《最新实用组织化学技术常规病理组织学和组织化学研究生张国华0504w3ppt课件ppt课件》由会员分享，可在线阅读，更多相关《最新实用组织化学技术常规病理组织学和组织化学研究生张国华0504w3ppt课件ppt课件（39页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、实用组织化学技术实用组织化学技术-常规病理组常规病理组织学和组织化学研究生织学和组织化学研究生-张国华张国华20160504w3ppt课件课件一、取材基本要求：取材是否正确、恰当，直接影响切片基本要求：取材是否正确、恰当，直接影响切片基本要求：取材是否正确、恰当，直接影响切片基本要求：取材是否正确、恰当，直接影响切片的制作及正确诊断。的制作及正确诊断。的制作及正确诊断。的制作及正确诊断。1 1取材越快越新鲜越好取材越快越新鲜越好取材越快越新鲜越好取材越快越新鲜越好，防止组织自溶、腐败。，防止组织自溶、腐败。，防止组织自溶、腐败。，防止组织自溶、腐败。2 2取材刀要锋利取材刀要锋利取材刀要锋利取
2、材刀要锋利，切取时刀口垂直地切取；严禁，切取时刀口垂直地切取；严禁，切取时刀口垂直地切取；严禁，切取时刀口垂直地切取；严禁挤压，严禁用钳镊钳夹，以免使组织或细胞变形造成人挤压，严禁用钳镊钳夹，以免使组织或细胞变形造成人挤压，严禁用钳镊钳夹，以免使组织或细胞变形造成人挤压，严禁用钳镊钳夹，以免使组织或细胞变形造成人为的损伤。为的损伤。为的损伤。为的损伤。3 3取材大小取材大小取材大小取材大小，一般长，一般长，一般长，一般长l-3l-3厘米，宽厘米，宽厘米，宽厘米，宽1-21-2厘米，厚度厘米，厚度厘米，厚度厘米，厚度为为为为0.3-0.50.3-0.5厘米。科研用光镜标本不超过厘米。科研用光镜标
3、本不超过厘米。科研用光镜标本不超过厘米。科研用光镜标本不超过1cm 1cm 1cm1cm 1cm 1cm，电镜标本直径约，电镜标本直径约，电镜标本直径约，电镜标本直径约0.5mm0.5mm。过大材料在短时间内不易固。过大材料在短时间内不易固。过大材料在短时间内不易固。过大材料在短时间内不易固定透，影响效果。定透，影响效果。定透，影响效果。定透，影响效果。4 4 要要要要兼顾病变部位与正常部位兼顾病变部位与正常部位兼顾病变部位与正常部位兼顾病变部位与正常部位。 5 5 尽可能尽可能尽可能尽可能在低温条件下操作在低温条件下操作在低温条件下操作在低温条件下操作，0 04 4。 各器官取材方法：各器官
4、取材方法：各器官取材方法：各器官取材方法：脑脑脑脑：取材应能反应出脑各部位的变化，一般采用：取材应能反应出脑各部位的变化，一般采用：取材应能反应出脑各部位的变化，一般采用：取材应能反应出脑各部位的变化，一般采用冠状切面法，全脑包括（桥脑、延脑、小脑和脊髓颈冠状切面法，全脑包括（桥脑、延脑、小脑和脊髓颈冠状切面法，全脑包括（桥脑、延脑、小脑和脊髓颈冠状切面法，全脑包括（桥脑、延脑、小脑和脊髓颈段及脉络丛）。段及脉络丛）。段及脉络丛）。段及脉络丛）。取材部位如下：取材部位如下：取材部位如下：取材部位如下：额极；额极；额极；额极； 中央前后回；中央前后回；中央前后回；中央前后回；海马；海马；海马；海
5、马；内囊；内囊；内囊；内囊； 丘脑；丘脑；丘脑；丘脑； 枕叶；枕叶；枕叶；枕叶；脉络丛；脉络丛；脉络丛；脉络丛；中脑；中脑；中脑；中脑； 桥脑；桥脑；桥脑；桥脑； 延髓；延髓；延髓；延髓； 小脑；小脑；小脑；小脑； 脊髓颈段。脊髓颈段。脊髓颈段。脊髓颈段。取材时要包括软脑膜、室脑膜或软脊膜取材时要包括软脑膜、室脑膜或软脊膜取材时要包括软脑膜、室脑膜或软脊膜取材时要包括软脑膜、室脑膜或软脊膜（刀要锋（刀要锋（刀要锋（刀要锋利）。利）。利）。利）。垂体：垂体：垂体：垂体：取垂体时注意前、中、后叶和垂体柄都要取垂体时注意前、中、后叶和垂体柄都要取垂体时注意前、中、后叶和垂体柄都要取垂体时注意前、中、
6、后叶和垂体柄都要兼顾，从前向后矢状切。兼顾，从前向后矢状切。兼顾，从前向后矢状切。兼顾，从前向后矢状切。 心：心：心：心：一般悄况下将心房、瓣膜、心室一起取下。一般悄况下将心房、瓣膜、心室一起取下。一般悄况下将心房、瓣膜、心室一起取下。一般悄况下将心房、瓣膜、心室一起取下。也可分别取一块病变部位连同正常组织。也可单独取也可分别取一块病变部位连同正常组织。也可单独取也可分别取一块病变部位连同正常组织。也可单独取也可分别取一块病变部位连同正常组织。也可单独取心室肌，乳突肌组织。心室肌，乳突肌组织。心室肌，乳突肌组织。心室肌，乳突肌组织。肺：肺：肺：肺：常规取材应包括左、右两肺（五个肺叶），常规取材
7、应包括左、右两肺（五个肺叶），常规取材应包括左、右两肺（五个肺叶），常规取材应包括左、右两肺（五个肺叶），可根据病变需要决定取材块数，特殊情况下为区别在可根据病变需要决定取材块数，特殊情况下为区别在可根据病变需要决定取材块数，特殊情况下为区别在可根据病变需要决定取材块数，特殊情况下为区别在哪个肺叶上取的材可用形状做标志，在记录时记清楚。哪个肺叶上取的材可用形状做标志，在记录时记清楚。哪个肺叶上取的材可用形状做标志，在记录时记清楚。哪个肺叶上取的材可用形状做标志，在记录时记清楚。肾：肾：肾：肾：取材包括被膜、皮质、髓质和肾盂，并要求取材包括被膜、皮质、髓质和肾盂，并要求取材包括被膜、皮质、髓质和
8、肾盂，并要求取材包括被膜、皮质、髓质和肾盂，并要求区别左、右肾。区别左、右肾。区别左、右肾。区别左、右肾。胰：胰：胰：胰：常规取胰体部，为长方形必要时加取胰头、常规取胰体部，为长方形必要时加取胰头、常规取胰体部，为长方形必要时加取胰头、常规取胰体部，为长方形必要时加取胰头、胰尾。胰尾。胰尾。胰尾。肝：肝：肝：肝：取长方形或三角形均可，带被膜。取长方形或三角形均可，带被膜。取长方形或三角形均可，带被膜。取长方形或三角形均可，带被膜。脾：脾：脾：脾：取材带被膜。取材带被膜。取材带被膜。取材带被膜。管腔脏器管腔脏器管腔脏器管腔脏器：取材时注意方向：取材时注意方向：取材时注意方向：取材时注意方向大、小
9、肠：大、小肠：大、小肠：大、小肠：考虑环行肌肉，沿肠管的长轴取考虑环行肌肉，沿肠管的长轴取考虑环行肌肉，沿肠管的长轴取考虑环行肌肉，沿肠管的长轴取（纵切）；（纵切）；（纵切）；（纵切）；食管：食管：食管：食管：以横切面为宜；以横切面为宜；以横切面为宜；以横切面为宜；胃：胃：胃：胃：常规取材以胃底为好；常规取材以胃底为好；常规取材以胃底为好；常规取材以胃底为好；气管：气管：气管：气管：横切、纵切均要有。横切、纵切均要有。横切、纵切均要有。横切、纵切均要有。总之管腔脏器的各层构造都要取到。总之管腔脏器的各层构造都要取到。总之管腔脏器的各层构造都要取到。总之管腔脏器的各层构造都要取到。为了防止标本入
10、固定液后变形，为了防止标本入固定液后变形，为了防止标本入固定液后变形，为了防止标本入固定液后变形，将材料取下后将材料取下后将材料取下后将材料取下后（如剪开的大小肠、胃等组织）将浆膜面铺在滤纸（如剪开的大小肠、胃等组织）将浆膜面铺在滤纸（如剪开的大小肠、胃等组织）将浆膜面铺在滤纸（如剪开的大小肠、胃等组织）将浆膜面铺在滤纸上，上，上，上，然后入固定液内，这样能防止或减少组织受压然后入固定液内，这样能防止或减少组织受压然后入固定液内，这样能防止或减少组织受压然后入固定液内，这样能防止或减少组织受压变形与收缩。变形与收缩。变形与收缩。变形与收缩。二、组织固定二、组织固定组织固定的意义：组织固定的意义
11、：组织固定的意义：组织固定的意义：组织固定是做好切片的重要步骤之一，如果首次固组织固定是做好切片的重要步骤之一，如果首次固组织固定是做好切片的重要步骤之一，如果首次固组织固定是做好切片的重要步骤之一，如果首次固定失败，再重新固定也不如一次固定成功好，无法补定失败，再重新固定也不如一次固定成功好，无法补定失败，再重新固定也不如一次固定成功好，无法补定失败，再重新固定也不如一次固定成功好，无法补救。救。救。救。迅速将检材固定能有效地防止组织及细胞发生死后迅速将检材固定能有效地防止组织及细胞发生死后迅速将检材固定能有效地防止组织及细胞发生死后迅速将检材固定能有效地防止组织及细胞发生死后的一系列变化。
12、的一系列变化。的一系列变化。的一系列变化。固定的关键在于取材后尽可能地及时地将取到的材固定的关键在于取材后尽可能地及时地将取到的材固定的关键在于取材后尽可能地及时地将取到的材固定的关键在于取材后尽可能地及时地将取到的材料进行固定，抑制其死后变化的进展，尽力使组织接料进行固定，抑制其死后变化的进展，尽力使组织接料进行固定，抑制其死后变化的进展，尽力使组织接料进行固定，抑制其死后变化的进展，尽力使组织接近于生前状态。近于生前状态。近于生前状态。近于生前状态。另外，在标本制做过程中经过许多步骤，为了防止另外，在标本制做过程中经过许多步骤，为了防止另外，在标本制做过程中经过许多步骤，为了防止另外，在标
13、本制做过程中经过许多步骤，为了防止组织成份的溶解消失，有必要及时转变为不溶性物质，组织成份的溶解消失，有必要及时转变为不溶性物质，组织成份的溶解消失，有必要及时转变为不溶性物质，组织成份的溶解消失，有必要及时转变为不溶性物质，从而有利于保存。从而有利于保存。从而有利于保存。从而有利于保存。 组织固定的目的：组织固定的目的： 阻止死后变化阻止死后变化，防止组织的自溶与腐，防止组织的自溶与腐败。败。 使组织的结构保存下来使组织的结构保存下来，如蛋白质，如蛋白质，脂肪、糖元、酶等各种成份与生活时的形态脂肪、糖元、酶等各种成份与生活时的形态相仿。相仿。 便于染色便于染色，同时对组织有媒染作用，同时对组
14、织有媒染作用，使不同的组织成份对染料有不同的亲和力，使不同的组织成份对染料有不同的亲和力，使细胞各部易于受色。使细胞各部易于受色。 能使组织硬化能使组织硬化，为做薄切片打下基础。，为做薄切片打下基础。 组织固定的注意事项：组织固定的注意事项： 检材、标本：检材、标本：材料块不能过大；材料块不能过大； 固定器皿不易过小；固定器皿不易过小； 固定液量不易过少，固定液量不易过少，大约是固定材料体积的大约是固定材料体积的2040倍。倍。固定液：根据检验目的不同选择不同固固定液：根据检验目的不同选择不同固定液，如做糖元检查就不能用含水的固定液，定液，如做糖元检查就不能用含水的固定液，做电镜检查就必须用锇
15、酸固定液等。做电镜检查就必须用锇酸固定液等。 固定液：固定液：固定液：固定液：用以固定组织的药剂。用以固定组织的药剂。用以固定组织的药剂。用以固定组织的药剂。固定液分为两大类：固定液分为两大类：固定液分为两大类：固定液分为两大类： 单纯固定液单纯固定液单纯固定液单纯固定液：仅由一种药剂组成。：仅由一种药剂组成。：仅由一种药剂组成。：仅由一种药剂组成。 混合固定液混合固定液混合固定液混合固定液（或复合固定液）：由二种以上的（或复合固定液）：由二种以上的（或复合固定液）：由二种以上的（或复合固定液）：由二种以上的药剂组成的固定液。药剂组成的固定液。药剂组成的固定液。药剂组成的固定液。固定液选择标准
16、：固定液选择标准：固定液选择标准：固定液选择标准：具有强的穿透力，具有强的穿透力，具有强的穿透力，具有强的穿透力，固定均匀，能迅速渗透组织固定均匀，能迅速渗透组织固定均匀，能迅速渗透组织固定均匀，能迅速渗透组织内部，使组织细胞结构保持生活时期的相仿状态。内部，使组织细胞结构保持生活时期的相仿状态。内部，使组织细胞结构保持生活时期的相仿状态。内部，使组织细胞结构保持生活时期的相仿状态。不使组织过度收缩与膨胀而变形不使组织过度收缩与膨胀而变形不使组织过度收缩与膨胀而变形不使组织过度收缩与膨胀而变形。能迅速使能迅速使能迅速使能迅速使组织中的蛋白质，糖、脂肪等物质凝组织中的蛋白质，糖、脂肪等物质凝组织
17、中的蛋白质，糖、脂肪等物质凝组织中的蛋白质，糖、脂肪等物质凝固而成为不溶性物质。固而成为不溶性物质。固而成为不溶性物质。固而成为不溶性物质。使组织达到使组织达到使组织达到使组织达到一定的硬度一定的硬度一定的硬度一定的硬度，便于切片制作、染色。，便于切片制作、染色。，便于切片制作、染色。，便于切片制作、染色。X X价格便宜，容易买到，同时要配制方便。价格便宜，容易买到，同时要配制方便。价格便宜，容易买到，同时要配制方便。价格便宜，容易买到，同时要配制方便。 常用的单纯固定液常用的单纯固定液乙醇（酒精）乙醇（酒精）alcohol 甲醛（福尔马林）（缓冲液配制）甲醛（福尔马林）（缓冲液配制） for
18、malin重铬酸钾重铬酸钾 potassium bichromate 苦味酸苦味酸 picric acid锇酸锇酸 osmic acid 丙酮丙酮 acetone 冰醋酸冰醋酸 glacial acetic acid 多聚甲醛缓冲固定液多聚甲醛缓冲固定液 paraformaldehyde戊二醛磷酸缓冲固定液戊二醛磷酸缓冲固定液 glutaric dialdehyde5. 多聚甲醛缓冲固定液多聚甲醛缓冲固定液 paraformaldehyde多聚甲醛多聚甲醛多聚甲醛多聚甲醛 4g4g4g4g，加入，加入，加入，加入0.1mol/L0.1mol/L0.1mol/L0.1mol/L磷酸缓冲液磷酸缓冲
19、液磷酸缓冲液磷酸缓冲液 pH7.2 pH7.2 pH7.2 pH7.2 100ml100ml100ml100ml中，加热中，加热中，加热中，加热6060606080808080溶解。溶解。溶解。溶解。固定固定固定固定15min15min15min15min24h,024h,024h,024h,04444。主要用于科研组织标本的固定，尤其用于免疫组织主要用于科研组织标本的固定，尤其用于免疫组织主要用于科研组织标本的固定，尤其用于免疫组织主要用于科研组织标本的固定，尤其用于免疫组织化学染色的组织固定，保护抗原决定簇不被封闭。化学染色的组织固定，保护抗原决定簇不被封闭。化学染色的组织固定，保护抗原决
20、定簇不被封闭。化学染色的组织固定，保护抗原决定簇不被封闭。6.戊二醛磷酸缓冲固定液戊二醛磷酸缓冲固定液 glutaric dialdehyde 25%戊二醛戊二醛10ml，加入，加入0.1mol/L0.1mol/L0.1mol/L0.1mol/L磷酸缓冲液磷酸缓冲液磷酸缓冲液磷酸缓冲液 pH7.2pH7.2pH7.2pH7.27.47.47.47.4 90ml 90ml 90ml 90ml中。中。中。中。固定时间为固定时间为固定时间为固定时间为60min, 060min, 060min, 060min, 04444。主要用于科研组织标本的固定，尤其用于主要用于科研组织标本的固定，尤其用于主要用
21、于科研组织标本的固定，尤其用于主要用于科研组织标本的固定，尤其用于电镜超薄电镜超薄电镜超薄电镜超薄切片的小组织块切片的小组织块切片的小组织块切片的小组织块标本的初标本的初标本的初标本的初固定固定固定固定。组织固定方法组织固定方法1. 原位固定法原位固定法在活体情况下，采用快速边取材边滴加固定液，取在活体情况下，采用快速边取材边滴加固定液，取在活体情况下，采用快速边取材边滴加固定液，取在活体情况下，采用快速边取材边滴加固定液，取出标本后再浸泡固定出标本后再浸泡固定出标本后再浸泡固定出标本后再浸泡固定30min-1h30min-1h，以上操作应在，以上操作应在，以上操作应在，以上操作应在0-40-
22、4下下下下进行。进行。进行。进行。2. 浸透固定法浸透固定法固定液固定液固定液固定液0-40-4，量应是样品，量应是样品，量应是样品，量应是样品40404040倍以上，浸泡倍以上，浸泡倍以上，浸泡倍以上，浸泡30-30-30-30-90min90min90min90min或更长。或更长。或更长。或更长。3. 培养细胞和涂片固定法培养细胞和涂片固定法单层细胞培养瓶只需将培养内盖片取出浸透固定即单层细胞培养瓶只需将培养内盖片取出浸透固定即单层细胞培养瓶只需将培养内盖片取出浸透固定即单层细胞培养瓶只需将培养内盖片取出浸透固定即可。悬液培养细胞应离心浓缩后涂片，或离心管内加可。悬液培养细胞应离心浓缩后
23、涂片，或离心管内加可。悬液培养细胞应离心浓缩后涂片，或离心管内加可。悬液培养细胞应离心浓缩后涂片，或离心管内加入固定液入固定液入固定液入固定液2000r/min2000r/min约约约约20 min20 min离心成团后制作切片。离心成团后制作切片。离心成团后制作切片。离心成团后制作切片。也可以向离心管内加入胶冻再离心，切取离心管尖也可以向离心管内加入胶冻再离心，切取离心管尖也可以向离心管内加入胶冻再离心，切取离心管尖也可以向离心管内加入胶冻再离心，切取离心管尖端胶冻固定。端胶冻固定。端胶冻固定。端胶冻固定。4. 灌注固定法灌注固定法通过心血管途径将固定剂灌注到全身或某一器官，通过心血管途径将
24、固定剂灌注到全身或某一器官，通过心血管途径将固定剂灌注到全身或某一器官，通过心血管途径将固定剂灌注到全身或某一器官，使生活的细胞在原位迅速固定后再取材，可达到非常使生活的细胞在原位迅速固定后再取材，可达到非常使生活的细胞在原位迅速固定后再取材，可达到非常使生活的细胞在原位迅速固定后再取材，可达到非常好的固定效果，尤其对于脑等需要很长取材时间的器好的固定效果，尤其对于脑等需要很长取材时间的器好的固定效果，尤其对于脑等需要很长取材时间的器好的固定效果，尤其对于脑等需要很长取材时间的器官更有意义。官更有意义。官更有意义。官更有意义。麻醉麻醉麻醉麻醉或或或或颈椎脱臼颈椎脱臼颈椎脱臼颈椎脱臼处死动物后，
25、立即打开胸腹腔和心处死动物后，立即打开胸腹腔和心处死动物后，立即打开胸腹腔和心处死动物后，立即打开胸腹腔和心包，滴溜注射针刺入左心室或主动脉内，剪开右心耳包，滴溜注射针刺入左心室或主动脉内，剪开右心耳包，滴溜注射针刺入左心室或主动脉内，剪开右心耳包，滴溜注射针刺入左心室或主动脉内，剪开右心耳排血，立即用含有适量肝素的生理盐水或缓冲液灌注，排血，立即用含有适量肝素的生理盐水或缓冲液灌注，排血，立即用含有适量肝素的生理盐水或缓冲液灌注，排血，立即用含有适量肝素的生理盐水或缓冲液灌注，清洗血液；然后很快用固定液继续灌注，大小鼠心灌清洗血液；然后很快用固定液继续灌注，大小鼠心灌清洗血液；然后很快用固定
26、液继续灌注，大小鼠心灌清洗血液；然后很快用固定液继续灌注，大小鼠心灌注时其压力约为注时其压力约为注时其压力约为注时其压力约为100-150mmHg100-150mmHg，灌流量约为，灌流量约为，灌流量约为，灌流量约为5-5-10ml/min10ml/min，灌注时间一般在，灌注时间一般在，灌注时间一般在，灌注时间一般在5-20min5-20min左右，一般以观察左右，一般以观察左右，一般以观察左右，一般以观察动物肝质地变硬为准。动物肝质地变硬为准。动物肝质地变硬为准。动物肝质地变硬为准。灌注固定完成后取材，并用固定液后固定灌注固定完成后取材，并用固定液后固定灌注固定完成后取材，并用固定液后固定
27、灌注固定完成后取材，并用固定液后固定2 2小时。小时。小时。小时。灌注固定快速均匀，灌注固定快速均匀，灌注固定快速均匀，灌注固定快速均匀， 可保存细胞组织的微细结构。可保存细胞组织的微细结构。可保存细胞组织的微细结构。可保存细胞组织的微细结构。三、水洗三、水洗用水道流水洗涤，目的是将组织块中的固定液用水道流水洗涤，目的是将组织块中的固定液用水道流水洗涤，目的是将组织块中的固定液用水道流水洗涤，目的是将组织块中的固定液取代出来，水洗一定要充分。取代出来，水洗一定要充分。取代出来，水洗一定要充分。取代出来，水洗一定要充分。水洗时间数小时至水洗时间数小时至水洗时间数小时至水洗时间数小时至2424小时
28、。小时。小时。小时。根据材料多少、大小可灵活掌握水洗工具，可根据材料多少、大小可灵活掌握水洗工具，可根据材料多少、大小可灵活掌握水洗工具，可根据材料多少、大小可灵活掌握水洗工具，可用水洗筐或用纱布包裹，要防止水流大将组织块冲用水洗筐或用纱布包裹，要防止水流大将组织块冲用水洗筐或用纱布包裹，要防止水流大将组织块冲用水洗筐或用纱布包裹，要防止水流大将组织块冲掉或丢失。掉或丢失。掉或丢失。掉或丢失。科研用小材料科研用小材料科研用小材料科研用小材料也可用也可用也可用也可用PBSPBS液多次浸泡洗涤液多次浸泡洗涤液多次浸泡洗涤液多次浸泡洗涤，但，但，但，但要保证要保证要保证要保证至少至少至少至少4-64
29、-6小时的洗涤时间小时的洗涤时间小时的洗涤时间小时的洗涤时间。四、脱水四、脱水组织块固定后虽然已经硬化，但达不到切薄片组织块固定后虽然已经硬化，但达不到切薄片组织块固定后虽然已经硬化，但达不到切薄片组织块固定后虽然已经硬化，但达不到切薄片的硬度，必须进行除固定液以外的其它处理，脱水的硬度，必须进行除固定液以外的其它处理，脱水的硬度，必须进行除固定液以外的其它处理，脱水的硬度，必须进行除固定液以外的其它处理，脱水就是继固定后的重要步骤。就是继固定后的重要步骤。就是继固定后的重要步骤。就是继固定后的重要步骤。经固定和水洗后的组织含大量水份，在这种情经固定和水洗后的组织含大量水份，在这种情经固定和水
30、洗后的组织含大量水份，在这种情经固定和水洗后的组织含大量水份，在这种情况下首先必须除去组织内部的水份，这种除水的过况下首先必须除去组织内部的水份，这种除水的过况下首先必须除去组织内部的水份，这种除水的过况下首先必须除去组织内部的水份，这种除水的过程叫做程叫做程叫做程叫做脱水脱水脱水脱水，脱水使用的药剂称为，脱水使用的药剂称为，脱水使用的药剂称为，脱水使用的药剂称为脱水剂脱水剂脱水剂脱水剂。脱水必须逐渐依次从低浓度酒精开始到高浓度脱水必须逐渐依次从低浓度酒精开始到高浓度脱水必须逐渐依次从低浓度酒精开始到高浓度脱水必须逐渐依次从低浓度酒精开始到高浓度酒精，否则会引起组织强烈收缩变脆，不利制片，酒精
31、，否则会引起组织强烈收缩变脆，不利制片，酒精，否则会引起组织强烈收缩变脆，不利制片，酒精，否则会引起组织强烈收缩变脆，不利制片，但脱水不彻底也很难浸蜡。但脱水不彻底也很难浸蜡。但脱水不彻底也很难浸蜡。但脱水不彻底也很难浸蜡。常用脱水剂：酒精、丙酮、正丁醇等。常用脱水剂：酒精、丙酮、正丁醇等。常用脱水剂：酒精、丙酮、正丁醇等。常用脱水剂：酒精、丙酮、正丁醇等。1. 1. 酒精酒精酒精酒精一股是从一股是从一股是从一股是从7070酒精开始，经酒精开始，经酒精开始，经酒精开始，经808090909595100100I I一一一一100II100II，每步骤脱水时间根据材料大小而灵活掌握，一，每步骤脱水
32、时间根据材料大小而灵活掌握，一，每步骤脱水时间根据材料大小而灵活掌握，一，每步骤脱水时间根据材料大小而灵活掌握，一般数小时到般数小时到般数小时到般数小时到1212小时，更换一次酒精。小时，更换一次酒精。小时，更换一次酒精。小时，更换一次酒精。无水乙醇不适合用来配低浓度酒精，价格较贵。取无水乙醇不适合用来配低浓度酒精，价格较贵。取无水乙醇不适合用来配低浓度酒精，价格较贵。取无水乙醇不适合用来配低浓度酒精，价格较贵。取9595酒精酒精酒精酒精70ml70ml加蒸馏水加蒸馏水加蒸馏水加蒸馏水25ml25ml，配成，配成，配成，配成7070酒精酒精酒精酒精95ml95ml。8080酒精取酒精取酒精取酒
33、精取9595酒精酒精酒精酒精80ml80ml加蒸馏水至加蒸馏水至加蒸馏水至加蒸馏水至95ml95ml即可，依次即可，依次即可，依次即可，依次类推。类推。类推。类推。2. 2. 丙酮丙酮丙酮丙酮脱水作用与酒精相似，虽然其脱水作用比酒精强，但对脱水作用与酒精相似，虽然其脱水作用比酒精强，但对脱水作用与酒精相似，虽然其脱水作用比酒精强，但对脱水作用与酒精相似，虽然其脱水作用比酒精强，但对组织块的收缩较严重，且价钱较贵，故不宜用于一股组织组织块的收缩较严重，且价钱较贵，故不宜用于一股组织组织块的收缩较严重，且价钱较贵，故不宜用于一股组织组织块的收缩较严重，且价钱较贵，故不宜用于一股组织脱水。丙酮既有脱
34、水作用，又有透明作用。脱水。丙酮既有脱水作用，又有透明作用。脱水。丙酮既有脱水作用，又有透明作用。脱水。丙酮既有脱水作用，又有透明作用。用丙酮固定的材料要小，脱水用丙酮固定的材料要小，脱水用丙酮固定的材料要小，脱水用丙酮固定的材料要小，脱水1 1一一一一8 8小时即可。小时即可。小时即可。小时即可。 五、透明五、透明 组织块脱水后需要透明，因为水与蜡不组织块脱水后需要透明，因为水与蜡不能相交换，需要借助石蜡诱导剂的过渡。石能相交换，需要借助石蜡诱导剂的过渡。石蜡诱导剂渗入之后组织块往往呈现透明状态，蜡诱导剂渗入之后组织块往往呈现透明状态，习惯上将石蜡诱导剂渗入组织内的过程叫透习惯上将石蜡诱导剂
35、渗入组织内的过程叫透明，而这种药剂称为明，而这种药剂称为透明剂透明剂。透明的时间依组织块的大小而定，一般透明的时间依组织块的大小而定，一般采用采用20分钟至分钟至1小时左右，如组织块过大可延小时左右，如组织块过大可延长透明时间，透明好的材料如同油炸的感觉，长透明时间，透明好的材料如同油炸的感觉，呈透明状。呈透明状。 最常用的透明剂为最常用的透明剂为最常用的透明剂为最常用的透明剂为二甲苯、氯仿、甲苯、香柏二甲苯、氯仿、甲苯、香柏二甲苯、氯仿、甲苯、香柏二甲苯、氯仿、甲苯、香柏油油油油等。等。等。等。二甲苯二甲苯二甲苯二甲苯：是无色透明的一种有机溶媒，有很强：是无色透明的一种有机溶媒，有很强：是无
36、色透明的一种有机溶媒，有很强：是无色透明的一种有机溶媒，有很强的刺激气味，易挥发，长期接触对粘膜有刺激作用。的刺激气味，易挥发，长期接触对粘膜有刺激作用。的刺激气味，易挥发，长期接触对粘膜有刺激作用。的刺激气味，易挥发，长期接触对粘膜有刺激作用。二甲苯透明组织的作用很强，可使组织收缩变二甲苯透明组织的作用很强，可使组织收缩变二甲苯透明组织的作用很强，可使组织收缩变二甲苯透明组织的作用很强，可使组织收缩变形，故透明时间不宜过长。形，故透明时间不宜过长。形，故透明时间不宜过长。形，故透明时间不宜过长。透明过程中如遇到组织块内部或某一个部位呈透明过程中如遇到组织块内部或某一个部位呈透明过程中如遇到组
37、织块内部或某一个部位呈透明过程中如遇到组织块内部或某一个部位呈白色混浊状态时，说明脱水不彻底，进而造成透明白色混浊状态时，说明脱水不彻底，进而造成透明白色混浊状态时，说明脱水不彻底，进而造成透明白色混浊状态时，说明脱水不彻底，进而造成透明不彻底，无法下一步浸蜡。应退回到不彻底，无法下一步浸蜡。应退回到不彻底，无法下一步浸蜡。应退回到不彻底，无法下一步浸蜡。应退回到100100酒精中重酒精中重酒精中重酒精中重新彻底脱水。新彻底脱水。新彻底脱水。新彻底脱水。六、浸蜡与包理六、浸蜡与包理 浸蜡的目的浸蜡的目的是为了能制备一菲薄的切片是为了能制备一菲薄的切片做准备。做准备。将透明好的组织块浸到石蜡中，
38、使石蜡将透明好的组织块浸到石蜡中，使石蜡渗透到组织细胞内，将组织细胞内的二甲苯渗透到组织细胞内，将组织细胞内的二甲苯完全彻底地取代出来，然后再用石蜡将组织完全彻底地取代出来，然后再用石蜡将组织包埋起来，冷却后，切成小块，修整好切面，包埋起来，冷却后，切成小块，修整好切面，再用切片机切极薄的切片，将这一过程称为再用切片机切极薄的切片，将这一过程称为浸蜡与包埋。浸蜡与包埋。蜡的种类：主要有两类：蜡的种类：主要有两类：蜡的种类：主要有两类：蜡的种类：主要有两类： 蜂蜡蜂蜡蜂蜡蜂蜡：是动物体内提取的蜡，颜色微黄，：是动物体内提取的蜡，颜色微黄，：是动物体内提取的蜡，颜色微黄，：是动物体内提取的蜡，颜色
39、微黄，故也称为黄蜡，溶点在故也称为黄蜡，溶点在故也称为黄蜡，溶点在故也称为黄蜡，溶点在5454左右。特点是润滑带有左右。特点是润滑带有左右。特点是润滑带有左右。特点是润滑带有粘性，冬天用量比夏天多。粘性，冬天用量比夏天多。粘性，冬天用量比夏天多。粘性，冬天用量比夏天多。 石蜡石蜡石蜡石蜡：是由矿物质中提取，质地较疏松，色：是由矿物质中提取，质地较疏松，色：是由矿物质中提取，质地较疏松，色：是由矿物质中提取，质地较疏松，色白。根据蜡的溶点不同又可分为软蜡及硬蜡：白。根据蜡的溶点不同又可分为软蜡及硬蜡：白。根据蜡的溶点不同又可分为软蜡及硬蜡：白。根据蜡的溶点不同又可分为软蜡及硬蜡： 溶点在溶点在溶
40、点在溶点在5050以下的石蜡称为以下的石蜡称为以下的石蜡称为以下的石蜡称为软蜡软蜡软蜡软蜡。溶点在溶点在溶点在溶点在5050以上的石蜡称为以上的石蜡称为以上的石蜡称为以上的石蜡称为硬蜡硬蜡硬蜡硬蜡。两种蜡可以掺合在一起使用（没条件的情况下两种蜡可以掺合在一起使用（没条件的情况下两种蜡可以掺合在一起使用（没条件的情况下两种蜡可以掺合在一起使用（没条件的情况下可用蜡烛来代替）。上海生物制品厂出的石蜡熔点可用蜡烛来代替）。上海生物制品厂出的石蜡熔点可用蜡烛来代替）。上海生物制品厂出的石蜡熔点可用蜡烛来代替）。上海生物制品厂出的石蜡熔点有有有有52525454，56565858，58586060，60
41、606262这几种。这几种。这几种。这几种。2 . 包埋：包埋：包埋的方法多种，最常用的是包埋的方法多种，最常用的是包埋的方法多种，最常用的是包埋的方法多种，最常用的是石蜡包埋法石蜡包埋法石蜡包埋法石蜡包埋法。除此之。除此之。除此之。除此之外还有外还有外还有外还有火棉胶包埋法、炭蜡包埋法、明胶包埋法及环氧火棉胶包埋法、炭蜡包埋法、明胶包埋法及环氧火棉胶包埋法、炭蜡包埋法、明胶包埋法及环氧火棉胶包埋法、炭蜡包埋法、明胶包埋法及环氧树脂包埋法（电镜用）。冰冻切片采用水包埋法或特殊树脂包埋法（电镜用）。冰冻切片采用水包埋法或特殊树脂包埋法（电镜用）。冰冻切片采用水包埋法或特殊树脂包埋法（电镜用）。冰
42、冻切片采用水包埋法或特殊专用包埋剂包埋专用包埋剂包埋专用包埋剂包埋专用包埋剂包埋等。等。等。等。包埋时用纯石蜡溶解后（包埋时用纯石蜡溶解后（包埋时用纯石蜡溶解后（包埋时用纯石蜡溶解后（6060）倒入包埋框内，迅）倒入包埋框内，迅）倒入包埋框内，迅）倒入包埋框内，迅速将浸好的组织块依次摆入框内，待蜡逐渐冷却凝固后速将浸好的组织块依次摆入框内，待蜡逐渐冷却凝固后速将浸好的组织块依次摆入框内，待蜡逐渐冷却凝固后速将浸好的组织块依次摆入框内，待蜡逐渐冷却凝固后就将组织材料一并凝结在石蜡内。就将组织材料一并凝结在石蜡内。就将组织材料一并凝结在石蜡内。就将组织材料一并凝结在石蜡内。包埋时组织块的切面向下、
43、放平。如果操作不熟练包埋时组织块的切面向下、放平。如果操作不熟练包埋时组织块的切面向下、放平。如果操作不熟练包埋时组织块的切面向下、放平。如果操作不熟练或在冬天包埋时最好有一酒精灯，在材料包入石蜡之前或在冬天包埋时最好有一酒精灯，在材料包入石蜡之前或在冬天包埋时最好有一酒精灯，在材料包入石蜡之前或在冬天包埋时最好有一酒精灯，在材料包入石蜡之前稍在酒精灯上过一下（稍加一下温），以免材料与包埋稍在酒精灯上过一下（稍加一下温），以免材料与包埋稍在酒精灯上过一下（稍加一下温），以免材料与包埋稍在酒精灯上过一下（稍加一下温），以免材料与包埋蜡温度不符造成材料与包埋蜡有一痕迹，切片时产生分蜡温度不符造成材
44、料与包埋蜡有一痕迹，切片时产生分蜡温度不符造成材料与包埋蜡有一痕迹，切片时产生分蜡温度不符造成材料与包埋蜡有一痕迹，切片时产生分离现象。离现象。离现象。离现象。蜡块上要烫上标记年号例号等字样的纸片以长期保蜡块上要烫上标记年号例号等字样的纸片以长期保蜡块上要烫上标记年号例号等字样的纸片以长期保蜡块上要烫上标记年号例号等字样的纸片以长期保存，切完的蜡块表面要用烫片板烫一下，封闭材料面，存，切完的蜡块表面要用烫片板烫一下，封闭材料面，存，切完的蜡块表面要用烫片板烫一下，封闭材料面，存，切完的蜡块表面要用烫片板烫一下，封闭材料面，隔离空气接触，可长期保存材料不干。隔离空气接触，可长期保存材料不干。隔离
45、空气接触，可长期保存材料不干。隔离空气接触，可长期保存材料不干。目前主要在包埋机上操作，方便、快捷。目前主要在包埋机上操作，方便、快捷。目前主要在包埋机上操作，方便、快捷。目前主要在包埋机上操作，方便、快捷。七、切片七、切片1 1、载玻片的准备、粘附剂的使用：、载玻片的准备、粘附剂的使用：、载玻片的准备、粘附剂的使用：、载玻片的准备、粘附剂的使用：. . . .商品化准备好的载玻片商品化准备好的载玻片商品化准备好的载玻片商品化准备好的载玻片：两端带有：两端带有：两端带有：两端带有“”标志，标志，标志，标志，无须处理，直接使用；比较昂贵；无须处理，直接使用；比较昂贵；无须处理，直接使用；比较昂贵
46、；无须处理，直接使用；比较昂贵；. . . .常规载玻皮的处理：常规载玻皮的处理：常规载玻皮的处理：常规载玻皮的处理：铬硫酸铬硫酸铬硫酸铬硫酸浸泡浸泡浸泡浸泡24242424小时，流水冲洗小时，流水冲洗小时，流水冲洗小时，流水冲洗12121212小时，蒸馏水小时，蒸馏水小时，蒸馏水小时，蒸馏水洗洗洗洗3 3 3 3遍，烘干，备用；玻片较干净时，也可用遍，烘干，备用；玻片较干净时，也可用遍，烘干，备用；玻片较干净时，也可用遍，烘干，备用；玻片较干净时，也可用稀盐酸稀盐酸稀盐酸稀盐酸浸浸浸浸泡。泡。泡。泡。 蛋白甘油：蛋白甘油：蛋白甘油：蛋白甘油：用鸡蛋清（不要鸡蛋黄）用玻璃棒用鸡蛋清（不要鸡蛋黄
47、）用玻璃棒用鸡蛋清（不要鸡蛋黄）用玻璃棒用鸡蛋清（不要鸡蛋黄）用玻璃棒充分搅拌后用数层纱布过滤后加等量的甘油搅均匀加充分搅拌后用数层纱布过滤后加等量的甘油搅均匀加充分搅拌后用数层纱布过滤后加等量的甘油搅均匀加充分搅拌后用数层纱布过滤后加等量的甘油搅均匀加数颗麝香草酚（防腐）。载玻片上薄层涂抹后晾干，数颗麝香草酚（防腐）。载玻片上薄层涂抹后晾干，数颗麝香草酚（防腐）。载玻片上薄层涂抹后晾干，数颗麝香草酚（防腐）。载玻片上薄层涂抹后晾干，备用。主要用于常规组织学、组织化学染色用。备用。主要用于常规组织学、组织化学染色用。备用。主要用于常规组织学、组织化学染色用。备用。主要用于常规组织学、组织化学染
48、色用。 多聚赖氨酸多聚赖氨酸多聚赖氨酸多聚赖氨酸（poly-L-lycine, PLLpoly-L-lycine, PLLpoly-L-lycine, PLLpoly-L-lycine, PLL） 多聚赖氨酸（多聚赖氨酸（多聚赖氨酸（多聚赖氨酸（M.W=300kDM.W=300kDM.W=300kDM.W=300kD） 0.5g0.5g0.5g0.5g 蒸馏水蒸馏水蒸馏水蒸馏水 100ml100ml100ml100ml配制方法：称取配制方法：称取配制方法：称取配制方法：称取多聚赖氨酸多聚赖氨酸多聚赖氨酸多聚赖氨酸，配制，配制，配制，配制0.5%0.5%0.5%0.5%的水溶的水溶的水溶的水溶液
49、，充分混合即可。也可适当稀释配成液，充分混合即可。也可适当稀释配成液，充分混合即可。也可适当稀释配成液，充分混合即可。也可适当稀释配成0.01%-0.5%0.01%-0.5%0.01%-0.5%0.01%-0.5%浓浓浓浓度。度。度。度。4444保存，也可在保存，也可在保存，也可在保存，也可在-20-20-20-20备用。备用。备用。备用。多聚赖氨酸多聚赖氨酸多聚赖氨酸多聚赖氨酸可反可反可反可反复冰冻，效果无大影响。复冰冻，效果无大影响。复冰冻，效果无大影响。复冰冻，效果无大影响。工作液常用稀释工作液常用稀释工作液常用稀释工作液常用稀释10-5010-5010-5010-50倍。倍。倍。倍。主
50、要用于免疫组织化学、原位杂交、主要用于免疫组织化学、原位杂交、主要用于免疫组织化学、原位杂交、主要用于免疫组织化学、原位杂交、TUNELTUNELTUNELTUNEL染色染色染色染色等。等。等。等。APESAPES粘片剂粘片剂（VectabongVectabong试剂）试剂）（3-Amino propyltriethoxy silane3-Amino propyltriethoxy silane3-Amino propyltriethoxy silane3-Amino propyltriethoxy silane）是一种新型玻片粘附剂，通过对玻璃表面的化学修饰作是一种新型玻片粘附剂，通过对玻璃
51、表面的化学修饰作是一种新型玻片粘附剂，通过对玻璃表面的化学修饰作是一种新型玻片粘附剂，通过对玻璃表面的化学修饰作用，改变其表面的化学物理特性，使组织切片牢固地粘贴于玻用，改变其表面的化学物理特性，使组织切片牢固地粘贴于玻用，改变其表面的化学物理特性，使组织切片牢固地粘贴于玻用，改变其表面的化学物理特性，使组织切片牢固地粘贴于玻璃片上，贴上后不易脱落，保留时间较久。一个试剂盒璃片上，贴上后不易脱落，保留时间较久。一个试剂盒璃片上，贴上后不易脱落，保留时间较久。一个试剂盒璃片上，贴上后不易脱落，保留时间较久。一个试剂盒7ml7ml7ml7ml可可可可配成配成配成配成350ml350ml350ml3
52、50ml（丙酮）工作液。（丙酮）工作液。（丙酮）工作液。（丙酮）工作液。 程序：干净载玻片程序：干净载玻片程序：干净载玻片程序：干净载玻片丙酮丙酮丙酮丙酮5min APES(1ml+50ml5min APES(1ml+50ml5min APES(1ml+50ml5min APES(1ml+50ml丙酮），丙酮），丙酮），丙酮），将玻片用镊子夹住浸入将玻片用镊子夹住浸入将玻片用镊子夹住浸入将玻片用镊子夹住浸入APESAPESAPESAPES试剂试剂试剂试剂1-21-21-21-2次次次次纯丙酮洗纯丙酮洗纯丙酮洗纯丙酮洗2 2 2 2次次次次干燥，干燥，干燥，干燥，37373737过夜过夜过夜过夜
53、用铝箔包好，用铝箔包好，用铝箔包好，用铝箔包好，RTRTRTRT存放，备用。存放，备用。存放，备用。存放，备用。铬矾明胶液（略）铬矾明胶液（略）甲醛甲醛- -明胶液（略）明胶液（略）注意：注意：注意：注意：备用载玻片均要避免污染（尤其注意防尘）；备用载玻片均要避免污染（尤其注意防尘）；备用载玻片均要避免污染（尤其注意防尘）；备用载玻片均要避免污染（尤其注意防尘）； 一般可保存半年以上一般可保存半年以上一般可保存半年以上一般可保存半年以上。2 2、制作切片、制作切片、制作切片、制作切片需要的工具：需要的工具：需要的工具：需要的工具：切片刀、磨切机、水浴锅、干燥箱或烤片机切片刀、磨切机、水浴锅、干
54、燥箱或烤片机切片刀、磨切机、水浴锅、干燥箱或烤片机切片刀、磨切机、水浴锅、干燥箱或烤片机（可用蜡箱代替使用）。还需载玻片、手术刀、毛笔一支、弯（可用蜡箱代替使用）。还需载玻片、手术刀、毛笔一支、弯（可用蜡箱代替使用）。还需载玻片、手术刀、毛笔一支、弯（可用蜡箱代替使用）。还需载玻片、手术刀、毛笔一支、弯镊子一个、托盘一个、大平皿一个、（展片使用）烤片盒或烤镊子一个、托盘一个、大平皿一个、（展片使用）烤片盒或烤镊子一个、托盘一个、大平皿一个、（展片使用）烤片盒或烤镊子一个、托盘一个、大平皿一个、（展片使用）烤片盒或烤片架、蛋白甘油等。片架、蛋白甘油等。片架、蛋白甘油等。片架、蛋白甘油等。切片机：
55、切片机：切片机：切片机：1. 1. 切片机种类：有轮转式切片机，滑行式切片机（滑动式）切片机种类：有轮转式切片机，滑行式切片机（滑动式）切片机种类：有轮转式切片机，滑行式切片机（滑动式）切片机种类：有轮转式切片机，滑行式切片机（滑动式），冰冻切片机，超薄切片机（电镜用）等；，冰冻切片机，超薄切片机（电镜用）等；，冰冻切片机，超薄切片机（电镜用）等；，冰冻切片机，超薄切片机（电镜用）等；2. 2. 构造：任何一个类型的切片机都是由四个基本部分组成：构造：任何一个类型的切片机都是由四个基本部分组成：构造：任何一个类型的切片机都是由四个基本部分组成：构造：任何一个类型的切片机都是由四个基本部分组成：
56、刀台；刀台；刀台；刀台；标本台；标本台；标本台；标本台；旋转轮；旋转轮；旋转轮；旋转轮；控制切片厚度的微动装控制切片厚度的微动装控制切片厚度的微动装控制切片厚度的微动装置（标有置（标有置（标有置（标有 l l2525或或或或1 1一一一一5050的数字，每一数字代表一个微米用的数字，每一数字代表一个微米用的数字，每一数字代表一个微米用的数字，每一数字代表一个微米用 来来来来显示）。可根据需要厚度来调节，一般组织片都采用显示）。可根据需要厚度来调节，一般组织片都采用显示）。可根据需要厚度来调节，一般组织片都采用显示）。可根据需要厚度来调节，一般组织片都采用7 7 。以上四部分共装在一个铁制的台坐
57、上，这样就组成了各种以上四部分共装在一个铁制的台坐上，这样就组成了各种以上四部分共装在一个铁制的台坐上，这样就组成了各种以上四部分共装在一个铁制的台坐上，这样就组成了各种类型的切片机，最常用的是石蜡切片机。类型的切片机，最常用的是石蜡切片机。类型的切片机，最常用的是石蜡切片机。类型的切片机，最常用的是石蜡切片机。切片操作：切片操作：将切割修整好的蜡块用普通刀片先将蜡块切面暴露将切割修整好的蜡块用普通刀片先将蜡块切面暴露将切割修整好的蜡块用普通刀片先将蜡块切面暴露将切割修整好的蜡块用普通刀片先将蜡块切面暴露出来、修平，固定在切片机标本台上并拧紧螺旋。出来、修平，固定在切片机标本台上并拧紧螺旋。出
58、来、修平，固定在切片机标本台上并拧紧螺旋。出来、修平，固定在切片机标本台上并拧紧螺旋。切片刀固定于刀台上，拧紧固定刀的螺丝，同时调切片刀固定于刀台上，拧紧固定刀的螺丝，同时调切片刀固定于刀台上，拧紧固定刀的螺丝，同时调切片刀固定于刀台上，拧紧固定刀的螺丝，同时调整刀与蜡块的切片距离，使刀与蜡块贴紧后再固定刀台螺丝，整刀与蜡块的切片距离，使刀与蜡块贴紧后再固定刀台螺丝，整刀与蜡块的切片距离，使刀与蜡块贴紧后再固定刀台螺丝，整刀与蜡块的切片距离，使刀与蜡块贴紧后再固定刀台螺丝，刀的角度为刀的角度为刀的角度为刀的角度为2525度角。度角。度角。度角。调节微动装置，调至切片所需厚度（一般为调节微动装置
59、，调至切片所需厚度（一般为调节微动装置，调至切片所需厚度（一般为调节微动装置，调至切片所需厚度（一般为 6-76-7微微微微米）米）米）米）修材。右手握旋转轮摇把，按顺时针方向均匀地摇修材。右手握旋转轮摇把，按顺时针方向均匀地摇修材。右手握旋转轮摇把，按顺时针方向均匀地摇修材。右手握旋转轮摇把，按顺时针方向均匀地摇动直到组织块切面完整为止。如果以上各部操作正常，此时动直到组织块切面完整为止。如果以上各部操作正常，此时动直到组织块切面完整为止。如果以上各部操作正常，此时动直到组织块切面完整为止。如果以上各部操作正常，此时能切出一条完整的连续的蜡带，用毛笔轻轻将蜡带顺刀口挑能切出一条完整的连续的蜡
60、带，用毛笔轻轻将蜡带顺刀口挑能切出一条完整的连续的蜡带，用毛笔轻轻将蜡带顺刀口挑能切出一条完整的连续的蜡带，用毛笔轻轻将蜡带顺刀口挑下，放在托盘内待用。下，放在托盘内待用。下，放在托盘内待用。下，放在托盘内待用。3 3、水浴锅展片、捞片、水浴锅展片、捞片、水浴锅展片、捞片、水浴锅展片、捞片通电后将平皿内水温升至通电后将平皿内水温升至通电后将平皿内水温升至通电后将平皿内水温升至4545左右左右左右左右，将已切好，将已切好，将已切好，将已切好的薄片切割数片轻漂水中展平，不平时可用小弯镊子的薄片切割数片轻漂水中展平，不平时可用小弯镊子的薄片切割数片轻漂水中展平，不平时可用小弯镊子的薄片切割数片轻漂水
61、中展平，不平时可用小弯镊子轻轻展平，然后用涂有蛋白甘油等粘附剂的载片在水轻轻展平，然后用涂有蛋白甘油等粘附剂的载片在水轻轻展平，然后用涂有蛋白甘油等粘附剂的载片在水轻轻展平，然后用涂有蛋白甘油等粘附剂的载片在水中选择完整的切片以一定角度进行捞片。中选择完整的切片以一定角度进行捞片。中选择完整的切片以一定角度进行捞片。中选择完整的切片以一定角度进行捞片。注意事项：注意事项：注意事项：注意事项： 1 1切片刀要锋利，否则切片有切痕或组织破碎，切片刀要锋利，否则切片有切痕或组织破碎，切片刀要锋利，否则切片有切痕或组织破碎，切片刀要锋利，否则切片有切痕或组织破碎，甚至切不下来。甚至切不下来。甚至切不下
62、来。甚至切不下来。2 2展切片时水温要适当，水温低展不平切片，展切片时水温要适当，水温低展不平切片，展切片时水温要适当，水温低展不平切片，展切片时水温要适当，水温低展不平切片，影响效果，有皱折；水温过高切片入水后蜡片及组织影响效果，有皱折；水温过高切片入水后蜡片及组织影响效果，有皱折；水温过高切片入水后蜡片及组织影响效果，有皱折；水温过高切片入水后蜡片及组织熔化。熔化。熔化。熔化。八、染色八、染色 染色前准备工作染色前准备工作染色用的工具：染色用的工具：12个染色缸或者盛各种不同浓度的酒精个染色缸或者盛各种不同浓度的酒精染色筐广口瓶，染色缸及脱蜡、透明用的各染色筐广口瓶，染色缸及脱蜡、透明用的
63、各二个二甲苯缸，盖片，带磨口盖的树胶瓶一二个二甲苯缸，盖片，带磨口盖的树胶瓶一个，镊子等。个，镊子等。染色需要的试剂及染色液的配制：染色需要的试剂及染色液的配制：盐酸盐酸盐酸盐酸酒精：酒精：酒精：酒精：主要是染色分色时用。一般采用主要是染色分色时用。一般采用主要是染色分色时用。一般采用主要是染色分色时用。一般采用0. 50. 51 1的浓度，即在的浓度，即在的浓度，即在的浓度，即在100ml100ml的的的的70708080酒精中加人酒精中加人酒精中加人酒精中加人0.50.5或者或者或者或者1ml1ml的浓盐的浓盐的浓盐的浓盐酸。酸。酸。酸。 苏木素苏木素苏木素苏木素（HematoxylinH
64、ematoxylin）苏木素为细胞核的染料，不经氧化的苏木素是不具有染色苏木素为细胞核的染料，不经氧化的苏木素是不具有染色苏木素为细胞核的染料，不经氧化的苏木素是不具有染色苏木素为细胞核的染料，不经氧化的苏木素是不具有染色能力的。苏木素的配方很多，一般组织化学染色所配制的苏木能力的。苏木素的配方很多，一般组织化学染色所配制的苏木能力的。苏木素的配方很多，一般组织化学染色所配制的苏木能力的。苏木素的配方很多，一般组织化学染色所配制的苏木素有二类：一类是自然氧化的苏木素，另一类是加入氧化剂加素有二类：一类是自然氧化的苏木素，另一类是加入氧化剂加素有二类：一类是自然氧化的苏木素，另一类是加入氧化剂加
65、素有二类：一类是自然氧化的苏木素，另一类是加入氧化剂加速氧化的苏木素。速氧化的苏木素。速氧化的苏木素。速氧化的苏木素。 伊红伊红伊红伊红（曙红，（曙红，（曙红，（曙红， EosinEosin）是细胞质最常用的染料之一。外观是红色粉末。分两种，是细胞质最常用的染料之一。外观是红色粉末。分两种，是细胞质最常用的染料之一。外观是红色粉末。分两种，是细胞质最常用的染料之一。外观是红色粉末。分两种，一种是一种是一种是一种是酒溶性伊红酒溶性伊红酒溶性伊红酒溶性伊红，另一种为，另一种为，另一种为，另一种为水溶性伊红水溶性伊红水溶性伊红水溶性伊红。使用前要看说明以。使用前要看说明以。使用前要看说明以。使用前要
66、看说明以免配错。免配错。免配错。免配错。一般组织病理学切片染色，染细胞核用苏木素，染细胞质一般组织病理学切片染色，染细胞核用苏木素，染细胞质一般组织病理学切片染色，染细胞核用苏木素，染细胞质一般组织病理学切片染色，染细胞核用苏木素，染细胞质用伊红，故称之为用伊红，故称之为用伊红，故称之为用伊红，故称之为HEHE染色（苏木素染色（苏木素染色（苏木素染色（苏木素- -伊红染色法）伊红染色法）伊红染色法）伊红染色法）。染色方法及步骤（以染色方法及步骤（以HE染色为例）染色为例） 1 1脱蜡脱蜡脱蜡脱蜡，将干燥的切片入二甲苯，将干燥的切片入二甲苯，将干燥的切片入二甲苯，将干燥的切片入二甲苯I 10-2
67、0I 10-20分钟，然分钟，然分钟，然分钟，然后移入二甲苯后移入二甲苯后移入二甲苯后移入二甲苯 10-2010-20分钟。分钟。分钟。分钟。2 2脱苯脱苯脱苯脱苯：用无水乙醇：用无水乙醇：用无水乙醇：用无水乙醇I I 脱苯脱苯脱苯脱苯2-52-5分钟，再经无水乙分钟，再经无水乙分钟，再经无水乙分钟，再经无水乙醇醇醇醇II 2-5II 2-5分钟。分钟。分钟。分钟。3 3水化：水化：水化：水化：再经再经再经再经9595909080807070酒精各酒精各酒精各酒精各1 1分钟，入蒸馏水浸洗数分钟，每步操作要轻。分钟，入蒸馏水浸洗数分钟，每步操作要轻。分钟，入蒸馏水浸洗数分钟，每步操作要轻。分钟
68、，入蒸馏水浸洗数分钟，每步操作要轻。4 4染细胞核染细胞核染细胞核染细胞核，将切片移入苏木素染液中染，将切片移入苏木素染液中染，将切片移入苏木素染液中染，将切片移入苏木素染液中染10-2010-20分分分分钟。钟。钟。钟。5 5水洗水洗水洗水洗（水洗一下，将浮在表面的染液去掉）。（水洗一下，将浮在表面的染液去掉）。（水洗一下，将浮在表面的染液去掉）。（水洗一下，将浮在表面的染液去掉）。6 6l l盐酸酒精分化盐酸酒精分化盐酸酒精分化盐酸酒精分化，时间几秒钟，肉眼观察切片，时间几秒钟，肉眼观察切片，时间几秒钟，肉眼观察切片，时间几秒钟，肉眼观察切片组织材料呈粉红色即可。组织材料呈粉红色即可。组织
69、材料呈粉红色即可。组织材料呈粉红色即可。7 7 7 7兰化：兰化：兰化：兰化：水道流水洗（半小时水道流水洗（半小时水道流水洗（半小时水道流水洗（半小时-24-24-24-24小时），切片小时），切片小时），切片小时），切片从粉红色转变为鲜艳的兰色，这过程也称为从粉红色转变为鲜艳的兰色，这过程也称为从粉红色转变为鲜艳的兰色，这过程也称为从粉红色转变为鲜艳的兰色，这过程也称为兰化兰化兰化兰化的过的过的过的过程。必要时放入氨水的低碱液中浸几分钟。程。必要时放入氨水的低碱液中浸几分钟。程。必要时放入氨水的低碱液中浸几分钟。程。必要时放入氨水的低碱液中浸几分钟。8 8 8 8染细胞质染细胞质染细胞质染细
70、胞质：用：用：用：用0.50.50.50.5或者或者或者或者l l l l伊红水溶液进行伊红水溶液进行伊红水溶液进行伊红水溶液进行染色，染色，染色，染色，1-51-51-51-5分钟。分钟。分钟。分钟。9 9 9 9切片脱水：切片脱水：切片脱水：切片脱水：是由低浓度酒精到高浓度酒精。是由低浓度酒精到高浓度酒精。是由低浓度酒精到高浓度酒精。是由低浓度酒精到高浓度酒精。将切片入将切片入将切片入将切片入70707070808080809090909095959595酒精，酒精，酒精，酒精，时间几时间几时间几时间几秒钟秒钟秒钟秒钟，时间长了，伊红易脱色，注意伊红与苏木素的，时间长了，伊红易脱色，注意伊
71、红与苏木素的，时间长了，伊红易脱色，注意伊红与苏木素的，时间长了，伊红易脱色，注意伊红与苏木素的对比染色的色调适合。对比染色的色调适合。对比染色的色调适合。对比染色的色调适合。10101010彻底脱水彻底脱水彻底脱水彻底脱水，100100100100酒精酒精酒精酒精I 510I 510I 510I 510分钟，再入分钟，再入分钟，再入分钟，再入100100100100IIIIIIII酒精酒精酒精酒精 510510510510分钟分钟分钟分钟。11. 11. 11. 11. 透明透明透明透明：入二甲苯：入二甲苯：入二甲苯：入二甲苯I 25I 25I 25I 25分钟，再入二甲苯分钟，再入二甲苯分钟，再入二甲苯分钟，再入二甲苯II II II II 25252525分钟。分钟。分钟。分钟。
