原原原原学学学学诊诊诊诊断断断断，有有有有针针针针对对对对性性性性选选选选择择择择抗抗抗抗生生生生素素素素；加加加加强强强强和和和和严严严严格格格格执执执执行行行行消消消消毒毒毒毒隔隔隔隔离离离离制制制制度度度度，尤尤尤尤其其其其是是是是在在在在耐耐耐耐药药药药菌菌菌菌严严严严重重重重感感感感染染染染的的的的重重重重症症症症监监监监护护护护病病病病房房房房等等等等单单单单位位位位，防防防防止止止止交交交交叉叉叉叉感感感感染染染染；合合合合理理理理应应应应用用用用
62、抗抗抗抗生生生生素素素素，严严严严格掌握用药原则。格掌握用药原则。格掌握用药原则。格掌握用药原则。 从从从从目目目目前前前前来来来来看看看看，通通通通过过过过研研研研究究究究新新新新的的的的抗抗抗抗生生生生素素素素和和和和消消消消除除除除细细细细菌菌菌菌耐耐耐耐药药药药性性性性基基基基因因因因来来来来控控控控制制制制细细细细菌菌菌菌耐耐耐耐药药药药性性性性还还还还未未未未取取取取得得得得令令令令人人人人满满满满意意意意的的的的进进进进展展展展，因因因因此此此此对对对对抗抗抗抗生生生生素素素素的的的的使使使使用用用用进进进进行行行行宏宏宏宏观观观观管管管管理理理理与与与与控控控控制制制制是是是是
63、减减减减少少少少耐耐耐耐药药药药性性性性产产产产生生生生的的的的重重重重要要要要措措措措施施施施，如如如如尽尽尽尽量量量量减减减减少少少少青青青青霉霉霉霉素素素素的的的的预预预预防防防防性性性性应应应应用用用用，控控控控制制制制第第第第三三三三代代代代头头头头孢孢孢孢菌菌菌菌素素素素及及及及其其其其它它它它新新新新的的的的B-B-内内内内酰酰酰酰胺胺胺胺类类类类、氟氟氟氟喹喹喹喹诺诺诺诺酮酮酮酮类类类类药药药药物物物物的的的的大大大大量量量量应应应应用用用用，根根根根据据据据临临临临床床床床细细细细菌菌菌菌药药药药敏敏敏敏感感感感结结结结果果果果、患患患患者者者者自自自自身身身身感感感感染染染
64、染状状状状况况况况合合合合理理理理选选选选择择择择抗抗抗抗生生生生素素素素联联联联合合合合应应应应用用用用；4 4研研研研制制制制新新新新的的的的抗抗抗抗生生生生素素素素，对对对对产产产产酶酶酶酶菌菌菌菌开开开开发发发发新新新新型型型型稳稳稳稳定定定定的的的的制制制制剂剂剂剂，如如如如对对对对青青青青霉霉霉霉素素素素和和和和头头头头孢孢孢孢菌菌菌菌素素素素用用用用取取取取代代代代基基基基替替替替代代代代6-6-氨氨氨氨基基基基青青青青霉霉霉霉烷烷烷烷酸酸酸酸或或或或7-7-氨氨氨氨基基基基头头头头孢孢孢孢烷烷烷烷酸酸酸酸的的的的氨氨氨氨基基基基酸酸酸酸组组组组，或或或或用用用用a-a-甲甲甲甲
65、氧氧氧氧基基基基替替替替代代代代青青青青霉霉霉霉素素素素中中中中的的的的6 6碳碳碳碳和和和和头头头头孢孢孢孢菌菌菌菌素素素素中中中中7 7碳碳碳碳上上上上的的的的氢氢氢氢，对对对对羧羧羧羧苄苄苄苄青青青青霉霉霉霉素素素素可可可可结结结结合合合合一一一一个个个个6-6-氢氢氢氢氧氧氧氧基基基基组组组组分分分分，使使使使抗抗抗抗生生生生素素素素增增增增强强强强B-B-内内内内酰酰酰酰胺酶的水解能力。胺酶的水解能力。胺酶的水解能力。胺酶的水解能力。 开开开开发发发发G+G+球球球球菌菌菌菌感感感感染染染染治治治治疗疗疗疗的的的的有有有有效效效效药药药药物物物物，如如如如链链链链阳阳阳阳菌菌菌菌素素
66、素素为为为为原原原原始始始始霉霉霉霉素素素素的的的的衍衍衍衍生生生生物物物物，可可可可与与与与细细细细菌菌菌菌核核核核糖糖糖糖体体体体50s50s亚亚亚亚基基基基中中中中的的的的不不不不同同同同位位位位点点点点结结结结合合合合，抑抑抑抑制制制制蛋蛋蛋蛋白白白白质质质质的的的的合合合合成成成成，达达达达到到到到杀杀杀杀菌菌菌菌的的的的目目目目的的的的，该该该该药药药药主主主主要要要要用用用用于于于于耐耐耐耐甲甲甲甲氧氧氧氧西西西西林林林林的的的的葡葡葡葡萄萄萄萄球球球球菌菌菌菌、链链链链球球球球菌菌菌菌、肺肺肺肺炎炎炎炎球球球球菌菌菌菌及及及及流流流流感感感感杆杆杆杆菌菌菌菌、奈奈奈奈瑟瑟瑟瑟氏
67、氏氏氏菌菌菌菌属属属属、卡卡卡卡他他他他莫莫莫莫拉拉拉拉氏氏氏氏菌菌菌菌等等等等感感感感染染染染的的的的治治治治疗疗疗疗；甘甘甘甘氨氨氨氨酰酰酰酰环环环环素素素素为为为为多多多多四四四四环环环环素素素素与与与与米米米米诺诺诺诺环环环环素素素素的的的的半半半半合合合合成成成成衍衍衍衍生生生生物物物物，对对对对MRSAMRSA、MSSAMSSA、肠肠肠肠球球球球菌菌菌菌、链链链链球球球球菌菌菌菌属属属属、肺肺肺肺炎炎炎炎球球球球菌菌菌菌有有有有强强强强大大大大的的的的作作作作用用用用，对对对对G-G-杆杆杆杆菌菌菌菌和和和和厌厌厌厌氧氧氧氧菌菌菌菌亦亦亦亦有有有有良良良良好好好好作作作作用用用用，
68、可可可可能能能能成成成成为为为为治治治治疗疗疗疗多多多多重重重重药药药药菌菌菌菌感感感感染染染染的的的的有有有有效效效效药药药药物物物物；2-2-吡吡吡吡啶啶啶啶酮酮酮酮类类类类药药药药物物物物其其其其结结结结构构构构与与与与氟氟氟氟喹喹喹喹诺诺诺诺酮酮酮酮类类类类相相相相似似似似，其其其其抗抗抗抗菌菌菌菌谱谱谱谱广广广广，对对对对各各各各种种种种G-G-杆杆杆杆菌菌菌菌、G+G+球球球球菌菌菌菌及及及及厌厌厌厌养养养养菌菌菌菌均均均均有有有有良良良良好好好好的的的的抗抗抗抗菌菌菌菌活活活活性性性性，可可可可能能能能适适适适用用用用于于于于各各各各种种种种呼呼呼呼吸吸吸吸道道道道、皮皮皮皮肤肤
69、肤肤、软软软软组组组组织织织织及及及及尿尿尿尿路路路路感感感感染染染染，以及作为严重感染的经验用药；以及作为严重感染的经验用药；以及作为严重感染的经验用药；以及作为严重感染的经验用药； 恶恶恶恶唑唑唑唑烷烷烷烷酮酮酮酮类类类类为为为为全全全全新新新新的的的的化化化化学学学学结结结结构构构构，以以以以U-100592U-100592、U-U-100766100766为为为为代代代代表表表表，与与与与已已已已知知知知抗抗抗抗生生生生素素素素无无无无交交交交叉叉叉叉耐耐耐耐药药药药，对对对对G+G+球球球球菌菌菌菌有有有有强强强强大大大大的的的的杀杀杀杀菌菌菌菌作作作作用用用用，对对对对厌厌厌厌养养
70、养养菌菌菌菌、结结结结核核核核杆杆杆杆菌菌菌菌也也也也有有有有良良良良好好好好作作作作用用用用，但但但但对对对对G-G-杆杆杆杆菌菌菌菌无无无无作作作作用用用用，机机机机理理理理为为为为作作作作用用用用于于于于细细细细菌菌菌菌蛋蛋蛋蛋白白白白合合合合成成成成的的的的起起起起始始始始阶阶阶阶段段段段，抑抑抑抑制制制制30s30s核核核核糖糖糖糖体体体体起起起起始始始始复复复复合合合合物物物物的的的的形形形形成成成成，该该该该药药药药有有有有望望望望成成成成为为为为临临临临床床床床治治治治疗疗疗疗耐耐耐耐药药药药性性性性G+G+菌菌菌菌感感感感染染染染最最最最有有有有效效效效药药药药物物物物。研研
71、研研究究究究消消消消除除除除耐耐耐耐药药药药质质质质粒粒粒粒。细细细细菌菌菌菌的的的的耐耐耐耐药药药药性性性性大大大大多多多多由由由由其其其其质质质质粒粒粒粒上上上上的的的的耐耐耐耐药药药药基基基基因因因因控控控控制制制制的的的的，如如如如能能能能消消消消除除除除细细细细菌菌菌菌中中中中的的的的耐耐耐耐药药药药质质质质粒粒粒粒，则则则则可可可可降降降降低低低低细细细细菌菌菌菌的的的的耐耐耐耐药药药药性性性性，到到到到现现现现在在在在为为为为止止止止，国国国国际际际际上上上上还还还还没没没没有有有有一一一一个个个个较较较较好好好好的的的的可可可可供供供供体体体体内内内内使使使使用用用用的的的的清
72、清清清除除除除R R质质质质粒粒粒粒的的的的方方方方法法法法，这这这这方方方方面面面面研研研研究究究究的的的的难难难难度度度度很很很很大大大大，但但但但仍仍仍仍需需需需继继继继续续续续努努努努力力力力。进进进进一一一一步步步步深深深深入入入入研研研研究究究究细细细细菌菌菌菌的的的的耐耐耐耐药药药药机机机机制制制制，不不不不断断断断更更更更新新新新防防防防治治治治耐耐耐耐药药药药菌菌菌菌的的的的措施。措施。措施。措施。细细细细菌菌菌菌的的的的耐耐耐耐药药药药机机机机理理理理越越越越来来来来越越越越复复复复杂杂杂杂，不不不不断断断断有有有有新新新新的的的的耐耐耐耐药药药药机机机机制制制制出出出出现
73、现现现，这这这这是是是是细细细细菌菌菌菌与与与与人人人人类类类类生生生生命命命命相相相相互互互互抗抗抗抗争争争争的的的的较较较较量量量量，尚尚尚尚需需需需人人人人们们们们付付付付出出出出艰艰艰艰苦苦苦苦卓卓卓卓绝绝绝绝的的的的研研研研究究究究工工工工作作作作，逐逐逐逐步步步步控控控控制制制制和和和和减减减减少少少少细细细细菌菌菌菌的的的的耐耐耐耐药药药药性性性性，以以以以至至至至最最最最终终终终消消消消灭灭灭灭耐耐耐耐药药药药菌菌菌菌，使使使使人人人人类在和平美好的环境中健康快乐地发展。类在和平美好的环境中健康快乐地发展。类在和平美好的环境中健康快乐地发展。类在和平美好的环境中健康快乐地发展。
74、附注：附注：附注：附注：-内酰胺酶的检测内酰胺酶的检测内酰胺酶的检测内酰胺酶的检测: :（1 1）头孢硝基噻吩显色法（）头孢硝基噻吩显色法（）头孢硝基噻吩显色法（）头孢硝基噻吩显色法（NitrocefinNitrocefin）：制配纸）：制配纸）：制配纸）：制配纸片片片片灭菌水湿润灭菌水湿润灭菌水湿润灭菌水湿润涂测试菌于纸片上，涂测试菌于纸片上，涂测试菌于纸片上，涂测试菌于纸片上，10min10min观察观察观察观察纸片颜色，显红色为阳性（葡萄球菌应放置纸片颜色，显红色为阳性（葡萄球菌应放置纸片颜色，显红色为阳性（葡萄球菌应放置纸片颜色，显红色为阳性（葡萄球菌应放置1h1h内观内观内观内观察）
75、。察）。察）。察）。（2 2）酸度法：青霉素）酸度法：青霉素）酸度法：青霉素）酸度法：青霉素-内酰胺酶水解内酰胺酶水解内酰胺酶水解内酰胺酶水解青霉酸、青霉酸、青霉酸、青霉酸、pH6.8pH6.8以下以下以下以下酚红指示剂由红色（构橼酸钠缓冲液酚红指示剂由红色（构橼酸钠缓冲液酚红指示剂由红色（构橼酸钠缓冲液酚红指示剂由红色（构橼酸钠缓冲液pH8.5pH8.5）变为黄色。）变为黄色。）变为黄色。）变为黄色。（3 3）碘测定法：）碘测定法：）碘测定法：）碘测定法：-内酰胺酶破坏内酰胺酶破坏内酰胺酶破坏内酰胺酶破坏-内酰胺环，碘与内酰胺环，碘与内酰胺环，碘与内酰胺环，碘与破坏后的破坏后的破坏后的破坏后
76、的-内酰胺结合，使兰色的淀粉内酰胺结合，使兰色的淀粉内酰胺结合，使兰色的淀粉内酰胺结合，使兰色的淀粉碘复合物碘复合物碘复合物碘复合物转变成无色。转变成无色。转变成无色。转变成无色。（4 4）仪器测定法：）仪器测定法：）仪器测定法：）仪器测定法：Vitek- AMSVitek- AMS、MicroscanMicroscan的药物的药物的药物的药物测试卡中均带有测酯功能。测试卡中均带有测酯功能。测试卡中均带有测酯功能。测试卡中均带有测酯功能。ESBLS检测：检测：（1）纸纸片片扩扩散散初初筛筛：头头孢孢他他啶啶（30g/片片）抑菌圈抑菌圈22mm 头孢噻肟（头孢噻肟（30g/片）抑菌圈片）抑菌圈2
77、7mm 头孢曲松（头孢曲松（30g/片）抑菌圈片）抑菌圈25mm 氨曲南（氨曲南（30g/片）抑菌圈片）抑菌圈27mm（2）肉肉汤汤稀稀释释法法：上上述述药药物物MIC2g/ml可可疑疑为为ESBLS。（表表型型确确证证试试验验：对对2个个任任何何一一个个药药物物MIC，在在加加克克位位维维酸酸比比不不加加克克拉拉维维酸酸的的MIC值值降降低低3个个以以上上对对倍倍稀稀释释度度判判为为ESBLS）。）。 （3 3）双纸片协同确认试验：）双纸片协同确认试验：）双纸片协同确认试验：）双纸片协同确认试验：头头头头孢孢孢孢他他他他啶啶啶啶（30g/30g/片片片片）与与与与头头头头孢孢孢孢他他他他啶啶
78、啶啶（30g30g）/ /克克克克位位位位维维维维酸（酸（酸（酸（10g10g）头头头头孢孢孢孢噻噻噻噻肟肟肟肟（30g/30g/片片片片）与与与与头头头头孢孢孢孢噻噻噻噻肟肟肟肟（30g30g）/ /克克克克拉拉拉拉维维维维酸（酸（酸（酸（10g10g）两纸片抑菌圈相比）两纸片抑菌圈相比）两纸片抑菌圈相比）两纸片抑菌圈相比 5mm5mm即为即为即为即为ESBLSESBLS。（4 4）E-testE-test法法法法（浓浓浓浓度度度度梯梯梯梯度度度度法法法法）：由由由由瑞瑞瑞瑞典典典典AB AB BiodiskBiodisk公公公公司司司司研研研研究究究究生生生生产产产产，广广广广洲洲洲洲贝贝
79、贝贝肯肯肯肯公公公公司司司司经经经经销销销销。试试试试条条条条中中中中的的的的三三三三代代代代头孢菌素或氨曲南的头孢菌素或氨曲南的头孢菌素或氨曲南的头孢菌素或氨曲南的MIC2g/mlMIC2g/ml即可疑为即可疑为即可疑为即可疑为ESBLSESBLS。（ 5 5） 仪仪仪仪 器器器器 测测测测 定定定定 法法法法 ： Vitek,microscanVitek,microscan和和和和 BD-BD-PHOEMXTMPHOEMXTM微生物分析仪均可测试微生物分析仪均可测试微生物分析仪均可测试微生物分析仪均可测试ESBLSESBLS。（6 6）利利利利用用用用分分分分子子子子生生生生物物物物学学学
80、学技技技技术术术术（PCRPCR、DNADNA探探探探针针针针等等等等）及及及及分分分分析析析析酶酶酶酶底底底底物物物物谱谱谱谱及及及及抑抑抑抑制制制制物物物物谱谱谱谱、生生生生物物物物化化化化学学学学技技技技术术术术等等等等检检检检测技术可对测技术可对测技术可对测技术可对ESBLSESBLS做出确诊。做出确诊。做出确诊。做出确诊。AmpcAmpc酶检测：酶检测：酶检测：酶检测：（1 1）初筛：）初筛：）初筛：）初筛：头头头头孢孢孢孢西西西西汀汀汀汀（30g/30g/片片片片）与与与与头头头头孢孢孢孢西西西西汀汀汀汀（30g30g）/ /邻邻邻邻氯氯氯氯西西西西林林林林（200g200g）。后
81、者比前者的抑菌圈）。后者比前者的抑菌圈）。后者比前者的抑菌圈）。后者比前者的抑菌圈 5mm5mm即疑为即疑为即疑为即疑为AmpcAmpc。5 5种种种种纸纸纸纸片片片片筛筛筛筛选选选选：马马马马斯斯斯斯平平平平、泰泰泰泰能能能能、头头头头孢孢孢孢西西西西汀汀汀汀、头头头头孢孢孢孢他他他他啶啶啶啶与与与与头头头头孢孢孢孢他他他他啶啶啶啶/ /克克克克拉拉拉拉维维维维酸酸酸酸。如如如如头头头头孢孢孢孢西西西西汀汀汀汀 18mm18mm，对对对对马马马马斯斯斯斯平平平平、泰泰泰泰能能能能敏敏敏敏感感感感即即即即疑疑疑疑为为为为产产产产AmpcAmpc，如如如如头头头头孢孢孢孢他他他他啶啶啶啶与与与与
82、其其其其酶酶酶酶抑抑抑抑制制制制剂剂剂剂的的的的抑抑抑抑菌菌菌菌圈圈圈圈 5mm5mm可能产可能产可能产可能产ESBLSESBLS。（2 2）确认试验（头孢西汀三维水相试验法）确认试验（头孢西汀三维水相试验法）确认试验（头孢西汀三维水相试验法）确认试验（头孢西汀三维水相试验法）一金属一金属-内酰胺酶的表型检测方法内酰胺酶的表型检测方法( (一一) )头孢他啶头孢他啶+2-+2-巯基丙酸法巯基丙酸法(CAZ+NCA)(CAZ+NCA)1.1.将待测菌株按常规药敏纸片将待测菌株按常规药敏纸片K-BK-B法操作均匀涂布于法操作均匀涂布于M-HM-H平板平板上。上。2.2.在在M-HM-H平板上分别贴
83、两片头孢他啶平板上分别贴两片头孢他啶(30ug/(30ug/片片) )纸片，纸片中纸片，纸片中心相距心相距2.5cm,2.5cm,将其中一片头孢他啶纸片上加将其中一片头孢他啶纸片上加3ul 2-3ul 2-巯基丙巯基丙酸，酸，3535孵育孵育18-24h18-24h。3.3.结果观察：若加有结果观察：若加有2-2-巯基乙酸的头孢他啶纸片抑菌圈大于单巯基乙酸的头孢他啶纸片抑菌圈大于单个头孢他啶的抑菌圈（个头孢他啶的抑菌圈（4mm4mm），则为阳性，即产金属），则为阳性，即产金属-内酰胺酶。内酰胺酶。一金属一金属-内酰胺酶的表型检测方法内酰胺酶的表型检测方法( (二二) )亚胺培南亚胺培南+EDT
84、A+EDTA法法(IMP+EDTA)(IMP+EDTA)1.1.将待测菌株按常规药敏纸片将待测菌株按常规药敏纸片K-BK-B法操作均匀涂布于法操作均匀涂布于M-HM-H平平板上。板上。2.2.在在M-HM-H平板上贴一片亚胺培南平板上贴一片亚胺培南(10ug/(10ug/片片) ) 纸片，在距亚胺纸片，在距亚胺培南纸片中心培南纸片中心1.5cm1.5cm处贴无菌空白纸片一片，将处贴无菌空白纸片一片，将0.5M 0.5M EDTA 10ul EDTA 10ul 均匀浸注于空白纸片上，均匀浸注于空白纸片上，3535孵育孵育18-24h18-24h。3.3.结果观察：若两片纸片抑菌圈有协同作用，则为
85、阳性，即结果观察：若两片纸片抑菌圈有协同作用，则为阳性，即产金属产金属-内酰胺酶。内酰胺酶。二二AmpC酶新的检测方法酶新的检测方法( (一一) )三维水相试验方法的改进三维水相试验方法的改进三维水相试验方法的改进三维水相试验方法的改进1.1.将标准菌株将标准菌株ATCC 25922ATCC 25922按常规药敏纸片按常规药敏纸片K-BK-B法操作均匀法操作均匀涂布于涂布于M-HM-H平板上。平板上。2.2.在在M-HM-H平板中心贴一片头孢西汀平板中心贴一片头孢西汀(30ug/(30ug/片片) ) 纸片，在距纸纸片，在距纸片边缘片边缘1cm1cm处，用无菌手术刀片切处，用无菌手术刀片切3c
86、m3cm长度的小槽，将待长度的小槽，将待测菌株的测菌株的6 6个菌落接种于槽内个菌落接种于槽内( (勿溢出槽外勿溢出槽外) )，3535孵育孵育18-24h18-24h。3. 3. 结果观察：若抑菌圈向内凹陷，即结果观察：若抑菌圈向内凹陷，即AmpCAmpC酶阳性。酶阳性。( (二二) )三维水相试验方法的改进三维水相试验方法的改进三维水相试验方法的改进三维水相试验方法的改进(M-H(M-H平板打孔平板打孔2mm2mm扩散法扩散法).).二二AmpC酶新的检测方法酶新的检测方法( (二二) )质粒型质粒型质粒型质粒型AmpCAmpC酶三联纸片方法的检测酶三联纸片方法的检测酶三联纸片方法的检测酶
87、三联纸片方法的检测1 1将标准菌株将标准菌株ATCC 25922ATCC 25922按常规药敏纸片按常规药敏纸片K-BK-B法法操作均匀涂布于操作均匀涂布于M-HM-H平板上。平板上。2 2在在M-HM-H平板中心贴一片头孢西汀平板中心贴一片头孢西汀(30ug/(30ug/片片) ) 纸纸片，在纸片边缘贴有待测菌的纸片（纸片上含片，在纸片边缘贴有待测菌的纸片（纸片上含20ul20ul， PH8.0PH8.0，1M Tris-0.1MEDTA1M Tris-0.1MEDTA）。）。3 3另一侧边缘贴有产另一侧边缘贴有产AmpCAmpC酶菌的纸片（同上）。酶菌的纸片（同上）。4 43535孵育孵育
88、18-24h18-24h，如待检菌出现扁平或凹陷的，如待检菌出现扁平或凹陷的抑菌环为阳性。抑菌环为阳性。三鉴定卡他球菌方法三鉴定卡他球菌方法( (一一)40%KNO3)40%KNO3浸湿滤纸条，贴于羊浸湿滤纸条，贴于羊( (马马) )血平板上，血平板上，周围点种待测菌，如果菌落周围出现大的绿色环周围点种待测菌，如果菌落周围出现大的绿色环 ，即为阳性。，即为阳性。( (二二) )丁酸酯酶检测法：购买丁酸酯酶检测纸片丁酸酯酶检测法：购买丁酸酯酶检测纸片( (梅里梅里埃公司生产埃公司生产) )，涂细菌于纸片上，如几分钟内出现，涂细菌于纸片上，如几分钟内出现绿色为阳性。绿色为阳性。四四D-Test试验
89、试验1 1将待检菌按常规药敏纸片将待检菌按常规药敏纸片K-BK-B法操作均匀涂布于法操作均匀涂布于M-HM-H平板上。平板上。2 2在在M-HM-H平上板贴一片红霉素平上板贴一片红霉素 (15ug/(15ug/片片) ) 纸片，纸片，在距纸片边缘在距纸片边缘1.5cm1.5cm处贴克林霉素处贴克林霉素 (2ug/(2ug/片片) ) 纸纸片。片。3 33535孵育孵育18-24h18-24h，如克林霉素出现扁平或凹陷，如克林霉素出现扁平或凹陷的抑菌环为阳性。的抑菌环为阳性。四四D-Test试验试验耐药机制耐药机制 红霉素红霉素 克林霉素克林霉素 基因型基因型 泵出泵出(MS) R S MSRA(MS) R S MSRA核糖体基因诱导变异核糖体基因诱导变异 (iMls) R D-Test(+) (iMls) R D-Test(+) （ermCermC为主）为主）核糖体基因结构变异核糖体基因结构变异 (cMLS) R R (cMLS) R R （ermAermA为主）为主） 谢 谢！ 雅雅 丹丹 地地 貌貌
